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UNIVERSIDAD CATLICA SANTA

MARA
Informe Cientfico

RECONOCIMIENTO Y EVALUACION DE MATERIALES USADOS EN


EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA,
NORMAS BSICAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

RESUMEN

En el presente informe se hace referencia a las normas de laboratorio, adems de


ello al reconocimiento de material, as como el de las distintas reas que hay en el
laboratorio de microbiologa, adems de ello se explica cmo preparar los medios
de cultivo, y que tipo de bacteria se desarrolla mejor dependiendo del medio, y de la
siembra e inoculacin de bateras.

INTRODUCCION

Un laboratorio de Microbiologa es un lugar habilitado para manejar y estudiar


microorganismos. El trabajo debe realizarse de acuerdo con los estndares tcnicos
y de seguridad propios de un laboratorio de Microbiologa.
Es importante recordar que la finalidad es determinar los microorganismos
presentes en la muestra por lo que es preciso extremar las precauciones para evitar
contaminaciones que den lugar a resultados errneos. Todas las muestras deben
ser manejadas con precaucin por su potencial patogenicidad.
El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el
crecimiento de los microorganismos. La composicin precisa depender de la
especie que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varan
considerablemente. Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en
medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que necesitan
determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.

OBJETIVOS

1.
2.
3.
4.

Conocer las normas bsicas de seguridad en el Laboratorio.


Conocer las reas del Laboratorio de Microbiologa .
Identificar los materiales y equipos ms frecuentes del laboratorio
Preparacin de Medios:

5.

Siembra e inoculacin de Bacterias

FUNDAMENTO TEORICO

NORMAS BSICAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO


El trabajo en laboratorio de Microbiologa requiere la observacin de ciertas normas y
precauciones para Utilizar las campanas extractoras adecuadas al material que se est
manipulando.

Usar mandil (guardapolvo) y mantenerlo siempre abrochada.

Es imprescindible el uso de guantes cuando se manipulan sustancias biolgicas.

Lavarse siempre las manos despus de cada proceso , y antes de salir del
laboratorio.

No comprobar el olor o el sabor de ningn proceso.

No PIPETEAR NUNCA con la boca. Utilizar SIEMPRE un dispositivo especial para


pipetear lquidos.

Si el pelo es largo, supone un riesgo en determinadas tcnicas de laboratorio, por lo


que es recomendable recogerlo.

Se debe evitar que las mangas, pulseras, etc. Entren en contacto con los reactivos o
muestras que se est manipulando.

No est permitido FUMAR ni COMER.

Se deben cerrar los grifos y llaves de agua, gas, etc. Y desconectar los aparatos
utilizados durante la prctica.

El material de vidrio, por su naturaleza, se debe manipular con mucha precaucin, Y


NO FORZAR NUNCA, especialmente las pipetas al introducirlas en los dispositivos de
pipeteado, que pueden producir cortes graves.

Otros
MATERIALES DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
-

Materiales de Vidrio

Materiales de Metal
Materiales de Porcelana
Equipos
Reactivos y Medios de cultivo

PREPARACION DE MEDIOS
Un mtodo fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio lquido o en la
superficie de un medio slido de agar. Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes
que van, desde azcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto
de caldo de carne. Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra
formada por muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo slido donde las
clulas que se multiplican no cambian de localizacin; tras muchos ciclos reproductivos,
cada bacteria individual genera por escisin binaria una colonia macroscpica compuesta
por decenas de millones de clulas similares a la original. Si esta colonia individual se
siembra a su vez en un nuevo medio crecer como cultivo puro de un solo tipo de bacteria.
Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfolgicamente que es imposible
diferenciarlas slo con el uso del microscopio; en este caso, para identificar cada tipo de
bacteria, se estudian sus caractersticas bioqumicas sembrndolas en medios de cultivo
especiales. As, algunos medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de la
mayora de las especies bacterianas, pero no la de un tipo que deseamos averiguar si est
presente. Otras veces el medio de cultivo contiene determinados azcares especiales que
slo pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se aaden indicadores de pH que
cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y se generan
catabolitos cidos. Si las bacterias son capaces de producir fermentacin, generan gases
que pueden ser apreciados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado. Con otros
medios de cultivo se identifica si las bacterias producen determinadas enzimas que digieren
los nutrientes: as, algunas bacterias con enzimas hemolticas (capaces de romper los
glbulos rojos) producen hemlisis y cambios apreciables macroscpicamente en las placas
de agar-sangre. Los diferentes medios y tcnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio
de microbiologa, pues sirven para identificar las bacterias causantes de las enfermedades
infecciosas y los antibiticos a los que son sensibles esas bacterias.
SIEMBRAS Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS
Como un resultado del tamao pequeo de los microorganismos, la cantidad de
informacin acerca de sus propiedades y caractersticas que puede ser obtenida de cada
individuo es limitada. Por lo tanto se estudia poblaciones conteniendo millones billones
de individuos.
Dichas poblaciones son obtenidas por crecimiento de microorganismos bajo condiciones
bien definidas llamadas Cultivos.

Dado que los microorganismos no requieren de mucho espacio para desarrollar, por lo
tanto se le puede crear un medio ambiente artificial en un tubo, frasco placa Petri, siendo
stos tres tipos ms comunes para dichos cultivos.

Teniendo en cuenta que los microorganismos son ubicuos es decir que se encuentran en
cualquier ambiente, pueden aislarse igualmente de diversos substratos, la decisin para
elegir un substrato de muestreo depende del grupo de Microorganismos de inters.
Las tcnicas de aislamiento, permiten la obtencin de microorganismos a partir de muestras
complejas (suelo, agua, aire, alimentos, etc.) en las que hay una gran diversidad
microbiana, as como para comprobar la pureza de los cultivos obtenidos.
Los cultivos puros estn formados por un solo tipo de microorganismo; y son indispensables
para conocer las caractersticas morfolgicas, propiedades de tincin, actividad bioqumica,
patogenicidad, sensibilidad a antibiticos e identificacin de las especies microbianas.
Algunas veces los microorganismos se han adaptado a condiciones muy especficas y
podrn requerir procedimientos de trabajo para aislamiento y siembra especiales como es el
caso de microorganismos anaerobios, auttrofos, etc.
El aislamiento de cultivos microbianos puede realizarse por mtodos de dilucin, en medios
slidos por estra en placa o en medios lquidos. En el primer caso se considera que cada
clula bacteriana que se separa dar origen a una poblacin que formar una colonia
caracterstica, visible a simple vista.
La limitacin principal de estas tcnicas de dilucin, es que no es prctica para el
aislamiento a partir de mezclas donde el microorganismo de inters se encuentra en
pequeas cantidades, donde solamente se obtendrn las bacterias dominantes. Por lo que
para favorecer el aislamiento de cultivos de baja densidad, se aplican mtodos de cultivo en
medios que contienen nutrientes especiales, antibiticos, altas concentraciones de sales y/o
condiciones de pH, luz o temperatura para favorecer el crecimiento del microorganismo de
inters (medios selectivos).
Un medio de cultivo se define como un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y
otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos.
La diversidad metablica de los microorganismos es enorme, al igual que la variedad de
medios de cultivo. Los cuales mayormente se comercializan en forma de liofilizados que es
preciso rehidratar, siguiendo las instrucciones del fabricante. Las sustancias termolbiles se
esterilizan por filtracin y se aaden al resto de los componentes previamente esterilizados
en el autoclave.
Los constituyentes habituales de los medios de cultivo son: Agar, Extractos, Azcares,
peptonas, etc
Los cultivos deben de ser hechos en forma completamente estril.
SIEMBRA EN PLACA (TCNICA DE ESTRA CRUZADA):
En la parte posterior y exterior de la caja, dividirla en cuatro cuadrantes. Tomar una muestra
con el asa previamente flameada y fra, inocular la muestra haciendo 4-5 estras simples
muy juntas de lado a lado sobre el primer cuadrante de la placa.

Flamear el asa de inoculacin y hacer girar la caja de Petri un cuarto de vuelta. Abrir
nuevamente la caja y enfriar el asa de siembra tocando la superficie del medio lejos de la
zona de estras recin hechas.
Rozar con el asa una vez la superficie del conjunto original de estras y hacer un segundo
grupo de estras en el segundo cuadrante como en el caso anterior. Repetir el
procedimiento anterior en el tercer cuadrante y al efectuar la siembra en el ltimo cuadrante,
no se deber flamear el asa de siembra y se har una estra ms abierta (simple).
SIEMBRA EN AGAR INCLINADO:
Se introduce el asa de siembra en el tubo con cultivo crecido y se toma un inculo que se
extiende sobre el agar inclinado deslizando el asa suavemente por su superficie en zig-zag.
En el caso del medio TSI, la siembra se deber realizar tanto en superficie (aerobiosis)
como en la profundidad del agar (anaerobiosis).
Una vez sembrados, colocar los cultivos a incubar a 37 C de 24 48h o hasta que se
observe crecimiento bacteriano. Si la evaluacin no se hace despus del periodo
mencionado, conservar las placas petri y los tubos con cultivo a 4C.
Otros tipos de siembra:
1.
Siembra por inmersin: se coloca el inculo en una placa Petri y sobre el mismo se
vierte el medio de cultivo previamente fundido. Se utiliza para microorganismos aerobios.
2.
Siembra en doble capa: similar por inmersin. Una vez solidificado el medio se
vierte una cantidad extra de medio necesaria para cubrir la capa . Este mtodo se utiliza
para microorganismos anaerobios facultativos y microaeroflicos.
3.
Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo
autoclavado se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inculo, se extiende el
inculo hasta su absorcin total por el medio de cultivo. Este tipo de siembra se recomienda
para microorganismos aerobios estrictos.

MATERIALES Y METODOS

MATERIALES:
Materiales base para preparar los siguientes medios de cultivo:

Agar Baird Parker (A.BP)

Agar Eosina Azl de metileno (A.EMB)

Agar Tiosufato-Citrato-Bilis-Sacarosa (TCBS) Agar Verde Brillante (VB)

Agar Saboraud Agar Mosto.

Agar Kenner Fecal A. KF)

Caldo Cerebro-Corazn (BHI)

Otros Materiales:

Placas Petri de vidrio

Pipetas de 1 o 2 mL

Pipetas de 10 mL

Matraces Erlenmeyer de 250 mL

Probetas

Mecheros

Horno de calor seco

Incubadora a 37C

Papel kraft para envolver

Equipos:

Parrilla de calentamiento

Autoclave

Balanzas

Estufa a 37

Esterilizadores

Medios de Cultivo:

Placas Petri con Agar Baird Parker (A.BP)

Placas con agar Eosina Azl de metileno (A.EMB)

Placas con agar Tiosufato-Citrato-Bilis-Sacarosa (TCBS) Agar Verde Brillante (VB)

Placas con Agar Saboraud Agar Mosto.

Agar Kenner Fecal A. KF)

Tubos con Caldo Cerebro-Corazn (BHI)

Otros medios de cultivo con Bacterias

Otroa materiales:

Mecheros

Asa de inoculacin

Incubadora

Muestras

Autoclave

METODOS
A. LAVADO Y ESTERILIZACIN DEL MATERIAL DE TRABAJO

Lavar las placas de Petri y pipetas con escobilln y detergente. Enjuagar con
abundante agua corriente.

Escurrir el exceso de agua y enjuagar el material con agua destilada, y ms en las


paredes internas.

Dejar secar el material en una estufa.

Una vez seco el material, se proceder a envolver las placas de Petri y pipetas con
papel kraft.

Las placas de Petri y pipetas envueltas se colocaran en horno a 150 C durante 2


horas. Despus de sacarlas, dejarlas enfriar y abrir los paquetes nicamente en rea
asptica

B. PREPARACIN Y ESTERILIZACIN DE MEDIOS DE CULTIVO

Preparacin de un medio slido en placa.


1

Pesar la cantidad de medio (si el preparado contiene agar debemos aadirlo


a una concentracin de 15 g/l.) y rehidratarlo con agua destilada en un baln
o matraz y tapar con un torunda de algodn.

Autoclavar el baln o matraz a 121 C y 15 Ibs durante 15 min. Apagar la


autoclave y dejar que baje la presin al valor de "0".

Sacar del autoclave, enroscar del todo el tapn e introducir el baln en un


bao a 40C al menos durante 30 minutos.

Distribuir el medio en las placas de Petri que estn estriles dentro de una
campana de flujo laminar o en las proximidades del mechero, flameando bien
la boca de la botella para evitar las contaminaciones.

Dejar que el medio solidifique.

Preparacin de medio slido en tubo.


1

Pesar el medio que contenga agar y rehidratar con agua destilada en un


matraz.

Fundir el medio en un horno microondas o en una placa caliente. El medio


debe hervir hasta que se vuelva transparente.

Distribuir rpidamente el medio en los tubos antes de que comience a


solidificar. Para ello se emplear una pipeta y los tubos no se llenarn ms de
un tercio de su volumen.

Autoclavar.

Sacar del autoclave e inclinar los tubos sobre una superficie angulada y dejar
que el medio solidifique.

Todos los medios se guardan en nevera a 4C.

Siembra
Seleccin de colonias y siembra en tubo
1. Tcnica aplicable en caso de tener crecimiento de colonias en una placa petri.
2. Examinar la placa estriada y escoger una colonia aislada marcando su posicin
con un circulo por el lado inferior de la placa petri.
3. Flamear la aguja de inocular.
4.Levantar la parte superior de la placa petri para sacar una porcin del cultivo
bacteriano seleccionado.

5.Despus de haber obtenido el inoculo colocar la tapa de la caja y tomar un tubo


con medio de cultivo lquido.
6. Quitar el tapn, flamear el borde de tubo y sumergir el inoculo dentro del caldo.
Sacudir la aguja.
7. Flamear el borde del tubo y volver a colocar el tapn correspondiente.
8. Flamear la aguja de inocular.
9. Identificar el tubo con la informacin necesaria.

CONCLUSIONES

*Se logr reconocer los materiales de laboratorio.


*Se logr reconocer las reas del laboratorio.
*Se identificaron los medios de cultivo y su clasificacin.
*Se aprendieron 3 tcnicas de siembra en placas:
-Por estras
-Por agotamiento
-Medio liquido
*Se aprendi que bacteria corresponde a que medio:
-A. Bard Parker-------------------------Staphylococus
-A. EMB------------------------------------E. Coli
-A. Mosto---------------------------------- Candida ( Levadura)
-A. Verde Brillante ---------------------- E. Coli
-A. KF -------------------------------------- Streptococus ( MITY)
-Caldo BHI -------------------------------- Bacilus
*Quedo pendiente ver el desarrollo de los cultivos de bacterias.

BIBLIOGRAFA
Gua de laboratorio Microbiologa Ambiental - Adilmi Milagro Teran Dianderas, Maria Rosario
Valderrama Valencia

NFORMATOGRAFIA
https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-microbiologia/indice/preparacion-demedios-de-cultivo
http://www.ugr.es/~cjl/medios%20de%20cultivo.pdf
http://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/practicoI.pdf