Joo Lcio de Azevedo

PESQUISA

Universidade Federal de Gois

Gentica e melhoramento de fungos na biotecnologia

biotecnologia consiste
no uso de sistemas celulares para o desenvolvimento de processos e
produtos de interesse
econmico ou social. Entre os sistemas
celulares, os fungos so de grande interesse biotecnolgico. Talvez sejam eles,
dentre os seres vivos, os que mais tm
contribudo com produtos e processos de
importncia fundamental para o bemestar da populao. Mas, que so os
fungos e o que eles fazem? o que ser
visto a seguir.

fungos um dos mais numerosos. Estima-se que existam pelo menos um

milho e quinhentas mil espcies de
fungos espalhadas pelo mundo. Isso
muito mais do que todas as espcies
vegetais e animais somadas, excluindo-

O que so os fungos?
Os fungos, tambm chamados de
bolores, mofos ou cogumelos, esto interferindo constantemente nas nossas atividades dirias. Eles so to importantes
que hoje constituem um reino parte,
lado a lado com os reinos vegetal e
animal. Fica difcil definir os fungos tal
a sua diversidade. No entanto, eles possuem algumas caractersticas em comum
que os distinguem dos outros seres vivos.
Em geral, eles apresentam filamentos, as
chamadas hifas, com paredes rijas, ricas
em quitina, o mesmo material que reveste insetos como besouros; tm caractersticas heterotrficas, isto , no possuem
clorofila e, portanto, necessitam de material orgnico para viver, sendo sua nutrio feita por absoro de nutrientes graas presena de enzimas que so por
eles produzidas e que degradam produtos como, por exemplo, celulose e amido. Por outro lado, os fungos so
eucariticos, isto , possuem um ncleo
tpico no interior de suas clulas, comparvel ao das plantas e animais. Reproduzem-se por via sexual ou assexual e
assim possuem divises celulares do tipo
mitose e meiose, tendo sempre como
produto final os esporos que so rgos
de reproduo, resistncia e disseminao (figura 1). Na verdade, o reino dos

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Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

Figura 1- Estruturas de um fungo vistas

atravs de microscpio tico.
Notam-se filamentos (hifas) e corpos esfricos que so os esporos vegetativos ou
condios.

se os insetos. E por incrvel que parea,

apenas cerca de 70.000 espcies de
fungos foram at hoje descritas, ou seja,
menos de 5% das possivelmente existentes. Se entre esses cinco por cento
de espcies, j existem muitas de grande importncia, como as que entram na
fabricao de alimentos, incluindo bebidas, de cidos orgnicos, de frmacos e
inmeros outros produtos, pode-se imaginar o que se espera com a descoberta
de novas espcies com distintas propriedades potencialmente de valor
biotecnolgico. Em particular no Brasil,
que o pas que possui a maior
biodiversidade do mundo, a busca de

novas espcies de fungos dever produzir resultados extremamente interessantes do ponto de vista biotecnolgico. Mas
para o leigo, o que fazem os fungos? Na
maioria dos casos, eles so vistos pela
populao como prejudiciais, uma imagem que dada pelas poucas espcies
dentro do reino que causam as micoses
do homem e animais ou as que so
responsveis por doenas em plantas
cultivadas.
Outras pessoas associam os fungos
com os bolores ou mofos que invadem
paredes midas das residncias, artigos
de couro ou ainda cobrem os alimentos,
como frutas e gros armazenados. De
uma forma mais favorvel, eles podem
ser associados culinria, como o caso
dos cogumelos de chapu usados em
sopas, pizzas e nos strogonoffs. Essa a
imagem que o grande pblico tem sobre
os fungos. O que esquecido que eles
so tambm os responsveis pela produo de antibiticos como a penicilina, a
griseofulvina ou a cefalosporina, de vitaminas como a riboflavina, de esterides,
de cido ctrico, usado na fabricao de
refrigerantes, medicamentos, balas e doces, de enzimas tipo celulases, quitinases,
proteases, amilases e muitas outras de
valor industrial, de etanol, usado como
combustvel nos automveis, como
solvente e desinfetante, ou ainda nas
fermentaes alcolicas, produzindo bebidas como o vinho, a cerveja, o saqu e
os destilados. Eles tambm entram na
panificao, na fabricao e maturao
de queijos como o gorgonzola, o
camembert e o roquefort, em alimentos
exticos orientais, entre muitos outros
produtos. Tambm de grande importncia agrcola e ecolgica, so eles que
mantm um equilbrio, decompondo restos vegetais, degradando substncias txicas, auxiliando as plantas a crescerem e
se protegerem contra inimigos, como
outros microrganismos patognicos, insetos-pragas da agricultura ou herbvoros. Enfim, os fungos constituem um

reino que, se extinto, ocasionaria tambm o desaparecimento da maioria das

espcies atualmente existentes, inclusive a humana, uma vez que sem os fungos
os ciclos biolgicos no seriam completados. No por acaso que eles so considerados como de grande importncia
para a gentica e a biotecnologia, como
ser visto a seguir.
A gentica de fungos e as novas
tecnologias
Os fungos tm contribudo com enorme soma de conhecimentos para um
melhor entendimento dos processos genticos. Como se sabe, a gentica a
cincia da hereditariedade ou transmisso de caractersticas de pais para filhos
ou de ascendentes para descendentes.
Como j mencionado, sendo eucariticos,
alm de reproduzirem-se rapidamente,
eles puderam ser usados, com eficincia,
na resoluo de problemas genticos. Foi
utilizando fungos filamentosos e leveduras que se descobriu em 1941 que genes
produziam enzimas e outras protenas.
Veio a seguir uma avalanche de conhecimentos derivados do uso de fungos,
como sistemas genticos que no s
confirmaram as regras da cincia da hereditariedade (figura 2), mas tambm contriburam para a consolidao da
biotecnologia como um todo. Foi por
meio de tcnicas genticas clssicas,
como busca da variabilidade natural, selecionando-se linhagens mais apropriadas,
e pelo uso de mutantes e de cruzamentos entre linhagens, que se conseguiu
realizar o melhoramento gentico de
muitos fungos de valor industrial. O exemplo mais tpico e de maior sucesso foi o
do melhoramento gentico do fungo
produtor de penicilina, como ser visto
mais adiante. Apesar dessa enorme contribuio, a moderna biotecnologia, com
as novas tecnologias, como a fuso de
protoplastos (figura 3) e a tecnologia do
DNA recombinante ou engenharia gentica, s foi usada de forma mais rotineira,
em fungos, a partir de meados dos anos
70 e incio dos anos 80. Com os processos
de fuso de protoplastos e de transformao gentica, foi possvel a manipulao
gentica dos fungos, permitindo com
que novas caractersticas de valor
biotecnolgico fossem adicionadas a espcies j utilizadas comercialmente, aumentando assim o seu potencial
biotecnolgico. Alguns fungos, principalmente leveduras, que so aqueles que se
reproduzem por brotamento, como
Saccharomyces cerevisiae, j vm sendo
usados desde a Antiguidade na fabricao
de produtos alimentcios, como o po;

outros fungos vm sendo tambm empregados na fabricao de produtos de

uso dirio, como o caso do cido ctrico
produzido por Aspergillus niger.
Sabe-se assim que esses fungos no
causam qualquer problema, sendo eles
prprios, ou seus produtos, ingeridos
pela espcie humana e outros mamferos. Desta forma, esses fungos constituem-se em hospedeiros ideais para albergar genes provenientes de outros organismos. A produo de hormnios, como
a insulina ou o hormnio de crescimento
humano, ou, ainda, a produo de outros
tipos de frmacos, como o interferon,
usado contra alguns vrus, pode ser levada a cabo tendo fungos como hospedeiros de genes responsveis pela produo
dessas substncias. Em bactrias, hospedeiros tradicionais de genes clonados, as
protenas no so modificadas de maneira apropriada, como ocorre em seres
eucariticos, como os fungos. Alm do
mais, h um maior conhecimento no uso
de fungos em fermentaes industriais
devido a sua grande utilizao na produo de antibiticos e etanol. Finalmente,
o rendimento em peso por litro do produto desejado , em geral, maior, quando
fungos so utilizados como hospedeiros
de genes clonados. De tudo isso, pode-se
concluir que cada vez mais eles tendem
a ocupar um papel de destaque na
biotecnologia. Fica difcil descrever aqui
todas as aplicaes biotecnolgicas que
os fungos apresentam. No entanto, alguns exemplos sero dados para que o
leitor tenha cincia da importncia dos
fungos em biotecnologia. No presente
artigo, alguns exemplos foram escolhidos pelo seu valor econmico ou histrico ou por serem derivados de trabalhos
realizados no Brasil.
Exemplos do uso biotecnolgico
de fungos manipulados
geneticamente

Figura 2- Colnias de fungo, resultantes

de um cruzamento sexual entre fungos da
mesma espcie, porm, com mutaes para
diferentes cores. Notam-se colnias rosadas (caracters-tica dada por um gene)
em contra-posio a colnias brancas,
verdes e amarelas. A proporo de colnias rosadas em relao s outras de 1:1
evidenciando uma segregao que comprova as leis mendelianas da gentica.

com produo de 60mg/litro. Graas a

tcnicas de induo de mutaes e seleo de mutantes, alm da melhoria das
condies de cultivo, os aumentos foram
constantes at atingir o valor de 7g/litro.
Atualmente, estima-se que existam linhagens industriais de Penicillium capazes de produzir mais de 50g/litro, ou seja,
um aumento de 25.000 vezes em relao
linhagem original de Fleming (figura 4).
Esse exemplo demonstra a importncia
das tcnicas clssicas no melhoramento
gentico de microrganismos de valor
industrial. Alis, foi com a produo de
antibiticos que a biotecnologia teve seu
incio efetivo na dcada de 40, adquirindo em seguida a importncia que tem
atualmente, quando acrescida das modernas tecnologias, especialmente a do
DNA recombinante. na indstria de
antibiticos que existem outros exemplos comparveis ao descrito para a penicilina, tanto utilizando fungos como
bactrias.

Figura 3- Fuso de protoplastos em fungos

A produo de antibiticos
Um dos exemplos mais impressionantes de melhoramento gentico, utilizando tcnicas de gentica clssica, incluindo seleo e mutao, ocorreu no
fungo
filamentoso
Penicillium
chrysogenum. Quando Fleming relatou,
pela primeira vez, em 1929, o grande
valor potencial desse fungo produtor da
penicilina no combate a doenas infecciosas causadas por bactrias, estava longe
de imaginar que sua linhagem, que produzia menos de 2mg do antibitico por
litro de meio de cultivo, teria sua produo melhorada em milhares de vezes. Por
seleo natural, foram obtidas linhagens
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

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A produo de cidos
orgnicos
Diferentes cidos orgnicos so produzidos industrialmente por fungos. Dentre estes fungos, destaca-se o Aspergillus
niger, responsvel pela produo de vrios compostos teis, incluindo o cido
ctrico. Exemplos de melhoramento gentico empregando-se tcnicas de gentica clssica e molecular nesse fungo tm
sido descritos. No Estado de So Paulo,
uma linhagem industrial utilizada para
produo de cido ctrico em cultura de
superfcie, isto , em bandejas contendo
meio de cultura lquido com sacarose
como fonte de carbono, foi melhorada no
laboratrio do Setor de Gentica de Microrganismos do Instituto de Gentica da
Escola Superior de Agricultura Luiz de
Queiroz, da Universidade de So Paulo
(ESALQ/USP), em Piracicaba, resultando
em um aumento na produo de at 30%
de cido, em relao cultura original.
Foram utilizadas tcnicas de mutao,
seleo e fuso de protoplastos (figura
5). Quando as linhagens melhoradas foram levadas indstria, ocorreram aumentos considerveis na produo de
cido ctrico. Esse um dos exemplos
brasileiros que demonstram que os princpios genticos na biotecnologia, quando racionalmente aplicados, podem levar, com poucos custos, a ganhos substanciais na indstria.
A produo de etanol
O Brasil tem larga experincia na
produo de lcool combustvel. O Programa Nacional do lcool desencadeado
no final dos anos 70, decorrente da crise
do petrleo, gerou uma srie de
tecnologias prprias, tornando o nosso
pas lder mundial nesse sentido. No
poderia deixar de ocorrer, portanto, o
desenvolvimento de processos visando
produo de linhagens melhoradas da
levedura Saccharomyces cerevisiae, responsvel pela produo de etanol. Linhagens mais produtivas, com caractersticas
desejveis para produo de etanol e
com monitoramento na indstria por tcnicas de marcao molecular, foram desenvolvidas em vrios laboratrios, salientando-se mais uma vez os da ESALQ/
USP, em Piracicaba. Por tecnologia do
DNA recombinante, os laboratrios de
pesquisa das universidades de Braslia e
da USP desenvolveram em conjunto linhagens de leveduras contendo genes
de amilases capazes de utilizar o amido,
por exemplo de mandioca ou batatadoce, na produo de etanol. Essas leve14

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

es mistas (duas espcies de leveduras)

ou, o que seria pior, adio de acar.
Esse trabalho resultou em patente que
est em vigor, e a levedura melhorada
desenvolvida na Universidade de Caxias
do Sul (UCS), no Rio Grande do Sul, j
est sendo utilizada com sucesso na produo de vinhos de alta qualidade.
O controle biolgico de insetos
por fungos

Figura 4 - Melhoramento gentico para produo de penicilina pelo fungo filamentoso

Penicillium chrysogenum (modificado de
Elander R. P. (1967)). Enhanced penicillin
Biosynthesis in mutant and recombinant strais
of Penicillium chrysogenum. In Induced
mutations and their utilization (H.Stubbe,Ed.)
pp 403-423. Akademic-Verlag, Berlim.

duras manipuladas geneticamente esto

sendo aperfeioadas e podero desempenhar um importante papel na produo de etanol. A tecnologia do DNA
recombinante tem sido tambm usada
por esses e outros laboratrios brasileiros
e do exterior na clonagem e
seqenciamento de genes de interesse
industrial em fungos.
A biotecnologia na enologia
Um outro exemplo, tambm brasileiro, o do melhoramento via fuso de
protoplastos com produo de hbridos,
empregando-se espcies diferentes de
leveduras utilizadas na fabricao do vinho. Por fuso de protoplastos, foi obtido
um hbrido entre as leveduras
Saccharomyces
cerevisiae
e
Schizossaccharomyces pombe reunindo
caractersticas favorveis dos dois gneros de fungos em uma s clula (figura 6).
Esta, multiplicada e retrocruzada com a
linhagem original de Saccharomyces
cerevisiae, resultou em linhagem capaz
de utilizar uvas cidas, como as que
ocorrem em certas safras na regio Sul do
pas, na produo de vinhos finos, sem
necessidade de utilizao de fermenta-

Assim como os fungos podem eventualmente causar doenas em plantas e

mamferos, tambm os insetos podem
ser atacados por certos fungos (figura 7).
Se usados convenientemente, eles podem ser empregados no controle de
insetos-pragas de plantas cultivadas ou
mesmo de insetos vetores de doenas. O
Brasil, possuindo um clima tropical em
grande parte de seu territrio e com
vastas reas cultivadas, tem dificuldades
na utilizao do controle qumico de
insetos, que se torna at invivel e
antieconmico em certas condies, alm
de causar desequilbrios biolgicos e problemas de intoxicao. A soluo ento
o uso e aplicao de tcnicas na produo de inseticidas microbianos que
possam, se no substituir, pelo menos
diminuir o uso de agroqumicos com
vantagens econmicas e de preservao
do ambiente. O Brasil talvez seja o pas
onde as pesquisas e a utilizao em larga
escala de fungos entomopatognicos,
isto , os que atacam insetos, tm tido
maior sucesso. Melhoramento gentico
clssico, desenvolvimento de marcadores
moleculares, clonagem de genes e outros estudos tm sido realizados em um
esforo conjunto abrangendo diversas
instituies. Assim, vrios centros da
Empresa Brasileira de Pesquisa
Agropecuria (EMBRAPA), a ESALQ/USP,
a UNICAMP, o Centro de Biotecnologia
da UFRGS, a Universidade Estadual de
Londrina, a UCS a UFPernambuco, alm
de empresas privadas, tm trabalhado
com fungos como o Metarhizium

Figura 5- Protoplastos de um fungo. Os

protoplastos foram corados, mostrando que
eles possuem vrios ncleos (corpos azuis) no
seu interior.

anisopliae, Beauveria bassiana e

Nomuraea rileyi aplicando tecnologias
clssicas e modernas para um melhor
conhecimento da biologia e gentica
desses fungos e no desenvolvimento de
linhagens mais eficientes no controle
biolgico de insetos.
Controle biolgico de doenas de
plantas e fungos endofticos Como no
caso do controle biolgico de insetos por
fungos, existem tambm exemplos de
fungos que atuam como controladores
de doenas de plantas. Novamente o
emprego racional dos mesmos pode prevenir doenas causadas por microrganismos fitopatognicos. A utilizao desses
controladores naturais restringe tambm
a aplicao abusiva de fungicidas. As
tcnicas de produo massal desses
controladores biolgicos, a otimizao
dos processos de aplicao e o melhoramento gentico dos fungos empregados,
tornando-os mais eficientes, vm sendo
desenvolvidos em laboratrios do Brasil e
exterior. Exemplos de interesse tm sido
obtidos em alguns centros de pesquisa da
EMBRAPA no Sul e Sudeste do pas.
Recentemente tem sido verificado que
fungos e bactrias encontrados internamente em vegetais, particularmente em
suas partes areas como folhas e ramos,
tm enorme importncia no controle de
doenas de plantas e tambm de insetos.
Uma boa quantidade da populao de
microrganismos que existe no interior de

Figura 6 - Clulas hbridas resultantes de um

cruzamento por fuso de protoplastos entre
duas espcies de leveduras. O produto vem
sendo empregado com finalidades enolgicas
na fabricao de vinhos finos.

a desses endofticos. O estudo de fungos endofticos feito em pases de

clima temperado; entretanto, so escassos os trabalhos com plantas tropicais.
Devido a isso, vrios laboratrios do
Brasil (ESALQ/USP, UNESP, em BotucatuSP, Universidade Federal de Gois,
Fiocruz, no Rio de Janeiro, Universidade
Federal do Amazonas e outras) tm
isolado e encontrado novas caractersticas de valor biotecnolgico em fungos
endofticos. A sua manipulao gentica
tem sido feita no intuito de serem
clonados genes de interesse, de tal modo
que sua reinoculao em plantas cultivadas poder levar introduo nos
vegetais de caractersticas novas e de
interesse biotecnolgico.
CONCLUSES

Figura 7 - Fungo entomopatognico atacando inseto em seu estado larval. Nota-se

que uma das lagartas est completamente
recoberta pelo fungo, ao lado de outra sadia,
no atacada.Os fungos que causam doenas
em insetos so usados para controlar pragas
da agricultura em um processo de controle
biolgico.

plantas constituda por fungos que so

denominados de fungos endofticos. Eles,
alm de controlarem doenas e pragas,
podem possuir outras propriedades, como
alterar o metabolismo das plantas, impedindo formao de sementes ou produzindo hormnios que causam modificaes no desenvolvimento dos vegetais.
Existem, tambm, casos de incremento
de produo em plantas, graas presen-

Os exemplos citados no esgotam

nem de longe o potencial que os fungos
apresentam em biotecnologia. A viso
que se pretendeu dar por meio dos
exemplos selecionados foi de que a
gentica, o melhoramento gentico e a
biotecnologia em fungos, embora j
tenham produzido resultados realmente assombrosos, como no caso do melhoramento para produo de antibiticos, ainda tm muito mais a oferecer.
evidente que, no Brasil, um nmero
maior de micologistas, geneticistas de
fungos e biologistas moleculares tem
que existir para conseguir estudar no
s as espcies j conhecidas como tambm toda a biodiversidade ainda
inexplorada no grande reino dos fungos.
Referncias bibliogrficas
Seguem algumas referncias gerais, onde o leitor poder encontrar mais
dados sobre a biotecnologia em fungos.
So citados tambm alguns trabalhos de
autores nacionais referentes s pesqui-

sas acima mencionadas.

Alves, S.B. (1997) Controle
Microbiano de Insetos. Editora FEALQ,
Piracicaba (esta a segunda edio que
dever estar disponvel no segundo semestre deste ano e que apresenta vrios
captulos sobre uso de fungos no controle
biolgico de insetos).
Astolfi Filho, S; Galembeck, E.V.;
Faria, J.B. & Frascino A.C.S. (1986)
Stable yeasts transformants that secrete
functional alfa-amilase encoded by cloned
mouse pancreatic cDNA. Biotechnology
1:47-54 (trabalho realizado no Brasil envolvendo a UNB e a USP, sobre manipulao de levedura de interesse para produo de etanol).
Azevedo, J. L. (1986) Gentica de
Microrganismos em Biotecnologia e Engenharia Gentica (apresenta uma srie
de captulos com revises de diversos
autores sobre aspectos biotecnolgicos
em fungos, incluindo controle biolgico,
produo de cido ctrico, enzimas
hidrolticas e leveduras de uso enolgico.
Possui tambm captulos descrevendo as
tcnicas de fuso de protoplastos e a
tecnologia do DNA recombinante).
Azevedo, J. L. (1997) Endophytic
fungi and their roles mainly on tropical
plants. Seventh International Symposium
on Microbial Ecology (captulo de livro
que dever estar publicado ainda em
1997. O captulo possui dados sobre
fungos endofticos com nfase nos isolados de plantas no Brasil).
Ball, C. (1984) Genetics and
breeding of industrial microorganisms.
CRC Press, Boca Raton, Florida (contm
captulos
sobre
mtodos
de
melhoramento de fungos e suas
aplicaes biotecnolgicas, com nfase
na produo de antibiticos).
Bettiol, W (1991) Controle Biolgico
de Doenas de Plantas. EMBRAPA/
CNPDA, Jaguarina (possui captulos
sobre o uso de fungos no controle
biolgico de doenas de plantas e seu
valor biotecnolgico).
Carrau, J. L.; Azevedo, J. L.; Sudbery,
P. & Campbell, D. (1982) Methods for
recovery fusion products among
oenological strains of Saccharomyces
cerevisiae and Schizossacharomyces
pombe. Revista Brasileira de Gentica
5:221-226 (publicao original, em grande
parte feita no Brasil, sobre obteno de
levedura hbrida de valor enolgico).
Saunders, V.A. & Saunders, J.R.
(1987) Microbial genetics applied to
Biotechnology. Croom-Helm, London
(apresenta as diversas aplicaes da
gentica de fungos no melhoramento
gentico de espcies de valor industrial).

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

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