UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

TINGO MARA

FACULTAD DE INGENIERA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

DEPARTAMENTO ACADMICO DE CIENCIAS, TECNOLOGA E
INGENIERA DE ALIMENTOS

LABORATORIO N4 ULTRASONIDO

CURSO:

FISICA I

DOCENTE:

SANTISTEBAN ALVARADO, CESAR A.

INTEGRANTES:

MILLA TELLO THALIA

PEREZ NIETO MARIA DE LOS ANEGELES
SALAS PEDRAZA NOEMI
TANGOA REINA WENDY
TINGO MARA
PER

I.
INTRODUCCIN
La poblacin microbiana existente en nuestro entorno es grande y
compleja. Cientos de especies microbianas habitan normalmente en
distintas partes de nuestro cuerpo, incluidas la boca, el tracto
intestinal y la piel. Al nacer, los microbios inmediatamente empiezan
a colonizar nuestros cuerpos, as como a casi todos los objetos del
mundo. Ellos flotan alrededor hasta que entran en contacto con una
superficie que ofrezca comida y resguardo. Se encuentran ms
frecuentemente en la oscuridad, en objetos hmedos que a menudo
entran en contacto con la comida, la suciedad o la vegetacin. Las
superficies del bao, los cepillos para el cabello, los refrigeradores,
los lavaplatos y las tablas de cocina tienen a menudo muchos
microbios. Las manijas y las paredes tienen menos porque son
pobres en nutrientes y secos.
Un estudio adecuado de microorganismos que hay en estos hbitats
requiere tcnicas que permitan conocer y ordenar la compleja
poblacin mixta o cultivo mixto, separndole en sus distintas
especies como cultivos puros. Un cultivo puro consta de una
poblacin de clulas derivadas todas ellas de una clula parental.
Los microorganismos se cultivan en el laboratorio sobre materiales
nutritivos denominados medios. Se dispone de una gran cantidad de
medios y la clase que se debe de utilizar depende de muchos
factores, uno de los cuales es la clase de microorganismos que se va
a cultivar. El material que se inocula sobre el medio se denomina
inculo mediante alguna tcnica (siembra por estra en placa o
siembra en masa en placa). Durante la incubacin a 37: C, las
clulas microbianas individuales se reproducen tan rpidamente que
en un lapso de 18 a 24 horas producen masas visibles de clulas
denominadas colonias. Procedentes del inculo original queda muy
cerca una de otra sobre el medio de Agar, la masa de clulas
observables no ser un cultivo puro. La mayora de los microbios en
nuestro cuerpo y otras superficies son inofensivas, pero algunos son
patgenos o causan enfermedad. Por esta razn, queremos controlar
el nmero de microbios que nos rodea. La posibilidad de infectarnos
aumenta con el nmero de microbios en los objetos circundantes.
Pero qu podemos hacer para reducir el nmero de microbios en
las superficies que nos rodean?, es una pregunta muy eficaz que
hasta ahora no se logra responder.

II.
OBJETIVO
Aprender a sembrar microorganismos en un medio de cultivo.
Aislar microorganismos por la tcnica de siembra por estra en una placa
Petri con agar nutritivo y obtener un cultivo puro.
Identificar y aprender los diferentes mtodos para la siembra de
microorganismos
Aprender la importancia de los microorganismos para su aislamiento e
identificacin
III.

MARCO TEORICO

3.1. Crecimiento Microbiano

Entendemos por crecimiento microbiano el aumento del nmero de
microorganismos a lo largo del tiempo. Por tanto, no nos referimos al
crecimiento de un nico microorganismo que denominaremos ciclo celular, sino
al demogrfico de una poblacin. En este tema nos centraremos en el
crecimiento de bacterias, el estudio que se hace puede servir tambin para
entender el crecimiento de levaduras y de otros hongos. El crecimiento de los
virus se produce de otra forma diferente y ser tratada al final de este captulo.
Denominamos ciclo celular al proceso de desarrollo de una bacteria aislada. A
lo largo del ciclo celular tiene lugar la replicacin del material gentico, la
sntesis de componentes celulares, la elongacin de la bacteria para alcanzar
un tamao doble del inicial y su divisin por biparticin para dar lugar a dos
clulas hijas. La duracin del ciclo celular coincide con el tiempo de generacin
y depende, en general, de los mismos factores de los que depende este. El
crecimiento de una poblacin resulta de la suma de los ciclos celulares de
todos los individuos de dicha poblacin. Los cultivos de microorganismos de los
que hemos hablado son asincrnicos puesto que en ellos cada microorganismo
se encuentra en un punto diferente del ciclo celular. Por consiguiente, en un
momento determinado en un cultivo se encuentran clulas que acaban de
dividirse, otras que estn replicando su ADN, otras que estn creciendo, otras
que estn iniciando la divisin celular, etc. En un cultivo sincrnico todas las
clulas se encuentran simultneamente en la misma fase del crecimiento

celular. Los cultivos sincrnicos son muy difciles de mantener por lo que su
importancia est principalmente ligada a los estudios bsicos de biologa
microbiana. Sin embargo, en la naturaleza, las bacterias del suelo se
encuentran en condiciones de crecimiento prximas a la fase estacionaria (en
la que se produce una cierta sincronizacin del cultivo) y, por consiguiente,
durante cierto tiempo las poblaciones naturales probablemente se comporten
como relativamente sincrnicas.
Las poblaciones de bacterias crecen de forma explosiva acumulando grandes
nmeros en un periodo de tiempo muy reducido. Puesto que el efecto de los
microorganismos es en la mayora de los casos depende de su nmero,
entender cmo se produce el crecimiento microbiano es importante para poder
evitar o reducir sus efectos nocivos y potenciar los beneficiosos o aplicados.
3.2. Cultivo de Microorganismos
El

cultivo

de

microorganismos

consiste

en

proporcionarles

las

condiciones fsicas, qumicas y nutritivas adecuadas para que puedan

multiplicarse de forma controlada. En general, podemos distinguir cultivos
lquidos y slidos en funcin de las caractersticas del medio y cultivos
discontinuos y continuos en funcin de la disponibilidad de nutrientes en el
medio.
3.3. Medios de Cultivo
Un microorganismo necesita para crecer nutrientes que le aporten
energa y elementos qumicos para la sntesis de sus constituyentes celulares.
Dependiendo de la fuente de carbono que utilizan, los microorganismos se
pueden clasificar en auttrofos si es el CO 2 atmosfrico (microorganismos que
foto sintetizan) y hetertrofos si utilizan carbono orgnico. La frmula elemental
de un microorganismo es, aproximadamente, C 4H7O2N lo que supone que los
componentes de las clulas son: carbono que representa alrededor del 50% del
peso seco, oxgeno (32%), nitrgeno (14%), fsforo (3%), azufre (en torno al
1%) y otros elementos traza entre los que se encuentran Fe, K, Mg, Mn, Co,
Mb, Cu y Zn. La elaboracin de medios de cultivo requiere proporcionar los
elementos antes citados en una forma asimilable. As, por ejemplo, el C debe
estar en forma de carbono orgnico para los hetertrofos y como CO 2 para los

auttrofos, el N en forma de NH 4, de NO3 - o de NO2 - o en forma de

aminocidos a los que se pueda tomar su grupo amino; el P debe estar en
forma de PO4, el S procede de aminocidos sulfurados o de SO 4, etc. Adems,
en ciertos casos, es necesario aadir a los medios de cultivo algunos
aminocidos o vitaminas que determinados tipos de microorganismos no
pueden sintetizar. En el caso de la levadura del pan (Saccharomyces
cerevisiae)

la

frmula

elemental

C3.72H6.11O.95N0.61S0.017P0.035K0.056

esta

ms

concreta

es:

puede

variar

composicin

ligeramente en funcin de las condiciones de cultivo o de fase de crecimiento.

El conocimiento de la frmula elemental del microorganismo que se cultiva
facilita la formulacin del medio de cultivo ms adecuado para el mismo.
Los medios de cultivo se pueden clasificar en definidos cuando su composicin
qumica se conoce totalmente y complejos cuando no es el caso porque estn
compuestos por mezclas de extractos de materiales complejos (extracto de
levadura, extracto de carne, etc.). Por otra parte, los medios de cultivo pueden
ser lquidos o slidos si se aade algn agente solidifican te que no sea
consumible por los microorganismos (normalmente agar). En funcin de los
microorganismos que pueden crecer en ellos, los medios pueden ser
generales,

selectivos

cuando

favorecen

el

crecimiento

de

ciertos

microorganismos mientras suprimen el de otros (por ejemplo, el medio SPS

para clostridios), diferenciales cuando alguno de sus componentes permite
identificar las colonias de un tipo de microorganismos (por ejemplo medios con
hemates para identificar colonias de microorganismos hemolticos), selectivodiferenciales cuando combinan las dos caractersticas anteriores (por ejemplo,
el agar de MacConkey para identificar Escherichia coli), y medios de
enriquecimiento que permiten aislar un tipo determinado de microorganismo a
partir de una mezcla una poblacin mixta de gran tamao.
METODO Y CULTIVO
METODOS CULTIVO PLACA AGAR
Se utilizan variaos mtodos de siembra por estras en superficie entre las
cuales tenemos el mtodo francs y el clsico, la finalidad de estos, es obtener
colonias separadas.

METODO FRANCES (Estra compuesta)

Se flamea el asa y se toma la muestra del material a estudiar. Coloque el
inoculo en uno de los extremos de la caja de petri con el medio de cultivo
indicado. Extienda el cultivo haciendo 4 o 5 estras paralelas, sin romper el
agar. Flamee de nuevo el asa enfrela y sin tomar ms muestra, haga 4 o 5
estras paralelas formando un ngulo recto con las anteriores. Este paso se
repite hasta cubrir toda el rea de la caja.
METODO CLASICO (estra simple)
Flamee el asa y se toma muestra del material a estudiar. Extienda de un
extremo a otro formando lneas en zigzag hasta cubrir toda el rea de la caja.
CULTIVO EN AGAR INCLINADO
Rotule el tubo con su nombre, el nombre del germen que va inocular y la flecha
en que se hace el inoculo. Con la mano derecha tome la aguja de inoculacin y
flamela. Sin soltarla, djela enfriar. Sostenga el tubo con el cultivo en la mano
izquierda, remueva el tapn con el meique de la otra mano y sostngalo de tal
manera que no toque ninguna superficie. Flamee la boca del tubo. Retire con el
agua de inoculacin una porcin de la colonia. Flamee nuevamente la boca del
tubo. Tpelo y descrtelo. Toma el tubo a inocular, destpelo, flamelo e
inoclelo, haciendo una estra en su superficie en lnea recta. Flamee de nuevo
la boca del tubo, tpelo y colquelo en la gradilla. Antes de descartar la guja de
inoculacin, esterilcela. Incube a 37 grados centgrados por 24 a 48 horas.
Describa las caractersticas del crecimiento bacteriano en agar inclinado.
CULTIVO EN AGAR NUTRITIVO
El crecimiento de las bacterias en medios lquidos se manifiesta por la
aparicin de: turbidez o sedimento, velo en la superficie del medio y olor
caracterstico. Para la siembra proceda de igual manera que en el caso anterior
pero utilizando el asa y agitndola en un medo lquido. Incube a 37 grados por
24 o 48 horas, interprete los resultados
CONCEPTO DE CULTIVO PURO

Se denomina cultivo puro (axnico) al que contiene slo un tipo de

microorganismos. Los cultivos puros se inician a partir de colonias aisladas, de
manera que todos los individuos del mismo tengan la misma composicin
gentica. Los cultivos puros son esenciales para poder estudiar las
caractersticas de los microorganismos y para poder identificarlos con
seguridad. Sin embargo, cada vez se va conoce ms sobre el funcionamiento
de las comunidades bacterianas lo que debe hacernos reflexionar sobre el
hecho de que un cultivo puro supone unas condiciones no naturales y que, por
consiguiente, la fisiologa de los microorganismos en ambientes naturales
puede ser diferente de la que presentan en condiciones de cultivos puros.
IV.

MATERIALES Y METODOS

MATERIALES
-Gradilla
-Tubos de ensayo
-Aza de siembra
-Placas Petri
-Mechero Bunsen
EQUIPOS
-Incubadora
MTODO
EXPLICATIVO: antes de comenzar con la siembra de microorganismos, el
profesor explico: que para tener una buena siembra es necesario hacerlo al
lado de un mechero bunsen, destapar la caja Petri, flamear la punta del aza
hasta que se ponga rojo vivo y luego tomar la muestra con la punta del aza, ya
con la muestra (caldo nutritivo) estriar ,esto nos garantiza que el
microorganismo crezca y se expanda en todo la muestra, flamear el aza
nuevamente, tapar la placa Petri y escribir los datos necesarios (nombre del
microorganismo, nombre del medio, nombre del grupo y fecha), voltear y
proceder a incubar por 24 horas. Luego de las 24 horas, sembrar
microorganismos en los tubos de ensayo agar-agar en dos formas de estra,
inclinadas y rectas. Siempre teniendo en cuenta que los materiales tienen que
estar bien esterilizados.

m.o

sembrar en agar nutritivo

Incubar 24 h/ 37C

Tomar un m.o
aislado

Incubar 24h/37C
-Observar color, forma y tamao.

V.

RESULTADOS
La bacteria cultivada presento las siguientes caractersticas:
Blanco opalescente y presentan un

COLOR

caracterstico brillo metlico.

FORMA DE COLONIA

redondeadas

TAMAO (DIAMETRO)

poseen un dimetro de 5 mm

VI.

DISCUSIN

La siembra en placa Petri nos permite cultivar microorganismos gracias a que

tiene los nutrientes necesarios para su desarrollo, el crecimiento de los
microorganismos se manifiesta de formas diferentes dependiendo de la tcnica
utilizada para su siembra y el tipo de medio en el que realizo dicha siembra, de
esta forma es posible obtener caractersticas morfolgicas distintas cuando se
realizan siembras de una misma muestra en diferentes medios de cultivo o
viceversa.
El cultivo de microorganismos es una tcnica que puede llevarse a cabo al
proporcionar a los microorganismo un medio favorable para su crecimiento. Ello
significa que las nuevas clulas dispongan de los nutrimientos necesarios en
forma adecuada para emplearlos como materiales sintticos, una fuente de
energa y temperatura, oxgeno y otros factores que sean adecuados.
El crecimiento de los microorganismos se manifiesta de diferentes formas,
dependiendo del tipo de dilucin y siembra realizada.
Las descripciones de colonias en placas de caldo nutritivo incluirn tamao,
forma, color. Pueden obtenerse tambin datos semejantes de los medios de
cultivos en medios inclinado de Agar. Estas caractersticas del crecimiento con
frecuencia son tpicas de ciertas especies, aunque como en el caso de la
morfologa, aparecen a veces variaciones temporales en distintas condiciones
de cultivo.
El crecimiento bacteriano realizando la siembra por estra no fue claramente
observable, presentando una forma de desarrollo en colonias separadas.
Cabe suponer que cada colonia aislada es la descendencia de una sola clula
y, por tanto un cultivo puro.
La forma de desarrollo es una de las caractersticas que contribuyen la
morfologa de las clulas bacterianas.
Entre las principales caractersticas de las bacterias figuran su tamao, su
forma, su estructura y tipo de agrupacin. Estas caractersticas constituyen la
morfologa de la clula bacteriana y la definen en un grupo taxonmico.
Los resultados obtenidos muestran que para todas las placas presentaba la
formacin de desarrollo en colonias separadas, consistencia membranosa,
ausencia de cromognesis y en cuanto a la cantidad se pudo percibir
crecimiento escaso, abundante y moderado. Este ltimo dependiendo de la
forma en la cual fue realizada la siembra.

En la siembra en tubos se pudo permitir claramente el crecimiento de

microorganismos presentando forma de desarrollo filiforme y predominando la
consistencia viscosa. En la siembra por puncin, se manifiesta el crecimiento
de la lnea, esta representa la movilidad del microorganismo.
Las caractersticas de las colonias que atraen mayor atencin son: el tamao,
la forma, la elevacin, el contorno, la superficie, la apariencia, el color y
textura.
La movilidad se considera como una adaptacin que facilita la supervivencia al
aumentar las posibilidades de obtencin de alimento.
Un organismo mvil crece solamente siguiendo la lnea de inoculacin por
picadura.

VII.

CONCLUSIONES

Durante el experimento se pudo observar que los diferentes materiales que

tocamos hay microorganismos que se encuentran en el medio que convivimos.
Las bacterias que se encuentran en estos ambientes son transitorias, lo cual
esta permanente latente en la superficie hasta la muerte.

El desarrollo de microorganismos anaerobios facultativos en un medio

lquido se manifiesta a travs de la turbidez.
El crecimiento bacteriano realizado en la siembra en placas por estra
fue claramente observable en formas de burbujas blancas.
El desarrollo de colonias formadas a partir de las diluciones seriadas
presentan caractersticas que difieren en forma, borde, elevacin,
superficie y estructura interna, lo cual es notablemente influenciado por
las concentraciones de carga microbiana del medio en el cual dichas
colonias se desarrollan.
El desarrollo de colonias formadas a partir de los mtodos realizados por
estras y extensin el placa Petri defieren en forma, borde, elevacin,
superficie y estructura interna, lo cual es notablemente influenciado por
las concentraciones de carga microbiana del medio en el cual dichas
colonias se desarrollaron as como por el mismo medio de cultivo.
En general aprendimos a sembrar microorganismos por diferentes
mtodos obteniendo resultados satisfactorios.

VIII.

F1. Colonias de M.O en Agar nutritivo

ANEXOS

F2. Cepa de ECOLI (AGUA)

F3.
Esterilizacin de la asa de siembra

F4. Estriado del Agar

F5. Caldo nutritivo con ECOLI

F6. Siembra de M.O en el caldo

Y muestra solidificada

IX.

BIBLIOGRAFIA

http://labmicrofarmaciaulat.blogspot.pe/p/sembrado-en-placa-demicroorganismos.html
http://es.slideshare.net/rebecaoloarte/tecnicas-de-siembra-de-microorganismos
http://meplunesr.blogspot.pe/2011/05/universidad-nacional-experimentalsimon.html
BARRETO, Miriam. 1994. Manual Prctico de Microbiologa General. Canoabo
CARPENTER, Philip. 1969. Microbiologa. 2da Edicin. Editorial Interamericana,
S.H. Mxico.
PELCZAR. 1990. Microbiologa. 2da Edicin. Editorial. Mc Graw-Hill. Mxico.
WALTER, W.G. 1980. Introduccin a la Microbiologa. Editorial Continental.
Mxico.
GRASSINI, Luis. 1967. Microbiologa Agraria. UCV-Facultad de Agronoma.
Caracas-Venezuela.
BLAIR, J. 1970. Manual Clnico de Microbiologa. Bethesda. AMER-SocMicrobiolgica.
BIOLOGIA DE LOS MICROORGANISMOS MICHAEL T. MADIGAN, JOHN
MARTINKO, JACK PARKER- EDITORIAL PEARSON.
INTRO. A LA MICROBIOLOGIA-GERARD J.TORTORA-EDITORIAL MEDICA
PANAMERICANA.