Agosto-Diciembre 2010 - LABORATORIO DE BACTERIOLOGA MDICA 7MQ1 SECCIN 2.

MUELLER HINTON
OBJETIVO
Comprobar la susceptibilidad de los microorganismos a los agentes antimicrobianos.
FUNDAMENTO BIOQUMICO
Medio ideal para comprobar la susceptibilidad de los microorganismos a las sulfamidas y al
trimetroprim. La baja actividad del trimetroprim da lugar a zonas de inhibicin y a colonias
en zonas anteriores. El PABA como el contenido de tiamina/timidina se reducen al mnimo;
reduciendo la inactivacin de las sulfamidas y el trimetroprim cuando se utilizan medios
para probar la susceptibilidad de bacterias aisladas a estos antimicrobianos. La inclusin del
almidn asegura que los factores txicos que se encuentran durante el crecimiento sean
absorbidos.
COMPOSICIN
Infusin de carne
Casaminocidos
Almidn
Agar
pH final a 25 C

300 g
17.5 g
17 g
38 g/l
7.3

MTODO
Una siembra del agar en capa fina produce zonas de inhibicin mejor definidas, se colocan
los discos impregnados con antimicrobianos, se incuban las placas y despus de 18 24
horas a 37 C, se miden los dimetros de la zona de inhibicin microbiana y se comparan
con los valores estndares reportados en las tablas o insertos proporcionadas por el
fabricante.
LECTURA
Se leen zonas de inhibicin microbiana alrededor del disco de antimicrobiano.
INTERPRETACIN
Dependiendo del dimetro del halo de inhibicin ser la susceptibilidad del
microorganismo al antimicrobiano usado.

Dra. Graciela Castro Escarpulli / Dra. Ma. Guadalupe Aguilera Arreola.

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AGAR BHI
OBJETIVO: Conocer la morfologa colonial de la mayora de las bacterias de inters
mdico.
FUNDAMENTO: El BHI es un medio slido rico, entre sus ingredientes tiene una
infusin de cerebro y de corazn, lo cual lo hace adecuado para el desarrollo de un
importante nmero de bacterias, siempre y cuando se incuben a la temperatura y a la
atmsfera adecuada.
COMPOSICIN DEL MEDIO DE CULTIVO:
Frmula en gramos por litro de agua destilada
Infusin de cerebro de ternera
200.0
Infusin de corazn de res
250.0
Peptona
10.0
Cloruro de sodio
5.0
Fosfato de potasio
2.5
Glucosa
2.0
Agar
15.0
pH final 7.4
MTODO:
1.- Tomar una colonia con el asa.
2.- Sembrar por estra cruzada.
3.- Incubar a 37C durante 24 horas en atmsfera normal para bacterias aerobias estrictas y
para anaerobias facultativas. Para anaerobios estrictos se debe utilizar alguna metodologa
que proporcione una atmsfera libre de oxgeno e incubar durante 48 horas.
LECTURA:
Observar si hubo desarrollo bacteriano y describir las caractersticas morfolgicas.
INTERPRETACIN:
Desarrollo bacteriano.
NOTAS:
1.- En este medio, las bacterias puede ser sembradas por estra cerrada o en forma masiva
con un hisopo con el propsito de tener abundante desarrollo bacteriano para la
conservacin del microorganismo o para la obtencin de biomasa.
2.- Para hacer que el medio de cultivo sea selectivo para hongos, se puede adicionar
penicilina y estreptomicina para inhibir el crecimiento bacteriano.
BIBLIOGRAFA:
Jean F. McFadin. Medio for Isolation Cultivation. 1985. Baltimore London. Editorial
Williams & Wilks . Volumen 1.

Dra. Graciela Castro Escarpulli / Dra. Ma. Guadalupe Aguilera Arreola.

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MEDIO F (AGAR F PSEUDOMONAS)

OBJETIVO: Determinar la produccin de fluorescena en el gnero Pseudomonas.
FUNDAMENTO BIOQUIMICO.
El medio F es un medio diferencial que permite la produccin de fluorescena. El sulfato de
magnesio presente en el medio estimula la produccin de la fluorescena e inhibe la
formacin de piocianina.
COMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO
Frmula en gramos por litro de agua destilada
COMPOSICION
CANTIDADES
Peptona
20.0 g
Fosfato de potasio
1.5 g
Sulfato de magnesio hepta hidratado
1.5 g
Agar
15.0 g
Disolver y agregar 10 ml de glicerol.
pH final de 7.2 0.2
METODO.
1.- Sembrar la cepa de por estra cerrada en toda la superficie del medio
2.- Incubar a 35C durante 18-24 y hasta 72 horas.
LECTURA.
Observar si hay desarrollo bacteriano y si hubo produccin de pigmento en el medio de
cultivo, este se observa mejor con la lmpara de Woods que emite luz ultraviloleta.
INTERPRETACIN.
Produccin de fluorescena: Cuando hay produccin de fluorescena, esta difunde en el
medio y se pone de manifiesto con un color amarillo-verdoso.
PRODUCCION DE PIGMENTOS POR ESPECIES BACTERIANAS

Pseudomonas aeruginosa
Pseudomonas fluorescens
Pseudomonas putida
Burkholderia cepacia
Burkholderia diminuta
Stenotrophomonas maltophilia

PRODUCCION DE
FLUORESCEINA
+
+
+
-

PRODUCCION DE
PIOCIANINA
+
-

Dra. Graciela Castro Escarpulli / Dra. Ma. Guadalupe Aguilera Arreola.

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MEDIO P (AGAR P PSEUDOMONAS)

OBJETIVO: Determinar la produccin de piocianina en el gnero Pseudomonas.
FUNDAMENTO BIOQUIMICO.
El medio P es un medio diferencial que permite la produccin de piocianina.
COMPOSICION DEL MEDIO DE CULTIVO
Frmula en gramos por litro de agua destilada
COMPOSICION
CANTIDADES
Peptona
20.0 g
Cloruro de magnesio
1.4 g
Sulfato de potasio
10.0 g
Agar
15.0 g
Disolver y agregar 10 ml de glicerol.
pH final de 7.2 0.2
METODO.
1.- Sembrar la cepa de por estra cerrada en toda la superficie del medio
2.- Incubar a 35C durante 18-24 y hasta 72 horas.
LECTURA.
Observar si hay desarrollo bacteriano y si hubo produccin de pigmento en el medio de
cultivo
INTERPRETACION.
Produccin de piocianina: Cuando hay produccin de piocianina, esta difunde en el medio
y se pone de manifiesto con un color verde-rojo.
PRODUCCION DE PIGMENTOS POR ESPECIES BACTERIANAS

Pseudomonas aeruginosa
Pseudomonas fluorescens
Pseudomonas putida
Burkholderia cepacia
Burkholderia diminuta
Stenotrophomonas maltophilia

PRODUCCION DE
FLUORESCEINA
+
+
+
-

PRODUCCION DE
PIOCIANINA
+
-

Dra. Graciela Castro Escarpulli / Dra. Ma. Guadalupe Aguilera Arreola.