Beruflich Dokumente
Kultur Dokumente
RESTRICTION ENZYME
DNA LIGASE
Konvensional vs Modern
Konvensional : okulasi, stek
Modern : teknik penggandaan gen yang
menghasilkan turunan yang sama sifat baik dari
segi hereditas maupun penampakannya dengan
induknya
CLONING VECTOR
Cloning Vectors
Cloning vector - a carrier of foreign DNA into a host cell, replicates
inside a bacterial (or yeast) cell and produces many copies of itself
and the foreign DNA
BACTERIAL PLASMID
PLASMID
Bacterial genome
(5000kb)
Plasmid DNA
(3kb)
DNA Ekstrakromosom
DNA Utas Ganda Sirkuler Berukuran
Kecil
Dapat Melakukan Replikasi
Secara Genetik Dapat Ditransfer
Secara Stabil
Bagian Plasmid
Titik Replikasi (ORI)
Tempat-tempat Restriksi Untuk Penyisipan Gen
- Multiple Cloning Sites Regions of known
restriction (NdeI, HindIII, EcoRI, etc.) sites that
permit insertion or deletion of the gene of interest
Penanda Ketahanan Genetik
Plasmid Vector
ENZIM RESTRIKSI
How it works?
Cohesive (sticky) ends overhanging single-stranded ends
Blunt ends double-stranded, non-overhanging ends
Bacteria
Sequence
EcoRI
E.coli
G AATTC
HindIII
Haemophilus influenzae
A AGCTT
Taq I
Thermus aquaticus
T CGA
SmaI
Serratia marcescens
CCC GGG
Double Restriction/Digestion
Penggunaan dua enzim untuk memotong DNA
Mapping Restriction
Proses pencarian informasi struktural pada
potongan2 DNA dengan menggunakan enzim
restriksi
Aim: to determine which restriction enzymes cut the
cloned gene.
Bam
ENZIM LIGASE