Manual de Bioquímica PDF

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA
FACULTAD DE AGRONOMA
MANUAL DE
PRACTICA PARA
BIOQUMICA.
REA DE CIENCIAS
SUB REA DE CIENCIAS QUMICAS
GUATEMALA ENERO 2010
NDICE
CONTENIDO
PAGINAS
NDICE ..................................................................................................................................................................... 2
REUNIN DE INFORMACIN GENERAL DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA ............................... 5
1. INTRODUCCIN ...................................................................................................................................................... 5
2. OBJETIVOS ................................................................................................................................................................ 5
3. MATERIALES ........................................................................................................................................................... 6
4. METODOLOGA ....................................................................................................................................................... 6
PRACTICA No. 1 SELECCIN DE LA MUESTRA VEGETAL A TRABAJAR EN EL LABORATORIO .. 7
1. INTRODUCCIN ...................................................................................................................................................... 7
2. OBJETIVOS ................................................................................................................................................................ 7
3. MATERIAL DE APOYO LAS BIOMOLCULA ................................................................................................. 8
4. CUESTIONARIO PRE LABORATORIO .......................................................................................................... 13
5. MATERIALES ........................................................................................................................................................ 15
6. METODOLOGA .................................................................................................................................................... 15
7. EVALUACIN DE LA PRCTICA .................................................................................................................... 16
PRCTICA 2. PREPARACIN DE MUESTRAS VEGETALES PARA ANLISIS QUMICO SECADO,
MOLIDO Y TAMIZADO DE MUESTRAS VEGETALES ............................................................................... 17
1. INTRODUCCIN .................................................................................................................................................. 17
2. OBJETIVOS ............................................................................................................................................................. 17
3. MARCO TERICO ................................................................................................................................................ 18
4.
CUESTIONARIO PRE LABORATORIO PRCTICA 2 .................................................................................. 21
5. MATERIALES ........................................................................................................................................................ 22
6. METODOLOGA .................................................................................................................................................... 23
8. PARA INCLUIR EN EL REPORTE DE PRCTICA: ..................................................................................... 24
9. INVESTIGAR .......................................................................................................................................................... 24
PRCTICA No. 3 EXTRACCIN Y ESTUDIO CUALITATIVO DE PROTENAS EN MUESTRAS
VEGETALES......................................................................................................................................................... 25
1. INTRODUCCIN ................................................................................................................................................... 25
[Escr FACULTAD DE AGRONOMA
LABORATORIO DE BIOQUMICA
2. OBJETIVOS ............................................................................................................................................................. 25
3. MARCO TERICO. ............................................................................................................................................... 26
4. CUESTIONARIO PRE LABORATORIO PRCTICA 3 ................................................................................ 31
5. MATERIALES ........................................................................................................................................................ 32
6. METODOLOGA ................................................................................................................................................... 33
8. PARA INCLUIR EN EL INFORME EN LA DISCUSIN.............................................................................. 37
PRCTICA 4 ESTUDIO DE AMINOCIDOS DE MUESTRA VEGETALES............................................. 38
1. INTRODUCCIN ................................................................................................................................................... 38
2. OBJETIVOS: ............................................................................................................................................................ 38
3. MARCO TERICO. ............................................................................................................................................... 39
5. MATERIALES ........................................................................................................................................................ 47
6. METODOLOGA. ................................................................................................................................................... 48
7. PARA INCLUIR EN EL INFORME DE PRCTICA: ..................................................................................... 53
9. RESULTADOS Y ANLISIS DE RESULTADOS PARA EL REPORTE ................................................... 54
PRCTICA No. 5 ESTUDIO DE AMINOCIDOS, CROMATOGRAFA DE AMINOCIDOS Y
ESPECTROFOTOMETRA. .............................................................................................................................. 56
1. INTRODUCCIN ................................................................................................................................................... 56
2. OBJETIVOS ............................................................................................................................................................. 56
3. MATERIAL DE APOYO CROMATOGRAFA (11)....................................................................................... 57
5. MATERIALES DE LA PRCTICA V ................................................................................................................. 65
6. METODOLOGA .................................................................................................................................................... 66
Prctica No. 6 EXTRACCIN DE GLCIDOS DE MUESTRAS VEGETALES ........................................ 75
1. INTRODUCCIN ................................................................................................................................................... 75
2. OBJETIVOS ............................................................................................................................................................. 75
3. MATERIALES ........................................................................................................................................................ 76
4. METODOLOGA .................................................................................................................................................... 77

PRCTICA 7 ESTUDIO DE GLCIDOS DE MUESTRAS VEGETALES ................................................... 79
1. INTRODUCCIN ................................................................................................................................................... 79
2. OBJETIVOS ............................................................................................................................................................. 79
3. MATERIAL DE APOYO GLCIDOS (CARBOHIDRATOS) (3,7,15,20) ................................................ 80
5. MATERIALES ........................................................................................................................................................ 88
6. METODOLOGA .................................................................................................................................................... 89
7. PREPARACIN DE REACTIVOS ..................................................................................................................... 91
Prctica No. 8 EXTRACCIN DE LPIDOS DE MUESTRAS VEGETALES .......................................... 101
1. INTRODUCCIN ................................................................................................................................................. 101
2. OBJETIVOS ........................................................................................................................................................... 101
3. MATERIALES ...................................................................................................................................................... 102
4. METODOLOGA .................................................................................................................................................. 103
5. EVALUACIN DE LA PRCTICA: ................................................................................................................. 104
Prctica No. 9 ESTUDIO DE LPIDOS DE MUESTRAS VEGETALES .................................................. 105
1. INTRODUCCIN ................................................................................................................................................. 105
2. OBJETIVOS ........................................................................................................................................................... 105
3. MATERIAL DE APOYO ESTUDIO DE LPIDOS DE MUESTRAS VEGETALES ............................... 106
4. CUESTIONARIO PRE LABORATORIO PRCTICA 9 .............................................................................. 112
5. MATERIALES ...................................................................................................................................................... 113
6. METODOLOGA .................................................................................................................................................. 114
7. EVALUACIN DE LA PRCTICA .................................................................................................................. 118
8. PARA EL REPORTE DE PRCTICA .............................................................................................................. 118
BIBLIOGRAFA................................................................................................................................................. 120
REUNIN DE INFORMACIN GENERAL DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA
1. INTRODUCCIN
Para iniciar el Laboratorio de Bioqumica, se plantea esta primera reunin, de carcter obligatorio,
para enterar a los estudiantes de las disposiciones generales que aqu debern cumplirse. Esta es
una parte del laboratorio que el estudiante suele obviar, pero que, por la trascendencia de la
misma, se plantea como parle de la asistencia.
Adems de lo antes dicho, puede aprovecharse la reunin para que el estudiante conozca a su
instructor d laboratorio y viceversa, con la finalidad de que se cimienten las bases de una buena
comunicacin sobre la cual pueda edificarse el conocimiento.
A su vez, el instructor de laboratorio formar grupos de trabajo a quienes har responsables de
un locker, con la finalidad de qu las actividades prcticas s realicen con el mayor orden posible.
2. OBJETIVOS
2.1. GENERAL
Informar a los estudiantes de las disposiciones generales del laboratorio de Bioqumica.
2.2.
ESPECFICOS:
Revisar el contenido del programa de Laboratorio de Bioqumica.
Revisar el reglamento de Laboratorio de Bioqumica.
Revisar las normas de cuidado de materiales dentro del laboratorio.
Dar lectura a los "aspectos a considerar para el buen uso del Manual de prcticas de
bioqumica.
Ampliar la informacin antes revisada, o bien aclarar aquellas dudas que el estudiante
pudiese tener sobre algn tpico de la informacin general del Laboratorio.
Formar los grupos de trabajo para el desarrollo ordenado del Laboratorio de Bioqumica.
3. MATERIALES
Programa de Laboratorio do Bioqumica.
Reglamento de Laboratorio de Bioqumica.
Reglamento para Uso de Materiales de Laboratorio.
4. METODOLOGA
El instructor de laboratorio habr d presentarse a los estudiantes y tomar asistencia a
esta reunin.
El instructor de laboratorio repartir los tres reglamentos mencionados en los listados
de materiales" de esta sesin de laboratorio.
Se proceder a dar lectura al Programa de laboratorio de Bioqumica.
Se proceder a dar lectura al Reglamento d laboratorio de Bioqumica.
Se proceder, a dar lectura al Reglament para uso de materiales de laboratorio.
El instructor de laboratorio ampliar aquella informacin que fuese requerida por los
estudiantes.
Se formarn grupos de trabajo con un mximo de 4 integrantes, para favorecer la
realizacin de las prcticas y el aprendizaje de los estudiantes.
PRACTICA No. 1 SELECCIN DE LA MUESTRA VEGETAL A TRABAJAR EN EL

LABORATORIO
1. INTRODUCCIN
Algunas veces se ha escuchado en la Subrea de Ciencias Qumicas, la inquietud de los estudiantes
por encontrar, desde el inicio, un "sentido" a los laboratorios de la Subrea. No han quedado de
lado aquellos estudiantes que ven al laboratorio simplemente como un requisito para la
aprobacin del curso, y es qu mucho de lo que un estudiante puede aprovechar de un laboratorio,
est ligado con la manera en cmo se lo presenten.
Es por ello que ahora se inicia el Laboratorio de Bioqumica con los fundamentos que puedan
crear un espritu de inters en el estudiante, esto es, algunas bases sobre las que pueda descansar
el proceso de aprendizaje en el laboratorio, con la pretensin de que el estudiante se site en el
contenido del Laboratorio de Bioqumica y logre contextualizar l mismo en el campo de la
Agronoma.
Procurando no caer en la profundizacin terica -lo cual corresponde a la teora de curso- se har
una breve descripcin de lo que es una "Biomolcula", y junto a ello la identificacin de las
molculas que se estudiarn posteriormente en el Laboratorio.
As mismo, se aprovechar la reunin de esta semana para adelantar un poco de la Prctica 2 a fin
de que no se sobrecargue de trabajo la semana asignada a dicha prctica.
2. OBJETIVOS
Explicar la importancia del laboratorio de Bioqumica dentro de la Carrera de Ingeniero
Agrnomo.
Ubicar el trmino "Biomolcula" en la Jerarqua Organizativa de la Vida.
Identificar las Biomolculas y Macromolculas que se van a trabajar en el laboratorio.
Seleccionar el material vegetal que se trabajar en el laboratorio.
Iniciar el proceso de preparacin del material vegetal seleccionado.
3. MATERIAL DE APOYO LAS BIOMOLCULA

c)
3.1. La materia viva posee diversas caractersticas (15)
Alguna vez estudiaste en Biologa General lo que distingue a los organismos vivos de los objetos
inanimados; ahora mencionaremos uno de" estos atributos: "Un organismo vivo es
estructuralmente complicado y altamente organizado. Poseen intrincadas estructuras internas
(Fig. 1) y contienen muchos tipos de molculas. Ello contrasta con la materia inanimada del
entorno -arcilla, arena, rocas, agua del mar que suele consistir en mezclas de compuestos qumicos
relativamente simples.
C4
C3
Fig. 1 corte transe versal de hoja. Observe como se aprecia la organizacin y complejidad microscpica
"Cada uno de los componentes de un organismo vivo tiene una funcin especfica. Esta afirmacin
no es solamente cierta para estructuras macroscpicas como las hojas y los tallos, el corazn y los
pulmones, sino tambin para estructuras intracelulares microscpicas como el ncleo y los
cloroplastos".
La bioqumica trata de explicar la vida en trminos qumicos (5)
"Las molculas que componen los organismos vivos cumplen todas las leyes familiares de
la qumica, pero tambin la interaccin entre ellas, de acuerdo con otra serie de principios
a los que nos referiremos colectivamente como la lgica molecular de la vida. Estos
principios son un conjunto de relaciones que caracterizan la naturaleza, la funcin, as
como las interacciones de las Biomolcula.
"Si los organismos vivos se componen de molculas intrnsecamente inanimadas, cmo pueden
estas molculas dar lugar a la remarcable combinacin de caractersticas que llamamos vida?
Cuales la razn de que un organismo vivo parece ser ms que la suma de sus partes inanimadas?
8
El objetivo fundamental de la ciencia 'bioqumica es el de determinar de qu modo interactan los

organismos vivos con otros los conjuntos de molculas inanimadas que constituyen los
organismos vivos para mantener y perpetuar la vida. En otras palabras, la bioqumica tiene como
objetivo explicar las estructuras y funciones biolgicas en trminos qumicos. Aunque la
bioqumica proporciona conocimientos y aplicaciones prcticas que son importantes en medicina,
agricultura, nutricin e industria, su preocupacin ltima es el prodigio de la vida misma.
3.2. Debajo de la diversidad biolgica subyace una informacin qumica (15)
Por favor piense un poco en la diversidad de seres vivos que conoce. Piense en un conejo, en un
caballo, en un insecto -de los que se miran en Entomologa General-, en un roble (Quercus sp), en el
frijol (Phaseolus vulgaris), piense en una bacteria o un hongo (de los que se pueden apreciar al
cursar Microbiologa General). Si compara cada una de las cosas en las que pens, en un principio,
parece haber muy pocas cosas en comn.
Sin embarg, despus de cien aos de investigacin bioqumica, resulta evidente que los
organismos vivos son notablemente similares en los niveles qumico y microscpico.
3.3. Biomolculas
Lehninger, Nelson y Cox (15) dicen que al comenzar el estudio de las biomolculas y sus
interacciones, algunas cuestiones bsicas requieren atencin. Qu elementos, qumicos
pueden encontrarse en las clulas? Qu tipos de molculas conforman la materia viva?
En qu proporciones se hallan? Cmo llegaron a formar parteado ella? De qu manera
las molculas presentes en las clulas vivas son especialmente adecuadas para cumplir su
cometido?
"Prcticamente todos los compuestos orgnicos a partir de los que se construyen los organismos
vivos son productos de la actividad biolgica. Estas biomolculas fueron seleccionadas a lo largo
del proceso de evolucin biolgica en razn de su idoneidad para llevar a cabo funciones
bioqumicas y celulares especficas".
3.4. Composicin qumica (15)
"A principios del siglo diecinueve resultaba claro para los qumicos que la composicin de la
materia viva era sorprendentemente diferente de la del mundo inanimado.
3.5. La materia viva se compone principalmente en los elementos ms ligeros
"Los cuatro elementos ms abundantes en loa organismos vivos, en trminos de porcentaje sobre
el nmero total de tomos, son el hidrgeno, el oxgeno, el nitrgeno y el carbono, que en conjunto
representan ms del 99% de la masa de la mayor parte de los clulas.
3.6. Las biomolculas son compuestos de Carbono

"La qumica de los organismos vivos se organiza alrededor del elemento carbono, que representa
ms de la mitad del peso seco de las clulas.
Recuerde un poco el contenido de curso de "Qumica Orgnica": "los tomos de carbono unidos
covalentemente pueden formar cadenas lineales, cadenas ramificadas y estructuras cclicas y en forma
de celda. A estos esqueletos carbonados se les unen otros grupos de tomos, denominados grupos
funcionales, que confieren propiedades qumicas especficas a la molcula.
Las molculas que contienen esqueletos carbonados unidos covalentemente se
denominan compuestos orgnicos; el nmero de ellos y su variedad son casi ilimitados.
La mayor parte de biomolculas son compuestos orgnicos; podemos por tanto deducir que
la versatilidad de enlace del carbono constituy un factor decisivo en la seleccin de los
compuestos de carbono para la maquinaria molecular de las clulas durante el origen y la
evolucin de los organismos vivos"(15)
3.7. Los grupos funcionales determinan las propiedades qumicas:
"Puede considerarse que la mayor parte de biomolculas son derivados de los
hidrocarburos, compuestos que tienen un esqueleto de tomos de carbono unidos
covalentemente a los que slo se unen tomos de hidrgeno.
Los esqueletos de hidrocarburo son muy estables.
Los tomos de hidrgeno pueden ser
reemplazados por una amplia gama de grupos funcionales para dar lugar a las diferentes
familias de compuestos orgnicos.
"Muchas biomolculas son poli funcionales y contienen dos o ms tipos diferentes de grupos
funcionales, cada uno de ellos con sus propias caractersticas qumicas y su reactividad propia: Los
aminocidos, una importante familia de biomolculas que actan principalmente como
subunidades monomricas de las protenas, contienen como mnimo dos tipos diferentes de
grupos funcionales: un grupo amino y un grupo carboxlico. La capacidad de un aminocido para
condensarse con otros aminocidos para formar las protenas depende de los propiedades
qumicas de estos dos grupos funcionales''.
3.8. Reactividad qumica (15) .
"Los hidrocarburos saturados -molculas con enlaces simples carbono-carbono y sin enlaces
dobles o grupos sustituyentes- no son fcilmente atacados por la mayora de los reactivos
qumicos; las biomolculas, quo pueden, poseer diversos tipos de grupos funcionales, son mucho
ms reactivas qumicamente. Es posible analizar y predecir el comportamiento qumico y las
reacciones de las biomolculas a partir de los grupos funcionales que contienen".
10
3.9. Las macromolculas y sus subunidades monomricas (15)

"Muchas de las molculas que se encuentran dentro de las clulas son macromolculas,
polmeros de alta masa molecular construidos a partir de precursores relativamente simples.
Las
macromolculas
pueden
formar
posteriormente
estructuras
supra macromoleculares, dando lugar a las unidades funcionales del tipo de los ribosomas,
las membranas y los orgnulos (Ver Fig. 2)
:
"Las macromolculas son los constituyentes principales de los organismos. Prcticamente
toda la materia slida de cualquier tipo de clulas es orgnica y se halla presente en cuatro formas:
protenas, cidos nucleicos, polisacridos y lpidos.
"Las protenas, largos polmeros de aminocidos, constituyen, el agua aparte, la
fraccin celular mes importante; las protenas son quizs las ms verstiles de los
biomolculas, en cuanto a sus mltiples funciones y propiedades. Los cidos nucleicos,
DNA y RNA, son polmeros de nucletidos. Participan en el almacenaje, transmisin y
traduccin de la informacin gentica. Los polisacridos, polmeros de azcares simples
como la glucosa, tienen dos funciones principales: como almacn de combustibles
energticos y cmo elementos estructurales extracelulares.
Los lpidos, derivados hidrocarbonados grasos o aceitosos, sirven de componentes estructurales
do las membranas y de reserva de combustible rico en energa, adems de cumplir otras
funciones.
"Las macromolculas se construyen a partir de subunidades monomricas. En las macromolculas
protenas, cidos nucleicos y polisacridos el nmero de subunidades monomricas es muy
grande.
NOTA: Si esto ltimo le confunde un poco, no se preocupe, pues esto es lo que se ir estudiando en
el laboratorio de Bioqumica.
Antes de continuar, se recordar un poco de lo visto en el Curso de Biologa General,
respecta a la jerarqua de organizacin de un organismo vivo.
Esto servir para poder ubicar el contenido del laboratorio de Bioqumica en un
contexto Agronmico, pues con esta Figura 2, es posible concatenar ideas, para ubicar
el sitio de las "Biomolculas" en una planta (pilar fundamental de la Agronoma).
3.10. Existe una jerarqua en la estructura celular
"Las subunidades monomricas (aminocidos, azcares simples como la glucosa, etc.), que se
unen para formar las macromolculas, Son muy pequeas comparadas con las macromolculas
biolgicas. Una molcula d un aminocido como la alanina tiene una longitud menor de 0.5 nm.
Lo hemoglobina, la protena transportadora de oxgeno de los eritrocitos, est formada por
aproximadamente 600 aminocidos unidos covalentemente en cuatro largas cadenas, que se
11
pegan en forma globular y se asocian en una estructura tetramrica con un dimetro de 5,5 nm.
Por su parte, las molculas de protena son pequeas en comparacin con los ribosomas (de
aproximadamente 20 nm de dimetro), que contienen aproximadamente 70 protenas diferentes y
diversas molculas de DNA. Los ribosomas, son a su vez, mucho ms pequeos que orgnulos
cmo las mitocondrias, de dimetro aproximadamente igual a 1000 nm. Existe pues, un gran salto
desde las biomolculas sencillas hasta las estructuras celulares que pueden observarse con el
microscopio ptico. (Ver Fig. 2)
Fig. 2 Organizacin jerrquica en la estructura celular
12
4. CUESTIONARIO PRE LABORATORIO

1. A qu se le llama la Lgica Molecular de la Vida?
2. Cul es el objetivo fundamental de la Ciencia Bioqumica?
3. Cules son los dos niveles en los cuales los organismos vivos (por ejemplo, un roble, un
insecto o un hongo) son notablemente similares?
4. En razn de qu surgieron las biomolculas a lo largo del proceso de evolucin biolgica?
5. Cules son los 4 elementos ms abundantes en los seres vivos?
6. A su juicio personal y fundamentado en lo que ha ledo, qu es lo que determina las

propiedades qumicas y el comportamiento de las biomolculas?
7. Elabore una definicin propia de Biomolcula, indique qu es una macromolcula. Adems

explique si a su juicio hay alguna diferencia entre ambos trminos.
8. Enumere las 4 macromolculas que se presentan en el material de apoyo a esta prctica.

Adems indique cul de esas 4 es la que tiene mayor versatilidad de funciones y propiedades.
9. Seales las funciones generales de los cidos nucleicos, los polisacridos y los lpidos.
10. Esquematice lo que para usted significa la frase siguiente: las macromolculas se construyen a
partir de subunidades monomricas.
13
11. Para resolver este tpico piense, por ejemplo, en un conjunto formado por varios
subconjuntos. Luego piense cmo la unin de estos lo hace a aqul.
12. Esquematice grficamente, de manera clara y sencilla, cada uno de los trminos sealados en
la Fig. 2 del Material de apoyo de esta prctica, procurando que su esquema guarde una
secuencia lgica. Por ejemplo: se le pudiera ocurrir esquematizar una hoja de Frijol como
ejemplo de rgano.
13. Ordene ascendentemente (en funcin de su tamao), los trminos siguientes: rgano,
subunidad monomrica, organismo vivo, complejos supra moleculares, orgnulos, tejido,
macromolcula, sistema, clula.
14. Conteste con sinceridad si usted cree que ha podido ubicar el tema central de estudio de este
laboratorio (biomolcula) como parte integradora de una Planta. Cree usted que al lograr esta
ubicacin es posible enmarcar el Laboratorio de Bioqumica en un Contexto Agronmico?
Explique. Recuerde que su Instructor de Laboratorio est para asesorarle y ayudarle a resolver
sus dudas.
14
5. MATERIALES
A cargo de cada estudiante
Manual de prcticas de Laboratorio de Bioqumica
Cuaderno de prcticas de laboratorio.
6. METODOLOGA
Revisin del fundamento terico y explicacin del instructor de laboratorio:
Resolver un examen corto del fundamento terico contenido en el "Material de Apoyo".
Revisin del cuestionario pre-laboratorio y solucin a interrogantes de los estudiantes.
Entrega del cuestionario pre-laboratorio.
Identificacin de las biomolculas y macromolculas que se estudiarn en el Laboratorio de
Bioqumica
Revisar de forma general el documento de laboratorio de Bioqumica, procurando
identificar las biomolculas y macromolculas que se tratarn en las prcticas respectivas.
Realizar un listado de las biomolculas y macromolculas que se van a trabajar en las prcticas
de laboratorio.
En el listado anterior, procure colocar al menos, dos ejemplos de cada biomolcula
macromolcula.
Seleccin del material vegetal a trabajar en el laboratorio:
Al observar los objetivos de su instructivo, se ve que durante el laboratorio de Bioqumica, se va a
estudiar las macromolculas. En funcin de ello, la seleccin del material vegetal estar muy ligada
al contenido (en porcentaje peso/peso) de dichas molculas.
El material a trabajar debe, cumplir con las caractersticas siguientes:
Que lo seleccionado sea un rgano vegetal (semilla, tallo, hoja, fruto, etc.) que no posea
demasiados pigmentos (como podra ser el caso del caf o el laurel).
Que sea factible preparar harina de ese rgano vegetal
Para la seleccin de un material vegetal especfico seguir las recomendaciones siguientes:
Que se tenga un porcentaje no menor que 10%, de al menos dos biomolculas y/o
macromolculas (protenas, carbohidratos, lpidos).
Conocer la planta seleccionada.
Tener la facilidad de conseguir la planta.
15
Toda vez seleccionada la planta que se va a trabajar, cada sub-grupo de laboratorio, se dirigir o.
su instructor para pedir por la aprobacin de la planta a trabajar.
Para ello debe tener al menos dos opciones de plantas (que cumplan con lo sealado
anteriormente) y presentar al instructor una pequea tabla con los datos siguientes:
Nombre comn y nombre cientfico de la planta.
Lugar (es) donde se le puede conseguir (nombre del almacn u otro lugar de
suministro del material vegetal)
Contenido, en porcentaje, de biomolculas y/o macromolculas
Contenido de humedad
Porcin no comestible de la planta.
Inicio del proceso de preparacin de la muestra vegetal aprobada;
Cuando el instructor apruebe la planta a trabajar, los estudiantes procedern a
comprar el material suficiente para poder preparar una buena cantidad de harina de la
muestra vegetal. De 700 gramos en adelante, de material vegetal.
Cuando tengan la muestra vegetal, refirase al numeral 6.1 de la prctica 2 (en caso
de semillas) y/o al numeral 6.4 de la prctica 2 (para el secado de la muestra vegetal).
Luego los alumnos averiguarn el porcentaje de humedad de la muestra vegetal,
utilizando el horno de conveccin (a una temperatura no mayor a 60oC).
Refirase a la metodologa que se emplea en el laboratorio de la Subrea de Ciencias
Biolgicas de la FAUSAC, para averiguar el contenido de humedad de la muestra vegetal.
Para hacer esto puede serle de utilidad los numerales 6.1 y 6.2 del Instructivo de la
Prctica 2 de este laboratorio.
Anote los resultados de sus clculos en su cuaderno de laboratorio y entrguelos
como parte de la Tarea No. 1.
Recuerde que el material vegetal que se va a utilizar en la siguiente prctica debe
llevarlo seco, para que su instructor autorice la realizacin de dicha prctica.
7. EVALUACIN DE LA PRCTICA
Examen Corto con un nivel de dificultad similar al del CUESTIONARIO PRE
LABORATORIO.
Tarea No. 1:
Usted deber entregar individualmente un trabajo corto, escrito. Para ello debe resolver y realizar
aquello que est planteado, que aparecen en el Instructivo de Prctica 1. La parte prctica indicada
en esos mismos ser evaluada al momento de que los estudiantes lleven su material debidamente
seco, para la preparacin de la harina, en la Prctica 2.
16
PRCTICA 2. PREPARACIN DE MUESTRAS VEGETALES PARA ANLISIS

QUMICO SECADO, MOLIDO Y TAMIZADO DE MUESTRAS VEGETALES
1. INTRODUCCIN
En el laboratorio de Bioqumica, se plantea un estudio de protenas, carbohidratos y lpidos dentro
de un contexto agronmico, y es por ello que el anlisis de estas biomolculas se har en muestras
de vegetales.
No obstante el aplicar pruebas analticas a muestras de vegetales a alguien le pudiese parecer
insuficiente para crear un contexto agronmico en cada prctica. En funcin de esto, se realiz una
planificacin de actividades, la semana anterior (Prctica 1), y en esa oportunidad se pudo
seleccionar aquel vegetal, que por su contenido, de al menos dos de las tres molculas biolgicas
en cuestin, es adecuada para el trabajo a lo largo de todo el laboratorio.
Luego cada grupo de trabajo ha conseguido una muestra suficiente de la planta escogida. As se
llega a la presente reunin de laboratorio, en donde la atencin se centrar en preparar dicho
material vegetal, con lo, cual se pretende proveer al estudiante de herramientas de trabajo del
campo agronmico.
2. OBJETIVOS
Al finalizar la prctica, el alumno deber estar en capacidad de:
Preparar muestras vegetales para el anlisis a realizar en el laboratorio de Bioqumica de la
FAUSAC.
Utilizar de manera correcta, el equipo de laboratorio utilizado en la presente prctica.
17
3. MARCO TERICO
Cuando se hace referencia a "preparar" muestras vegetales para anlisis qumico, en el contexto
del laboratorio de Bioqumica de la FAUSAC, se est hablando del proceso de colecta, secado,
molido y tamizado de dichas muestras. Este proceso incluye la "extraccin" de los compuestos a
analizar, sin embargo, esto se deja como un apartado puesto que se estar trabajando ms
adelante (16)
3.1. Recopilacin botnica
Es el estudio botnico de la familia o gnero de plantas a investigar con el objeto de no cometer
errores en el momento de la recoleccin, pues en ocasiones hay varias plantas, miembros de
familias o gneros, que por lo comn contienen las mismas sustancias de inters y debe decidirse
cul planta escoger en el momento. (6)
3.2. Investigacin bibliogrfica de la planta de inters (6)
Consiste en hacer un estudio exhaustivo sobre todo lo que se encuentra escrito sobre
determinado gnero o familia del vegetal a investigar con el objeto de tener la mayor cantidad
posible de informacin y conocer, por ejemplo, que parte de la planta es rica en ciertos
constituyentes, qu tipo de constituyentes se conoce que contiene, qu parte de la planta
recolectar, qu mtodo de extraccin utilizar, etc.
La mayor cantidad de informacin sobre estudios qumicos en plantas y sustancias aisladas de
ellas, son publicadas en revistas cientficas de muy diversa ndole, pertenecientes a las reas de
Farmacia, Medicina, Agronoma, Botnica, Qumica, Zootecnia, etc.. Por lo tanto la localizacin de
datos sobre un vegetal puede ser muy dificultosa. Sin embargo utilizando publicaciones de
Chemical Abstrais u otros abstractos de la rama de vegetales, puede facilitarse esta bsqueda
bibliogrfica. Adems, actualmente, el recurso Internet es de mucha ayuda.
3.3. Recoleccin de las muestras vegetales
Segn Medinilla (lT), idealmente el anlisis qumico de muestras vegetales debera realizarse
sobre tejidos vegetales frescos. Sin embargo, muchas veces la planta a estudiar proviene de
lugares distantes, o quizs fue colectada en otro continente. En tales casos la planta debe ser
secada antes de la extraccin de compuestos.
Debe cuidarse que el material vegetal bajo estudio se encuentre libre de contaminacin con otra
planta. Asimismo, es esencial emplear plantas sanas, que no estn infectadas por virus, bacterias u
hongos. La razn de esto es que no solo podran detectarse productos de sntesis microbiana, sino
que adems estas infecciones podran alterar seriamente el metabolismo de la planta y formarse
productos inesperados, quizs en grandes cantidades (lT).
18
Es necesario reconocer de antemano al vegetal a recolectar entre grupos similares de plantas, as

como saber que parte o partes se van a colectar de acuerdo al inters del investigador. Es
imperativo llevar a cabo una recoleccin de acuerdo a las normas establecidas para ello. (6)
De la tcnica do colecta de plantas en el campo, puede obtenerse una buena referencia
consultando el documento "Algunas indicaciones para la preservacin de plantas", del Herbario de
la FAUSAC (13), razn por la cual no se detalla aqu.
3.4. Secado de las muestras vegetales
Medinilla (17), dice: "es esencial que la operacin de secado se efecte bajo condiciones
controladas para evitar que ocurran cambios qumicos en los constituyentes. Toda muestra
vegetal debe secarse lo ms pronto posible, evitando usar altas temperaturas, y preferiblemente con
una adecuada circulacin de aire".
Segn el documento "Mtodos de Investigacin Fitoqumica" (6), el secado de muestras vegetales
puede realizarse de 2 maneras:
3.4.1. Tcnica de secado al sol:
Esta tcnica es la ms utilizada, debido a que no hay descomposicin de constituyentes, por lo cual
es la tcnica ms recomendable. Secando sobre papel peridico cambiable cada 24 horas hasta unas 4
a 5 veces hasta la eliminacin total del agua
3.4.2. Tcnica de secado artificial:
Utilizando mtodos elctricos o de cualquier otro tipo. Es necesario no calentar a temperaturas
mayores de 60C que podran descomponer ciertos compuestos.
En el documento del Herbario de la FAUSAC (13), dice que en el proceso de colecta de muestras
vegetales, muchos buenos especmenes se pierden por pudricin. Por ello el secado de esas
muestras es imperativo. En ese documento se citan tcnicas de colocacin de muestras vegetales
en una "prensa", con el objeto de preservar de mejor forma la morfologa de la planta, y proveer
una tcnica fcil de secado -que es lo particularmente nos interesa -. Una vez hecho el paquete en la
"prensa", puede dejarse secando lejos de la intemperie y haciendo cambios constantes de papel
peridico, o bien utilizando una cmara desecadora, comnmente utilizada en el herbario.
3.5. Molienda y tamizado del material vegetal
Moler es reducir un cuerpo a partes menudas, o aplastarlo mucho (de aqu en adelante
procuraremos no confundir este trmino con "macerar", por las razones que habrn de
explicarse posteriormente). Para el caso del anlisis de las plantas en el laboratorio de
Bioqumica, se realiza la molienda con el fin de homogeneizar el material a analizar, pues muchas
veces, los compuestos qumicos de inters se encuentran distribuidos heterogneamente en un
rgano vegetal
19
"La molienda debe efectuarse con el material ya seco; con el objeto de reducir a lo mnimo posible el
tamao de la partcula del material a utilizar. Con races o material leoso debe usarse un molino,
teniendo cuidado de que la friccin producida no eleve la temperatura del sistema para evitar
descomposiciones de principios activos o compuestos qumicos de inters. Cuando el material es
ligero (hojas, tallos, flores, etc.) puede utilizarse un mortero manual" (1).
Para el tamizado se utiliza un tamiz de 20 mallas, con el objeto de dejar pasar nicamente
aquellas partculas ms pequeas y separarla de grumos que no suelen ser de inters.
3.6. Procesamiento de las semillas
En el laboratorio de Bioqumica de la FAUSAC suelen utilizarse semillas para el anlisis de las
biomolculas de inters. Por ello debe hacerse una breve referencia de aquellas razones en las que
se fundamentan algunos hechos de la metodologa del instructivo de prctica.
Para principiar, se recomienda eliminar la testa de las semillas a usar, para evitar que exista una
interferencia de pigmentos (13). Sin embargo, esto se hace en funcin de que con el anlisis a
realizar en este laboratorio, se pretende acercar al estudiante al estudio cuali-cuantitativo de
biomolculas, y no se pretende hacer un anlisis detallado de todas las molculas para cada parte de
la planta a utilizar.
Es bueno hacer referencia a la definicin de testa. Testa es la capa exterior de la semilla, y suele
conocerse vulgarmente como la "cascara" de la semilla. Algunas veces es difcil de eliminar (por
ejemplo en el frijol negro, Phaseolus vulgaris) y por ello se recomienda hacer un remojo de no ms de
25 minutos para esa eliminacin. Lo que sucede es que la testa no es impermeable y permite el paso
de agua hacia su interior, provocando que los tejidos internos de la semilla (endospermo y
embrin) absorban agua y se hinchen, facilitando de tal manera la eliminacin de la testa.
20
4. CUESTIONARIO PRE LABORATORIO PRCTICA 2

1. A qu se refiere la "preparacin de muestras vegetales" para anlisis qumico, dentro del
contexto de laboratorio de Bioqumica de la FAUSAC?
2. Cul es la importancia de hacer un recopilado botnico y una investigacin bibliogrfica de

la planta de inters?
3. Por qu debe cuidarse que el material vegetal bajo estudio debe estar sano?
4. Qu documento se le recomienda aqu para la colecta y secado de material vegetal?
5. Por qu razn la operacin de secado debe hacerse bajo condiciones controladas?
6. En qu consiste la tcnica de secado artificial de muestras vegetales
7. Explique por qu cree que se hace la molienda del material vegetal.
8. Qu es la testa de una semilla?
NOTA Cada grupo de trabajo debe traer, para la realizacin de esta prctica, lo siguiente: La
muestra vegetal que se puso a secar das antes de la presente prctica, segn lo estipulado por
el Instructivo de\ Prctica I. Esta muestra debe estar debidamente seca para no: daar el
equipo de laboratorio, por ello su instructor revisar esto al inicio de la prctica.
21
5. MATERIALES
Preparar el rea de trabajo del rea de trabajo:
01 Mortero y 01 pistilo (1 marceador)
02 esptulas
01 Becker de 600 ml
01 balanza mono plato
Papel peridico
01 tamiz de 20 mallas
A cargo del da de laboratorio:
01 horno de conveccin
Papel encerado
Etiquetas auto adhesivo
Tijeras
Masking tape
22
6. METODOLOGA
23
Nota: Debido a que la mayora de grupos de trabajo utilizarn "semillas" de la planta de inters, la
metodologa que se describirn ser para ese rgano vegetal. En caso de utilizar otra parte de la
planta, consultar con su instructor de laboratorio.
Examen Corto con un nivel de dificultad similar al del CUESTIONARIO PRE
LABORATORIO.
Tarea No. 2: Usted deber entregar individualmente un trabajo corto, escrito. Para
ello debe resolver y realizar aquello que est planteado para el reporte.
8. PARA INCLUIR EN EL REPORTE DE PRCTICA:
Reporte la cantidad de semilla utilizada para preparar harina.
Reporte la cantidad de harina obtenida
Reporte el porcentaje de prdida en el proceso de preparacin de harina. Trate de
indicar las razones de prdida de harina.
Indique qu cuidados especiales debern aplicarse a la harina en su almacenamiento.
9. INVESTIGAR
Por qu debe eliminarse la testa de las semillas que se utilizaren como muestras
vegetales para el anlisis en este laboratorio?
Refirase a documentos de Tecnologa de Semillas" o dirjase al rea Tecnolgica
(Subrea de Manejo y Mejoramiento de Plantas) y pregunto sobre quien puede
asesorarle en este tpico.
Por qu se utiliza ms la "tcnica de secado al sol" que la de "secado artificial", en la
preparacin de muestras vegetales para anlisis qumico?
Por qu es necesario calentar las muestras vegetales a temperaturas menores de 60 0C
en la tcnica de secado artificial?
Cul es la razn de efectuar la "molienda" con material vegetal seco?
24
PRCTICA No. 3 EXTRACCIN Y ESTUDIO CUALITATIVO DE PROTENAS EN

MUESTRAS VEGETALES
1. INTRODUCCIN
El contenido proteico es un componente de los anlisis bromatolgicos que se realizan en cultivos
para evaluar su calidad nutricional o para evaluar el efecto, en este aspecto, de algn tratamiento
practicado (16).
Para el estudio de las macromolculas, en este laboratorio, han de realizarse pruebas analticas
(cuantitativas y cualitativas). Dichas pruebas estn diseadas para llevarse a cabo en medio
acuoso. Es por ello que en esta prctica de laboratorio se prepararn soluciones salinas y acuosas
de protenas a travs del proceso de "Extraccin de Protenas" indicado ms adelante.
Con la finalidad de no confundir al estudiante en su proceso de aprendizaje, en esta prctica se
pretende dar a conocer cmo caracterizar a la macromolcula "Protena", sin profundizar, todava,
en las subunidades monomricas que le componen. As que se detendr, por el momento, en el
estudio a travs de dos pruebas de caracterizacin de protenas, que son: La Prueba de Biuret y la
Prueba de Metales Pesados.
Es necesario mencionar, que el estudio cuantitativo de protenas se realizar en una prctica
posterior, a fin de evitar que se sobresature el contenido de prcticas de laboratorio siguientes.
2. OBJETIVOS
Al finalizar la prctica el estudiante deber estar en capacidad de:
Efectuar extraccin salina y extraccin acuosa de las protenas de una muestra Vegetal.
Efectuar la prueba de Biuret para la deteccin de protenas y/o pptidos (de al menos dos
enlaces peptdicos), en los extractos.
Efectuar la prueba de "Precipitacin Proteica por Metales Pesados" para la deteccin de
protenas en los extractos.
Utilizar adecuadamente el equipo y cristalera de laboratorio empleado en la presente
prctica.
25
3. MARCO TERICO.
3.1. Protenas
La importancia de las protenas fue reconocida a comienzos del S. XIX por Mulder (1838): En las
plantas y animales hay presente una sustancia que, sin duda es la ms importante entre las
sustancias conocidas de los seres vivos, y sin ella, la vida sera imposible en el planeta.
Esta sustancia se llama protena.
El nombre protena atestigua la importancia que
sematribuye a esta clase de biomolculas". (19)
Bohinski (2) dice lo siguiente: "Cada protena es nica en trminos de estructura y funcin. No
obstante, tambin existen numerosas semejanzas entre las protenas. Su caracterstica ms
comn es que todas son polmeros formados por aminocidos, los cuales son sus monmeros,
stos se unen en forma covalente unos a otros en secuencia mediante lo que se llama un enlace
peptdico. La estructura resultante, que tiene forma de cadena, recibe el nombre de polipptido,
o simplemente pptido. Cuando un polipptido consta de 50 o ms residuos (unidades) de
aminocidos (un mnimo arbitrario) ya se considera una protena".
Como dicen Lehninger, Nelson y Cox (15), casi todo lo que sucede en la clula requiere la
intervencin de una o ms protenas. Las protenas proporcionan estructura, catalizan
reacciones celulares y llevan a cabo una multitud de tareas. Su papel central en la clula queda
reflejado en el hecho que la informacin gentica se expresa en ltimo trmino en forma de
protenas. En una clula tpica existen miles de protenas diferentes, cada una codificada por
un gen y encargada de realizar una tarea especfica. Las protenas se encuentran entre las
macromolculas biolgicas ms abundantes y son tambin extremadamente verstiles en sus
funciones. Las protenas son las molculas orgnicas ms abundantes en el interior de las
clulas, pues constituyen el 50% o ms de su peso seco.
Las protenas ocupan una posicin central en la composicin y en funcionalismo de la materia
viva. Las actividades fsicas y qumicas que constituyen la vida de la clula estn catalizadas
por enzimas, las cuales son todas de naturaleza proteica (19).
3.2. Extraccin proteica
La visin bioqumica general sobre la estructura y funcin de las protenas proviene del
estudio de muchas protenas individuales. Los mtodos de separacin de protenas
aprovechan las propiedades tales como la carga, tamao y solubilidad, que varan en una y
otra protena (15).
La Extraccin de Protenas tiene que ver mucho con su solubilidad en diversos
compuestos. Dado que muchas protenas se unen a otras biomolculas, las protenas
tambin se pueden separar en base a sus propiedades ligantes. La fuente de una protena es
26
generalmente un tejido o clulas microbianas. Las clulas deben romperse liberando la

protena en una solucin denominada extracto crudo.
Protena: del griego protos, primero. Mulder en 1838 introdujo esta palabra con el sentido de "de
primer orden, o sea, la sustancia ms importante de la materia viva,
Para el caso particular de los laboratorios de Bioqumica de la FAUSAC, interesa la extraccin
acuosa y la extraccin salina. Se suelen preparar soluciones de protena a razn de 5 g. de
protena por litro de solvente. La casena se disuelve en un poco de NaOH (6N), la albmina,
gelatina y peptona se disuelven en solucin salina (NaCl 0.2N) (19)
3.3.
Composicin de las protenas
En la prctica siguiente, se ver cmo las protenas se conforman a partir de aminocidos. El
objeto de colocar aqu, un poco sobre "composicin de Protenas", es para tocar un poco lo de la
solubilidad de las protenas y con ello comprender un poco mejor el tema de la "Extraccin de
Protenas".
Segn Lelninger (15), del aislamiento de muchas protenas en forma pura y cristalina, se ha
aprendido que todas contienen carbono, hidrgeno, nitrgeno y oxgeno, y casi todas
tambin azufre. Asimismo, hay protenas que contiene elementos adicionales, como
fsforo, hierro, zinc y cobre. Lehninger(15) y Bohin.ski(2) coinciden en que las protenas se
dividen en dos clases principales basndose en su composicin: Protenas simples y
Protenas conjugadas.
1. LAS PROTENAS SIMPLES: son aquellas que por hidrlisis producen solamente
aminocidos, sin ningn otro producto principal, orgnico o inorgnico. Comprenden los
siguientes grupos:
Albminas: Solubles en agua, coagulan por el calor y precipitan con las soluciones
salinas saturadas.
Globulinas: Solubles en soluciones diluidas de sales de cidos y bases fuertes (NaCl
por ejemplo); insolubles en agua pura o en soluciones salinas de mediana
concentracin; coagulan por el calor.
Glutelinas: Solubles en cidos y lcalis diluidos; insolubles en los solventes neutros;
coagulan por el calor. Ejemplo: glutelina del trigo.
Prolaminas: Solubles en alcohol de 70 a 80%; insoluble en alcohol absoluto, en agua
y en otros solventes neutros. Ejemplos: la zena del maz y la gliadina del trigo.
Albuminoides: Solubles en todo solvente neutro y en cidos y lcalis diluidos. En este
grupo entran las protenas de sostn. Ejemplo: queratina, colgeno.
Histidias: Solubles en agua y en cidos muy diluidos; coagulables por el calor.
Predominan los aminocidos bsicos.
27
Protaminas: Poli pptidos bsicos, solubles en agua predominan

aminocidos
bsicos en su estructura; precipitan a otras protenas. Se encuentran principalmente en las
clulas huevo.
2. Las PROTENAS CONJUGADAS son aquellas que por hidrlisis producen no solamente
aminocidos, sino tambin otros componentes orgnicos o inorgnicos (esta porcin no
aminocido, de una protena conjugada se denomina grupo prosttico). Las protenas
conjugadas pueden subdividirse de acuerdo con la naturaleza qumica de sus grupos
prostticos, y pueden identificarse as:
Nucleoprotenas: Compuestos formados por una o varias molculas de protena unidas al
cido nucleico.
Glucoproteas: Compuestos que tienen carbohidratos como grupos prostticos. Ejemplo:
la mucina.
Fofoprotenas: Compuestos con un radical que contiene fsforo que no sea ni un
fosfolpidos ni cido nucleicos. Ejemplo: la casena.
Cromoprotenas: Compuestos conjugados con un grupo cromforo.
Ejemplos:
hemoglobina, citocroruo y flavoproienas.
Lipoprotenas: Poseen grasas neutras (triglicridos) u otros lpidos tales como fosfolpidos
y colesterol.
Metaloprotenas: Resultan de la unin con un metal.
Flavoprotenas: Tienen una flavina como grupo prosttico. De vez en cuando pueden estar
presentes dos o ms grupos prostticos idnticos o diferentes.
3.4. Configuracin (forma) de las protenas
Segn la forma o estructura tridimensional de las protenas, estas pueden ser: fibrosas y
globulares.
Las protenas fibrosas tienen formas moleculares muy alargadas. Como dicen Sniith y
Woocl(19), son insolubles en medio acuoso. Dentro de ellas encontramos: Cartlagos, tendones,
cabello, seda, exoesqueleto de los insectos, etc...
Las protenas globulares son ms compactas que las fibrosas; en general son ms solubles
que las protenas fibrosas. Incluyen la mayora de enzimas, muchas hormonas y otros como los
anticuerpos (2,19).
3.5. Extraccin salina de las protenas
Segn White, et.aL (20), las sales pueden disminuir o aumentar la solubilidad de una protena.
El efecto salino haciendo mayor la cantidad de protena disuelta se conoce como salling-in, o
solubilidad por salado.
28
Como usted recordar, del contenido terico de la Qumica General II, la solubilidad de cualquier
sustancia depende de la afinidad relativa entre la correspondiente a las molculas del soluto entre
s y la existente con las molculas del solvente. Como dicen White et.al. (20): "Cualquier factor que
disminuya las interacciones entre las molculas del soluto tender a aumentar la solubilidad. En el
efecto salling-in, los pequeos iones de las sales neutras interaccionarn con los grupos inicos de
las molculas proteicas, disminuyendo la interaccin proteica y, por tanto, favoreciendo la
solubilidad".
3.6. Reacciones de color de protenas (20)
An cuando todas las protenas son: Compuestos formados por aminocidos unidos por enlaces
peptdicos, estas sustancias presentan variaciones considerables en sus propiedades qumicas y
biolgicas.
Las protenas reflejan las propiedades qumicas de los aminocidos que estas contienen en su
estructura. Muchas de las reacciones de color de las protenas dependen de la presencia de un
aminocido en su molcula.
3.7. Prueba de precipitacin proteica con metales pesados
Esta prueba permite detectar la presencia de protenas. La precipitacin de las protenas se llama
"desnaturalizacin". En ella hay prdida de la actividad biolgica de la molcula. La
desnaturalizacin puede ser causada por: a) agentes fsicos o b) por agentes qumicos.
La prueba se basa en que no todas las protenas son igualmente sensibles a los agentes
desnaturalizantes y esta propiedad puede usarse para remover ciertas protenas de una mezcla.
A pH 7 o por encima de l, las protenas estn usualmente cargadas negativamente, as que la
adicin de metales cargados positivamente neutraliza la carga y la protena precipita. La
precipitacin por metales pesados es, por lo tanto, ms efectiva a valores de pH neutros o
ligeramente alcalinos, pero la solucin no puede ser muy alcalina porque se corre el riesgo de que
se precipiten hidrxidos de los metales. El precipitado es frecuentemente soluble en exceso de
iones de metal pesado, ya que tal exceso confiere a las partculas, cargas positivas estables.
Figura 3: Resultados de prueba de nitrato de plata, as como la reaccin.
29
Figura 4: Resultados de la prueba de (CH3COO)2Pb

Fuente: Marvin Pec.
3.8. Biuret
El ion cobre formar un complejo con las protenas de una manera similar al que forma con el
amonio. El complejo en el caso de las protenas es rojo o violeta, y azul en el caso del amonio. La
prueba es positiva cuando la muestra analizada posee, al menos, dos enlaces peptdicos
(tripptidos, polipptidos y protenas); esto quiere decir que los aminocidos y los dipptidos dan
una prueba negativa de Biuret.
La sustancia ms simple que tiene dos uniones peptdicos es el Biuret (NH2CONHCONH2) y esta es
la razn por la cual esta reaccin lleve el nombre de Biuret.
HN
NH
CH
HC
Cu2+
O
HN
R
CH
NH
HC
Figura 5: Resultados de prueba de Biuret y figura que muestra la interaccin entre cobre y aminocidos
30

1.
Elabore una definicin propia de: protena.
2.
Cules son los cinco elementos que se encuentran ms comnmente en las

protenas?
3.
Cmo pueden clasificarse las protenas segn su "composicin"?
4.
Cul es la diferencia entre una protena simple y una protena conjugada?
5.
Mencione tres protenas simples que sean solubles en agua.
6.
De una definicin de grupo prosttico. Mencione al menos tres compuestos que pueden, existir
corno grupos prostticos, en las protenas.
7.
Qu tipo de protena -segn su configuracin- es ms "soluble"? Las fibrosas o las

globulares?
8.
A qu se refiere la "solubilidad por salado" o salting-in?
9.
A qu se le llama "desnaturalizacin" de protenas?
10.
A pH 7 o por encima de l, las protenas precipitan cuando se les adicionan metales pesados.
Por qu? Adems, por qu en esta reaccin la solucin no debe estar demasiado alcalina?
11. Qu caracterstica debe tener un compuesto para dar positiva la prueba de Biuret?
12.
Indique el cambio que evidencia un resultado positivo para la prueba de "Metales Pesados" y
para la prueba de "Biuret".
31
5. MATERIALES
A cada del grupo de trabajo:
Balanza mono plat
2 Becker de 150 ml.
2 erlenmeyer de 50 ml.
1 anillo de hierro
1 esptula
12 tubos de ensayo

Centrfuga manual
2 varillas de agitacin
Probeta de 25 ml
1 plancha agitadora
1 embudo plstico
1 soporte universal
Agua destilada
Solucin de Biuret [0.2M
1 estufa elctrica
Papel parafilm No. 42
Papel encerado
2 probetas de 10 ml.
1 piceta
4 tubos de ensayo c/tapn de rosca-1
pinza p/tubo de
Solucin NaCl 10.2N]

Solucin Acetato de Pb
Refrigeradora
Papel filtro Whatman
Centrifugadora
Solucin de HCl (6N)
1 beacker de 500 mL
Solucin de Sulfato Cu [0.2M]
1 gradilla de metal
2 tubos p/centrfuga
Etiquetas autoadhesivas
Solucin Nitrato de Hg 10.2M
Centrifugadora
32
6. METODOLOGA
33
PRUEBAS DE CARACTERIZACIN DE PROTENAS

El siguiente cuadro, es una gua para el estudiante para que sepa qu muestras se van a analizar
con cada prueba, en esta prctica.
CUADRO 1. Resumen de pruebas cualitativas,
protenas.
a realizar a soluciones patrones y extractos de
PRUEBA
METALES PESADOS
BIURET
MUESTRA A ANALIZAR
Extracto Acuoso
Extracto Salino
Peptona
Albumina
Casena
Gelatina
NOTA: Las soluciones patrn (peptona, albmina, casena y gelatina) son protenas. Estas
soluciones se utilizan para que el estudiante tenga cuatro "testigos" de resultados positivos en
cada prueba. En otras palabras, estas soluciones sirven para poder observar como es el resultado
positivo para cada una de estas pruebas.
34
35
Examen Corto con un nivel de dificultad similar al del CUESTIONARIO PRE LABORATORIO.
La metodologa de evaluacin tambin incluye un Informe de prctica. Este informe puede hacerse
en parejos o individualmente, y debe incluir:
Cartula
RESULTADOS Y ANLISIS DE RESULTADOS
Resultados de prctica.
Estos se presentan segn las siguientes indicaciones:
Para los resultados de los numerales 6.1 y 6.2 de la metodologa, solamente resuelva lo que se le
indica en los "cuadritos negros" que all aparecen.
Para los numerales 6.3 y 6.4, primeramente debe presentar un cuadro de resultados pura cada
prueba: Siga el modelo indicado en el Cuadro 2.
CUADRO 2. Resultados de la prueba de BIURET con las cuatro soluciones patrn y los dos
extractos de protenas.
MUESTRA ANALIZADA
COLORACIN OBTENIDA
DICTAMEN
Extracto Acuoso
Extracto Salino
Peptona
Albmina
Casena
Gelatina
REFERENCIA: Coloracin = color observado como resultado de la prueba Dictamen =

prueba positiva (+) o negativa (-).
Adems del cuadro anterior, para los numerales 6.3 y 6.4, debe incluir el anlisis y explicacin
de los dos cuadros de resultados, a fin de establecer la presencia o ausencia de protenas en cada
muestra problema. (Para el caso de la explicacin que se le pide, haga nfasis sobre si hay
concordancia de los resultados prcticos con el fundamento terico. Si no hubiese tal
concordancia, plantee una justificacin valida).
36
Resuelva los "cuadros" que aparezcan en su metodologa (6.3 y 6.4); debe presentarlos
tambin, intercalados con los resultados, y anlisis de resultados. Esto puede servirle tambin
como una gua para ou anlisis de resultados.
8. PARA INCLUIR EN EL INFORME EN LA DISCUSIN
Qu es una solucin patrn? Qu utilidad encontrada con el uso de este tipo de soluciones en la
presente prctica?
De la extraccin de protenas:
Cul cree que es (son) la(s) razn(es) para realizar dos tipos de extraccin de protenas?
Cuntos tipos de "extraccin de protenas" existen y cules son? En qu se diferencian estos
tipos de extraccin?
Qu tipo de protena -segn su configuracin- es ms "soluble"? Las fibrosas o los globulares? En
funcin de ello qu tipo de protena -segn su configuracin- habr en mayor cantidad en sus
"Extractos de protenas"?
Esquematice (utilice dibujos sencillos: No se complique) el procedimiento general para extraer
protenas de una muestra vegetal. Sugiera usted el solvente para extraccin (agua o solucin
salina)
En qu se basa la prueba de Precipitacin proteica por metales pesados?
Qu resultado indica una prueba positiva en esta prueba?
Qu se logra identificar con esta prueba?
En qu se basa la prueba de Biuret?
Qu resultado indica una prueba positiva en esta prueba?
Qu se logra identificar con esta prueba?
Haga un listado de los tipos de protenas que se pueden extraer con Agua. (Vea la parte
Composicin de las Protenas" de su material de Apoyo a la prctica)
Haga un listado de los tipos de protenas que se pueden extraer con Solucin salina. (Vea la parte
"Composicin de las Protenas" de su material de Apoyo a la prctica)
A qu se refiere la solubilidad por salado o "salting in"? Qu tiene que ver con esta prueba de la
prctica?
37
PRCTICA 4 ESTUDIO DE AMINOCIDOS DE MUESTRA VEGETALES

1. INTRODUCCIN
En la prctica anterior se ha efectuado el estudio cualitativo de protenas de una muestra vegetal.
Esta vez el estudio recae en las unidades que componen a las protenas; usted recordar que en la
prctica 1 se mencion que las protenas se construyen a partir de aminocidos, los cuales son las
subunidades monomricas que se unen para formar esas macromolculas.
Tal como se ver ms adelante, pueden obtenerse aminocidos libres a partir de la hidrlisis de
protenas. Esto es, entonces, la primera parte de esta prctica, la hidrlisis de protenas; luego,
mediante el anlisis de los hidrolizados, se habr de comprobar si la hidrlisis de las protenas
fue o no fue completa.
El desarrollo de esta prctica contina con un estudio cualitativo de los hidrolizados obtenidos; es
este el momento en que el estudiante de laboratorio centrar su atencin en los aminocidos y
podr detectar su presencia/ausencia.
Esta prctica es una de las ms que necesita ms tiempo para su realizacin. A s que deben
emplearse al mximo las dos horas de laboratorio y en caso de no poder terminar con la
metodologa de prctica, se tendr que trabajar en otro momento, acordado por el instructor y los
estudiantes, dentro de la semana asignada para esta prctica.
2. OBJETIVOS:
Al finalizar la prctica, el estudiante deber estar en la capacidad de:
Efectuar la hidrlisis cida e hidrlisis alcalina de protenas extradas de la muestra
vegetal.
Determinar la presencia o ausencia de aminocidos en hidrolizados de protenas.
Determinar la presencia o ausencia de aminocidos con ncleo aromtico, en hidrolizados
de protenas.
Determinar la presencio o ausencia de aminocidos fenlicos, en hidrolizados de protena.
Determinar la presencia o ausencia de thioaminocidos, en hidrolizados de protena.
Determinar la presencia o ausencia de aminocidos con grupo imidazol, en hidrolizados de
protenas.
Utilizar soluciones patrn, para obtener resultados positivos que acten como testigos
en cada prueba de esta prctica.
Utilizar adecuadamente el equipo y cristalera de laboratorio empleado en la presente
prctica.
38
3. MARCO TERICO.
La hidrlisis proteica es el proceso de rompimiento del enlace peptdico con lo que se producen
ppticos y/o aminocidos libres. La hidrlisis proteica puede ser de tres tipos: cida, alcalina o por
enzimas (10,15)
La hidrlisis con cido o base no es especfica y existen algunos aminocidos que sufren
modificaciones o pueden ser destruidos. Mediante la hidrlisis enzimtica es posible romper los
enlaces peptdico entre residuos de aminocidos especficos. La hidrlisis es un proceso
fundamental para llegar a determinar la secuencia de aminocidos que conforman la estructura
primaria de la protena. (15).
Hidrlisis de las protenas mediante cido: (De Harper (10) y Lehninger (15)): la mayora de las
protenas son completamente hidrolizadas hasta sus aminocidos constituyentes calentando a
110oC durante 20 a 70 horas en HCL 6N. La hidrlisis se realiza en un tubo cerrado. El hidrolizado
resultante contiene los aminocidos en forma de clorhidratos.
Sin embargo, no todos los aminocidos de un pptido o de una protena determinada se
recuperarn cuantitativamente. Esto quiere decir lo siguiente:
Todo el triptfano y cantidades variables se serina y treonina son destruidos.
Los grupos amida de la glutamina y la asparagina resultan hidrolizados, con produccin de los
cidos glutmico y asprtico y de iones amonio.
Hidrlisis de las protenas por lcali: esta se usa para recuperar el triptfano y la tirosina, los
cuales no se destruyen por hidrlisis alcalina. Sin embargo, la hidrlisis alcalina provoca la
destruccin de la arginina, la cistina, la serina y la treonina; todos los aminocidos son
racemizados. Por ello el mtodo se emplea para la determinacin por separado del triptfano, que
es estable a la calefaccin con bases. (10,15)
3.1. Aminocidos
Anteriormente se cit a Bohinski (2) para conocer que la caracterstica ms comn de las
protenas es que todas son polmeros formados por aminocidos. Este autor dice que los
aminocidos son monmeros que se unen en forma covalente unos a otros en secuencia
mediante lo que se llama un enlace peptdico, y dan por resultado una estructura que tiene forma
de cadena; esa estructura recibe el nombre de polipptido, o simplemente pptido.
Cuando un polipptido consta de 50 o ms residuos (unidades) de aminocidos (un mnimo
arbitrario) ya se consideran una protena.
El primer aminocidos que se aisl de una protena fue la glicina (del griego glykis, dulce, pues la
sustancia tiene cierto sabor dulce); la obtuvo Braconnot, en 1820, al hidrolizar la gelatina con
39
cido sulfrico diluido, en un intento de averiguar si la gelatina, como la celulosa, producira un

azcar por hidrlisis. Durante un perodo de 50 aos, el aislamiento de aminocidos a partir de
hidrolizados de protena era una cuestin de azar, ms que un problema de investigacin
sistemtica (10).
A partir de estos bloques unitarios, los aminocidos, los diferentes organismos pueden fabricar
productos tan diversos como enzimas, hormonas, anticuerpos, la protena del cristalino del ojo,
antibiticos, venenos de hongos y muchas sustancias con actividades biolgicas distintas (15)
3.2. Estructura de los aminocidos caractersticas generales
Se sabe que existe alrededor de 300 aminocidos diferentes de origen natural. Muchos de ellos
solo se observan en determinadas formas de vida, y algunos solo aparecen en una especie. Sin
embargo, todos los organismos usan solo 20 de ellos para la biosntesis de protenas, lo que
constituye un notable ejemplo de la unidad bioqumica en la biosfera (2).
Como seala Lehinger, Nelson y Cox (15), debido a que cada uno de esos aminocidos tiene una
cadena lateral propia que determina sus propiedades qumicas, se puede considerar a este
grupo de 20 molculas precursoras como el alfabeto en el que est escrito el lenguaje de la
estructura proteica . Las clulas pueden producir protenas con propiedades y actividades
claramente diferentes uniendo los mismos 20 aminocidos en multitud de combinaciones y
secuencias distintas.
Como dice Bohinski (2) y White & Handler (18), casi todos los aminocidos (salvo la Prolina y la
hidroxiprolina) son alfa-aminocidos pues tienen un grupo amino (-NH2) y Un grupo carboxilo (COOH) unidos al mismo tomo de carbono, llamado alfa.
Cada aminocido posee propiedades nicas debido a la variacin en la estructura de los Grupos R
(el grupo R se refiere a la cadena lateral del aminocido).
Lehninger, Nelson y Cox (15) dicen que algunos aminocidos son mucho menos frecuentes q otros.
Por ejemplo, muchas protenas poseen relativamente pocos restos de Histidina y de triptfano.
3.3. Reacciones qumicas de los aminocidos
Alfa-amino ms caracterstica y ms ampliamente utilizada es la reaccin de la Las reacciones
qumicas de los aminocidos son las de sus grupos funcionales, es decir, las de los grupos alfacarboxilo y alfa-amino, as como las de los grupos funcionales presentes de las cadenas laterales.
40
Una de las reacciones del grupo ninhidrina, que puede utilizarse para valorar los aminocidos
cuantitativamente en cantidades muy pequeas (15)
3.4. Solubilidad de los aminocidos
La naturaleza del radical R de los aminocidos, puede ser, por un lado, hidroflico o Hidrofbico y,
por otro, acida, bsica o neutra. Fieser y Fieser (10) sealan que como los aminocidos contienen
simultneamente grupos carboxilo y amino, se comportan como sustancias anfteras que se
ionizan como cidos y como bases.
En el laboratorio de Bioqumica de la FAUSAC, se acostumbra preparar soluciones patrn de
aminocidos a razn de 1g de aminocidos por litro de agua destilada.
Para disolver los aminocidos hay que considerar si estos son cidos, bsicos o neutros. As: los
aminocidos se disuelven en agua y agregando unas gotas de HCl 1N;
por otro lado los
aminocidos bsicos se disuelven agregando, al agua, unas gotas de NaOH6N. Los aminocidos
neutros se disuelven simplemente en agua (5, 16).
Esto de aminocidos cidos, neutros o bsicos depende del grupo R de los aminocidos. Para
profundizar en ello se recomienda referirse al captulo 5 de Lehninger, Nelson y Cox (15)
3.5. Protenas vegetales y nutricin humana (18)
Salisbury y Ross (18) sealan lo siguiente: seres humanos y otros animales dependen de los
vegetales para obtener muchos de sus aminocidos, por lo que la composicin protenica de
semilla, hoja y tallo es importante para la dieta. Nosotros y otros animales, utilizamos estos
aminocidos para formar nuestras propias protenas y como fuente alimenticia ( de energa ).
Aunque los humanos adultos podemos sintetizar la mayor parte de los aminocidos que
necesitamos, a partir de carbohidratos y diversos compuestos orgnicos nitrogenados, hay ocho
aminocidos que debemos obtener del alimento. Estos son: leucina, isoleucina, valina, lisina,
metionina, triptfano, fenilalanina y treonina. Adems parece que slo se pueden formar
cantidades adecuadas del aminocido azufrado Cistenas cuando se dispone de suficiente
metionina (otro aminocido azufrado ), y Utilizamos la fenilalanina para sintetizar tirosina, que
de lo contrario tambin seria Esencial en la dieta.
La mayor parte de las protenas en la dieta humana provienen de semillas, en especial granos
de cereales como maz, trigo y arroz. Una contribucin menor, pero an importante, la hacen
semillas
de
leguminosas
como
frjol,
chcharo
y
soya.
41
Comparados con casi cualquier protena animal, las protenas de los granos de cereal tienen bajo
contenido de lisina, mientras que las semillas de las leguminosas tienen bajo contenido de
metionina. Los agricultores estn logrando algunos avances con la introduccin de especies
nuevas o hibridas con mayor contenido protenico y mayores porcentajes de aminocidos
esenciales.
Cuadro 3. Contenido proteico y composicin de aminocidos de algunos cereales y Leguminosas.
3.6.
PRUEBAS DE CARACTERIZACIN CUALITATIVA DE AMINOCIDOS: (5,16)
a) Prueba de la ninhidrina:
Esta prueba se utilizar en este laboratorio para la deteccin de aminocidos. Al reaccionar la
Ninhidrina, un agente oxidante poderoso, con cualquier alfa aminocido a un pH entre 4 y 8 se
forma un compuesto azulado o violeta. Con la prolina o Hidroxiprolina, que poseen un grupo
amino libre, el color producido es amarillo.
Fig. 6. Reaccin de Ninhidrina
42
b) Prueba de sanger:
En solucin dbilmente alcalina, el 1-fluor-2,4-dinitrobenceno (FDNB) convierte cualquier
aminocido en su derivado 2,4 dinitrofenicado, por sustitucin de un hidrogeno del grupo-amino en
un grupo 2,3-dinitrofenilo. En esta prueba, el desarrollo de un precipitado amarillo denota la
presencia de aminocidos.
Fig. 7. Reaccin de Sanger
c) Prueba xantoproteica:
Los aminocidos que poseen un ncleo aromtico forman nitro derivados de color amarillo
cuando se calientan con acido ntrico concentrado. Las sales de estos derivados son de color
naranja. Por lo tanto, el aparecimiento de color naranja, en esta prueba, denota la presencia de
aminocidos aromticos.
Las protenas que contienen triptfano, tirosina, y fenilalanina, dan prueba positiva. Esta prueba la
realizan inadvertidamente los estudiantes cuando derraman cido ntrico sobre su piel.
Figura No. 8 coloracion de los extractos tanto acido como basico despues de la aplicacin de acido nitrico. Ademas de
la coloracion de los patrones
43
d) Prueba de millon:
Los compuestos que contienen el radical hidroxibenceno reaccionan con el reactivo de Millon
formando compuestos rojos. Los nicos aminocidos fenlicos son la tirosina y sus derivados y
solamente ellos dan una reaccin positiva.
Fig. 9 Reaccin positiva de millon
e) Prueba del sulfuro:

Los thioaminocidos reaccionan en medio alcalino con el acetato de plomo, precipitando sulfuro de
plomo (de color negro) como uno de los productos.
Fig. 10 Reaccin de Sulfuro
f) Prueba del bromo:

El bromo acta en medio alcalino con aminocidos que poseen el grupo imidazol (como la
Histidina), provocando una reaccin de adicin al eliminar un doble enlace. El compuesto as
formado posee una cloracin azul- violeta. Esto quiere decir, que cuando en esta prueba se
produce un color azul-violeta, se denota la presencia de Histidina.
Figura No. 11 Reaccin del bromo.
44

1.
Qu Es la hidrlisis proteica?
2.
Qu tipo de hidrlisis se utiliza para la determinacin por separado del triptfano? Explique.
3.
Elabore una definicin propia de: Aminocido.
4.
A qu se refiere el trmino alfa-aminocido?
5.
A qu se refiere el grupo R que poseen los aminocidos?
6.
Mencione al menos 5 productos que se pueden formar a partir de las distintas combinaciones
de aminocidos:
7.
Qu grupos funcionales son los que propician las reacciones qumicas de los aminocidos?
8.
Cmo disolvera usted 3 gramos de un aminocido cuyo grupo R es de naturaleza alcalina?
9.
En la reaccin de Nihidrina Qu reaccin provoca una coloracin azulada o violeta? Cul

reaccin provoca un color amarillo?
10. Explique en qu consiste la prueba de Sanger, la prueba Xantoprotica, la prueba de Millon, la

prueba de Sulfuro y la prueba del Bromo.
45
11. Investigue a que se refieren los trminos: aminocido fenolico, thioaminoacido, y aminocido
con grupo imidazol. Consulte a su instructor de laboratorio, a su catedrtico de curso o en
alguno de los libros que se le sugieren como bibliografa del curso.
12. Cules son los 8 aminocidos que los adultos debemos obtener del alimento?
13. Refirase al cuadro 1 del material de apoyo de esta prctica. Observe los aminocidos que all
se le presentan. Diga cules de ellos se trabajarn en esta prctica (vea cuadro 2 que est en el
instructivo de practica).
46
5. MATERIALES
A cargo del grupo de laboratorio:
Extracto acuoso
Extracto salino
Muestra desconocida
4 beackers de 50 Ml
2 varillas de agitacin
1 pizeta
4 tubos grandes con tapn de rosca
1 gradilla de metal grande
4 frascos con gotero para cada una de las
siguientes soluciones:
NaOH (1N), NaOH(GN), HCl(6N), Y
HCl(1N).
30 tubos de ensayo
2 gradillas de metal
2 pinzas p/tubo de ensayo
1 estufa elctrica
2 probetas de 10 mL
1 beacker de 500 mL
1 beacker de 100 ml
Frasco gotero identificado para cada una
de las siguientes soluciones:
Nihidrina, FDNB, Millon, NaNO2 1 % y
acetato de plomo 2%
A cargo del auxiliar de laboratorio

1 estufa elctrica colocada en una
campana de gases
1 beacker de 500 mL
Recipiente de polietileno con solucin
NaOH (6N)
Agua destilada
Etiquetas autoadhesivas
Gotero de pico de gallo con acido ntrico
(ubicado en campana de gases)
Gotero pico de gallo con acido sulfrico
(ubicado en lavadero de laboratorio)
Gotero pico de gallo con solucin de
bromo (ubicado en campana de gases)
Gotero pico de gallo con carbonato de
Amonio (ubicado en campana de gases)
Solucin de HCl (6N)
Solucin HCl
Autoclave
Mechero de Meckler
Manguera de hule
Trpode para autoclave
Rollos de papel pH
Potencimetros (medir pH).
47
6. METODOLOGA.
48
49
NOTA IMPORTANTE TODO LO QUE SOBRE DE EXTRACTO DE PROTENAS DEBE SER

ALMACENADO NUEVAMENTE EN REFRIGERACIN, PARA SER UTILIZADO EN LA PRCTICA 5
PRUEBA DE CARACTERIZACIN CUALITATIVA DE AMINOCIDOS
El cuadro siguiente es una gua para el estudiante para que sepa que muestras se van a analizar en
las pruebas de esta prctica.
Cuadro 4. Resumen de pruebas cualitativas, a realiza a soluciones patrones e hidrolizados de
protenas y muestra desconocida.
PRUEBAS
MUESTRAS A
ANALIZAR
Ninhidrina
Sanger
Xantoproteica
Milln
Sulfuro
Bromo
Hidrolizado
acuoso bsico
Hidrolizado
acuoso acido
Hidrolizado
salino bsico
Hidrolizado
salino bsico
Muestra
desconocida
Lisina
Triptfano
Tirosina
Leucina
Histidina
Cistena
Fenilalamina
SOLUCIN
PATRN
TOME EN CUENTA LA LIMPIEZA DE LA CRISTALERA PARA LA REALIZACIN DE ESTAS

PRUEBAS EN LA PRESENTE PRCTICA
50
51
52
7. PARA INCLUIR EN EL INFORME DE PRCTICA:

Responda, como trabajo post laboratorio, las cuestiones siguientes:
Usted observa en el cuadro 4 una serie de cheques ( ) que le indican que prueba realizarle a
cada muestra o solucin patrn. Para cada una de las muestras o soluciones patrn,
justifique por que se le deben realizar las pruebas sealadas por los cheques. Ejemplo:
Porque en la lisina se van efectuar solamente las pruebas de la Ninhidrina y la Sanger.
Qu es una solucin patrn? Por qu se utiliza?
Haga un listado de las soluciones patrones que se usaran en cada prueba. Qu
utilidades(es) ha encontrado en el uso de soluciones patrn?
Qu es la hidrlisis proteica?
Esquematice de forma sencilla el procedimiento general para realizar hidrlisis a una
solucin extracto de protenas.
En qu consiste la hidrlisis proteica mediante acido?
En qu consiste la hidrlisis proteica de lcali? Para que se utiliza ese tipo de hidrlisis?
A su criterio Cul es la razn de mantener la temperatura de la autoclave en un rango que
no sobrepase los 228 F?
Investigue en que otros lugares de la Facultad de Agronoma existen autoclaves. Adems
indique si hay diferencias entre los autoclaves que encontr.
Indique el procedimiento general para detectar, visualmente, la presencia del triptfano en
una muestra recin colectada de granos de cebada. (si usted plantea que se debe efectuar
hidrlisis, indique y justifique cual utilizara, la acida o la alcalina).
Cul es la utilidad de la prueba Biuret? Qu se logra identificar con esta prueba?
Qu le indicara un resultado negativo de esta prueba? y un resultado positivo?
Para la comprobacin de una hidrlisis completa debe hacer una comparacin entre el
resultado obtenido para cada hidrolizado en dos pruebas que son la de Biuret y la de la
Ninhidrina.
Diga si la siguiente explicacin es falsa o verdadera, justifique su respuesta: Se tiene una
solucin X a la cual se le han aplicado las metodologas de hidrlisis. Esta solucin ha dado
positivo la prueba de Biuret, y un resultado negativo en la prueba de la Ninhidrina. Por eso
podemos decir que en la solucin X hemos identificado solamente aminocidos y por lo
tanto estaremos hablando de una hidrolisis completa de protenas.
Utilizando los resultados de la Ninhidrina y de Biuret de cada uno de los hidrolizados y
justificando su respuesta indique si cada una de las hidrlisis fue o no fue completa.
De una razn vlida para la aplicacin de la prueba de Biuret y de la Ninhidrina como
comprobante de hidrlisis proteica completa. (En otras palabras, Por qu se usa Biuret
para ver si hubo o no una hidrlisis completa de protenas?)
53
Para Ninihidrina, Sanger, Xantoproteica, Millon, Sulfuro, bromo colocar lo siguiente.

En que se basa esta prueba?
Qu expresa para usted un resultado positivo da la prueba? Que se logra identificar
con esta prueba.
Examen Corto con un nivel de dificultad similar al del CUESTIONARIO
PRELABORATORIO.
La metodologa de evaluacin tambin incluye un informe de prctica. Este informe
puede hacerse en parejas o individualmente, y debe incluir:
Cartula
9. RESULTADOS Y ANLISIS DE RESULTADOS PARA EL REPORTE
Resultados de prctica. Estos se presentan segn las siguientes indicaciones:
Para los resultados de los numerales 6.1, 6.2, 6.3 y 6.4 solamente debe resolverse los
cuadritos negros que aparezcan all.
Posteriormente presente resueltos los cuadros negros que aparezcan en la metodologa
(numerales 6.5 al 6.10). Procure colocar el titulo de cada pareja de respuestas (es decir
el titulo del numeral).
Para los resultados de los numerales 6.5, 6.6, 6.8, 6.9 y 6.10, tambin debe presentarse
un cuadro de resultados para cada Muestra Problema, (hidrolizado acuoso acido,
hidrolizado salino acido, hidrolizado acuoso bsico, hidrolizado salino bsico y Muestra
desconocida). Loa cuadros deben seguir el siguiente modelo
54
CUADRO 5. Cuadro de resultados de las pruebas realizadas a la muestra de

HIDROLIZADO ACUOSO ACIDO:
NOMBRE DE LA PRUEBA
Biuret
Ninhidrina
Sanger
Xantoproteica
Millon
Sulfuro
Bromo
pH
COLORACIN
DICTAMEN
REFERENCIA: pH = VALOR EN NUMERO

Coloracin = color observado como resultado de la prueba
Dictamen = prueba positiva (+) o negativa (-).
OJO: Utilice como criterio de dictamen, los resultados obtenidos con las
soluciones patrn.
Procure Intercalar Los Resultados De Cada Muestra Con Su Anlisis respectivo.
Toda vez presentados estos resultados, se realizara un anlisis y explicacin de cada
cuadro, a fin de establecerla presencia o ausencia de aminocidos en cada muestra
problema. Si sus resultados se lo permiten, tambin debe indicar el nombre o nombres
posibles de aminocidos identificados.
Para el caso de la explicacin que se le pide, haga nfasis si hay concordancia, plantee una
justificacin valida.
Compare los resultados de sus muestras problemas con los resultados con las soluciones
patrn y tener otro criterio de anlisis.
Como una gua de anlisis le recomienda utilizar la solucin a los cuadritos negros que
aparecen para cada parte de la metodologa.
55
PRCTICA No. 5 ESTUDIO DE AMINOCIDOS, CROMATOGRAFA DE

AMINOCIDOS Y ESPECTROFOTOMETRA.
1. INTRODUCCIN
Esta semana, continua es estudio de aminocidos y protenas. Son prcticas de aplicacin
frecuente en los laboratorios de anlisis de bioqumica y hoy se pretende que el estudiante
tenga un contacto con estas prcticas. Debido a lo extenso de la metodologa de las prcticas
pasadas, estas molculas biolgicas no se han podido estudiar de una sola vez y por ello se
emplea una semana ms.
La cromatografa es una tcnica que sirve para separa, identificar y a veces purificar una
mezcla compleja de solutos solubles en un solvente comn. Esta semana se utilizara esta
tcnica para que el estudiante tenga un contacto con esta alternativa de anlisis cualitativo de
sustancias en este caso con aminocidos. Por ende tratara de enlazarse lo obtenido con la
cromatografa.
La continuacin al estudio de protenas se hace desde un punto de vista cuantitativo y para ello
se utiliza una tcnica denominada Espectrofotometra.
2. OBJETIVOS
Al finalizar la prctica, es estudiante deber estar en capacidad de:
Utilizar la tcnica Cromatografa en Capa Fina como parte del anlisis
cualitativo de aminocidos de la muestra vegetal.
Utilizar Espectrofotometra en la cuantificacin de protenas extradas de la
muestra vegetal.
56
3. MATERIAL DE APOYO CROMATOGRAFA (11)

La cromatografa es una tcnica que sirve para separar identificar y a veces purificar una
mezcla compleja de solutos solubles en un solvente comn.
Como dice Gaxiola (11), una mezcla de sustancias que van a ser separadas se aplica en solucin
a un medio de sostn. Este puede ser papal, una capa de slice, o una columna rellena de resina
absorbente o de intercambio inico. La prueba consiste en que se deja correr por el medio de
sostn un solvente revelador y dicho solvente lava junto con el la mezcla de las sustancias
aplicadas previamente. En el proceso, las diferentes molculas de la mezcla son arrastradas por
el lavado a distintas velocidades, resultando en su separacin.
En la mayora de los mtodos cromatogrficos la separacin est basada en un proceso de
reparto mltiple o uno continuo de absorcin desorcion, aunque en la prctica existe una
combinacin de ambos, dominando ms o menos uno y otro tipo.
El grado de la separacin depende de cuatro fuerzas que operan independientemente una de la
otra. Estas son: (1) la velocidad de flujo del solvente, (2) la solubilidad de las sustancias en el
solvente, (3) los efectos de fraccionamiento, y (4) los efectos de absorcin. Los dos primeros
factores son responsables de la movilizacin de la mezcla de sustancias a travs del medio de
sostn y los dos ltimos factores con responsables del retardo del movimiento de la mezcla a
travs del medio de sostn.
El flujo del solvente es el mismo para todas las sustancias presentes en la mezcla. Si todas las
sustancias fueran completamente solubles, no habra separacin. No obstante, por fortuna es
muy raro que las sustancias tengan la misma solubilidad en cualquier solvente.
Consecuentemente, si la sustancia es muy soluble, tendera a movilizarse a travs del medio de
sostn y aparecer en el frente del solvente en movimiento. Por otra parte, si es relativamente
insoluble, tendera a permanecer en su punto de origen. Por lo tanto, uno de los factores
primordiales que determinan la separacin cromatogrfica es la combinacin de la solubilidad
y del flujo del solvente. Los otros factores, los factores retardants, son igualmente importantes
y merecen alguna discusin.
Hay cuatro tipos principales de procedimientos cromatogrficos, cada uno de los cuales est
basado en ciertos principios fsicos. Ellos son: (1) cromatografa por fragmentacin; (2)
cromatografa por absorcin; (3) cromatografa por intercambio inico, y (4) cromatografa
con filtracin en gel.
En la cromatografa de absorcin existe, como mnimo, un sistema de tres componentesabsorbente, medio de elusin (disolvente) y compuesto cromatografado. El comportamiento
cromatogrficos depende tanto del absorbente como del medio de elusin. Entre los
absorbentes ms utilizados en la cromatografa en la capa fina, se encuentran los xidos, xidos
hidratados y sales. Los ms comunes son la gel de slice (silicagel) y el oxido de aluminio
(almina).
57
3.1.
CROMATOGRAFA EN CAPA FINA (11)
La cromatografa en capa fina es una tcnica muy utilizada en la actualidad, por su gran rapidez
y versatilidad. Tambin se conoce como cromatografa en columna abierta o cromatografa en
pelcula delgada. Es una tcnica donde la separacin ocurre sobre una capa delgada de
adsorbente que est adherida a un soporte inerte, generalmente vidrio. Se pueden usar
variedad de adsorbentes, desde la gel de slice o la almina hasta la celulosa la cual la
separacin es similar a la cromatografa de papel. Se diferencia de la hecha en papel porque la
separacin ocurre ms rpido, las manchas son ms discretas y compactas, y se pueden usar
reactivos detectores corrosivos sin daar el substrato o el adsorbente.
El disolvente utilizado para la separacin se mueve sobre esta capa fina, ya sea hacia arriba,
por capilaridad (cromatografa ascendente) o hacia abajo, por gravedad (cromatografa
descendente). La separacin de sustancias se basa en sus caractersticas de polaridad. Por
consiguiente, una sustancia polar se mover muy lentamente con relacin al frente del
disolvente, mientras que una sustancia no polar se mover ms rpido.
Bajo ciertas condiciones experimentales, el movimiento de una sustancia en particular es
constante, con respecto al movimiento del frente de un disolvente determinado. Esta constante
se llama valor Rf y se define como:
3.1.1. CTIVACIN DE LAS PLACAS:

Antes de que se puedan usar las placas, generalmente deben ser calentadas para retirar el agua
que acta como una impureza y evita una buena separacin. Con frecuencia el agua est
firmemente ligada al adsorbente, por lo cual se debe calentar la placa fuertemente. La
magnitud del calor depende del tipo de separacin que se requiere.
Para compuestos hidroflicos o polares, el secado al aire o con un secador de pelo son
generalmente adecuados; pero para los compuestos hidrofbicos o no polares es necesario un
calentamiento ms intenso. Las placas de almina o silicagel con adhesivo requieren ser
secadas al aire durante aproximadamente 30 minutos y despus ser activadas en un horno a
10C (nunca arriba de 105C) alrededor de 30 minutos.
Las placas de xido de aluminio y de silicagel sin adhesivo requieren secado al aire durante 1.5
a 2 horas y ser activadas en el horno a 120C durante aproximadamente 60 minutos.
3.1.2. APLICACIN DE LA MUESTRA:
La muestra se aplica en solucin con una micro pipeta o con tubo capilar en cantidades de
aproximadamente 5 micro litros. Esto asegura que la mancha no se extienda. Una mancha ideal
tendr ms o menos 5 mm de dimetro.
58
La mancha debe ser secada tan pronto como sea posible, usando un secador de pelo (esto
adems evita que la mancha se extienda). Si la solucin est diluida, se pueden repetir muchas
aplicaciones en el mismo sitio una vez que la anterior se ha secado. Debe tenerse cuidado de no
sobre cargar la mancha, de lo contrario se presentar el rayado (escurrimiento). Otro factor
importante es que debe tenerse cuidado de no maltratar la capa delgada del adsorbente
durante el manchado.
Con paciencia y con prctica resulta posible no tocar la capa con el extremo de la micro pipeta
(o tubo capilar) durante el manchado o el trazado de una placa para CCD. An ms, dado que la
capa est adherida a su soporte inerte de vidrio o de aluminio, no es necesario usar placas de
vidrio para sostener el cromatograma durante el manchado.
3.1.3. REVELADO DEL CROMATOGRAMA:
Existen numerosos mtodos para detectar sustancias en los cromatogramas. Algunos de ellos
usan sistemas fsicos, pero la mayora utiliza mtodos qumicos.
Las tcnicas para localizar en el cromatograma sustancias, que no son visibles, se clasifican en
tres categoras:
a. Nebulizacin: En esta tcnica el reactivo se disemina en forma de fino aerosol sobre la
cromatoplaca mediante un atomizador. Debe aplicarse en un gabinete cerrado
(campana de extraccin de gases) para gases y para vapores a fin de evitar que el
reactivo penetre en el laboratorio. Si sta se hace muy cerca del papel o la cromatoplaca,
se aplicar demasiado reactivo y har que se corra el cromatograma. Es preferible
colocar el atomizador a 30-38 cms del cromatograma.
b. Inmersin: Esta es mejor que la nebulizacin por numerosas razones, ya que no se
requiere de gabinete contra emanaciones en muchos casos; es mucho ms fcil obtener
una aplicacin uniforme del reactivo detector. Se necesita un recipiente
(preferentemente plstico) que contenga el solvente. La cromatoplaca se pasa
uniformemente dentro del solvente de inmersin y se cuelga para que se seque.
c. Exposicin a gas o vapor: Est requiere equipo especial y por ello no se trata aqu.
3.1.4. PRESERVACIN DE LOS CROMATOGRAMAS DE CAPA DELGADA:
Con la mayora de las placas rociadas con cido, o con reactivos que producen colores que se
desvanecen con rapidez (como la ninhidrina), no slo es difcil almacenarlos como referencia,
sino que tambin resulta caro, ya que las placas de vidrio se pueden volver a usar. Tan pronto
como se seque un cromatograma rociado, las manchas debern ser delineadas con un lpiz
afilado o con un alfiler y se deben rastrear. Debido a que los colores tienden a desteirse
despus de algn tiempo, es recomendable hacer una copia del original tan pronto como sea
posible.
59

3.2.
ESPECTROFOTOMETRA (9)
Uno de los mtodos fisicoqumicos ms empleados en anlisis bioqumico es el de la medida de

la absorcin o emisin de energa radiante. La gran difusin de esta tcnica es consecuencia de:
1. El amplio intervalo de longitudes de onda o de frecuencias de energa radiante y sus
diferentes modos de interaccin con la materia.
2. La existencia en el mercado de instrumentos de medida cada vez ms precisos.
3. Las ventajas inherentes al mtodo.
La energa radiante se define como la energa transmitida en forma de radiacin
electromagntica. Esta energa puede ser absorbida, transmitida, reflejada y refractada por
muchas sustancias en diferentes estados de agregacin (slido, lquido, disolucin, gas), si la
radiacin incidente tiene una longitud de onda apropiada.
En espectrofotometra, la energa que incide sobre una muestra, es una radiacin
monocromtica (energa radiante de una sola longitud de onda, o por razones prcticas, una
banda muy estrecha de longitudes de onda). Las medidas de la radiacin transmitida se
realizan mediante aparatos muy sensibles como el espectrofotmetro.
Un espectrofotmetro consta de una Fuente de radiacin; Dispersor de longitud de onda
(prisma de cuarzo o de vidrio o de NaCl); Lentes; Clulas espejos; y un Detector
(Fotomultiplicador). (Vea figura 1)
Cuando se encuentra un sistema coloreado o un color producido en una reaccin, es preciso
una investigacin para desarrollar una determinacin espectrofotomtrica adecuada del
constituyente, para lo cual es necesario hacer una seleccin de la longitud de onda analtica.
3.2.1. NATURALEZA DE LA ABSORCIN DE ENERGA RADIANTE
El espectro de la energa radiante, contado a partir de la de menor longitud de onda (o, lo que
es lo mismo, e la de ms alta frecuencia), incluye los rayos csmicos, las radiaciones gamma, los
rayos X, la regin del ultravioleta, la regin de la luz visible, la zona del infrarrojo y l regin de
las ondas de radio. Tanto los tomos como las molculas pueden adoptar varios estados
electrnicos o diversos niveles de energa. La absorcin de energa involucra la transicin de
los electrones a niveles energticos ms elevados; cuanto ms larga es la longitud de onda de la
radiacin absorbida, menor es la transformacin energtica por esa absorcin. Ahora bien,
estas son normas generales, vlidas para todos los casos, pero cuando se pretende interpretar
con ms detalle los fenmenos de absorcin, las cosas se hacen bastante ms complicadas,
especialmente en el caso de las molculas orgnicas.
60
3.2.2. LEYES DE LA ABSORCIN DE LA ENERGA RADIANTE

Estas Leyes hacen referencia a las relaciones existentes entre la magnitud de la absorcin de
energa radiante y la cantidad de la sustancia absorbente. Para un sistema absorbente
(solucin) dado, a una longitud de onda concreta y con una determinada intensidad de la
energa incidente, hay dos variables que influencian la intensidad de la absorcin: la
concentracin del absorbente y el espacio recorrido por la radiacin energtica a travs de la
solucin.
La ley de Beer, expresa la absorcin de un rayo de energa radiante, efectuada por un
absorbente determinado, en las siguientes condiciones:
a) Se supone que la energa radiante es monocromica (es decir, con una longitud de onda
nica).
b) El medio es homogneo o istropo (es decir, su ndice de refraccin es idntico en todas
direcciones).
c) La absorcin del solvente es despreciable.
d) No hay asociacin ni disociacin de las molculas absorbentes.
e) No existe reaccin entre el absorbente y las molculas del solvente.
La ley de Beer afirma que, si se cumplen esos requisitos, la absorcin, A, es directamente
proporcional a la concentracin del absorbente y a la longitud del trayecto recorrido por la
energa radiante a travs de la solucin.
De aqu se puede escribir:
Donde:
A1: Absorcin de una solucin problema (de la que se quiere averiguar la concentracin)
A2: Absorcin de una solucin patrn de concentracin conocida.
C1: Concentracin de la solucin problema
C2: Concentracin de la solucin patrn (estndar)
Esta es una frmula que se aplicara en esta prctica de laboratorio, a pesar de que las lecturas
de un instrumento determinado espectrofotmetro- pueden variar significativamente en el
curso de unas pocas semanas a consecuencia del desgaste de sus componentes, puesto que
todo esto no representan un problema cuando se calculan los resultados deducindolos de la
comparacin de la absorcin del problema con la de un patrn (9).
61
La dificultad es grave, en cambio, cuando hay que deducir los resultados a partir de valores
establecidos de absorcin, sea por no disponer de patrones, sea por no resultar practico
analizar un patrn simultneamente con cada problema o grupo de problemas (9).
3.3.
PROCEDIMIENTO A REALIZAR EN ESPECTROFOTOMETRA (9)
3.3.1. DETERMINACIN DEL ESPECTRO DE ABSORCIN

Este se estudia en el espectrofotmetro la disolucin del constituyente que se analiza, despus
de desarrollado el color, determinndose su espectro de absorcin. La longitud de onda
seleccionada es normalmente una, a la que la diferencia entre la absorbencia del compuesto
coloreado y el reactivo sea mxima. Aunque la longitud de onda conseguida no sea muy
sensible, debe ser segura.1
3.3.2. BLANCO DE REACTIVOS
Generalmente cuando se hace una determinacin con un problema, se hace una lectura similar
sustituyendo la solucin problema por agua o por el o los reactivos que sirvan para detectar la
sustancia problema. Esta ltima lectura es la del blanco de reactivos y sirve para determinar la
absorcin de la solucin problema no derivada de la sustancia cuya concentracin se trata de
medir si no de los reactivos en s. En esta prctica la absorcin en blanco se debe a la razn que
se explica seguidamente:
En esta prctica se utilizara la prueba de Biuret para detectar la sustancia problema de nuestro
inters: Protenas. Piense en el reactivo de Biuret. Es de color azul recuerda? Cuando se utiliza
este reactivo para detectar protenas, y medir su concentracin, sucede que la lectura en
espectrofotmetro es la suma del color del reactivo de Biuret mas el color de la sustancia
problema. Por ello se hace necesario hacer una correccin.
Al colocar el espectrofotmetro en absorcin 0 (100% transmitancia) con agua u otro
solvente, entonces la lectura del problema corresponde a la absorcin del problema en si mas
la del blanco de reactivos. Se lee luego el blanco de reactivos, frente al mismo solvente
empleado antes y el valor de esta ltima se resta a la absorcin de la solucin problema
(extracto de protenas). El valor de absorcin que ahora se tiene, representa presumiblemente,
la absorcin debida a la sustancia que se trata de determinar, siempre, que no existan
sustancias que interfieran en la calibracin.
3.3.3. USO ADECUADO DE LAS CUBETAS

La conservacin de las cubetas exige que se les trate correctamente. Hay que evitar hacerles
ralladuras o ponerlas en contacto con sustancias qumicas capaces de alterar sus
62
caractersticas pticas. Por lo tanto no se deben usar, para limpiarlas, ni acido sulfrico
concentrado, ni tampoco soluciones fuertemente alcalinas. Lo ms conveniente es un
detergente de actividad moderada (no excesivamente alcalino) o, tambin, algn solvente
orgnico.
Las superficies pticas deben limpiarse con un trozo de tejido blando con papel para limpiar
los cristales de la guas, y no deben tocarse con los dedos mientras se hacen las lecturas.
Figura No. 12 Espectrofotmetro utilizado en el laboratorio de bioqumica.

Fuente: MPH
Referencia:
Bausch & Lomb, Modelo
Spectronic 20
1. Escala de lectura
2. Luz piloto
3. Escala de longitud de onda
4. Control para seleccionar la longitud de onda
5. Control de intensidad de luz
6. Interruptor de corriente y control de cero
7. Compartimiento de la muestra
63

1. Qu es la cromatografa? En qu consiste esta prueba?
2. Cules son las 4 fuerzas que determinan el grado de separacin de sustancias en la

cromatografa?
3. A qu tipo de procedimiento cromatogrfico pertenece la cromatografa fina (esta se

usara en la prctica)?
4. Cul sera el comportamiento de una sustancia relativamente insoluble, en un proceso

de separacin cromatografa? Qu sucedera si la sustancia fuese muy soluble?
5. Explique en qu consiste la cromatografa de absorcin?
6. Qu tipos de adsorbentes se pueden utilizar en la cromatografa de capa fina?
7. Qu es la activacin de de placas en la cromatografa en capa fina?
8. Enumere tres cuidados que se debe tener presentes en la aplicacin de la muestra en la
cromatoplaca:
9. En qu consiste la tcnica de nebulizacin para el revelado de cromatograma?
10. Cmo se preservan los cromatogramas de capa delgada?
11. Elabore una definicin propia de espectrofotometra.
12. Para qu se utiliza espectrofotmetro?
13. Qu condiciones debe cumplir la absorcin de un rayo de energa radiante segn la Ley
de Beer?
14. Qu dice la Ley de Beer? Para responder a esta pregunta puede tambin referirse a
Lehninger, Nelson y Cox.
15. Trate de explicar con sus palabras lo que es un blanco de reactivos. Si se le dificulta
mucho, por favor preguntarle a su instructor de Laboratorio o Catedrtico de curso.
64
5. MATERIALES DE LA PRCTICA V
A cargo de cada grupo de trabajo:
Cromatoplaca de aluminio con slica gel
Extraccin acuosa
Extraccin salina
Un lpiz o un portaminas de grafico
1 regla graduada
1 gradilla de metal
1 beacker de 50 ml
3 tubos capilares
1 pinza /tubo de ensayo
2 probetas de10 ml
Muestra problema
1 cromatografa
9 tubos de ensayo
2 pipetas Mohr (1ml y 5 ml)
1 Kleenex

1 caja de placas
cromatografas de aluminio con: Slica
Gel como medio de sostn.
Tubos capilares
Cono(s) de hilo
1 Objeto puntiagudo (navaja, clavo, etc) y/o ganchos plsticos de ropa
Papel filtro
Espectrofotmetro de Bausch y Lomb Modelo Epectronic 20
2 Cubetas (recipientes para lectura en espectrofotmetro)
1 mechero bunsen
Solucin n-butanol, acido actico, agua
1 nebulizador de vidrio
1 manguera de hule
1 caja de Kleenex
Adems las soluciones siguientes:
Sulfato de sodio al 26.6 % Estndar de albumina de concentracin conocida (preparado a base
de reactivo o de clara de huevo), Reactivo de Biuret, Agua destilada, Alcohol etlico, Acetona.
65
6. METODOLOGA
66
67
68
69
70
71

Resuelva lo siguiente:
Definir Cromatografa. En qu consiste esta prueba?
Enumere las cuatro fuerzas, de accin independiente, que definen el grado de separacin de
sustancias en la cromatografa. Cules de esos factores son responsables de la
movilizacin de la mezcla de sustancias a travs del medio de sostn?
Cul es la diferencia entre la cromatografa en papel y la cromatografa en capa fina?
Seale al menos 3 recomendaciones para la aplicacin de muestras en las cromatoplacas.
Elabore un flujo grama de la metodologa para realizar cromatografa en capa fina. (No es
necesario que sea muy especfico, puede hacer simplemente un bosquejo de dicha
metodologa).
Indique que soluciones utilizo en la cromatografa (muestra problema y soluciones patrn)
y explique el fundamento que le ayudo a decir que soluciones utilizar.
Calcule el valor de Rf para todas las manchas.
Vea la formula que aparece en su material de apoyo a la prctica.
Con base a los valores Rf obtenidos, identifique de ser posible, la muestra desconocida.
Compare los Rfs de cada una de las manchas obtenidas de sus muestras de hidrolizado,
con los obtenidos para los aminocidos patrn.
Analice la correspondencia existente entre estos resultados y los de las pruebas de color,
desarrolladas en la prctica 2 parte II.
Resuelva lo siguiente:
Indique como se activa una cromatoplaca.
Cul es la razn de utilizar tubos microcapilares?
Cul es la razn de esperar a que se seque cada aplicacin?
Por qu se coloca papel filtro mojado con eluente?
Por qu se marca con lpiz la posicin del frente del disolvente?
72
Qu indicara para usted el aparecimiento de una mancha de un color muy diferente al

azul o violeta que denota aminocidos segn la prueba de la Ninhidrina?.
Indique las dimensiones de una cromatoplaca completa (de donde su instructor de
laboratorio recorto varias porciones). Cules son las dimensiones de la seccin de
cromatoplaca que usted utilizo en esta prctica?
Investigue si una cromatoplaca se recorta o si se utiliza completa. Por qu se uso una
cromatoplaca recortada?
Todas las cromatocamaras son iguales a las que se utilizaron aqu? Justifique su
respuesta; si hubiese cromatocmaras de fabrica Cul es su tamao? Adems trate de
justificar por qu aqu se usaron cromatocamaras pequeas.
Responda las siguientes preguntas:
Qu es espectrofotometra? Qu es un espectrofotmetro?
Por qu hay que limpiar tan minuciosamente la cubeta antes de agregar la solucin que
se medir en el espectrofotmetro?
Por qu se utiliz una longitud de onda de 540 nm, en el espectrofotmetro, para realizar
esta prctica de laboratorio?
Qu es un blanco de reactivo?
Elabore una tabla para indicar el contenido de los 9 tubos de ensayo identificados con
letras maysculas.
Justifique los pasos 6. 2 g y 6.2 h de la metodologa de esta prctica.
Se le sugiere leer el tema blanco de reactivos de el material de apoyo a esta prctica o
consultar a su instructor de Laboratorio o Catedrtico de Curso.
Reporte los datos siguientes:
Lectura (absorbancia y transmitancia) para las soluciones siguientes: blanco de reactivo
(Na2SO4 + Biuret); Estndar (albmina); Solucin problema (extracto).
Concentracin [% peso/volumen] de protenas en el extracto acuoso de protenas. (utilice
la frmula incluida en el Material de apoyo a esta prctica).
Concentracin [% peso/volumen] de protenas en el extracto salino de protenas. (utilice
la frmula incluida en el Material de apoyo a esta prctica.
73
Investigue lo siguiente:
Cantidad (en gramos) de Protenas (solubles en agua) en 100 gramos de harina vegetal
seca.
Cantidad (en gramos) de Protenas (solubles en agua) en 100 gramos de muestra vegetal
hmeda.
Cantidad (en gramos de Protenas (solubles en agua) en 100 gramos de muestra vegetal
seca.
Para resolver esto tome en consideracin los siguientes datos:
Concentracin [1% peso/volumen] de protenas en el extracto acuoso de protenas.
La cantidad obtenida de Extracto Acuoso en la prctica 3 de este Manual de Prcticas.
La Cantidad de Harina Vegetal utilizada para preparar el Extracto Acuoso.
La cantidad de Muestra Vegetal (semilla, hoja, etc.) utilizada para preparar la harina vegetal
y la Cantidad de Harina Vegetal preparada.
El % de humedad de su Muestra Vegetal.
74
Prctica No. 6 EXTRACCIN DE GLCIDOS DE MUESTRAS VEGETALES

1. INTRODUCCIN
Los glcidos han sido conocidos durante mucho tiempo como carbohidratos, pero en la actualidad
suele usarse ms el nombre glcido.
Segn Lehniger, Nelson y Cox (15), los glcidos son las biomolculas ms abundantes en la
naturaleza. Cada ao, el proceso de la fotosntesis llevado a cabo por plantas y algas convierte ms
de 1000.000 millones de toneladas mtricas de CO2 y H2O en celulosa y otros productos
vegetales.
Ciertos glcidos (como el azcar y el almidn) son fundamentales en la dieta humana de la mayor
parte de pases, y la oxidacin de glcidos es la principal ruta de obtencin de energa en la
mayora de clulas no fotosintticas. Los polmeros insolubles de glcidos actan como elementos
estructurales y de proteccin en las paredes celulares de bacterias y plantas y en los tejidos
conjuntivos y envolturas celulares anmales. Otros polmeros de glcidos funcionan como
lubricantes de articulaciones seas o como adhesivos celulares.
En esta prctica de laboratorio se trabajar una metodologa sencilla para la extraccin de
glcidos (carbohidratos). Aquel fundamento terico que se ha seleccionado para el trabajo con
esta biomolcula, se presenta en la Prctica 7 de este Manual. Por ello no encontrar usted aqu
cuestionario pre laboratorio.
2. OBJETIVOS
Utilizar el Sistema Soxhlet para la extraccin de glcidos de una muestra vegetal
pulverizada.
Utilizar adecuadamente la cristalera y equipo a emplear un esta prctica de
laboratorio.
75
3. MATERIALES
A carga de cada grupo de trabajo:
Harina de muestra vegetal (preparada y almacenada desde la Prctica 2 de este
laboratorio).
Un destilador Soxhlet contenido en una caja de cartn: esto incluye: un refrigerante o
condensador, una cmara de extraccin, un baln de fondo plano de 250 ml y dos
mangueras de hule largas.
1 mechero
1 manguera de hule
1 soporte universal
1 anillo de hierro
1 rejilla de asbesto
2 pinzas fisher
1 erlenmeyer de 250 ml
A cargo del da de laboratorio
1 caja con perlas de ebullicin
- papel parafilm - fsforos
NOTA: Del destilador Soxhlet cabe sealar que es un sistema de cristal que requiere de mucho
cuidado en su manejo, pues es muy frgil. En funcin de esto es posible que alguno(s) o todos
los grupos utilicen un sistema aleatorio que venga a sustituir a este destilador, pero esto ser
decisin de la Subrea de Ciencias qumicas y la explicacin pertinente de su uso estar a cargo
del Instructor de Laboratorio.
76
4. METODOLOGA
77
Esta prctica ser evaluada junto con la practica 7. as que esta vez no habr entrega de
cuestionario pre laboratorio, ni examen cort ni entrega de informe.
78
PRCTICA 7 ESTUDIO DE GLCIDOS DE MUESTRAS VEGETALES

1. INTRODUCCIN
Los carbohidratos tambin llamados hidratos de carbono o glcidos, son compuestos de amplia
distribucin en la naturaleza, la mayora son de origen vegetal formados durante el proceso de la
fotosntesis. Los carbohidratos son los principales componentes de casi todas las plantas y
comprenden del 60 al 90 % de su masa seca. Los hidratos de carbono son sustancias orgnicas que
contienen grupos aldehdos o cetnicos potenciales (que en su estado libre poseen un intenso
poder reductor) y numerosos grupos alcohlicos secundarios y primarios. A causa de la similitud
de sus estructuras y reacciones, resulta difcil identificarlos y determinarlos.
Se crea un contexto agronmico en las prcticas de laboratorio de Bioqumica, de la FAUSAC, al
estudiar los carbohidratos extrados de una muestra vegetal. Para el mencionado estudio, se ha de
trabajar con reacciones caractersticas de las biomolculas (aplicacin de pruebas para su
caracterizacin cualitativa) en el extracto de la muestra vegetal), en el extracto hidrolizado de la
muestra vegetal, a la par de soluciones patrones de carbohidratos.
2. OBJETIVOS
Al finalizar la prctica, el estudiante deber estar en la capacidad de:
Aplicar tcnicas qumicas en la caracterizacin de carbohidratos en una muestra vegetal.
Sealar los criterios de clasificacin y caracterizacin de los carbohidratos.
Manipular adecuadamente, la cristalera, reactivos y equipo a utilizar en la presente
prctica.
79
3. MATERIAL DE APOYO GLCIDOS (CARBOHIDRATOS) (3,7,15,20)

Segn Lehninger, Nelson y Cox (15), loe glcidos son las biomolculas ms abundantes en la
naturaleza. Cada ao, el proceso de la fotosntesis llevado a cabo por plantas y algas convierte ms
de 100.000 millones de toneladas mtricas de CO2 y H2O en celulosa y otros productos vegetales.
Ciertos glcidos (como el azcar y el almidn) son fundamentales en la dieta humana de la mayor
parte de pases, y la oxidacin de glcidos es la principal ruta de obtencin de energa en la
mayora de clulas no fotosintticas. Los polmeros insolubles de glcidos actan como elementos
estructurales y de proteccin en las paredes celulares de bacterias y plantas y en los tejidos
conjuntivos y envolturas celulares animales. Otros polmeros de glcidos funcionan como
lubricantes de articulaciones seas o como adhesivos celulares.
Los glcidos han sido conocidos durante mucho tiempo como carbohidratos, pero en la actualidad
suele usarse ms el nombre "glcido". Literalmente, carbohidrato significa hidrato de carbono.
Este nombre deriv de investigaciones de los primeros qumicos, cuyos anlisis demostraron que
contenan nicamente carbono, hidrgeno y oxgeno. Ahora se sabe que algunos carbohidratos
contienen nitrgeno y azufre, adems de los 3 elementos ya mencionados. Muchos glcidos
comunes cumplen la frmula emprica (CH2O)n, mientras que otros no. En definitiva no son
compuestos hidratados, como lo son muchas sales inorgnicas (CuSO4.5H20). La mayor parte de
sustancias de este tipo tienen frmulas empricas que sugieren que son `hidratos' de carbono, en
los que la relacin C:I3:0 es de 1:2:1. (3, 20)
Como sealan I-P-hninger, Nelson y Cox (15), los glcidos o carbohidratos son
polihidroxialdehdos o polihidroxicetonas, o bien, sustancias que dan lugar a estos compuestos
despus de su hidrlisis. En otras palabras los, carbohidratos son aldehdos o cetonas
polihidroxiladas o productos derivados de ellos por oxidacin, reduccin, sustitucin o
polimerizacin. (20)
Los carbohidratos son los principales componentes de casi todas las plantas, comprenden del 60 al
90% de su masa seca. Los vegetales usan los carbohidratos tanto como fuente de energa as como
tejido de sostn, de la misma manera que los animales emplean las protenas. Los vegetales
sintetizan sus propios carbohidratos a partir del dixido de carbono del aire y del agua del suelo
(3, 7)
El hombre no slo utiliza carbohidratos en su alimentacin (aproximadamente del 60 al 65% en
masa de su dieta media), sino tambin para su vestimenta (algodn, lino, rayn), habitacin
(madera), combustible (madera) y productos de papel (madera). (3, 7)
80

3.1.
CLASIFICACIN DE LOS CARBOHIDRATOS (3,7,15,20)
Los carbohidratos se pueden clasificar segn sus productos de hidrlisis cida. Se aceptan tres
categoras: Monosacridos, Oligosacridos y Polisacridos (la palabra "sacrido" viene del griego
sakkharon, que significa azcar).
3.1.1. Monosacridos:
Son azcares simples y no pueden fragmentarse en molculas ms pequeas por hidrlisis.
Consisten de una sola unidad de un polihidroxialdehdo o cetona. Los monosacridos son slidos
incoloros y cristalinos solubles en agua e insolubles en disolventes no polares. La mayora tienen
sabor dulce. Los monosacridos, por el grupo carbonlico, pueden ser aldosas (contienen un grupo
aldehdo; ejemplo glucosa) o cetosos (contienen un grupo cetnico; ejemplo fructosa). A su vez, los
monosacridos, pueden clasificarse por el nmero de tomos de oxgeno: hexosas (glucosa,
galactosa, manosa, fructosa), pentosas (arabinosa, xilosa, ribosa), tetrosas, treosas (treosa,
eritrosa).
3.1.2. Oligosacridos:
Consisten en cadenas cortas de unidades de monosacridos unidas por los caractersticos
enlaces glucosdicos. Los ms abundantes son los disacridos, que producen dos molculas de
monosacridos por hidrlisis. Aqu los monosacridos estn unidos mediante "enlaces glucosdicos".
Incluyen: sacarosa, lactosa y maltosa. Todos los monosacridos y disacridos comunes
tienen nombres que terminan con el sufijo "-osa". La mayor parte de oligosacridos que
tienen tres o ms unidades de monosacridos, no se encuentran libres sino que se unen a otro tipo de
molculas (lpidos o protenas) formando estructuras hbridas (glucoconjugados).
3.1.3. Polisacridos:
Consisten en cadenas largas de centenares o miles de unidades de monosacridos; es decir, los
polisacridos forman muchas molculas de monosacridos por hidrlisis. Son los carbohidratos
ms abundantes en la naturaleza; sirven como componentes estructurales de las clulas y como
sustancias alimenticias de reserva. Aqu encontramos: almidn, glicgeno y celulosa.
Aqu puede hacerse una subdivisin ms: se tienen por un lado los homoopolisacridos
(molculas muy grandes compuestas nicamente por un tipo de monosacrido) y por otro lado los
heteropolisacaridos (se forman a partir de dos o ms unidades bsicas y estn frecuentemente
asociadas con protenas; cuando predomina el carbohidrato el compuesto se conoce como
proteoglicano o mucoprotena, pero sin el carbohidrato es el componente menor, se le conoce
como glicoprotena).
81
Casi todos los monos y disacridos son slidos cristalinos, de sabor dulce y fcilmente solubles en
agua. Los polisacridos frecuentemente son compuestos amorfos, insolubles e inspidos, con
masas molares sumamente grandes.
Los carbohidratos tambin pueden clasificarse en funcin de sus propiedades "reductoras", de
acuerdo a su capacidad para reducir soluciones con iones metlicos como Cu+2 y Ag+1.
Un carbohidrato reductor es todo carbohidrato que se reduce sin necesidad de hidrlisis previa.
Se caracterizan por poseer sus grupos aldehdicos o cetnicos libres, es decir, que no forman parte
de uniones glucosdicas. En los carbohidratos, los grupos aldehdicos y cetnicos se encuentran en
forma de hemiacetales, por lo que su poder reductor es menor que el de un aldehdo o cetona
libres.
El poder reductor tambin vara entre loa diferentes tipos de carbohidratos (aldosas y cetosas,
monosacridos y disacridos), por lo que el tiempo en que se realiza la reduccin del cobre, a una
temperatura controlada, permite identificar en una muestra el tipo de carbohidrato reductor que
se encuentra presente.
Todos los monosacridos y algunos disacridos son reductores; los polisacridos contienen slo
un grupo reductor por varios cientos o ms de residuos, as que, en la prctica no son reductores.
3.2.
HIDRLISIS DE CARBOHIDRATOS (3)
La hidrlisis de los carbohidratos es la liberacin de las unidades monmeras, los monosacridos,

a partir de carbohidratos que se componen de por lo menos dos de stas unidades. Esto quiere
decir que la hidrlisis sucede desde los disacridos hasta los polisacridos.
Por ejemplo, la escama es un disacrido de molcula demasiado grande por lo que no puede pasar
a travs de las membranas celulares por lo que el cuerpo humano es incapaz de utilizarla como tal,
por lo que debe fragmentarse en sus componentes (glucosa y fructosa) por hidrlisis. Esta
reaccin es catalizada por enzimas en el cuerpo humano, y en el laboratorio puede llevarse a cabo
utilizando cido clorhdrico. El almidn, un polmero de glucosa, se hidroliza tambin por enzimas
y cidos obtenindose glucosa al final.
82

3.3.
PRUEBAS PARA CARBOHIDRATOS (3, 7, 8, 20)
3.3.1. Prueba de molish

Esta prueba es utilizada para identificar la presencia de carbohidratos, incluso
glucoprotenas. El resultado positivo (indicado por la aparicin de un anillo prpura) se da con todos los
carbohidratos ms superiores que las tetrosas.
El cido sulfrico concentrado hidroliza enlaces glicosdicos para dar monosacridos que
pueden ser luego deshidratados dando furfural y sus derivados. Estos productos pueden
condensarse con compuestos fenlicos como el -naftol para dar sustancias coloreadas
(mayormente prpuras).
Figura No. 13 Resultado de la prueba de molish.

Fuente: MPH.
3.3.2. Prueba de benedict:

Esta prueba se realiza en condiciones moderadamente alcalinas. Es una prueba sumamente
sensible para detectar la presencia de carbohidratos, pero no especfica para los azcares en
particular (el reactivo de Benedict demuestra la presencia hasta de 0.01% de glucosa en
agua). Esta reaccin suele usarse para demostrar la presencia de carbohidratos reductores,
y se basa en la reduccin del ion cprico, en medio alcalino, para formar xido cuproso [Cu 2O].
Los aldehdos, al igual que muchos otros compuestos, dan prueba positiva con el reactivo de
Benedict. La formacin de un precipitado de xido cuproso es el criterio para una prueba
positiva. El color del precipitado puede ser rojo, pardo naranja, amarillo o amarillo verdoso,
dependiendo de la naturaleza y cantidad del agente reductor presente.
83
El reactivo de Benedict es reducido por O-hidroxialdehidos, por O-hidroxicetonas y por Ocetoaldehdos. Las molculas que slo contienen el grupo funcionar alcohol, se oxidan con la
solucin de Benedict.
Figura No. 14 Prueba de benedict dando una coloracin anaranjada.
3.3.3. PRUEBA DEL, YODO:

Se utiliza para la deteccin de polisacridos y para seguir el curso de la hidrlisis, a travs del
cambio gradual de color que se produce entre el "hidrolizado" y el yodo. Esto se debe a que
el yodo forma complejos coloreados de adsorcin con los polisacridos. El almidn da un
color azul o negro azulado con el yodo, mientras que el glicgeno y el almidn parcialmente
hidrolizado dan una coloracin pardo rojiza o violeta rojizo.
Figura No. 15 Coloracin de los extractos con la prueba de yodo dando una coloracin azul.
84
3.3.4. PRUEBA DE BARFOED:

La prueba o reaccin de Barfoed se emplea para diferenciar entre mono y disacridos. La base de
esta prueba la constituye la diferente velocidad de la reaccin con el acetato cprico. La velocidad
de la reaccin se determina por la velocidad de formacin de Cu2O. Concentraciones equimolares
de monosacridos y disacridos poseyendo un grupo reductor por molcula reaccionan con el
reactivo de Barfoed a velocidades distintas. Una clara diferencia entre mono y disacrido, es su
tamao molecular, lo que parece constituir un factor limitante en la velocidad de la reaccin.
Tambin pueden estar implicados otros factores, tales como una interaccin ms compleja con los
dos anillos monosacridos. Ello parece suficiente para suponer que las molculas ms pequeas
tienen una mayor reactividad.
La prueba es positiva por el aparecimiento de un color rojo ladrillo, que se debe al aparecimiento
de precipitado 0120 (a pesar de ser el mismo precipitado formado con Benedict, el color obtenido
en estas pruebas es diferente).
Figura No. 16 coloracin que se obtiene con la prueba de barfoed en glucosa y fructuosa.
3.3.5. PRUEBA DE SELIWANOFF

Esta prueba permite diferenciar las aldohexosas de las cetohexosas en base a sus velocidades de
reaccin. El HCl caliente deshidrata a las cetohexosas para formar hidroximetilfurfural mucho ms
rpido que a las aldohexosas correspondientes.
Las cetosas se deshidratan ms rpido que las aldosas, dando derivados de furfural, que,
condensados con resorcinol, dan un complejo rojo.
85
Esta reaccin est basada en la transformacin de la fructosa en un derivado del furfural por la
accin del calor y el cido clorhdrico. Como ya se mencion, este derivado se condensa con el
resorcinol para formar un compuesto rojo. La reaccin la dan todas las cotosas.
La concentracin del azcar y el tiempo de calentamiento deben ser controlados cuidadosamente.
Un calentamiento prolongado hace que la glucosa y otras aldosas den positiva la reaccin. Las
pentosas reaccionan con esta prueba dando un producto de color verde a azul.
Figura No. 17 Coloracin de los extractos y patrones con la prueba de seliwanof.
86

1.
Elabore una definicin propia de: carbohidrato (glcido)
2.
Mencione al menos 5 funciones de los glcidos.
3.
Cmo se pueden clasificar a los carbohidratos segn sus productos de hidrlisis cida?
4.
Elabore una definicin para "monosacridos". Seale las caractersticas generales de este
grupo y adems indique cul(es) monosacridos se usar(n) en esta prctica.
5.
Cules la diferencia entre aldosa y cetosa?
6.
Qu es un oligosacrido?
7.
Elabore una definicin para "disacrido. Seale las caractersticas generales de este
grupo y adems indique cul(es) disacrido(s) se usarn en esta prctica.
8.
Elabore una definicin para "polisacrido". Adems indique cul(es) polisacrido(s) se

usar(n) en esta prctica.
9.
Qu es un carbohidrato reductor? Qu caracteriza a los carbohidratos reductores?
10.
Diferencie a los monosacridos y disacridos; de los polisacridos, en funcin de su solubilidad y de su

propiedad "reductora'.
11.
Qu es hidrlisis de carbohidratos?
12.
Para qu se utiliza la prueba de Molisch? Qu cambio indica una prueba de Molisch

positiva?
13.
En qu consiste la prueba de Benedict? Cul es su utilidad?
14.
Qu se puede detectar con la prueba del yodo? Qu cambio indica que la prueba es positiva?
15.
Cul es la utilidad de la prueba de Barfoed? en qu se fundamenta esta prueba?
16.
Qu compuesto es identificado en la prueba de Seliwanoff, cuando el resultado es un

complejo color rojo?
87
5. MATERIALES
Preparar el rea de trabajo del rea de trabajo:
30 tubos de ensayo
2 gradillas de metal
1 pinza p/tubo de ensayo
1 estufa elctrica
2 probetas de 10 ml
1 beacker de 600 ml
1 pizeta
1 beacker de 100 ml
tubos de ensayo grandes
frascos con gotero identificados en funcin de su contenido, as:
-naftol; Benedict; Solucin de Yodo; Barfoed; Seliwanoff.
Muestras de extracto, de extracto hidroliza.do, de almidn hidrolizado y de sac-fruosa
hidrolizada.
Agua destilada
2 goteros pico de gallo con cido sulfrico (en lavaderos)
1 gotero pico de gallo con cido clorhdrico (en la campana de gases). - Frascos con
gotero con las soluciones siguientes:
Celulosa, AL-pidn, Sacarosa, Lactosa, Maltosa, Glucosa, Fructosa.
88
6. METODOLOGA
89
VER PREPARACIN DE LOS REA CTIVOS.
N o t a : L a L I M P I E Z A de la cristalera es fundamental para las pruebas a realizar en esta

prctica de laboratorio
90
El cuadro siguiente es una gua para el estudiante para que sepa que muestras se van a analizar en
las pruebas de esta prctica.
Cuadro 6. Resumen de pruebas cualitativas, a realiza a soluciones patrones e hidrolizados de
carbohidratos y muestra desconocida.
PRUEBAS
MUESTRAS A
ANALIZAR
1. Extracto
2. Extracto
Hidrolizado
3. Celulosa
(Papel Bond)
4. Almidn
5. Almidn
Hidrolizado
6. Sacarosa
7. Sacarosa
Hidrolizada
8. Lactosa
9. Maltosa
10. Glucosa
11. Fructosa
12. Muestra
desconocida
Molisch
Benedict
Yodo
Barfoed
Seliwanoff
7. PREPARACIN DE REACTIVOS
a) Prueba de Benedict:
El reactivo de Benedict se p re p a ra disolviendo 1..3 g de curato de sodio y 10 gramos de
carbonato de sodio en aproximadamente 80 ml de agua tibia. Si la solucin est turbia, filtrar.
Colocar en una probeta de 100 ml y se completa con agua hasta la marca de 85 ml. Enseguida, se
disuelven 1.73g de sulfato de cobre en aproximadamente 10 ml de agua destilada. Se mezclan las
dos soluciones y se agitan. Se diluye la solucin a 100 ml con agua destilada (en un baln
volumtrico de 1OOmL).
91
b) Prueba del Yodo:

Esta solucin de yodo es al 5mmol I2 por litro de solucin de KI al 3% p/v,
c) Prueba de Barfoed:
El reactivo de Barfoed se prepara utilizando 13.3 g de acetato de cobre en 200 mL de agita destilada,
ms 1.8 mL de cido actico glacial.
d) Prueba Seliwanoff.
El reactivo de Seliwanoff se prepara utilizando 0.5g de resorcinol por cada litro de HCl 3M.
Explique el por qu de la distribucin de las muestras, del cuadro anterior, para cada prueba de
caracterizacin. En otras palabras, justifique el uso de cada muestra en cada prueba que se le
indica en el cuadro 6.
Examen Corto con un nivel de dificultad similar al del CUESTIONARIO PRE LABORATORIO
La metodologa de evaluacin incluye tambin un Informe de prctica. El informe puede hacerse
en parejas o individualmente, y debe incluir:
Cartula
RESULTADOS Y ANLISIS DE RESULTADOS
Es un cuadro de resultados para CADA UNA DE LAS 12 MUESTRAS (Vea el cuadro 6). Los cuadros
deben seguir el modelo del Cuadro 7, presentado a continuacin:
92
CUADRO 7. Cuadro de resultados de las pruebas realizadas a la muestra de EXTRACTO DE

CARBOHIDRATOS
NOMBRE DE LA PRUEBA
COLORACIN
DICTAMEN
Molisch
Benedict
Yodo
Barfoed
Seliwanoff
REFERENCIA: Coloracin = color observado como resultado de la prueba

Dictamen = prueba positiva (+) o negativa (-).
NOTA: Procure intercalar los resultados con su respectivo anlisis explicacin.
Anlisis y explicacin de cada cuadro de resultados, a fin de establecer la presencia o
ausencia de glcidos en cada muestra problema. (Para el caso de la explicacin que se le
pide, haga nfasis sobre si hay concordancia de los resultados prcticos con el fundamento
terico. Si no hubiese tal concordancia, plantee una justificacin vlida).
Dar solucin a los "cuadros" que aparezcan en su metodologa y presentarlos tambin,

intercalados con los resultados y anlisis de resultados.
Como una gua de su anlisis se le recomienda utilizar la solucin a los cuadritos que
93
Prctica No. 8 EXTRACCIN DE LPIDOS DE MUESTRAS VEGETALES

1. INTRODUCCIN
Cuando se iniciaban las prcticas de laboratorio de Bioqumica, se haca referencia al estudio de
las tres biomolculas ms importantes: protenas, carbohidratos y lpidos. Con el estudio de esta
prctica se iniciara el trabajo con los lpidos.
Los lpidos forman un grupo heterogneo de compuestos orgnicos y son componentes
importantes de los tejidos vegetales y animales. Poseen caractersticas comunes de solubilidad
(poco o nada solubles en agua, pero solubles en solventes no polares como cloroformo, ter,
etanol, benceno, etc.).
Los lpidos constituyen el grupo de compuestos de reserva de energa ms importante en el reino
animal. En contraste, los vegetales almacenas casi toda su energa en forma de carbohidratos,
fundamentalmente como almidn. Los lpidos sirven de aislamiento a los rganos vitales,
protegindolos de los golpes y manteniendo la temperatura optima del cuerpo. Los lpidos forman
parte integral de la estructura de la membrana celular y, como tales, estn asociados con el
transporte a travs de las membranas celulares.
Los aceites vegetales tienen un sin nmero de aplicaciones industriales, medicinales, etc. Y existe
gran cantidad de especies que son cultivadas para extraer y procesar los aceites presentes en sus
semillas, hojas u otros rganos.
En esta prctica de laboratorio se trabajara una metodologa sencilla para la extraccin de lpidos.
Aquel fundamento terico que se ha seleccionado para el trabajo con esta biomolecula, se presenta
en la practica 9 de este manual. Por ello no encontrara usted aqu cuestionario pre laboratorio.
2. OBJETIVOS
Utilizar el sistema soxhlet para la extraccin de lpidos de una muestra vegetal
pulverizada.
Utilizar adecuadamente la cristalera y equipo a emplear en esta prctica de laboratorio.
LABORATORIO BIOQUMICA
101
3. MATERIALES
Harina de muestra vegetal (preparada y almacenada desde la practica 2 de este
laboratorio).
NOTA: es posible que su instructor de laboratorio decida asignar una muestra vegetal a cada
grupo. Esto se har con la finalidad de que todos los grupos trabajen con un vegetal con un
contenido relativamente alto de LPIDOS (por ejemplo man, ajonjol, etc.).
Un destilador soxhlet contenido en una caja de cartn: esto incluye: un refrigerante o
condensador, una cmara de extraccin, un baln de fondo plano de 250 ml. y dos
mangueras de hule largas.
1 mechero
1 anillo de hierro
1 erlenmeyer de 250 ml.
1 manguera de hule
1 rejilla de asbesto
1 soporte universal
2 pinzas fisher
1 caja con perlas de ebullicin.
Solvente n-hexano o algn otro solvente apolar que le indique su instructor de
laboratorio.Papel parafilm
Fsforos.
NOTA: del destilador soxhlet cabe sealar que es un sistema de cristal que requiere de mucho cuidado
en su manejo, pues es muy frgil. En funcin de esto es posible que algunos o todos los grupos utilicen
un sistema aleatorio que venga a sustituir a este destilador, pero esto ser decisin de la Subarea de
Ciencias Qumicas y la explicacin debida estar a cargo del Instructor de Laboratorio.
102
4. METODOLOGA
103
5. EVALUACIN DE LA PRCTICA:
Esta prctica ser evaluada junto con la practica 9. As que esta vez no habr entrega de
cuestionario pre laboratorio, examen corto ni entrega de informe.
104
Prctica No. 9 ESTUDIO DE LPIDOS DE MUESTRAS VEGETALES

1. INTRODUCCIN
En la prctica anterior se han extrado lpidos de una muestra vegetal. Ahora se proceder a
realizar una metodologa sencilla para estudiar cuantitativa y cualitativamente esta Biomolcula.
Respecto a ella aqu se presenta el fundamento terico para hacer ms accesible el conocimiento
dentro del laboratorio.
Si usted compara los contenidos de las biomolculas en los vegetales, podr notar que
regularmente son los lpidos los de menor proporcin. Esto no se debe a que carezcan de
importancia, sino que las plantas han creado un medio de almacenamiento de energa a travs de
almidn y utilizan los lpidos sobre todo en el transporte a travs de las membranas celulares
(Segn White et.al. (20)).
Los lpidos son molculas biolgicas fundamentales en las plantas, como se cit anteriormente, y
por ello, en esta prctica, se buscara, a travs de experiencias sencillas, que el estudiante obtenga
bases para realizar pruebas de caracterizacin de lpidos en muestras vegetales, utilizando
adecuadamente la cristalera, equipo y reactivos necesarios.
2. OBJETIVOS
Al finalizar la prctica, el estudiante deber estar en capacidad de:
Determinar experimentalmente el porcentaje de pureza del extracto de lpidos de la
muestra vegetal.
Realizar las pruebas de solubilidad de lpidos y de instauracin como estudio cualitativo
de caracterizacin de lpidos de la muestra vegetal.
Obtener experimentalmente el ndice de Saponificacin de los lpidos de la muestra vegetal.
Obtener experimentalmente el ndice de acidez de los lpidos de la muestra vegetal.
Manipular adecuadamente, la cristalera, reactivos y equipo a utilizar en la presente
practica.
105
3. MATERIAL DE APOYO ESTUDIO DE LPIDOS DE MUESTRAS VEGETALES

3.1. LPIDOS (15,20)
Los lpidos se encuentran generalmente distribuidos en la naturaleza como esteres de cidos
grasos de cadena larga. Forma un grupo heterogneo de compuestos orgnicos y son componentes
importantes de los tejidos vegetales y animales. Poseen caractersticas comunes de solubilidad
(poco o nada solubles en agua, pero solubles en solvente no polares como cloroformo, ter, etanol,
benceno, etc.)
Los lpidos constituyen el grupo de compuestos de reserva de energa ms importante en el reino
animal. En contraste, los vegetales almacenan casi toda su energa en forma de carbohidratos,
fundamentalmente como almidn. Los lpidos sirven de aislamiento a los rganos vitales,
protegindolos de golpes y manteniendo la temperatura ptima del cuerpo. Los lpidos forman
parte integral de la estructura de la membrana celular y, como tales, estn asociados con el
transporte a travs de las membranas celulares.
Los aceites vegetales tienen un sin nmero de aplicaciones industriales, medicinales, etc, y existe
gran cantidad de especies que son cultivadas para extraer y procesar los aceites presentes en sus
semillas, hojas u otros rganos.
3.2.
CLASIFICACIN DE LOS LPIDOS (15,20)
A diferencia de los polisacridos y protenas, los lpidos no son polmeros no poseen unidad
monmerica repetitiva-. Sin embargo, al igual que los carbohidratos, pueden clasificarse en base a
sus productos de hidrlisis y segn su semejanza en cuanto a estructura molecular. Se clasifican
as:
1. Lpidos simples
2. Lpidos compuestos
3. Esteroides.
3.2.1. LPIDOS SIMPLES:
Se subdividen en:
Grasas y aceites (triacilgliceroles):
Producen cidos grasos y glicerol (un alcohol trihidroxilado) por hidrlisis. Se les llama
triacilgliceroles, debido a que son esteres que se componen de tres cidos grasos unidos al
glicerol.
106
Se dice que un lpido es una grasa si se encuentra en estado slido a 25C y un aceite, si sta es
lquido o la misma temperatura.
Estos compuestos constituyen la mayor parte de los lpidos ingeribles. Son degradados
parcialmente por las lipasas en el intestino y luego son re-esterificados en la mucosa intestinal.
Un cido es un cido monocarboxilico de cadena larga continua. La presencia de dobles enlaces en
ellos disminuyo el punto de fusin del compuesto. Estos cidos pueden ser saturados o
insaturados. En general cuando mayor sea el grado de instauracin de un cido graso, tanto
menor ser su punto de fusin. Las grasas estn formadas por una gran proporcin de cidos
grasos insaturados y los aceites tienen ms proporcin de cidos grasos insaturados.
Los steres de glicerol y cidos grasos se conocen como acilgliceroles. Los triacilgliceroles son la
forma predominante en la naturaleza. Los acilgliceroles on molculas no cargados y por ello se
conocen tambin como lpidos neutros
Los lpidos pueden ser oxidados en el hgado para suministrar energa o pueden ser depositados
como grasa en regiones caractersticas donde actan como depsitos de reserva a largos plazo y
como aislamiento trmico. En algunas semillas los triacilgliceroles se almacenan en fomra de
aceites. Los lpidos que se obtienen de fuentes animales, por lo general son slidos, en tanto que
los aceites normalmente son de origen vegetal. Por ende es comn hablar de grasas animales y de
aceites vegetales.
Ceras:
una cera es un ster de un alcohol aliftico superior y un cido graso de cadena muy larga.
Producen cidos grasos y alcoholes de cadena larga por hidrlisis. Las ceras no se hidrolizan con
facilidad, por lo tanto, resulta til como recubrimientos protectores. En las clulas, las ceras son
cubiertas a prueba de agua para proteger contra infecciones, dao mecnico o ganancia excesiva
de agua.
3.2.2. LPIDOS COMPUESTOS

Se subdividen en:
Fosfolipidos:
Producen por hidrlisis cidos grasos, glicero, cido fosforito y un alcohol nitrogenado. Los
fosfolpidos, tambien llamados fosfticos, son lpidos compuestos qu se derivan del fosfato de
glicerol. Qumicamente son similares a los triacilgliceroles ya que son steres de cidos grasos y
glicerol, pero adems contienen cido fosfrico eterificado con un alcohol.
107
Son especialmente abundantes en el hgado, cerebro y tejido espinal y se localizan en las

membranas externas de casi todas las clulas.
Son los lpidos de mayor polaridad. Se supone que su funcin fundamental es la de actuar como
un agente emulsionante en las superficies de las membranas celulares, donde los lpidos
insolubles en agua y los materiales solubles en ella deben ser capaces de asociarse
inmediatamente.
Glicolpidos:
Producen por hidrlisis cidos grasos, esfingosina o glicerol y un carbohidrato. Existen algunos
grupos de compuestos que contienen estructuras tanto de lpidos como de carbohidratos.
Aquellos que son solubles en agua reciben el nombre de liposacridos y se consideran como
derivados de carbohidratos. Aquella que sigue siendo solubles en disolventes orgnicos no
polares se clasifican como glicolpidos. Un grupo de glicolpidos contiene cidos grasos, glicerol y
diversos carbohidratos.
Esfingolpidos:
Producen por hidrlisis cidos grasos, esfingosina, cido fosfrico y un componente alcohlico. Se
encuentran en las membranas de plantas y animales, pero slo muy poco cantidad en los
depsitos de grasa. Aqu, el esqueleto de la molcula es el alcohol aminado esfingosina en lugar de
glicero. Tambin estn presentes en ellos, cidos grasos, fosfato y un compuesto alcohlico.
Lipoprotenas:
En los materiales biolgicos se encuentran frecuentemente asociados con protenas formando
complejos lipoprotenicos. Las lipoprotenas solubles se encargan principalmente del trasporte
los lpidos en la sangre, mientras que las insolubles constituyen la parte principal de muchas
membranas biolgicas.
3.2.3. Esteroides:
Los esteroides son compuestos que poseen una estructura fenantrnica muy diferente de los
lpidos formados por cidos grasos. Se hallan en tejidos vegetales y animales, levaduras y hongos
y pueden existir libre o combinacin con cidos grasos o carbohidratos. Puesto que los esteroides
esenciales son hidrocarburos de masa molar grande, son solubles solo en los disolventes de
grasas. Difieren de los dems lpidos en cuanto a que no experimentan saponificacin.
El esteroide mejor conocido y ms abundante en el cuerpo humano el colesterol. Se encuentra
sobre todo en el cerebro y el tejido nervioso. Es el principal componente de los clculos biliares,
de las cuales puede separarse como slido cristalino de color blanco. Aproximadamente el 95 %
de las muertes debidas a enfermedades cardiovasculares directamente ligadas a la arteriosclerosis
108
(endurecimiento de las arterias que producen enfermedad cardiaca degenerativa apopleja y

otras enfermedades arteriales). La arterosclerosis (una forma de arteriosclerosis) resulta de la
deposicin de un exceso de colesterol.
3.3.
PRUEBAS CUALITATIVAS DE LPIDOS (15,20)
3.3.1. SOLUBILIDAD:
Las propiedades de solubilidad de los lpidos son una funcin de su estructura tipo alcano. Los
grupos principales de los lpidos tienen caractersticas de solubilidad diferentes y esta propiedad
se usa su extraccin y purificacin a partir de materiales biolgicos.
La mayora de los lpidos son solubles en etanol, pero forman una emulsin de gotas pequeas
cuando se les agrega agua. Esto da a la suspensin una apariencia lechosa caracterstica y
constituyente una prueba muy sensible para grasas.
3.3.2. INSTAURACIN:
Los cidos grasos presentes en las grasas animales estn generalmente saturados, mientras que
aquellos presentes en los aceites vegetales contienen uno o ms enlaces dobles. La hidrogenacin
de estos enlaces convierte los aceites vegetales lquidos en grasas slidas, siendo esto lo se hace
comercialmente para la produccin comercial de margarina.
Los halgenos17 pueden unirse fcilmente a los enlaces dobles. La decoloracin de una solucin de
bromo o yodo por un lpido indica la presencia de los enlaces doble.
3.4.
PRUEBAS CUANTITATIVAS DE LPIDOS (14,15,20)
Un anlisis qumico completo de las grasas encontradas en la naturaleza es un procedimiento

bastante dispendioso (costoso), pero hay un nmero de mediciones tales como el valor de acidez,
el ndice de saponificacin y el ndice de yodo, que dan informacin til acerca de la composicin y
pureza de una grasa determinada.
3.4.1. NDICE DE ACIDEZ:

Por ACIDEZ de un lpido se entiende el contenido de cidos grasos libres de un aceite o una grasa
y se expresa en porcentaje en masa de cido oleico, palmtico o lurico, segn la naturaleza del
producto que se trate
109
Las grasas almacenadas pueden enranciarse debido a la oxidacin de los dobles enlaces para
formar perxido y su hidrlisis por microorganismos con liberacin de cidos grasos. La cantidad
de cidos grasos libres, da por lo tanto, un ndice de la frescura y calidad de la grasa.
Como dice el documento de ICAITI (14) el ndice de acidez es la cantidad de hidrxido de potasio
necesario para neutralizar la acidez y se expresa en miligramos de KOH requeridos
Para neutralizar los cidos grasos libres presentes en un gramo de producto.
En otras palabras, el valor de acidez es el nmero de miligramos de KOH requeridos para
neutralizar los cidos grasos libres presentes en un gramo de grasa.
Es una medida de los cidos grasos libres de un lpido. La reaccin es simplemente la titulacin de
un cido (el graso) y una base fuerte. Para neutralizar los cidos grasos libres de la cantidad de
lpidos analizados se efecta la conversin a un gramo de grasa y se expresa el resultado como IA.
En el documento de ICAITI (14) est indicado que la acidez y el ndice de acidez se calcula
aplicando las siguientes ecuaciones y promediando los resultados obtenidos en las
determinaciones en duplicado. Es decir que para obtener valores confiables es necesario repetir,
al menos una vez, la prueba de IA.
Donde:
V=Volumen de la solucin de hidrxido de potasio empleado en la titulacin, en centmetros
cbicos.
N=Normalidad de la solucin de hidrxido de potasio.
m=Cantidad de Lpido en gramos.
Nota: Tenga cuidado de no confundir la masa m con la masa del extracto
El IA tambin puede calcularse utilizando un procedimiento estequiomtrico. Para ello el
estudiante deber consultar su memoria y algn texto utilizando en la Qumica General 1 y 2.
110
3.4.2. NDICE DE SAPONIFICACIN: (14,15)

La hidrlisis de los triacilgliceroles puede efectuarse por varios procedimientos, los ms comunes
utilizan lcalis o enzimas llamadas lipasas. La hidrlisis alcalina recibe el nombre de
saponificacin, debido a que uno de los productores de la hidrlisis es un jabn, de ordinario, de
sales de sodio o potasio de los cidos grasos.
Esta reaccin de hidrlisis tambin proporciona un mtodo analtico, til para la determinacin de
una constante, el ndice de saponificacin, el cual es caracterstico de los lpidos simples.
El ndice de saponificacin de un lpido se define como el nmero de miligramos de hidrxido de
potasio necesario para saponificar un gramo de grasa o de aceite. Tambin puede definirse como
el nmero de miligramos de KOH que se requiere para neutralizar la masa molar media del lpido.
El ndice de saponificacin da una idea del tipo de cidos grasos presentes en el lpido ya que entre
ms larga sea la cadena hidrocarbonada, menor ser la cantidad de cido liberado por gramo de
lpido. En otras palabras, un ndice de saponificacin pequeo de un cido o aceite indica una
masa molar elevada.
Materia insaponificable de un lpido es el conjunto de sustancias que se encuentran disueltos en
los cuerpos grasos, no saponificables por lcalis, pero solubles en los solventes ordinarios de los
aceites y grasas.
Experimentalmente, una muestra pesada de grasa se saponifica con una Cantidad X de una
solucin alcohlica valorada de hidrxido de potasio. Despus de la saponificacin, el exceso de
lcali (cantidad y) se titula con cido valorado.
Usando la cantidad de mililitros de cido valorado qu se emplearon en la titulacin, se averigua los
ml de KOH que sirvieron para saponificar los lpidos (cantidad Y)
Para su clculo puede serle til la ecuacin siguiente:
Cantidad X = Cantidad Y + Cantidad Z
Utilizando esta ecuacin puede averiguarse la Cantidad de Z, es decir, los ml de KOH que se
emplearon en la saponificacin. Ya con esto puede averiguarse el IS.
3.4.3. PORCENTAJE DE PUREZA (%) (14,15)
Para el caso de las prcticas de laboratorio de Bioqumica de la FAUSAC, el porcentaje de pureza
va a representar los gramos de lpido contenidos en 100 gramos del extracto que se obtuvo. Dicho
111
porcentaje se hace necesario para realizar el clculo del ndice de acidez y el ndice de
saponificacin.
En la actualidad para el anlisis de lpidos se emplean la cromatografa gas-liquido y la
cromatografa en capa fina identificacin cualitativa de lpidos y cidos grasos componentes y la
determinacin cuantitativa del porcentaje de cada componente presente.
1. Elabore una definicin propia de: lpido.
2. Cmo almacenan energa los animales? Como lo hacen las plantas?
3. Enuncie una diferencia entre polisacrido y protenas respecto a los lpidos.
4. Qu es un triacilglicerol? Cul es la diferencia entre grasa y aceite?
5. Cmo es el punto de ebullicin de un lpido respecto al grado de saturacin de sus cidos
grasos?
6. Cules son los productos de la hidrlisis de una cera?
7. Qu es un fosfolpido? Cul se supone que es su funcin fundamental?
8. Cul es la diferencia entre un glicolpido y un esfigolpido?
9. De una definicin de lipoprotena.
10. Cul es la diferencia de los esteroides respecto a los dems lpidos?
11. Cmo se detectara la presencia de lpidos en una solucin de etanol con agua?
12. Cul es la diferencia entre cido graso de grasas animales y cido graso de aceite vegetal?
13. Qu es acidez de un lpido?
14. Qu es el ndice de acidez de un lpido? Segn su material de apoyo de cuntas maneras
puede calcularse el IA de un lpido?
15. Qu es una materia insaponificable?
16. Qu es saponificacin? Qu es ndice de saponificacin?
112
17. Explique la diferencia entre ndice de Acidez e ndice de Saponificacin.

5. MATERIALES
5 tubos de ensayo.
1 gradilla de metal.
1 pinza p/tubo de ensayo.
1 estufa elctrica.
2 probetas de 10 mL.
1 bao de mara metlico.
2 soportes universales.
2 pinza para bureta.
1 balanza mono plato.
2 Erlenmeyers de 100 mL.
1 varilla de Vidrio.
1 probeta de 25 mL.
1 frasco gotero con etanol. 1 frasco gotero c/fenoftaleina.
50 ml de extracto de lpidos.
Agua destilada.
Solucin de KOH [0.5 M]
Solucin de HCl [0.5 M].
Alcohol etlico.
Solucin de KOH [0.1 N]
Un frasco gotero con solucin de I2 en CHCl3 (cloroformo), al 1%p/v.
Un frasco gotero con solucin de Br2 en agua, al 1%p/v.
Dos balanzas semianalticas.
113
6. METODOLOGA
114
115
116
117
Examen Corto con un nivel de dificultad similar al CUESTIONARIO PRE LABORATORIO.
La metodologa de evaluacin tambin incluye un Informe de prcticas. Este informe puede
hacerse en parejas o individualmente, y debe incluir:
Cartula.
Resultados y Anlisis de Resultados.
Aqu ha de hacerse la presentacin que se considere ms conveniente. Pueden utilizar esquemas,
cuadros y/o frases para expresar lo observado durante la prctica. Aqu se incluyen tambin los
resultados de la solucin a los cuadros negros.
NOTA: Procure intercalar los resultados con su respectivo anlisis y explicacin.
8. PARA EL REPORTE DE PRCTICA
Anlisis y explicacin de cada cuadro de resultados, es decir, expresar en palabras aquello
que el estudiante crea tiene relevancia mencionar como parte del informe y que ha influido
en los resultados presentados con anterioridad. (Para el caso de la prctica con el
fundamento terico. Si no hubiese tal concordancia, plantee una justificacin vlida).
Dar solucin a los cuadros que aparezcan en su metodologa y presentarlos tambin,
intercalados con los resultados y anlisis de resultados.
Como una gua de su anlisis se le recomienda utilizar la solucin a los cuadritos que
Resuelva lo siguiente y colquelo al final de su Informe de prctica.
o Investigue qu utilidad tiene calcular el ndice de yodo en lpidos.
o Qu es un aceite esencial y qu relacin tiene con los lpidos?
o Dibuje la estructura de un triacilglicerol, un fosfoglicrido y un esfigonlpido.
o Por qu los asteroides y las vitaminas liposolubles son considerados como lpidos?
Qu es el ndice de saponificacin?
Para qu utilizo el porcentaje de pureza del extracto, para averiguar el IS?
Cmo se define la Acidez de un Lpido?
Cmo se define el ndice o valor de acidez?
Cul es la importancia de utilizar el valor porcentaje de pureza para el clculo acidez?
Justifique su respuesta.
Seale la utilidad de la prueba de yodo.
118
Ha podido identificar algo con la prueba de yodo?

Qu es un halgeno? Qu es un halogenuro? Qu relacin tienen estos trminos con esta
parte de la metodologa?
Si usted es observador notar que la metodologa de la prueba de instauracin est
planteada para utilizar dos halgenos, uno en un solvente apolar (cloroformo) y otro en un
solvente polar (agua). Trate de explicar la razn de este hecho particular de esta parte de la
metodologa.
119
BIBLIOGRAFA
1. ALLAMONG, B.; MERTENS, T. 1990. Energa de los procesos biolgicos; fotosntesis y
respiracin. Trad. Por Ma. Cristina Sangines. Mxico D.F., Editorial Limusa. 236p.
2. BOHINSKI, R. 1991. Bioqumica. Trad. Por Ramn Elizonda Mala. Estados Unidos, AddisonWesley Iboameticana. 730p.
3. CIENCIAS QUMICAS FAUSAC.
Anlisis de carbohidratos en muestras vegetales,
Facultad de Agronoma, USAC, Guatemala. 7p.
4. CIENCIAS QUMICAS FAUSAC. 1990. Estudio cuali-cuantitativo de lpidos en muestras
vegetales. Facultad de Agronoma, USAC, Guatemala. 7p.
5. CIENCIAS QUMICAS FAUSAC. Manual de prcticas de Bioqumica. FAUSAC, Guatemala.
35p.
6. CIENCIAS QUMICAS FAUSAC. Mtodos de investigacin fitoqumica. FAUSAC, Guatemala,
16p.
7. CIENCIAS QUMICAS FAUSAC. Reacciones caractersticas de carbohidratos. Facultad de
Agronoma, USAC, Guatemala. 7p.
8. ESCUELA DE QUMICA BIOLGICA, DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA. Algunas
propiedades qumicas de los carbohidratos. Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia,
USAC, Guatemala. 4p.
9. FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Y FARMACIA. Fotometra y espectrofometra. Escuela
de Qumica biolgica. Departamento de Bioqumica, Manual de prcticas de laboratorio,
26p.
10. FIESER, L.; FIESER, M.. 1948. Qumica orgnica. Trad. Por Francisco Giral. Mxico D.F.,
Editorial Atlante. 112p.
11. Gaxiola, V. 1975. Cromatografa; principios y tcnicas. Mxico D.F. El Manual Moderno. 93p.
12. HARPER, H. 1976. Manual de qumica fisiolgica. Trad. Por Guillermo Anguiano. 5ed.
Mxico D.F., El Manual Moderno. 653p.
120
13. HERBARIO FAUSAC. 1983. Algunas indicaciones para la preservacin de plantas. FAUSAC,
Guatemala, 14p.
14. ICAITI. 1973. Aceites y grasas comestibles, determinacin de la acidez. Guatemala, ICAITI.
3p
15. LENINGER, A,;NELSON,D;COX,M.. 1995. Principios De bioqumica. 2. Ed. Trad. Por Claudi
M. Cuchillo y Josep Vendrelli Roca. Barcelona, Ediciones Omega. 1013p
16. MANCILLA, R..Manual de prcticas de bioqumica. Escuela de Qumica Farmacutica,
Departamento de Anlisis Aplicado, USAC, Guatemala
17. MEDINILLA, B..Manual de laboratorio de fitoqumica. Escuela de Qumica Farmacutica ,
Departamento de Anlisis aplicado, UDAC, Guatemala.
18. SALISBURY, F,;ROSS,C.. 1994. Fisiologa Vegetal. Trad, por Virgilio Gonzlez Velzquez.
Mxico D.F., Grupo Editorial Iberoamrica. 759 p.
19. SMITH, C.; WOOD, E.. 1997. Molculas biolgicas. Trad. Por Hctor Escalona y Garca.
Estados Unidos, Addison Wesley Iberoamericana. 739 p.
20. WHITE, A,; HANDLER, P.; SMITH, E,. 983. Principios de bioqumica. Trad. Por Manuel Lpez
Prez. 2 ed. Espaa, Mac.Graw-Hill. 1582p.
121

Manual de Bioquímica PDF

Hochgeladen von

Dokumentinformationen

Originaltitel

Copyright

Verfügbare Formate

Dieses Dokument teilen

Dokument teilen oder einbetten

Freigabeoptionen

Stufen Sie dieses Dokument als nützlich ein?

Sind diese Inhalte unangemessen?

Copyright:

Verfügbare Formate

Manual de Bioquímica PDF

Hochgeladen von

Copyright:

Verfügbare Formate

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

GUATEMALA ENERO 2010

CUESTIONARIO PRE LABORATORIO PRCTICA 2 .................................................................................. 21

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

5. EVALUACIN DE LA PRCTICA .................................................................................................................... 78

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

REUNIN DE INFORMACIN GENERAL DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

PRACTICA No. 1 SELECCIN DE LA MUESTRA VEGETAL A TRABAJAR EN EL

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

3. MATERIAL DE APOYO LAS BIOMOLCULA

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

El objetivo fundamental de la ciencia 'bioqumica es el de determinar de qu modo interactan los

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

3.6. Las biomolculas son compuestos de Carbono

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

3.9. Las macromolculas y sus subunidades monomricas (15)

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

Fig. 2 Organizacin jerrquica en la estructura celular

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

4. CUESTIONARIO PRE LABORATORIO

2. Cul es el objetivo fundamental de la Ciencia Bioqumica?

4. En razn de qu surgieron las biomolculas a lo largo del proceso de evolucin biolgica?

5. Cules son los 4 elementos ms abundantes en los seres vivos?

6. A su juicio personal y fundamentado en lo que ha ledo, qu es lo que determina las

7. Elabore una definicin propia de Biomolcula, indique qu es una macromolcula. Adems

8. Enumere las 4 macromolculas que se presentan en el material de apoyo a esta prctica.

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

PRCTICA 2. PREPARACIN DE MUESTRAS VEGETALES PARA ANLISIS

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

Es necesario reconocer de antemano al vegetal a recolectar entre grupos similares de plantas, as

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

4. CUESTIONARIO PRE LABORATORIO PRCTICA 2

2. Cul es la importancia de hacer un recopilado botnico y una investigacin bibliogrfica de

4. Qu documento se le recomienda aqu para la colecta y secado de material vegetal?

5. Por qu razn la operacin de secado debe hacerse bajo condiciones controladas?

6. En qu consiste la tcnica de secado artificial de muestras vegetales

7. Explique por qu cree que se hace la molienda del material vegetal.

8. Qu es la testa de una semilla?

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

PRCTICA No. 3 EXTRACCIN Y ESTUDIO CUALITATIVO DE PROTENAS EN

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

generalmente un tejido o clulas microbianas. Las clulas deben romperse liberando la

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

Protaminas: Poli pptidos bsicos, solubles en agua predominan

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

Figura 3: Resultados de prueba de nitrato de plata, as como la reaccin.

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

Figura 4: Resultados de la prueba de (CH3COO)2Pb

[Escr FACULTAD DE AGRONOMA

4. CUESTIONARIO PRE LABORATORIO PRCTICA 3

Elabore una definicin propia de: protena.