Experimentacin

SEC: cromatografa de exclusin por tamao

Collision/reaction cell: Una celda de colisin / reaccin es un
dispositivo usado en la espectrometra de masas de plasma acoplado
inductivamente para la eliminacin de iones de interferencia o iones
poliatmicos en el plasma que pasa.
La celda de reaccin de colisin conocido como celda de reaccin
dinmica. La clula de reaccin dinmica es una cmara colocada
antes de la cmara de espectrometra de masas de plasma.
Estos iones se eliminan mediante la inyeccin de un gas de colisin
(He), o un gas reactivo (H2), o una mezcla de los dos, directamente
en el plasma a medida que fluye a travs del cono de muestra.
El anlisis de biomolculas de metal se realiz usando cromatografa
de exclusin por tamao acoplada inductivamente a espectrometra
de masas de plasma (ICP-MS).
En este trabajo se usaron dos sistemas ICP-MS independientes y
las condiciones de experimentacin se encuentran en la tabla 1.
Dos columnas de SEC de diferente rango de masa molecular
fueron usadas.
Un espectrmetro ultravioleta-visible (UV/VIS) para deteccin de
protenas fue usado con la columna de cromatografa de
exclusin por tamao para molculas de alta masa molecular
(HMM-SEC column).
Una centrifuga fue usada para la separacin del sobrenadante
(fraccin soluble) despus de la extraccin de biomolculas a
partir de los tejidos.
Un liofilizador se utiliz para secar las muestras antes del
anlisis total del elemento.
Para la determinacin total de Hg y Selenio se utiliz muestras
de tejidos, extractos (Fraccin soluble) y residuo (fraccin
insoluble) se digirieron utilizando un sistema de microondas de
marca Milestone Ethos plus equipado con control de
temperatura y presin.
El anlisis total se realiz con espectrometra de masas de
plasma usando el modo de celda de colisin con H2, siendo el
H2 el gas de colisin.

REACTIVOS
Todos los reactivos fueron de grado analtico - reactivo.
Protenas utilizadas para la calibracin de masa de las columnas
de la SEC fueron ferritina, amilasa, alcohol deshidrogenasa,

albmina de suero bovino, anhidrasa carbnica, citocromo c y

vitamina B12.
Tris compuesto orgnico conocido como tris (hidroximetil)
aminometano y cido clorhdrico.
Solucin patrn o estndar de 1,000 g ml-1 de Hg se prepar
disolviendo el cloruro de mercurio (II) (99 %) en 5 % HNO3
(cido ntrico).
Solucin patrn de 1000 g ml-1 de Se, Rodio y titanio.
H2O2 (35%) and HNO3 (65%) se utilizaron para digerir las
muestras de tejido, extractos (fraccin soluble) y la fraccin
insoluble residual.
Se obtuvo agua ultrapura fue obtenido de un sistema de
purificacin de agua, ELGA Purelab.

Muestreo y almacenamiento
o Ciervo rojo y jabal (subadultos, > 2-3 aos de edad) fueron
cazados en " monteras " (grandes cazas), que suelen durar 3
horas, momento en el final de la cual fueron asesinados los
animales.
o Caractersticas generales de las muestras se dan en la Tabla S2.
o Las muestras de hgado y rin fueron tomadas de los animales
en el lugar, en porciones colocadas en bolsas de plstico zip-lok
y almacenados en un refrigerador porttil a 4C antes de ser
transferido en un congelador a -80C, dentro de 2 h.
o Toda la informacin acerca de la muestra ubicaciones se
muestra en la Fig. S1.
Cuantificacin total, extrable y residual de Hg y Se

Para determinar el contenido total de Hg y Se, muestras (hgado

y los riones tanto de ciervo rojo y jabal) se liofilizaron y
homogeneizaron.
Aproximadamente 0,2 g de la muestra
liofilizada se digiri con 8 ml de 69 % HNO3 y 2 ml de 35 % H2
O2. La digestin se llev a cabo a partir de la temperatura
ambiente hasta 200 C en 5 min, se mantiene a 200 C
durante 5 min, y se eleva a 220 C en 5 minutos, y se mantuvo
a 220 C durante otros 5 min antes de que se dejara enfriar
hasta la temperatura ambiente.
Las muestras digeridas se diluyeron a un volumen final
apropiado con ultra-agua pura. Los extractos se mantuvieron
refrigerados a 4 C hasta su anlisis por ICP- MS. Los blancos
se procesaron en cada lote de digestiones. Soluciones utilizadas
para la calibracin se prepararon 1,000 g ml - 1 de cada
elemento.
Rodio y talio (15 g L - 1) fueron utilizados como estndares
internos para Se y Hg, respectivamente.

Despus de realizar la extraccin de biomolculas a partir de

tejido de rin de los ciervos rojos, los extractos (soluble
fraccin) y el residuo (fraccin insoluble) se liofilizaron y
continuacin, se analizaron usando las condiciones descritas
anteriormente.