Historia de la Biotecnologa

CyTB 2014
Flvio Silva Junqueira de Souza

Biotecnologa - definiciones
- "Any technological application that uses biological systems, living organisms,
or derivatives thereof, to make or modify products or processes for specific use."
(United Nations Convention on Biological Diversity)
- "The application of biological systems and organisms to technical and industrial
processes" (Food and Drug Administration - USA)

- "The application of science and technology to living organisms, as well as parts,

products and models thereof, to alter living or non-living materials for the
production of knowledge, goods and services." (European Commission)

- el uso de organismos vivos (o sus partes) para la creacin de

productos y processos tiles para el ser humano

Biotecnologa - periodos
- Biotecnologa antigua (antes de 1800)
: domesticacin de animales y plantas
: produccin de vino, cerveza y vinagre por fermentacin
: produccin de queso por fermentacin o coagulacin con quimosina
- Biotecnologa clsica (1800 - 1950)
: descubrimiento de fermentacin por microrganismos
: descubrimiento de los principios de la gentica
: desarrollo de la biotecnologa cientfica
- Biotecnologa moderna (1950 - presente)
: desarrollo de tcnicas de ingeniera gentica
: manipulacin del genoma de organismos para la produccin
(bacterias, hongos, plantas, animales)

Antes de la biotecnologa
- el gnero Homo existe hace 2 millones de aos
(H. habilis, H. erectus, H. heidelbergensis etc)
- Homo sapiens anatomicamente moderno
se origin hace 200 mil aos (Paleoltico)
- el modo de vida primitivo de los hombres era el
de cazadores-colectores (hasta hace 10 mil aos)
- la tecnologa paleoltica era simple (dominio del
fuego, instrumentos de piedra, hueso y madera)
- no existi una biotecnologa paleoltica notable
excepto por la domesticacin del lobo hace c. 15.000
aos
escena de caza,
cueva de Altamira
c. 15.000 aos atras

escena de caza p

Domesticacin del lobo

- el lobo gris (Canis lupus) fue el primer animal
en ser domesticado hace 15.000 aos
o ms (Paleoltico)
- el lobo domesticado ofreca proteccin,
compaia y ayudaba en la caza
- el sitio de domesticacin es controversial:
Medio Oriente, Europa o China
- acompa los humanos en las migraciones
mundiales (Amrica, Oceania)
- di origen al perro domstico (Canis lupus
familiaris)

Domesticacin del lobo

lobo gris

relieve asirio con perro de caza

(c. 3000 aos atras)

Web Museum of Fine Art

perro de compaa (detalhe)

Jan van Eyck, 1434

Cazadores-colectores

!Kung, Kalahari

Hadza, Tanzania

Cazadores-colectores

190.000 aos !

Revolucin neoltica
- drstico cambio en el modo de vida humano (agricultura y sedentarismo) que
marca el comienzo del Neoltico
- los motivos que llevaron a la invencin de la agricultura son discutidos;
cambios climticos? aumento de la poblacin?
- domesticacin de animales (cabra, oveja, vaca, chancho etc) y plantas (trigo,
cebada, arroz etc) empezando 12-10 mil aos atras
- empieza en el Medio Oriente, sigue independentemiente en China,
Meso- y Sudamrica, frica Equatorial

- la agricultura gener mayor disponibilidad de comida, sedentarismo, aumento

de la poblacin, surgimiento de las primeras ciudades, comercio, primeras
civilizaciones, tecnologa mas avanzada, escrita etc

Revolucin neoltica - primeras ciudades

plantaciones

animales
domesticados

atalhyk - poblado neoltico en Anatolia (9400 - 7200 aos atras)

lleg a tener 3.000 - 8.000 personas

Domesticacin
- proceso por el ser humano toma el control de la reproduccin de otra especie
que cambia su morfologa, fisiologa, comportamiento y gentica adaptandose
a las necesidades humanas

- resultado de presin de seleccin artificial sobre variantes de la especie

domesticada (o en proceso de ser domesticada)
- animales salvajes domesticables tienen un conjunto de caracteristicas que
favorecen la domesticacin: dieta amplia, crecimiento rpido, temperamento
adecuado etc
- las plantas cuando domesticadas adquieren caracteristicas claves: aumento
del tamao de las semillas/frutos; ausencia de dormencia de la semilla;
ausencia de mecanismos de dispersin de semillas etc

agricultura en el
Egipto antiguo
(c. 3000 aos atras)

Domesticacin

- centros de domesticacin de plantas

Planta

Lugar

Fecha (aos antes presente)

Higuera

Medio Oriente

11000

Cebada

Medio Oriente

11000

Trigo "Einkorn"

Medio Oriente

11000

Trigo "Emmer"

Medio Oriente

11000

Lino

Medio Oriente

10000

Zapallo

America Central

10000

Arroz

Extremo Oriente

8000

Maiz

America Central

8000

Mijo

Extremo Oriente

8000

Mandioca

Sudamerica

8000

Papa

Sudamerica

7000

Girasol

Norteamerica

4800

Chili

Sudamerica

6000

Batata

Sudamerica

4500

Poroto

America Central

4000

Arroz Africano

Africa

1000

Animal

Lugar

Fecha (aos antes presente)

Lobo/Perro

Medio Oriente, Europa,

China

30000-15000

Cabra

Medio Oriente (Iran)

11000

Oveja

Medio Oriente

11000

Jabal/Chancho

China, Medio Oriente

10000

Uro/Vaca

India, Medio Oriente

10000

Gato

Mediterraneo

9000

Gallina

India, Sudeste de Asia

8000

Burro

Egipto

7000

Caballo

Estepa Euroasiatica

6000

Llama

Andes (Peru)

5500

Gusano de la seda

China

5000

Camello bactriano

Asia Central

4500

Dromedario

Arabia

4500

Zeder (2008) PNAS USA

Domesticacin - Medio Oriente

- domesticacin de especies de trigo (wheat), cebada (barley), cabras, ovejas,

vacas y chanchos

Domesticacin - Medio Oriente

- cabra y vaca en Ur (Sumeria), 4500 aos atras

Wikimedia Commons

Domesticacin - Norte de frica

- cosecha en el Antiguo Egipto (3000 aos atras)

Wikimedia Commons

Domesticacin - ejemplos

- proporcin de granos de trigo (azul), cebada (amarillo) y arroz (rojo) que

no dispersan (non-shattering) en asentamientos humanos del Neoltico

Purugganan & Fuller (2009) Nature

Domesticacin - ejemplos

- cambios morfolgicos entre el teosinte y el maz: forma de la planta,

tamao del grano, nmero de granos por mazorca, cobertura de los granos

Doebley et al (2006) Cell

Doebley et al (2006) Cell

Domesticacin - ejemplos

tomate
(domesticado en Mesoamrica)

girasol
(domesticado en Norteamrica)

salvaje

domesticada

- mapeo gentico de variedades de arroz que

dispersan (salvajes) x no dispersan
(domesticadas) revel un gen (sh4) que
regula la camada de absicin del grano

gen sh4

- mapeo gentico de perros de distintos

tamaos muestra un alelo de IGF1
seleccionado en perros de pequea talla
- IGF1 codifica una proteina secretada
involucrada en crecimiento y longevidad

Procesamiento de la comida - fermentacin

- fermentacin clsica: proceso por el cual microorganismos (bacterias,
levaduras) convierten sustancias orgnicas (azcares) en frutas,
cereales y leche en CO2, alcohol y/o cido lctico

definiciones relacionadas:

fermentacin moderna: proceso por el cual microorganismos (bacterias,

levaduras, hongos, clulas animales, clulas vegetales) cultivados
en un biorreactor convierten sustancias orgnicas en biomasa o
productos tiles
fermentacin (bioqumica): degradacin de sustancias orgnicas
por organismos en condiciones anaerbicas en que electrones son
transferidos a compuestos endgenos. Ejemplos: fermentacin
alcohlica, fermentacin lctica etc

Procesamiento de la comida - fermentacin

- algunos productos fermentados
material
fermentado

microrganismo

regin de origen

fecha
(aos atras)

uvas

S. cerevisiae

Asia Menor

7400

malta, trigo

S. cerevisiae

Medio Oriente

6000

trigo (harina)

S. cerevisiae

Egipto

3500

hidromiel

miel

S. cerevisiae

4000

yogur

leche

lactobacterias

Asia Central

4000

vinagre

vino de dctil
o uva

acidobacterias

Medio Oriente

queso

leche

lactobacterias

Europa, Medio
Oriente

7000

salsa de soja

soja

Aspergillus

China

1700

maz,
mandioca

Sudamerica

>700

vino
cerveza
pan

chicha

Procesamiento de la comida - vino

levaduras
(fermentacin)

uvas

http://blog.winecollective.ca/

Procesamiento de la comida - vino

stiros produciendo vino (griego, 500 aC)

http://www.theoi.com/

Procesamiento de la comida - vino

productores medievales de vino

(iluminura del siglo XV)

Procesamiento de la comida - queso

cuajo - quimosina
(coagulacin de la leche)

leche
lactobacterias
(fermentacin)

Procesamiento de la comida - queso

produccin de queso (Tacuinum Sanitatis, siglo XV)

Wikimedia Commons

Procesamiento de la comida - queso

- del abomaso de los terneros se saca el
cuajo que contiene la enzima quimosina
- la quimosina procesa la caseina de la
leche y causa la coagulacin
- actualmente el 90% de la quimosina bovina
es recombinante - hecha en hongos
transgnicos

abomaso

quimosina bovina
recombinante
CHY-MAX
Chr Hansen
(Dinamarca)

Maxiren
DSM
(Holanda)

Procesamiento de la comida - cerveza

germinacin y secado de la cebada (malta)

cebada
produccin de mosto
(digestin del almidn de la
malta por las amilasas
de la propia malta)

agregado de levadura
y fermentacin

Procesamiento de la comida - cerveza

1506

1610

trabajadores de la produccin de cerveza (Alemania)

http://www.schlenkerla.de/biergeschichte/brauerstern/indexe.html

Saccharomyces cerevisiae
- microorganismo ms usado en procesos biotecnolgicos
(cerveza, vino, pan, produccin de etanol)
- se utilizan S. cerevisiae y parientes cercanos (S. bayanus, S. uvarum). Otras
especies (S. cariocanus, S. mikatae, S. paradoxus, S. kudriavzevii) ocurren
casi solamente en ambiente natural
- Saccharomyces son hongos unicelulares capaces de convertir glucosa en
etanol y CO2 (fermentacin alcohlica) en anaerobiosis.

- son tambin capaces de producir etanol en aerobiosis, cuando la concentracin

de glucosa es alta.
- cuando la concentracin de glucosa es baja en aerobiosis, el etanol puede ser
usado como sustrato del Ciclo de Krebs

Sicard & Legras (2011) C R Biologies

Saccharomyces cerevisiae

- S. cerevisiae puede producir etanol por fermentacin en anaerobiosis (enzima

Adh1) o utilizar el etanol como fuente de energa en aerobiosis (Adh2)

Sicard & Legras (2011) C R Biologies

Saccharomyces cerevisiae
- rbol filogentico de cepas de levadura
de distintas fuentes de fermentacin

- cepas usadas en procesos similares

son mas emparentadas

- muchas cepas son poliploides y

algunas son hbridas entre distintas
especies de Saccharomyces
- p.ej. la levadura de la cerveza Lager
tiene una mitad del genoma de S.
cerevisiae y la otra de S. bayanus
(adaptacin a la fermentacin a baja
temperatura)

Prez-Ortn (2002) Genome Res

Sicard & Legras (2011) C R Biologies

Saccharomyces cerevisiae

- cepas de S. cerevisiae usadas en producin de vino poseen una translocacin que

aumenta la expresin del gen de un transportador de sulfito (SSU1)
- sulfito es usado como agente antimicrobiano y antioxidante en el vino desde la
Antiguedad, Edad Media hasta hoy, lo que caus la seleccin de cepas resistentes

Revolucin cientfica - microorganismos

- en 1680, Anton van Leeuwenhoek observ por
primera vez la vida microscpica
- describi por primera vez protozoos, algas y
bacterias (animculos)
- no reconoci las levaduras como seres vivos

Wikimedia Commons

Fermentacin - frmula qumica

- Antoine Lavoisier (1789) reconoci que el azcar est compuesto por carbono, oxgeno y
hidrgeno y que la fermentacin origina etanol y gas carbnico (burbujas)
- Joseph-Louis Gay Lussac (1815) perfeccion la formula

- la levadura (fermento) era considerada un agente no vivo que era necesario pero que no
se gastaba durante la reaccin. La fermentacin era un proceso qumico, no biolgico
Barnett (2003) Microbiology

Fermentacin - levaduras
- en 1937, Charles Cagniard de la Tour, Friedrich Ktzing y Theodor Schwann descubrieron
independientemente que las levaduras son clulas vivas y que se dividen por gemacin
durante la fermentacin

gemacin

cicatrices

Theodor Schwann

- ese descubrimiento fue posible por el desarrollo de mejores microscopios

- hiptesis: la fermentacin era un proceso mediado por organismos vivos y no una reaccin
qumica solamente

Fermentacin - levaduras
- tres de los mas destacados cientficos de la poca se opusieron a la teoria de que las
levaduras eran vivas y necesarias a la fermentacin: Justus von Liebig, Jns Berzelius y
Friedrich Whler

Friedrich Whler

Justus von Liebig

- para ellos la fermentacin era resultado de la accin del aire en el jugo de los frutos; las
levaduras seran cuerpos inertes que resultan de la decomposicin del los frutos

Fermentacin - Pasteur
- por medio de experimentos detallados, Louis Pasteur
(1857) estableci definitivamente que la fermentacin
es un proceso mediado por un levaduras y termin con
la teora de que era un proceso solamente qumico

- determin adems:
: que la fermentacin es un proceso anaerbico y resulta
de la multiplicacin de las levaduras
: cada tipo de fermentacin (alcohlica, ltica) depende de un tipo especfico de
microorganismo
: que la inoculacin adecuada es importante en la fermentacin
: que los nutrientes del medio de crecimiento son importantes para la fermentacin

Fermentacin - enzimas
- en 1833, Anselme Payen y Jean-Franois Persoz aislaron la "diastasa" (amilasa) de la
malta de cebada
- en 1837, Liebig y Whler describieron la "emulsina" (beta-glucosidasa) de almendras
- "fermentos" podan ser "organizados" (levaduras, bacterias) o "no-organizados" (sustancias
solubles como la diastasa o la emulsina)
- en 1858, Moritz Traube sugiri que los "fermentos" (enzimas) eran responsables por las
reacciones de la fermentacin y que se encontraban adentro de las levaduras
- Wilhem Khne (1878) introdujo el trmino "enzima" para los fermentos no-organizados
solubles
- Eduard Buchner (1897) logr realizar la fermentacin alcohlica con extractos de levadura
y postul que eso de deba a una enzima (zimasa)

Fermentacin - Pasteur
- Pasteur (1864) tambin demostr la falsedad de la teora
de la generacin espontnea

- el aire est siempre cargado de microorganismos y

contamina los cultivos abiertos

Enfermedades - teora microbiana

- en 1796, Edward Jenner descubre que el pus de la variola bovina prevena la varola
humana cuando inoculada en personas (vacunacin)
- introduccin de los antispticos (1846)
- Robert Koch descubre que bacterias causan anthrax
(1877), tuberculosis (1882) y clera (1883)
- en 1880 Pasteur desarrolla una vacuna atenuada
contra la clera aviar
- en 1881 Pasteur crea vacunas contra la rabia y y el
anthrax

primera foto del bacilo del anthrax (Koch, 1877)

- en 1909, Paul Ehrlich crea un compuesto (Salvarsan o 606) con arsnico

que mataba la bacteria del sfilis - primer ejemplo de quimioterapia

Fermentacin industrial no-alimenticia

- durante la Primera Guerra Mundial, Alemania produca glicerol para municiones por medio
de la fermentacin de azcar de remolacha con levaduras. El agregado de sulfito al medio
provoca la formacin de glicerol en lugar de etanol.
- Chaim Weizmann, tambin durante la Primera Guerra Mundial, introdujo la fermentacin
con la bacteria Clostridium acetobutylicum para producir acetona y butanol para la indstria
blica inglesa. Fue la primera fermentacin no-alimenticia en larga escala

fermentacin ABE
(acetona-butanol-etanol)
en Clostridium

Biotecnologa
- Kroly Ereky cre el trmino "biotecnologa" en su libro:
"Biotecnologa de la produccin de carne, grasa y leche en grandes emprendimientos"
(Berlin, 1919)

Biotechnologie der Fleisch-, Fettund Milcherzeugung im

landwirtschaftlichen Grossbetriebe
(Berlin, 1919)

- as, el nombre "biotecnologa" empez asociado al mejoramiento de la agricultura y pecuaria

Penicilina y antibiticos
- en 1929, Alexander Fleming descubri que el hongo Penicillium notatum produce una
sustancia secretada antibacteriana - penicilina
- la penicilina original era inestable y diluda. Entre 1939-1941, Howard Florey, Ernst Chain y
Norman Heatley y companas farmaceuticas de EEUU lograron producir una gran cantidad
de penicilina estable, usada en la Segunda Guerra Mundial

propaganda de penicilina
- laboratorio Schenley
EEUU (1944)

Penicilina y antibiticos
- en los aos 1940, empez un programa de mejoramiento de la penicilina
- varias variedades de Penicillium fueron analizadas y una cepa de P. chrysogenum fue
elegida (produca ms penicilina que la P. notatum original)
- mutantes naturales de la cepa lograron aumentar la produccin de 60 a 150 mg/mL, y
mutacin con rayos-X y luz ultravioleta lograron mutantes que producan 300-550 mg/mL
(primer screening por mutagnesis inducida para mejorar una droga)

- en paralelo fueron mejoradas las condiciones de cultivo

fermentadores para penicilina

- laboratorios Squibb & Sons,
EEUU (1946)

Buchholz & Collins (2013) Appl Microb Biotech

Gentica
- 1859: El Origen de las Especies de Charles Darwin describe el
mecanismo de evolucin por seleccin natural. Tambin
describe en detalle la seleccin artificial
- 1865: Gregor Mendel describe la herencia de unidades
discretas (futuros "genes")
- 1900: redescubrimento y confirmacin del trabajo de Mendel

English pouter pigeon (1868)

- 1911: Thomas H Morgan y colaboradores descubren que los genes se localizan

en los fisicamente en los cromosomas
- 1941: George Beadle y Edward Tatum sugieren la teoria un-gen-una-enzima (ms tarde
un-gen-una-proteina)
- 1944: Oswald Avery, Colin MacLeod y Maclyn McCarty demuestran que el DNA es el
principio transformante en las bacterias de Frederick Griffith (1928)
- 1953: James Watson y Francis Crick descubren la doble hlice del DNA
- 1966: Marshall Nirenberg, Har Gobind Khorana, Heinrich Matthaei y Philip Leder decifran
el cdigo gentico

Ingeniera gentica
- en 1972, Paul Berg gener una molcula de DNA recombinante in vitro con secuencias del
operon lac, fago lambda y virus SV40 de mamferos
- en 1973, Stanley Cohen, Herbert Boyer y colaboradores logran juntar segmentos de DNA
plasmdico de E. coli usando enzimas de restriccin y ligasa y lo introdujeron en una
bacteria: primer organismo geneticamente modificado (OGM o GMO)

- en 1974, Stanley Cohen, Herbert Boyer

y colaboradores insertaron DNA de un
animal (la rana Xenopus) en un plsmido
y luego lo transformaron en E. coli
- la secuencia eucariota (RNA ribosomal) se
expres en E. coli
- primera bacteria con DNA hbrido entre
procariota/eucariota

comienzo de la era de la
ingeniera gentica

Frankenstein (1818)

- Mary Shelley escribi que su libro era

"aterrorizante, y as tiene que ser, pues
sera de un terror extremo el efecto de
cualquier actividad humana que se burlara
del extraordinario mecanismo del Creador
del mundo" (1831)
"Frightful must it be; for supremely frightful would be the effect of any
human endeavour to mock the stupendous mechanism of the Creator
of the world"

Frankenstein (1931) pelcula de James Whale

Ingeniera gentica - conferencia de Asilomar

- en 1974, P. Berg, S. Cohen, H. Boyer y otros cientficos escribieron un artculo a Science
pidiendo una moratoria en la utilizacin de las tcnicas de DNA recombinante
- en febrero de 1975 se organiz la Conferencia de Asilomar (Calif.) con 100 cientficos y la
presencia de la prensa y funcionarios del gobierno para evaluar la bioseguridad de los
experimentos de DNA recombinante
- en el documento final se consider que, en general, las investigaciones deberan seguir,
pero con estrictas medidas de contencin biolgica de los laboratorios de acuerdo al nivel
del riesgo
- en particular se recomendaba el uso de vectores y huespedes con limitada capacidad de
crecimento afuera del laboratorio

Nueva indstria biotecnolgica

- 1971: Donald Glaser y otros fundan Cetus Corporation
(Berkeley, CA)
- 1976: H. Boyer y Robert Swanson fundan Genentech (San
Francisco, CA)
- 1980: Cohen y Stanley consiguen patentar la tcnica de
DNA recombinante, y en los aos siguientes Stanford y
UCSF reciben US$100 millones de royalties por 200
licencias
- 1982: Genentech/Eli Lilly comercializan insulina humana
producida en E. coli, el primer frmaco recombinante en el
mercado
- otros productos: hormona de crecimiento (1983); ainterferon, vacuna de hepatitis B recombinante (1986);
activador tisular de plasmingeno (tPA, 1987);
eritropoyetina (EPO, 1989); G-CSF (1991); factor VIII
(1992); - interferon (1993)

Boyer en la tapa de TIME (1981)

Nueva indstria biotecnolgica

- 1975: Csar Milstein y Georges Khler
desarrollan los anticuerpos monoclonales
- 1983: mapeo del gen relacionado a una
enfermedad humana (Huntington's)
- 1983: Kary Mullins inventa el PCR (Cetus Corp)

- 1988: patente del ratn transgnico oncomouse

para el estudio del cncer (U. Harvard)
- 1994: tomate Flavr Savr (Calgene) transgnico
aprobado en EEUU (primer comida transgnica)

C. Milstein y G. Khler al ganar el Noble (1984)

Nueva indstria biotecnolgica - miedos

thehealingfrequency.com