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MICROBIOLOGA
SESIN 1
PRACTICA 1.
NORMAS GENERALES DE BIOSEGURIDAD
OBJETIVO:
PROCEDIMIENTO:
A continuacin encuentra las normas de bioseguridad bsicas de cualquier
laboratorio y los cuidados que se deben tener al lavar material del vidrio. Por favor
realice una buena lectura pero principalmente ponga en prctica todas las
recomendaciones.
Usar cabello recogido, calzado cerrado y bajo, no usar falda, joyas, manillas,
reloj o elementos que puedan entorpecer la manipulacin de los materiales o
equipos.
Bajo ninguna circunstancia se permitir comer, beber o fumar en el
laboratorio.
Bajo ninguna circunstancia, se debe tocar, oler o probar las sustancias
qumicas o biolgicas utilizadas en el desarrollo de las prcticas.
No trabajar nunca solo en el laboratorio.
No pipetear sustancias con la boca.
Cuando en el desarrollo de las prcticas se utilice cido y agua en diluciones,
agregue el cido sobre el agua.
No devolver reactivos a los frascos, as no hayan sido utilizados.
Siga fielmente todas las recomendaciones dadas por el docente responsable
del laboratorio.
Al calentar los tubos de ensayo en el mechero dirija la boca donde nadie
corra peligro de quemarse.
Los residuos y muestras de procedimientos de microbiologa que van a ser
incinerados fuera del laboratorio deber ser sometidos a desactivacin en
autoclave.
Como norma general no se podr verter ninguna sustancia peligrosa para el
medio ambiente por el desage.
Al culminar el trabajo, dejar limpio y ordenado el mesn, devolver los
elementos y materiales perfectamente limpios, asegrese de dejar cerrado el
gas, agua y lavarse las manos.
Para la eliminacin de los residuos se deben utilizar los recipientes
destinados para este fin siguiendo las indicaciones del docente responsable
del laboratorio.
Cualquier accidente por pequeo que sea debe comunicarse al docente
responsable del laboratorio.
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA
de:
PRACTICA 2.
PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO
OBJETIVO:
MATERIALES:
ELEMENTO
Vasos de precipitado
Mechero de alcohol
Matraz Erlenmeyer
Gradilla
IMAGEN
DESCRIPCIN
Son utensilios que permiten
calentar
sustancias
hasta
obtener precipitados.
Un
encendedor,
tambin
llamado mechero o yesquero,
es un dispositivo pirotcnico
porttil usado para generar una
llama.
Tubos de ensayo
Agitador
Caja de
Petri
Aza de
Siemba
El horno de
laboratorio
Es un recipiente de cristal o de
plstico , que consta de una
base circular, y las paredes son
de
una
altura
baja
aproximadamente de (1 cm), se
utiliza principalmente para el
cultivo de microorganismos.
Es
un
instrumento
de
laboratorio tipo pinza que
consta de una base que puede
estar hecha de platino, acero,
aluminio y un filamento que
puede
ser
de
nicromo,
tungsteno o platino que termina
o en un arito de 5 mm o en
punta.
El horno de laboratorio es un
tipo de horno comnmente
usado
para
deshidratar
reactivos de laboratorio o secar
instrumentos.
PROCEDIMIENTO:
Revisar las etiquetas de los
,,,,,,,
recipientes
de
diferentes
medios de cultivo, anote el
nombre, la composicin y
forma de preparacin.
1. Segn su origen:
a) NATURALES: Son los preparados a partir de sustancias naturales de
origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya
composicin qumica no se conoce exactamente.
b) SINTTICOS: Son los medios que contienen una composicin qumica
definida cualitativamente y cuantitativamente. Se utilizan para obtener
resultados reproducibles.
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA
Cultivo
de
los
microorganismos.
Recuperado
de:
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/08_
Tema_5_Cultivo.pdf
Prescott, L.; Harley, J.; Klein D. 1999. Microbi ologa. Cuarta edicin.
McGraw-Hill Interamenericana.
INFORME LABORATORIO DE
MICROBIOLOGA
SESIN 2
PRACTICA 3.
MICROORGANISMOS DEL AMBIENTE
OBJETIVOS:
Explicar cmo se puede demostrar la presencia de microorganismos en
diferentes sitios.
Describir las caractersticas macroscpicas de las colonias bacterianas.
MATERIALES:
ELEMENTO
Vasos de precipitado
Mechero de alcohol
Matraz Erlenmeyer
Gradilla
IMAGEN
DESCRIPCIN
Son utensilios que permiten
calentar
sustancias
hasta
obtener precipitados.
Un
encendedor,
tambin
llamado mechero o yesquero,
es un dispositivo pirotcnico
porttil usado para generar una
llama.
Tubos de ensayo
Agitador
Caja de
Petri
Aza de
Siemba
El horno de
laboratorio
Es un recipiente de cristal o de
plstico , que consta de una
base circular, y las paredes son
de
una
altura
baja
aproximadamente de (1 cm), se
utiliza principalmente para el
cultivo de microorganismos.
Es
un
instrumento
de
laboratorio tipo pinza que
consta de una base que puede
estar hecha de platino, acero,
aluminio y un filamento que
puede
ser
de
nicromo,
tungsteno o platino que termina
o en un arito de 5 mm o en
punta.
El horno de laboratorio es un
tipo de horno comnmente
usado
para
deshidratar
reactivos de laboratorio o secar
instrumentos.
PROCEDIMIENTO:
TABLA DE RESULTADOS:
SITIO DE TOMA DE
LAS MUESTRAS
CANTIDAD DE
CRECIMIENTO
CARACTERSTICAS
DE LAS COLONIAS
Piel
.
Sedimentacin en la
base color marrn
oscuro
Expandido
Herida
Cantidad de colonias de
microorganismos:
Borde: redondeado
Forma: puntiforme
Elevacin: plano
convexa
381= blancas
192= Amarillas
Datos tomados
cuenta colonias
del
Computador
Borde: espiculado
Forma: rizoide
Elevacin: cncavo
Estornudo
Cantidad de colonias de
microorganismos:
Borde: redondeado
Forma: puntiforme
Elevacin: convexa
62= blancas
97= Amarillas
Datos tomados
cuenta colonias
del
Frotes de piel
Frotes en computador
Frotes en una herida. Presente en el dedo ndice de un estudiante, en
los siguientes agares.
Agares utilizados:
AGAR NUTRITIVO:
Frmula (en gramos por litro)
Pluripeptona
5.0
Extracto de carne
3.0
Cloruro de sodio
8.0
Agar
15.0
Instrucciones
Suspender 31 g de polvo por litro
de agua destilada. Mezclar y
dejar reposar 5 minutos. Calentar
suavemente agitando y hervir 1 o
2 minutos hasta su disolucin.
Distribuir y esterilizar a 121C
durante 15 minutos.
Fuente: http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/nutritivoagar.htm
AGAR P.D.A:
Infusin de papa
200.0
Dextrosa
20.0
Agar bacteriolgico 15.0
PH: 5.6
Fuente:http://www.electronicsystems.com.mx/pdf/AGAR%20DEXTROSA%20
Y%20PAPA.pdf
ESTRACTO DE MALTA:
Extracto de Malta 10 g
Agar-Agar 15 g
Procedimiento:
Se pesan los ingredientes y se mezclan en el matraz con 1000 ml de agua
destilada. La suspension se calienta y agita hasta que queden totalmente
disueltos los ingredientes.
Fuente:https://lisergia.org/tutoriales/preparacion-de-medios-de-cultivossolidos-agares.34/
Son slidos en los que la selectividad se consigue alterando las condiciones fsicas
del medio o aadiendo o suprimiendo componentes qumicos especficos con el fin
de inhibir el crecimiento de especies qumicas cuyo crecimiento no interesa. Este
tipo de medio slo permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e
inhibiendo el de otros. Se utiliza para seleccionar y aislar microorganismos a partir
de poblaciones mixtas.
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA
AGAR NUTRITIVO:
Fuente: http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/nutritivoagar.htm
AGAR P.D.A:
Fuente:http://www.electronicsystems.com.mx/pdf/AGAR%20DEXTROSA%20
Y%20PAPA.pdf
ESTRACTO DE MALTA:
Fuente:https://lisergia.org/tutoriales/preparacion-de-medios-de-cultivossolidos-agares.34/
PRCTICA 4.
SIEMBRA DE MICROORGANISMOS
Sembrar es colocar una muestra de inculo, en un medio de cultivo para obtener el
crecimiento de los microorganismos. Para ello se extiende la muestra sobre caja de
Petri, que contiene un medio compuesto por las sustancias que necesitan los
microorganismos para crecer. A veces se aaden otras clases de sustancias; por
ejemplo, para impedir el crecimiento de otras bacterias que podran contaminar el
cultivo. La siembra se puede hacer en otros tipos de medios de cultivo, como tubos
de vidrio con gel, frascos con lquidos nutritivos para los microorganismos.
OBJETIVOS:
Determinar las condiciones necesarias para realizar la siembra de
microorganismos.
Reconocer los distintos sistemas de siembra y su utilidad.
MATERIALES:
ELEMENTO
Vasos de precipitado
Mechero de alcohol
Matraz Erlenmeyer
Gradilla
IMAGEN
DESCRIPCIN
Son utensilios que permiten
calentar
sustancias
hasta
obtener precipitados.
Un
encendedor,
tambin
llamado mechero o yesquero,
es un dispositivo pirotcnico
porttil usado para generar una
llama.
Tubos de ensayo
Agitador
Caja de
Petri
Aza de
Siemba
El horno de
laboratorio
Es un recipiente de cristal o de
plstico , que consta de una
base circular, y las paredes son
de
una
altura
baja
aproximadamente de (1 cm), se
utiliza principalmente para el
cultivo de microorganismos.
Es
un
instrumento
de
laboratorio tipo pinza que
consta de una base que puede
estar hecha de platino, acero,
aluminio y un filamento que
puede
ser
de
nicromo,
tungsteno o platino que termina
o en un arito de 5 mm o en
punta.
El horno de laboratorio es un
tipo de horno comnmente
usado
para
deshidratar
reactivos de laboratorio o secar
instrumentos.
PROCEDIMIENTO:
Esterilizamos el asa en el
mechero
despus
de
usarla.
Marcarmos correctamente
los tubos con el nmero
del grupo, sistema de
siembra utilizado y la
fecha.
Realizamos movimientos
de rotacin con el asa para
emulsionar con el caldo las
paredes del tubo. Retire el
asa, flamee la boca del
tubo y tape.
Se procede en la misma
forma que en la siembra
anterior pero con el asa de
argolla. Si la siembra es en
tubo se hace la puncin y
estra
Siembra en profundidad
Sistemas de Siembra:
Antes de iniciar la siembra se deben cumplir determinadas condiciones:
Esterilizacin de los instrumentos de trabajo y de los medios de cultivo. Los
medios de cultivo se esterilizan con calor hmedo en la autoclave y los
materiales de vidrio se esterilizan con calor seco en el horno Pasteur. En el
caso de objetos metlicos, como el asa de siembra, que se esterilizan en el
momento de su utilizacin, se mantienen en la llama hasta que se pongan al
rojo, teniendo la precaucin de enfriarlos antes de su uso.
Que el inculo no se contamine, modifique o destruya para lo cual se utiliza
calor directo, flameando las bocas de los tubos de ensayo, matraces, la
pipeta y dems elementos antes y despus de su utilizacin.
Marque correctamente los tubos con el nmero del grupo, sistema de siembra
utilizado y la fecha. Para crear un ambiente de esterilidad encienda el mechero y
trabaje siempre al lado de el. Esterilice un asa recta a la llama de un mechero y
djela enfriar
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA
Siembra
y
cultivo
de
microorganismos:
Rescatado
de:
http://meplunesr.blogspot.com/2011/05/universidad-nacional-experimentalsimon.html
Medios
de
cultivo,
mtodos
de
siembra.
Rescatado
http://www.slideshare.net/tmfvidal/medios-de-cultivo-mtodos-de-siembra
de:
INFORME LABORATORIO DE
MICROBIOLOGA
SESIN 3
PRACTICA 5.
TCNICAS DE TINCIN
La observacin microscpica de las bacterias se facilita cuando han sido
coloreadas. Se acostumbra fijar las bacterias en la lmina portaobjetos para poder
teirlas con facilidad. La fijacin puede hacerse con solventes o con calor. En
cualquier caso se trata e deshidratar la clula y coagularla con protenas.
Las coloraciones pueden ser simples cuando se utiliza un solo colorante o
compuestas cuando se utilizan 2 ms colorantes. Tambin se puede hacer una
coloracin negativa en la cual se tie el fondo, adems de la bacteria, para poder
observar la cpsula.
OBJETIVOS
Preparar frotis de bacterias para observaciones microscpicas
Observar las bacterias teidas al microscopio y clasificarlas por su forma y su
reaccin a la coloracin de Gram.
MATERIALES
ELEMENTO
Laminilla
Mechero de alcohol
IMAGEN
DESCRIPCIN
Son
lminas
de
vidrio
rectangulares, donde se coloca
la muestra para poder verla al
microscopio,
existen
portaobjetos con cavidades
semiesfricas que pueden ser
de
distinto
dimetro
y
profundidad, se utilizan para
tcnicas de laboratorio en las
que se hacen observaciones en
vivo.
Un
encendedor,
tambin
llamado mechero o yesquero,
es un dispositivo pirotcnico
porttil usado para generar una
llama.
Gradilla
Cuenta colonias
Microscopio
Aza de
Siemba
El
microscopio
es
un
instrumento de laboratorio el
cual nos permite ver objetos
que el ojo humano no puede
distinguir,
por
ser
estos
extremadamente pequeos.
Es
un
instrumento
de
laboratorio tipo pinza que
consta de una base que puede
estar hecha de platino, acero,
aluminio y un filamento que
puede
ser
de
nicromo,
tungsteno o platino que termina
o en un arito de 5 mm o en
punta.
PROCEDIMIENTO:
RESULTADOS:
MATERIAL
Cristal violeta
Lugol
Alcohol/acetona
safranina
Azul de metileno
IMAGEN
DESCRIPCION
Tincin de Gram:
Gram positiva
La tincin simple se
utiliza para destacar el
microorganismo
completo para que se
vean las formas y las
estructuras
celulares
bsicas.
Luego de estos pasos que fueron descritos con anterioridad se llev a cabo el paso
nmero tres que consista en la tincin de Gram; los pasos que fueron realizados
para lograr identificar la tincin fueron los siguientes:
MATERIAL
Cristal
violeta
Lugol
Alcohol/acet
ona
IMAGEN
DESCRIPCION
La mezcla de alcohol-acetona
que se agrega, sirve para
realizar la decoloracin, ya que
en la misma es soluble el
complejo I2/cristal violeta. Los
organismos Gram positivos no
se decoloran, mientras que los
Gram negativos s lo hacen.
Safranina
Es un colorante biolgico, de
contraste que se utiliza en la
Tincin
de
Gram
para
proporcionar un color violeta
ms intenso a las bacterias
Gram+ y tie de rosa a las
bacterias
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA
Tcnicas
de
tincin.
Rescatado
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm
de:
Tipos
de
tinciones.
Rescatado
de:
http://acuanatura.galeon.com/cursosonline/tecnicasdetincion/tecnicasdetincio
n.pdf
Tincin y observacin de microorganismos - U.T.N. rescatado de:
http://www.google.com.co/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=4&ca
d=rja&uact=8&ved=0CDwQFjAD&url=http%3A%2F%2Fwww.frro.utn.edu.ar%
2Frepositorio%2Fcatedras%2Fquimica%2F5_anio%2Fbiotecnologia%2Fprac
tico4.pdf&ei=bMt_U9GeGrCvsQTq_oCwAw&usg=AFQjCNHzxGxKhL5je2_sN
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ANEXOS