CULTIVO Y TINCION DE BACTERIAS EN AGAR

PAPADEXTROZA
(JIMENEZ A. E. E., CORZO F., CASTRO C. R. A., CASTELLANO. L. M. R.)
Universidad politcnica del centro, r/a tumbulushal Km 25+500 centro Tabasco

Resumen
En este artculo encontraras informacin para poder hacer un medio de cultivo de agarpapa-destroza, cultivar bacterias en esto y finamente teir y observar las bacterias
encontradas estudiamos las bacterias que se encuentran en las manos al tenerlas sucias,
lavadas, y muy bien lavadas, por lo que realizamos un medio de cultivo agar-papa-dextrosa
en el cual se cultiv colocando las manos y luego se tio las bacterias resultantes para
posteriormente ser observadas en el microscopio, cabe mencionar que tambin se
encontraron hongos que presentaban diversos colores pero lo importante aqu era analizar
las bacterias, el objetivo general de esta prctica fue realizar un medio de cultivo slido y
saber el proceso de tincin de bacterias.

Introduccin.
El caldo de patata y dextrosa son medios
comunes de cultivo microbiolgico que se
preparan a partir de infusin de patata y
dextrosa. El agar de patata y dextrosa es
el medio ms utilizado para el
crecimiento de hongos y levaduras que
atacan a las plantas vivas o materia
vegetal muerta en descomposicin.
(.probiotek, 2013)
Cultivar es una tarea fcil despus de
tener el medio de cultivo listo para esto
solo
necesitas
una
fuente
de
microorganismos y como bien sabemos
los microorganismos se encuentran en
todas partes pues es sencillo encontrar
bacterias y hongos en cualquier cosa, en
esta prctica nos interesamos por observar
que bacterias se encuentran en nuestras
manos por lo que nuestras manos son la
fuente de donde obtendremos as bacterias
La tincin es un mtodo sencillo para
incrementar el contraste entre la clula y
su entorno y por lo tanto contribuye a
mejorar la imagen observada. Las

tcnicas de tincin con diversos

colorantes facilitan la observacin al
aumentar notablemente el contraste. En
Microbiologa todas las tinciones se
realizan a partir de suspensiones de
microorganismos extendidas en un
portaobjetos (frotis), secadas y fijadas. La
fijacin, procedimiento que permite
preservar estructuras celulares, La pared
celular de las bacterias gram positivas
posee una gruesa capa de peptidoglicano,
adems de dos clases de cidos teicoicos:
anclado en la cara interna de la pared
celular y unido a la membrana plasmtica,
se encuentra el cido lipoteicoico, y ms
en la superficie, el cido teicoico que est
anclado solamente en el peptidoglicano
(tambin conocido como murena).

Metodologa.
Se midi en una probeta de 100ml, 200ml
de agua destilada lo cual se verti en un
vaso precipitado de 500ml; luego se pes
en el vidrio de reloj 1.5g de agar, 2.5g de
dextrosa y 50g de papa lo cual se coloc
en el vaso precipitado donde se puso en

soporto universal para calentarlo con un

mechero de bunsen hasta que la papa
estuviera blanda; luego con gasas se col
nuestra agua y se exprimi la papa hasta
soltar todo el jugo, en un matraz
Erlenmeyer de 250 ml y se agreg 1.5g de
agar y 2.5g de dextrosa lo cual se agito
calentndose en un mechero; as hasta que
nuestra mezcla quedo totalmente liquida
sin ningn grumo, de ah se fabric un
tapn con gasas para tapar nuestra mezcla
y se cubri solo la parte de arriba con
aluminio ponindole cinta solo para
sujetar sin apretar y se llev al autoclave
para esterilizar. Una vez esterilizado se
sac de la autoclave dejndolo reposar
10min para que se enfriara un poco.
En una mesa se encendieron tres
mecheros de bunsen (dos a los lados y
uno enfrente), con alcohol se limpi la
mesa, se us guantes y cubre bocas para
fraccionar lo cual se tom el matraz y se
le retiro el tapn dentro del rea donde
estaban los mecheros, luego se tom una
caja Petri y con una sola mano se abri
sin retirar la tapa pasando la boca del
matraz en unos de los mecheros para
esterilizar, se verti sin llenar en la caja
Petri y se cubri con su misma tapa, se
deslizo hacia un costado y se repito el
mismo procedimiento hasta acabar
nuestra
mezcla.
Se
esper
aproximadamente unos 20min para que se
solidificara y se apilo para fijarlo con
cinta, se volteo nuestro medio de cultivo
para que el condensado no cayera en
nuestro medio y no se contaminara, ya
por ltimo se guard en el refrigerador
para su conservacin.
Se esper 24 horas para observar si no
hubo alguna contaminacin en nuestro
medio, al no a ver contaminacin se

procedi a destapar cuidadosamente

nuestro medio y poner nuestros dedos
sucios, de ah se repiti el procedimiento
pero ahora con las manos lavadas, ya por
ltimo se volvi hacer el procedimiento
pero ya con nuestras manos bien lavados
con las indicaciones que nos dio la
maestra; despus se sell nuestros medios
con parafil y se guard en la estufa de
cultivos dejndolos por 24 horas para
observar
el
crecimiento
de
microorganismos que muestran en los
resultados.
Por ultimo al haber esperado unos das
para observar el crecimiento de
microorganismos, se procedi a teir las
bacterias que se encontraban en el agar,
para ello fue necesario esterilizar el rea
de trabajo con alcohol y luego se
encendieron 3 mecheros de bunsen
alrededor de donde se trabaj,
posteriormente se coloc 1 gota de agua
destilada en un portaobjetos y con una
sola mano se abri el agar y en el mismo
instante se coloc el asa bacteriana en la
flama de uno de los mecheros hasta llegar
a rojo vivo y se dej enfriar por unos
segundos a un lado de este, una vez que
se retira e rojo vivo rpidamente se
destapo el agar y se tom la muestra de
bacterias donde se encontraba la colonia
y seguidamente se coloc sobre la gota
del porta objetos, posteriormente se
coloc de 1 a 3 gotas de ____ y se
`procedi a enjuagar con agua destilada
para quitar los excesos despus de un
minuto, una vez quitado los excesos se
fij a muestra
apoyndonos de un
mechero luego se coloc de una a tres
gotas de lugol y se esper 1 minuto y
luego se agreg alcohol cetona y se
esper 10 segundos y se lav con agua
destilada y finalmente se realiz la tincin

de contraste agregando safranina, se

esper un minuto y se lav levemente con
agua destilada
Y se llev al microscopio donde pudo ser
observada la bacteria en 100x y con
ayuda de aceite de inmersin.

Para poner de manifiesto las clulas gram

negativas se utiliza una coloracin de
contraste. Habitualmente es un colorante
de color rojo, como la safranina. Despus

Resultados y discusin.

El medio de cultivo se encontraba

en buen estado y era til para
continuar con la prctica. Ver
anexo 1
Despus de cultivar los agares con
bacterias de las manos, todas
presentaron
desarrollo
y
crecimiento de microorganismos.
Ver anexo 2
El proceso de tincin y la
observacin en el microscopio
proporciono
informacin
suficiente para concluir con que la
bacteria con mayor presencia en
las manos son bacilos
Los bacilos poseen forma
alargada. En general suelen
agruparse en forma de cadena
(estreptobacilos) o en empalizada.
Ver anexo 3 y 4

El cristal violeta (colorante catinico)

penetra en todas las clulas bacterianas
(tanto gram positivas como gram
negativas) a travs de la pared bacteriana.
El lugol es un compuesto formado por I2
(yodo) haciendo que el cristal violeta se
fije con mayor intensidad a la pared de la
clula bacteriana.
La mezcla de alcohol-acetona que se
agrega,
sirve
para
realizar
la
decoloracin, ya que en la misma es
soluble el complejo I2/cristal violeta. Los
organismos gram positivos no se
decoloran, mientras que los gram
negativos s lo hacen.

de la coloracin de contraste las clulas

gram negativas son rojas, mientras que las

Anexo 1: medio de cultivo papadextroza

en perfecto estado, listo para ser
cultivado

gram positivas permanecen violetas.

Anexos
Anexo 2 podemos observar el crecimiento de
los microorganismos en los medios de cultivo
con presencia de colonias de bacteria y
hongos

Anexo 3 finamente podemos observar y concluir el

tipo de bacteria que se encuentra. Siendo
caramente bacilos (estreptobacilos y empalizadas)

Bibliografa

1.-Gram, C. (1884). The

differential staining of Schizomycetes in
tissue sections and in dried preparations.
Fortschritte der Medizin, 2, 185-9.

Disponible
en http://www.asmusa.org/ccLibraryFiles/
FILENAME/0000000235/1884p215.pdf .
2.-Aulton Michael E.
(2004): Ciencia y diseo de formas
farmacuticas. Espaa: Elsevier, segunda
edicin, 2004.

Wilkins, dcima edicin, 2004.ISBN 013-066271-2.

5.-Sgaard, M.; Nrgaard, M.;
Schnheyder,
H.
(2007):
First
notification of positive blood cultures:
high accuracy of the Gram stain report,
artculo en la revista Journal of Clinical
Microbiology, 45: pg. 1113; 2007.

3.-Bergey, David H.; Holt, John

G.; Krieg, Noel R.; Sneath, Peter H. A.
(1994): Bergey's manual of determinative
bacteriology. Lippincott Williams &
Wilkins, novena edicin, 1994. ISBN 0683-00603-7.
4.-Madigan, M. T; Martinko J.,
Parker J. (2004): Brock biology of
microorganisms. Lippincott Williams &

Anexo 4en esta imagen podemos observar

cmo queda terminado el proceso de tincin
de las bacterias en el portaobjetos