Cuestionario N 3

Sistemas analticos toxicolgicos

1-Como se clasifica a los txicos conforme a los procedimientos de
anlisis y de acuerdo a que propiedad?.
Divisin de los txicos atendiendo a los procesos tiles para su aislamiento:

Txicos separados en forma de gas o de vapor (voltiles)

Txicos inorgnicos
Txicos orgnicos.

2-Cuales son las principales sistemticas para gases y vapores?

La separacin de hidrocarburos de bajo punto de ebullicin se realizaba
mediante destilacin fraccionada o con cmaras o artificio de difusin del
vapor.
Desde el advenimiento de la cromatografa gaseosa, desarrollo del mtodo
espacio en cabeza o cmara en vapores de equilibrio con el lquido, el
anlisis se ha simplificado notablemente.
Por alcalinizacin y calentamiento se separan aminas voltiles (anilinas,
anfetaminas) al acidificarse se separan txicos cidos, mtodo til para
separar amoniaco acido sulfhdrico, monxido de carbono en sangre, al objeto
de su posterior determinacin en forma gaseosa por espectrofotometra
infrarroja o de gases con detector de conductividad trmica o en la clsica
celula de CONWAY.
a)
b)
c)
d)

Calentamiento: hidrocarburo de bajo punto de ebullicin

Acidificacin previa: CO, CN,S, F, As,
Alcalinizacin previa: aminas
Reduccin previa: As, F.

3-Cuales son los procedimientos en la sistemtica para los txicos

minerales?
a)Mineralizacin de la muestra. La destruccin de la materia orgnica de
la muestra es importante porque puede retener firmemente los
elementos inorgnicos; esto es especialmente cierto cuando se trata de
sangre o viseras de un intoxicado, a cuyas protenas irn unidos los
txicos minerales.

La mineralizacin se puede realiza:

a) Por va seca: por incineracin hasta convertir la muestra en
cenizas y tratamiento con cidos, por fusin alcalina mezclando la
muestra con carbonato o hidrxido sdico calentando hasta
fusin.
b) Por va hmeda una drstica oxidacin de la materia orgnica,
bien a presin atmosfera o sobre presin en vasija cerrada.
En ocasiones son es necesario mineralizar sino que es conveniente
desproteinizar lo que se consigui con acido fuerte como clorhdrico,
tricloro actico o ntrico y posterior separacin
de los restos por
centrifugacin o por ultrafiltracin de membranas con poros de tamao
apropiado.
b)Una vez obtenida la mineralizacin y disolucin de la muestra se divide el
liquido en 3 partes, en una de las cuales se sigue una marcha analtica para
cationes en la otra una sistemtica para aniones y se reserva la tercera para
cualquier eventualidad.
4- Tcnicas electro analticas. Cules son?
a) Potenciometricas: se basa en la medida de diferencias de potencial
entre dos electrodos sumergidos en una disolucin (pHmetria). Hay
electrodos especficos para los distintos grados de valencia.
b) Conductimetria: La medicin de la conductividad o conductancia de
disoluciones proporciona varias zonas prcticas de determinacin de
sustancias orgnicas o inorgnicas. Es ptima para el control del
contenido inico global de las aguas potables.
c) Voltametria:
- polarografia: basada en la cuantificacin de la
intensidad de la difusin de iones.
-volumetra de gota: redisolucin andica de gota
desnuda: como en la polarografa, cataliza para ctodo un goteo de Hg,
sobre el que, segn el potencial aplicado, se deposita cada elemento;
posteriormente se cambia de signo del potencial, lo que re disuelve el
elemento instantneamente con gran aumento de la seal.
d) fundamentada en la electrolisis, proporciona un medio de rpida
deteccin y separacin para posterior identificacin y determinacin de los
elementos :As, Sb, Bi y Hg.
5-Que dificultades
atmica (EAA)?

presenta

el

espectrofotmetro

de

absorcin

Cuando los elementos inorgnicos se encuentran en disolucin acuosa el

anlisis no presenta problemas pero cuando coexiste materia orgnica pueden

producirse respuestas errneas algunas de ellas se eliminan con accesorios

como el corrector de deuterio, y la cmara de grafito,etc.
Algunos elementos de gran inters toxicolgico, como el As, Sb, etc., presentan
dificultades en su determinacin por EAA, lo cual a sido resuelto mediante la
formacin del hidruro de elemento, y su determinacin espectrofotometrica en
estado de vapor sin el concurso de la llama. De aqu el nombre de
espectrofotometra sin llama o sistema de hidruros metalicos (SHM).
La misma tcnica es aplicable al Hg con el nombre de espectrofotometra de
vapor frio.
6-Espectrometria
de
emisin
de
plasma.,
Cuales
son
caractersticas? Que tipos ah? Como es la comparacin con EAA.

sus

Es una tcnica de emisin, como no de absorcin, que utiliza el plasma para

excitar los tomos de los elementos a determinar; existen 2 sistemas para
producir el plasma:
a. Es conocido como ICP (plasma acoplado inductivamente), que se origina
en un fuerte campo magnetico que mueve y se calienta, por efecto
joule, el gas.
b. El DCP (plasma por corriente directa), que s eforma entre varios
electrodos en corto circuito.
Estos instrumentos no emplean lmparas como en la EAA sino un
ordenador que controla el barrido de la longitudes de onda, lo que
permite realizar de forma secuencial anlisis de varios elementos; estos
supone mayor rapidez analtica, aunque sea menos sensible que la EAA,
una versin del ICP es la espectrometra atmica de fluorescencia, que
incorpora una lmpara de ctodo hueco .
7-Hidrlisis y digestin, cuando se realiza?. En que se basa la
extraccin con solventes
Cuando se trabaja con plasma u orina, antes de efectuar las extracciones se
puede realizar la hidrlisis de los conjugados por va qumica o enzimtica, que
aumentan el rendimiento de la extraccin de txicos como los opiaceos,
fenotiazinas, cannabinoides, etc. La hidrlisis qumica puede afectar los
xenobioticos lbiles a las condiciones de la reaccin, lo q no ocurre con la
hidrlisis enzimtica.
La separacin o extraccin de un compuesto presente en una muestra liquida o
solida se realiza con disolventes capaces de arrastrar aquel y separarse de la
muestra.

La solubilidad de un producto es funcin de su polaridad de forma que las

sustancias inicas o polares se disuelven en disolventes polares y las no
inicas, no polares lipidicas lo hacen en disolventes apolares o lipofilicos.
8-Sistematica para txicos orgnicos. Explicar
Este tipo de sistemtica pretende la separacin de todos los txicos de
naturaleza orgnica e incluye los que clsicamente se denominaban orgnicos
fijos (no volatilizables) , junto con los que, adems de poderse separar en
forma de vapor, tambin pueden ser extrados por disolventes orgnicos.
Fases:
a) Extraccin
Con disolvente polar
Con etanol
b) Purificacin del extracto
c) Fraccionamiento del extracto para grupos
cidos
Bsicos
Neutros
9-Extraccion del medio. Como se puede realizar? Explique en cada
caso.
Las extracciones pueden efectuarse por mtodos liquido-liquido, liquido-solido
o solido-liquido. En el primer caso se parte de una muestra liquida (agua, orina,
plasma o suero) que se agita en un embudo de decantacin o se trata de un
extractor continuo liquido-liquido en caliente con el disolvente orgnico
apropiado; en el 2do. Caso se pasa la muestra homogenizadas liquida al pH
conveniente por una columna cromatografa con relleno solido, y despus de
lavar, se re extrae con el disolvente; en el 3er. Caso una muestra solida
(alimentos, vsceras, etc.) troceada finamente, se somete a la accin
prolongada del disolvente, generalmente a la temperatura de ebullicin, por
calentamiento reflujo o en un extractor de sohxlder.
10-Tipos de purificacin y para que se utiliza?.
Para la purificacin de los extractos se han propuestos numerosas formas:
1- Precipitacin de las albuminas con diferentes reactivos:
a) con sulfato amnico: disminuye el rendimiento para txicos,
cidos y neutros
b) tunsgtato sdico: disminuye el rendimiento de bases
c) acido tricloro actico al 10%
d) cloruro de aluminio: da bajos rendimientos con acido

2- Coagulacin de las albuminas con etanol y acetonas: con este proceso

se logra eliminar la mayor proporcin de las protenas as como las
grasas que no se disolvern en el agua
3- Tcnicas cromatograficas:
a) Cromatografa de columnas de florisil, silica gel albumina, etc.
b) Cromatografa de papel o sobre capa de silica gel.
c) Cromatografa gaseosa preparativa.
Estas tcnicas cromatograficas se realizan para la purificacin del extracto
especialmente cuando lo tenemos en disolvente no acuoso.
11-Que es un fraccionamiento?. Como y para que se realiza?.
Ver grafico pagina 370 esquema 15.1
12-que representara las fases D y E? tcnicas orientativas cuales son
y para que sirven?
La fases D y E son aquellas donde se realiza la deteccin de un toxico
identificacin y cuantificacin.
Tcnicas orientativas sirven solo de tamizado como los inmunoensayos,
espectrofotometra, ultravioleta-visible, cromatografa sobre papel en capa fina.
Con los resultados proporcionados jams debera un analista proporcionados
por ellas jams debera un analista emitir un informe.
13-Cuales son las tcnicas confirmativas. Y que aconsejan las buenas
prcticas del laboratorio BPL
Las tcnicas confirmativas comprueban el anterior resultado, o lo tienen
directamente pues poseen mayor poder de discriminacin y seguridad. Las BPL
aconsejan efectuar la identificacin por dos tcnicas diferentes, basadas en
fundamentos fisicoqumicos distintos como la cromatografa de gases (gas
liquido), cromatografa de lquidos (liquido-liquido) de alta precisin o
resolucin, espectrofotometra infrarroja, y la reconocida como de mayor
discriminacin o seguridad el sistema integrado por cromatografa de gases por
espectrometra de masa

Tcnicas cromatograficas
1-Definicion de cromatografa
La cromatografa es una tcnica que permite reducir las mezclas particulares.
Esto se logra con la distribucin de los componentes de la mezcla entre una
fase mvil y una estacionaria .
La cromatografa puede definirse como la tcnica de separacin de una mezcla
de solutos basada en las diferentes velocidades que se mueven cada uno de
los componentes a travs de un medio poroso arrastrada por un disolvente en
movimiento.
2-Clasificacion de cromatografa. Explicar en la que se basan en la
interaccin entre el soluto y el lecho cromatografico.
En funcin de la naturaleza de la fase mvil:
1- Si es un gas: cromatografa gaseosa
2- Si es liquido: cromatografa liquida: en capa delgada, en columna abierta
y cromatografa liquida de alta performans.
3-Cuales son las facetas en que se basa la cromatografa?

Consta de 3 facetas: Absorcin, particin e intercambio inico.

4-Como varia la absorcin con respecto a la presin y a la
temperatura?
Para una sustancia absorbente a una temperatura dada al aumentar la presin
del medio el valor de la absorcin aumenta para un valor dado de
concentracin por el contrario a medida que la temperatura aumenta el valor
de la absorcin disminuye.
5-Como se selecciona los eluyentes y absorbentes?. Depende del tipo
de muestra?
La seleccin va a depender del comportamiento del absorbente y del medio de
dilucin hablando as de un ambiente de absorcin, dependiendo as de la
sustancia a separar.
6-Factores implicados en la CCD
A-Absorbente: silica gel, almina, silicato de magnesio ,etc
B-ligantes: sulfato clcico, carboximetilcelulosa, almidn
C-colocacin de la muestra: extracto de la muestra en etanol, acetona,
cloroformo, y otros solventes orgnicos. Se aplica con capilares y micropipetas
D- desarrollo:es ideal que corra unos diez cm. El volumen del solvente es
funcin del tamao de la cuba2?
7-el Rf es determinante de una sustancia? Que significa Rf:1 y Rf:?
La Rf de una sustancia se define como la distancia recorrida por la mancha
problema versus la distancia recorrida por la fase mvil. La Rf es determinante
de cada sustancia. Si el RF es alto, la sustancia no se absorbe en absoluto o
muy poco y avanza con el frente del solvente; en cambio si el RF es bajo la
sustancia se absorbe con mucha fuerza y queda fija en el punto de siembra
entonces si R:1 la sustancia se disuelve completamente en el disolvente y es
arrastrada con el en el frente de recorrida
Si RF:0 la sustancia no se desprende del absorbente y no se modifica su
situacin por el paso del eluyente, quedando en el punto de siembra
8-localizacion e identificacin de la mancha. Como se realiza? es
determinante de una sustancia?
Una vez seca la placa se examina a la luz UV o despus de pulverizar con spray
de fluorescena, examinando esta placa bajo luz UV, fluoresce con luz verdosa
azulada. Las manchas que tienen fluorescencia propia resaltan sobre el fondo

verdoso, las que no tienen flurescencia se observan como manchas oscuras

opacas.
Otra manera es recurrir a procedimientos qumicos que consisten en rociar a la
placa con los reactivos de aspercion adecuados. La localizacin no es
determinante de una sustancia pero despus de la pulverizacin se miden los
factores RF de las manchas asi como el color que constituye la base de la
identificacin.
9-que ventajas tiene la CCD y cuales son sus desventajas? Que
interacciones hay entre el soluto y el lecho cromatografico?
Ventajas: rapidez, facilidad de operacin, buena resolucin, especificidad,
requiere equipos y espacios minimos, no necesita personal especializado y la
determinacin simultanea de varias muestra
Desventajas:

Ocurren fenmenos de absorcin, proceso fsico en el cual una sustancia se fija

sobre una interfase de separacin slido-liquido o solido-gas, del medio que
rodea esa interfase. Esto significa un enriquecimiento de un componente dado
liquido o gas, sobre la superficie activada de un solido, frente a la
concentracin que tiene dicho componente en el medio lquido o gaaseoso que
rodea el slido.
Las partculas posees fuerzas electrostticas, que a su vez inducen otras
tantas en las sustancias, que desean hacer avanzar. Tambin el solvente de
corrida influye sobre estas fuerzas electrostticas entre sustancia y sorbente.
10-cuales son las caractersticas de un cromatgrafo gaseoso (CG)
tipos de detectores y la separacin de las muestras en funcin de que
estn?
11-ventajas del (CLAR) de alta resolucin y sus desventajas. Que
interacciones hay entre el soluto y el lecho cromatogrfico?

COLOQUIO IV
El anlisis qumico-toxicolgico y sistemticas analticas toxicolgicas
1-para que sirve un anlisis qumico toxicolgico?

Sirve no solo para descubrir o confirmar el ag etiolgico sino tambin para

dentro de lo posible evaluar la impregnacin txica y para controlar los
procesos de eliminacin y eficacia del tratamiento aplicado
2-que caractersticas diferentes presenta un anlisis toxicolgico
clnico y uno toxicolgico forense?
Un laboratorio de anlisis clnico toxicolgico presenta caractersticas
diferentes del dedicado a toxicologa forense. Por ejemplo:
a) La urgencia de disponer del resultado es mxima
en laboratorio de finalidad clnica y relativa en el
forense
b) La informacin (anamnesis) que recibe el analista
para orientar el anlisis es bastante frecuente en
el primer caso y muy escasa en el segundo.
c) Las muestras biolgicas que llegan al laboratorio
en toxicologa clnica suelen ser sangre (suero) y
orina, mientras que en el toxicolgico forense
dispone tambin de vsceras y faneras
d) La concentracin del producto en las muestras del
intoxicado son generalmente mas bajas en los
casos clnicos que en los casos forenses
e) La determinacin del txico en los casos forenses
puede ser de carcter cualitativo o
semicuantitativo, pues suele ser suficiente
encontrar en el medio organico un xenobiotico
para llegar al diagnostico mientras que con los
fines clnicos normalmente es necesaria la
determinacin cuantitativa para evaluar el grado
de impregnacin y gravedad de la intoxicacin, de
donde deducir las medidas teraputicas ms
convenientes. Por otra parte, en los casos forenses
puede tener poca relevancia el dato cuantitativo,
al ser dificilsu interpretacin si se desconocen
circunstancias como aumento de la absorcin,
tiempo transcurrido, actuaciones evacuadoras, etc
3-que se entiende por anlisis toxicolgico
Conjunto de procesos analticos encaminados a poner de manifiesto la
prescencia de una sustancia de las consideradas txicas (DT baja) en una
muestra
4-que caractersticas bsicas debe presentar una muestra para
toxicologa

Bsicamente las muestras deben ser homogneas y representativas. Hay casos

en que es necesario impedir las fermentaciones fermentaciones y
evaporaciones hacindose preciso aadir sustancias conservadoras , mantener
refrigeracin, etc; pero en otras ocasiones tales precauciones pueden resultar
incluso perjudiciales
5-que es y que representa la cadena de custodia. Que datos debe
tener una muestra?
Es todo lo que le da valor lega a la muestra en cuestin. Todo lo que le ocurre
a una muestra, desde que entra al laboratorio, antes, durante y despus de su
anlisis debe estar perfectamente documentado. Su objetivo es evitar los
errores que no estn relacionados con el mtodo analtico
Debe comenzar en el momento que se toma la muestra, e incluye la
preparacin y el transporte
Datos que deben registrarse a la llegada de la muestra:
Fecha y hora de recepcin
Nombre de la persona que la recibe
Persona o agencia que la entrega
Naturaleza y cantidad
Condiciones en que se entrega
Identificarla mediante un nmero de registro
Documentacin de solicitud de anlisis
Donde se almacena hasta su anlisis
Destino posterior
6-cuales son las muestras biolgicas ms importantes y que
consideraciones hay que tener en cada una
a)muestras hemticas: como al coagular la sangre y separase el suero puede
haber perdida por arrastre, es preferible reservar el suero para los estudios
enzimolgicos, por lo tanto la sangre total y el plasma son las muestras mas
representativas. Lo ideales que el laboratorio reciba la sangre total sin coagular
y sin hemolisar, adicionada con cloruro sdico slido, posteriormente el
analista decidir si utilizara la sangre total o si la centrifugara para separar el
plasma y trabajar con l ya que esta libre de interferencias y pigmentos de la
sangre y no forma emulsiones con los disolventes orgnicos.

Para ciertos casos como para determinar el plomo es prescindible sangre

total pero como el fluoruro de sodio interfirere se debe utilizar EDTA.
B)ORINA: es una matriz fcil de trabajar, con pocas interferencias, pero muchos
xenobioticos se excretan mal por esta va por lo que el anlisis puede o no ser
representativo. No precisa adicion de conservantes
c) contenido gstrico, lquido de lavado gstrico o vmito: no presentan
demasiados inconvenientes prcticos su anlisis puede ser rpido o ser fcil la
separacin del xenobiotico. Pero los resultados no son representativos de la
intoxicacin porque se refieren a xenobioticos no absorbidos
d) vsceras: el h{igado seguido del rin y el cerebro, son losrganos que ms
xenobioticos acumulan, por lo que se prefieren como muestras analticas, no
deben ser adicionados agentes conservantes sino mantenidos cuando sea
posible a baja temperatura pero sin congelar
7-cuales son las muestras de investigacin judicial y sus
observaciones
-un frasco bocal con estmago y su contenido, y adems vmitos y los
lavados gstricos.
-un frasco seco con sangre limpia en cantidad de 100ml, cuando procede
de un cadver; en este caso no es factible separar el suero porque la sangre no
coaguala, pero no precisa conservador.
-un frasco con orina
-un frasco bocal con aproximadamente 100gr de hgado y la vescula
biliar
-un frasco bocal con aproximadamente 100gr de cerebro
-un frasco bocal con aproximadamente 100gr de cua renal
-un recipiente con 100gr de pulmon
Observaciones:
-cuando se sospeche intoxicaciones con arsnico, plomo, berilo, talio,
estroncio, uranio y fluor, debern remitirse muestras de uas, cabellos o
huesos
- en caso de investigacin de txicos gaseosos o voltiles ser preciso
evitar que los frascos contengan cmara de aire, y estos hermticamente
cerrados se debern mantener el menor tiempo posible en el frigorfico

- todos los frascos deben ser etiquetados con expresin de su contenido

y procedencia. Podrn precintarse, pero no debe utilizarse lacre, para evitar la
contaminacin de este
-nunca se aadirn ag conservadores a las muestras a excepcin de:
-sangre para determinacin de alcoholes, donde se usar fluoruro
sdico
-tejidos para estudios histolgicos donde se usar formol al 10%
para cubrir la muestra troceada
8-en la exhumacin cuales son las muestras
-se toman muestras de la tierra que esta por encima y debajo del cadver
-en el caso de cadver en estado de putrefaccin no hay rganos formes, sino
magma, que se toma cerca de zona del hgado y del cerebro por separado

Toxicocintica
Absorcin:
La absorcin inhalatoria (hasta un 77%) es extremadamente rpida,
apareciendo los sntomas en segundos con altas dosis. Por va oral

(aproximadamente 50 %) el cido clorhdrico del estmago provoca liberacin

de HCN, que es absorbido como ion cianuro (CN
), generando sntomas en minutos. Tanto las mucosas como la piel intacta
poseen tambin rpida absorcin, dependiendo la aparicin de sintomatologa
principalmente del rea expuesta.
Distribucin:
El cianuro se une en un 60% a las protenas plasmticas, encontrndose el
resto concentrado en los glbulos rojos o como cianuro libre. Su Volumen de
Distribucin es de 1,5 L/kg de peso.
Metabolismo:
El principal mecanismo de metabolizacin del cianuro (80%) es su
transformacin por las enzimas
rodanasa mitocondrial
(localizada principalmente en hgado, riones y msculo esqueltico) y
mercaptopiruvato sulfurtransferasa
(en hgado, riones y eritrocitos). Ambas enzimas median la transferencia de
azufre desde el tiosulfato hacia el cianuro, formando as tiocianato, un
compuesto marcadamente menos txico que el cianuro. El paso limitante de
esta reaccin es la presencia del tiosulfato como dador de azufre.Otras vas
metablicas incluyen la combinacin con hidroxicobalamina para formar
cianocobalamina (Vitamina B12), la oxidacin a cido frmico o a CO2, o la
incorporacin a la cistina.La vida media del cianuro es de 0,7 a 2,1 hs.Existen
pequeas cantidades de cianuro endgeno, y slo cuando estos sistemas se
saturan por agregado de cianuro exgeno es que aparecen los sntomas.
Excrecin:
El tiocianato se excreta en la orina, y la hidroxicobalamina en la orina y la bilis.
Pequeas cantidades de cianuro se excretan por va pulmonar y por el sudor,
dando olor a almendras amargas.