Revista Mdica, 2004. Vol.

10 N 3:20-26

NORMATIZACION DE LA TOMA DE MUESTRAS PARA LA INVESTIGACIN

DE LA PATERNIDAD BIOLGICA A TRAVES DEL ANLISIS DE ADN
Rocabado O.

(1)

(2)

(3)

(4)

, Nez de Arco J. , Rocabado G. , Lorente J. .

(1)

Responsable del Laboratorio de Gentica Forense, Instituto de Investigaciones Forenses,

(2)
Fiscala General de la Republica / Bolivia E-MAIL: orocabado@fiscalialpz.com
Director
Nacional, Instituto de Investigaciones Forenses, Fiscala General de la Republica de Bolivia.
(3)
(4)
Investigador Asociado, Facultad de Ciencias Farmacuticas y Bioqumicas.
Director del
Laboratorio de Identificacin Gentica, Departamento de Medicina Legal, Universidad de
Granada Espaa.

RESUMEN
Actualmente la tecnologa del ADN ha superado con creces muchas otras tcnicas en
la investigacin de la paternidad biolgica, sin embargo, es fundamental el conocer la
versatilidad de sta tecnologa moderna. Una de las fases fundamentales, es sin duda
alguna, la obtencin del material biolgico a emplearse para esta investigacin, en
nuestra experiencia, hemos podido observar diversos criterios para la obtencin de
muestras biolgicas destinadas a este efecto, es por lo tanto el objetivo de esta
publicacin, el unificar esos criterios y mostrar la muestras sobre las que se puede

realizar este estudio.

Palabras claves: Muestras, ADN, paternidad

1. INTRODUCCIN.Las pruebas de investigacin biolgica de la paternidad mediante anlisis de ADN

(cido desoxirribonucleico), es el mtodo de identificacin ms preciso que existe en la
actualidad ya que los estudios de paternidad se realizan analizando un nmero
suficiente de marcadores genticos con lo que la fiabilidad de la prueba es tan alta que
permite obtener probabilidades de paternidad superiores al 99.99%. (1)
Surge en la actualidad la gentica molecular aplicada a la medicina forense, conocida
como gentica forense, una nueva especialidad que consiste en la aplicacin de la
gentica a la resolucin de problemas judiciales, consistentes principalmente en
pruebas de investigacin biolgica de paternidad, problemas de identificacin de
individuos y restos seos y anlisis de vestigios biolgicos de inters criminal. (2)
Un aspecto importante de considerar, es la toma de muestras para realizar este
estudio, nuestra experiencia nos ha permitido observar muchos errores en el proceso de
toma de muestras, lo que imposibilita el anlisis de ADN, es por esta razn que a travs
de esta publicacin, proponemos un protocolo de destinado a la toma de muestras
destinadas al anlisis gentico para la investigacin de la paternidad biolgica, proceso
que puede ser encomendado a cualquier mdico o personal en salud.
2. DOCUMENTACION
PATERNIDAD

EN

CASOS

DE

INVESTIGACION

BIOLOGICA

DE

Independiente al acta que se elabora para la tomas de muestras, es importante adjuntar

la siguiente documentacin:(3)

20

Revista Mdica, 2004. Vol. 10 N 3:20-26

2.1.- DOCUMENTACION NECESARIA
2.1.1.- Formulario de envo de muestras. En este formulario debe
constar:
" Datos identificativos del individuo:
- Nombre y apellidos.
- C.I.
- Lugar de nacimiento.
- Fecha de nacimiento
- Lugar de residencia.
- Grupo poblacional.
" Antecedentes patolgicos:
- Transfusiones de sangre recientes.
- Transplantes recientes.
- Enfermedades que puedan influir en la valoracin de los
resultados de los anlisis (p.e.: inestabilidad somtica en
cncer), si se conocen.
2.1.2.- Identificacin de las muestras. En todos los formularios debe
aparecer un listado donde se identifiquen y describan brevemente las
muestras.
" Listado de muestras donde debe especificarse:
- Nmero de referencia de la muestra.
- Tipo de muestra (sangre, saliva....).
- Nombre de la persona a la que se realiza la toma o
cdigo elegido para identificarla.
- Relacin con el caso (madre, hijo....).
3. PRUEBAS BIOLGICAS DE PATERNIDAD MEDIANTE ANLISIS DE ADN
En Bolivia las disputas de paternidad son muy
frecuentes, debido fundamentalmente a las
conductas sexuales adoptadas por la sociedad,
dando origen as a situaciones de conflicto de
paternidades.
El ADN por lo tanto, es muy til para la determinacin de la paternidad biolgica,
sabiendo que en cualquier persona la mitad del genoma procede del padre y la otra
mitad de la madre, en el supuesto de que haya dos individuos sospechosos de ser el
padre de una criatura, bastar comparar las bandas halladas en las huellas genticas
del hijo, de la madre y de los sospechosos. Las bandas correspondientes a la madre se
eliminan y quedan las del verdadero padre. Se comparan stas con las del sospechoso
o sospechosos y aparecer con claridad si es alguno de ellos por la coincidencia visible
que se produce en el espesor y situacin de estas bandas. De esta manera se resuelve
este conflicto. (4)
Las pruebas de investigacin biolgica de la paternidad mediante anlisis de ADN estn
aceptadas por los tribunales de todo el mundo como el mtodo de identificacin ms
preciso que existe en la actualidad ya que permite obtener probabilidades de paternidad
superiores al 99.99% (la mayora de los u
j zgados del mundo aceptan 99.0% como
prueba vlida). (5)

21

Revista Mdica, 2004. Vol. 10 N 3:20-26

Aplicando estas tcnicas es posible incluso determinar las paternidad de personas
fallecidas realizando un anlisis gentico a partir de los restos cadavricos del padre,
obtenidos a travs de una exhumacin, o a partir de sus familiares cercanos. De igual
modo las tcnicas genticas se aplican en la investigacin biolgica de la maternidad.
(6)

4. TOMA DE MUESTRAS .4.1.- Personal encargado de la toma de muestras.- En Bolivia, el personal encargado
de la toma de muestras es generalmente el mdico forense, quien lo hace a
requerimiento fiscal u orden judicial, aunque en algunas oportunidades lo puede hacer
otro personal de salud que sea instruido por las mismas autoridades. Cuando la
demanda de paternidad corresponde al mbito civil, no es necesario la participacin de
un fiscal, las partes interesadas, pueden acudir a un determinado laboratorio para
someterse a la prueba y es en este recinto donde existir el personal entrenado para la
toma de muestras destinadas al anlisis de ADN. As tambin se pueden remitir las
muestras a travs de un courrier hasta el laboratorio, cuando no existe un laboratorio
local. (Fig.1)
4.2.- PRECAUCIONES DURANTE EL PROCESO DE TOMA DE MUESTRAS Y ENVIO
AL LABORATORIO
4.2.1.- Proteccin del personal.
?? Prevenir, en todo momento, el contacto directo del operario con la muestra
mediante el uso de guantes, mascarilla, bata u otro tipo de ropa protectora. (3)
?? Prohibir el consumo de comidas y bebidas, as como de tabaco. (7)
?? Extremar las condiciones de asepsia y siempre que sea posible utilizar material
desechable. Una vez terminada la recogida de muestras, tirar todo el material
desechable utilizado en contenedores para residuos biolgicos, para eliminarlos
posteriormente. (8)
?? Cuando la recogida de muestras se realiza a partir de una exhumacin, estas

precauciones deben extremarse al mximo. (3)

4.2.2.- Proteccin de las muestras. Son numerosos los procesos que pueden
afectar a la integridad de una muestra y por tanto a la posible obtencin de perfiles
genticos, estos procesos son: (3) (9)
?? Contaminacin por material biolgico humano. Se debe al depsito de
material biolgico humano sobre las muestras, con posterioridad a la toma de las
mismas.
?? Contaminacin microbiolgica. Este tipo de contaminacin tiene lugar por el
desarrollo de microorganismos y suele estar favorecida por la humedad y las
altas temperaturas.
?? Contaminacin qumica. Se debe a la presencia de productos qumicos que
van a dificultar algunos de los procesos del anlisis gentico, fundamentalmente
la amplificacin y extraccin de ADN. Se produce cuando las muestras se
envan inmersas en productos conservantes como el formol, que pueden
comprometer el anlisis de ADN.

22

Revista Mdica, 2004. Vol. 10 N 3:20-26

Los procesos descritos podran evitarse o minimizarse si se mantienen algunas

precauciones bsicas como son: (3) (10) (11)
?? Usar guantes limpios que deben cambiarse con frecuencia, un par de guantes
nuevos para cada muestra tomada.
?? Evitar hablar o estornudar sobre las muestras. Usar mascarilla.
?? Usar bata u otro tipo de ropa protectora.
?? No aadir conservantes a las muestras.
?? Dejar las muestras secar a temperatura ambiente, en un lugar protegido, antes
de empaquetarlas para su envo definitivo al laboratorio.
?? Empaquetar cada muestra por separado.
?? Siempre que sea posible, empaquetar las muestras en bolsas de papel o cajas
de cartn evitando utilizar plstico.
?? Una vez terminada la recogida de muestras, tirar todo el material desechable
utilizado (guantes, pipetas, papeles....) en bolsas de basura o contenedores para
residuos biolgicos, para eliminarlo posteriormente.
4.3.- QUIENES PARTICIPAN DEL ANLISIS?
Aunque es aconsejable, no es preciso que la madre est presente para un estudio de
paternidad biolgica. As tambin, se puede determinar la paternidad sin la presencia
del presunto padre, a partir de parientes prximos, restos seos o muestras de
autopsias, en este tipo de situaciones se ha demostrado la gran utilidad de la aplicaci[on
del polimorfismo presente en el cromosoma Y, el cual es heredado de forma integra a
travs de la lnea paterna, es decir que pasa de padres a hijos varones de forma intacta.
(12). Los anlisis de ADN, se realizan generalmente a partir de muestras de sangre o
de mucosa bucal. Este ltimo mtodo es indoloro y no invasivo por lo que
recomendamos emplearlo en el caso de nios muy pequeos. No existe una edad
mnima para realizar la prueba e incluso es posible hacerla prenatalmente previo
acuerdo con una clnica especializada. (13)
4.4.- Toma de muestras
4.4.1 Toma de muestras indubitadas en personas vivas.a. Sangre: es la muestra indubitada clsica utilizada para la obtencin de ADN,
y se puede obtener por: (3) (13) (14)
?? Puncin venosa. Muestra de unos 5 ml de sangre que deben introducirse en
un tubo que contenga un anticoagulante tipo EDTA. Es importante que esta
muestra una ves tomada se almacenada y transportada a 4 C.
?? Puncin dactilar. Con una aguja o lanceta quirrgica se pincha la cara
anterior de algn dedo de la mano y 3 a 4 gotas de sangre se depositan
sobre un papel secante. En la actualidad existen kits estandarizados para
este tipo de tomas. (Fig. 2)
b. Clulas epiteliales bucales (Saliva).

23

Revista Mdica, 2004. Vol. 10 N 3:20-26

Obtenidas frotando la parte interna de los carrillos con hisopos de estriles en
seco. Se realizan dos tomas: Con un hisopo se frota la cara interna del carrillo
derecho y con el otro, la cara interna del carrillo izquierdo. Los hisopos,
correctamente identificados, deben dejarse secar a temperatura ambiente en un
lugar protegido. Es fundamental no introducirlos en las fundas hasta que no
estn totalmente secos, ya que en la saliva hay bacterias que proliferan
rpidamente con la humedad, produciendo la degradacin del ADN. (15)
5.4.2 Toma de muestras indubitadas en cadveres en buen estado de
conservacin.a. Sangre postmortem: se recoge una muestra de unos 10 ml de sangre que
debe introducirse en un tubo que contenga un anticoagulante tipo EDTA.
Trasnportar en cadena de fro a 4 C. Si se requiere sangre para la realizacin
de otro tipo de anlisis, debern recogerse muestras adicionales. (3) (10)
b. Msculo esqueltico: Se seleccionan dos fragmentos de msculo
esqueltico de la zona mejor conservada, de unos 10 g de peso
(aproximadamente de 2 cm de lado) que se introducen en un recipiente de
plstico con boca ancha y tampn de rosca. Si existen dudas sobre la
conservacin del cadver, conviene extraer 4 piezas dentales, si es posible
molares, y reservarlas, para evitar la posible exhumacin del cadver. (3)
5.4.2 Toma de muestras indubitadas en cadveres en avanzado estado de
putrefaccin o esqueletizados
a. Huesos: Se limpiarn de restos de putrlago y siempre que sea posible se
seleccionar un hueso largo, preferiblemente un fmur. Si no es posible
disponer de esta muestra, lo recomendable es ponerse en contacto con el
Laboratorio para valorar, en funcin de las muestras disponibles y de su estado,
cuales son las ms adecuadas para el anlisis. (16)
b. Dientes: Se seleccionan al menos 4 piezas dentales, si es posible molares,
que no estn externamente daados ni hayan sido sometidos a endodoncias. (3)
Referencias Bibliogrficas.1. Ma. Begoa Martnez Jarreta LA PRUEBA DEL ADN EN MEDICINA FORENSE, , Masson S.A. Ed. Barcelona, Espaa. 1999.
2. Lorente, JA y Lorente, M.: Recogida y envo de muestras al laboratorio. En El ADN y la identificacin
en la investigacin criminal y en la paternidad biolgica. Ed. Comares. (1995) pp:127-172Brenner C.H. and
3. Recomendaciones para la recogida y envio de muestras con fines de identificacin gentica. Grupo
Espaol y Portugues de la ISFG. Madeira 2 de Junio de 2002.
4. Lorente M, Lorente JA. EL ADN Y LA IDENTIFICACIN HUMANA EN LA INVESTIGACIN CRIMINAL
Y EN LA PATERNIDAD BIOLGICA.. Granada: Comares, 1995
5. Guisbert Calabuig. MEDICINA LEGAL Y TOXICOLOGIA (Sexta edicin). Ed. Masson S.A. Barcelona.
2003.

24

Revista Mdica, 2004. Vol. 10 N 3:20-26

6. Identifying DNA Evidence. National Commission on the Future of DNA Evidence. National Institute of
Justice. USA. 1999.
7. Operaciones fundamentales de Criminalstica. Unidad de Polica Cientfica. Departamento de Interior del
Gobierno Vasco. 1999
8. Revollo S., Rocabado O., Gomes S. La biologa Aplicada a la Identificacin Humana y Fornsica 2002.
9. Gua para la recoleccin y manejo de Vestigios Biolgicos susceptibles de Anlisis Genticos.
Laboratorio de DNA. Grupo de Biologa Forense. Direccin Regional Bogot. 1998
10. Evidence Colletion Guidelines. California Commission on Peace Officer Standards and Trainings
workbook for the "Forensic Technology for Law Enforcement", 1998
11. Deedrick, D.W.: Hairs, Fibers, Crime and Evidence. Part 3: Crime and Evidence. Forensic Science
Communications (2000)
12. Jobling M.A., Pandya A., Tayler-Smith C. (1997). The Y chromosome in forensic and paternity testing.
Int J Legal Med 110:118-124.
13. Informe del Grupo de Trabajo Europeo de Interpol sobre el Anlisis de ADN. El Cairo, 1998.

14. Collection, packaging, storage and shipment of evidence foe DNA tests at cellmark diagnostics.
Cellmark diagnostics,1999
15. Rocabado O., Nez de A., Corach D. (2004). Hacia la normatizacin de criterios de obtencin de
evidencias en vctimas sobrevivientes de agresin sexual, tendiente a la identificacin molecular por anlisis
de ADN. Revista Mdica 10:75-81.
16. Normas para la preparacin y remisin de muestras objeto de anlisis por el Instituto de Toxicologa.
Orden de 8 de Noviembre de 1996. BOE n 308 de 23-12-1996.
17. Emili Huguet, Angel Cariacedo INTRODUCCION A LA INVESTIGACION BIOLOGICA DE LA
PATERNIDAD., Manel Gen. PPU. 1988
18. Huguet E., Carracedo A. Investigacin biolgica de la paternidad. En: Gisbert Calabuig JA, ed.
Medicina Legal y Toxicologa, 5 ed. Barcelona: Masson, 1998: 1167-1176

(Fig.1) Esquema para la obtencin de muestras biolgicas para el

envo a un laboratorio para estudio de ADN

25

Revista Mdica, 2004. Vol. 10 N 3:20-26

(Fig. 2)Diversos tipos de material para tomar pequeas

cantidades de sangre, como hisopo de algodn o papel
FTA (Whatman), junto con aguja y lanceta para realizar
una puncin mnima

(Fig.3) Obtencin de muestra de

hisopado bucal

26