PRCTICA NO.

3 COFACTORES E INHIBIDORES
1. INTRODUCCIN.
En la mayora de las clulas el principal proceso de
formacin de ATP es la fosforilacin oxidativa
El proceso comienza con una transferencia de
electrones a partir de un sustrato reducido (SH2)
hacia NAD o FAD, segn si la deshidrogenasa
inicial es dependiente del NAD o el FAD. Cuando
el proceso empieza en el nivel del NAD, el
siguiente protador es el FMN. Cualquiera que sea el
sustrato inicial, los electrones del portador flavnico
se transfieren luego a la coenzima Q, de ah pasan
por una secuencia especfica de portadores
citocrmicos y, en ltima instancia, pasan al O2,
que funciona como aceptor final.[2]

2. METODOLOGA
Para la preparacin de la coenzima se pesaron 10 gr
de msculo de pollo a los cuales se realiz
molienda y se colocaron en bao Mara para
despus centrifugarlos a 3000 rpm durante 15
minutos.
Para la preparacin de la enzima se pesaron 10 gr
de msculo de pollo y se le agrego 10 mL de NaCl
al 0.9% el cual despus de la molienda en un bao
frio se dej reposar durante 30 minutos, pasado el
tiempo de centrifugado a 3000 rpm durante 15
minutos.
Para la preparacin de la deshidrogenasa succnica
y citocromos, se pes el corazn de pollo y por
cada gramo se le agregaron 8 mL de Na2HPO3 0.06
M los cuales se molieron en un bao de hielo y se
dejaron reposar durante 30 minutos. Una vez que se
obtuvieron las centrifugaciones se colocaron en
tubos para determinar la deshidrogenasa lctica,
deshidrogenasa succnica y el citocromos y
citocromo oxidasa.

3. RESULTADOS Y DISCUSIN
En la prueba deshidrogenasa lctica solo en los
tubos 1, 2,3 y 5 la actividad de deshidrogenasas se
llev a cabo de manera satisfactoria ya que se logr
observar decoloracin en estos gracias a que los
tubos se prepararon de manera correcta puesto que
contenan lo que un reactivo tpico para el anlisis
de las isoenzimas de la deshidrogenasa debe
contener:
1. Substrato reducido (en nuestro caso el lactato de
sodio al 1%).
2. Coenzima (sobrenadante).
3. Colorante oxidado (en este caso azul de
metileno)
4. Un transportador intermediario de electrones
(LDH)
5. Amortiguador; iones activados si es necesario.
En el tubo 4 no se observ decoloracin alguna
debido a que segn las indicaciones de preparacin

no se agreg sobrenadante LDH lo que nos deja

ver por qu no ocurre una reaccin, esto es debido
a que
la lactato deshidrogenasa cataliza la
transferencia de dos electrones y un ion de
hidrogeno del lactato (el cual no est presente) al
NAD+, siendo la reaccin procedente a una
velocidad mesurable solo en presencia de lactato
deshidrogenasa (la cual no se encuentra presente en
este caso). [3]
En la prueba de deshidrogenasa succnica en el tubo
numero 3 no hubo reaccin alguna esto debido a
que no se le agrego sobrenadante SDH segn la
tabla de preparacin y ya que a diferencia de otras
enzimas del ciclo del cido ctrico, la succinato
deshidrogenasa es una protena de la membrana
interna. La enzima puede transferir, pues, electrones
directamente desde su FADH2 unido a los otros
transportadores respiratorios unidos a la membrana.
Al igual que la NADH deshidrogenasa, la succinato
deshidrogenasa transfiere los electrones a travs de
los centros hierroazufre a la coenzima Q, y su
nombre completo es succinato-coenzima Q
reductasa (tambin se la denomina succinato
deshidrogenasa o complejo II. La cual no estaba
presente y no hubo transferencia de electrones
provocando que no se realizara la reaccin
esperada. [4]
En la prueba de citocromos y citocromo oxidasa los
reactivos contenidos en los tubos son incoloros y no
se observ ninguna coloracin o reaccin durante el
momento de incubacin una explicacin a esto es
que excepto por la citocroomoxidasa, los
citocromos estn clasificados tambin como
deshidrogenasas.
Los
citocromos
son
hemoproteinas que contienen hierro, en las cuales el
tomo de este metal oscila entre Fe+3 y Fe+2
durante la oxidacin y reduccin. En la preparacin
de los tubos se utiliz Cianuro de potasio (KCN al
0.01%) en consecuencia los iones cianuro (CN-),
sulfuro (S-), las azidas y el monxido de carbono
deben su accin inhibitoria a la formacin de
complejos con metales. Por tanto, todas las
metaloenzimas son susceptibles de ser inactivados
por estos agentes. En particular, es llamativa la
inactivacin en sistemas que contienen Fe, Cu y Zn;
en menor medida, Mn y Co. El efecto txico del
cianuro se debe a la inactivacin de la citocromo
oxidasa al ocupar la sexta posicin de coordinacin
de un hemo a, grupo prosttico de los citocromos a.
[1]

4. CONCLUSIONES
Despus de haber analizado los resultados
obtenidos llegamos a la conclusin de que la
actividad enzimtica estuvo presente en las pruebas
realizadas as como la presencia de inhibidores que
se discuti en la tercera prueba, en tanto a los
cofactores tambin se not su presencia en la
prueba de deshidrogenasa lctica ya que la reaccin
se dio de manera satisfactoria.

5. REFERENCIAS
[1] Bataner Arias, E. Introduccin a la Bioqumica,

[2] Bohinski, Robert C. (1991) Bioqumica. En:

Fosforilacin Oxidativa. E.M. Ramn, B.B.
Ernesto (eds). Pearson Adison Wesley, Mxico.
pp: 567-603
[3] Horton, H.R., Moran, L.A., Ochs R.S., Rawn
J.D., Scrimgeour K.G. (1995) Bioqumica. PHH
Press. Edo. De Mxico.12-2,12-3, 12-19, 12-20,
y 12-26 p.
[4] Mathews, C. K.; Van Holde, K. E.; Ahern, K.
G. (2002) Bioqumica. pearson educacin, s. a.
Nez de Balboa, 120,28006 Madrid

2, parte 2 a: enzimologa. Universidad de

salamanca ISBN 978-84-9012-296-9

Reporte de prctica