MACROMOLCULAS DE LA LEVADURA

Isabella Garca Oliveros1, Jennifer Lorena Gmez2, Valentina Herrera Arbelez3

Resumen
En esta prctica se separ por medio de la centrifugacin las principales
macromolculas de la levadura, se identific cualitativamente dichas
macromolculas como, protenas, cidos nucleicos y glucgeno. Se pudo
reconocer la presencia de ARN en levadura y tambin la carga de protenas de
la misma, con ayuda de la solucin salina al 0.15M.Esta prctica tambin
permiti aplicar la prueba de Biuret.
Palabras clave: prueba de Biuret, macromolculas, levadura, ARN, cidos
nucleicos, centrifuga.
Introduccin
Las macromolculas son molculas de gran dimensin, constituidas por varias
molculas que pueden ser similares entre s o no y que estn formadas por
miles de tomos. Generalmente se pueden describir como la repeticin de una
o unas pocas unidades mnimas o monmeras, formando los polmeros. En los
cuales se relacionan las protenas, cidos nucleicos, carbohidratos y lpidos.
La presencia de protenas en una mezcla se puede determinar mediante la
reaccin del Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solucin acuosa
alcalina (de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin de un
compuesto de color violeta, debido a la formacin de un complejo de
coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del
nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos presentando un mximo de
absorcin a 540 nm. 1

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jenniferlogoca@gmail.com
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valenherrera0112@gmail.com
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Procedimiento
En un mortero se coloc el equivalente a una cucharadita de levadura de
panadera, lavada y seca.se agrego una cucharadita de arena lavada y seca y
se trituro cuidadosamente por 5 minutos. Se agreg 15 ml de cido
tricloroactico al 5 % y se macero cuidadosamente por tres minutos ms. Se
dej que la arena se asentara y decantara la suspensin lechosa vertindola a
un tubo de centrfuga. Se Centrifug a 3000 revoluciones durante 5 minutos. Se
obtuvo un precipitado que contena cidos nucleicos y un sobrenadante que
contena glucgeno.
Se pas el sobrenadante a un tubo de ensayo y el tubo de centrfuga con el
precipitado se coloc en un bao de hielo.se precipit el glucgeno aadiendo
2 volmenes de alcohol etlico, agitando y enfriando en el bao de hielo.
Se pas este medio a un tubo de centrfuga y se centrifugo a 3000 r.p.m. se
descart el sobrenadante y se disolvi el precipitado en 1 ml de agua destilada.
Se utiliz como control otro tubo de ensayo 1 ml de agua destilada y a ambos
se agreg 1 ml del reactivo de yodo, el cual tio el glucgeno de pardo rojizo.
Se tom el precipitado de cidos nucleicos y protenas y se agrego 15 ml de
cloruro de sodio al 10 %, agitando cuidadosamente. Cmo tena este medio
con el tubo de centrfuga, se pas a un tubo de ensayo y se coloc en un bao
de agua hirviendo por 10 minutos. Luego se enfri cuidadosamente y se pas
el medio a un tubo de centrfuga, centrifugando a 3000 r.p.m., durante 3
minutos. l sobrenadante contena cidos nucleicos, se pas a un tubo de
ensayo, y se dej el precipitado proteico en un bao de hielo.se tomo el tubo
que contiene los cidos nucleicos y se precipit aadiendo 2 volmenes de
etanol fro, lentamente y agitando sobre un bao de hielo y dejndolo por unos
3 minutos. Se verti el contenido a un tubo de centrfuga y se centrifugo
durante 3 minutos a 3000 r.p.m. se Descart el sobrenadante y se disolvi el
precipitado en 2 ml de amortiguador salino. Se Coloc en otro tubo como
control 2 ml de amortiguador salino, y a ambos se agreg 3 ml del reactivo de
orcinol; se coloc los tubos en un bao de agua hirviendo durante algunos
minutos. Una coloracin verde indico la presencia de ARN.
Se tom el precipitado de protenas coaguladas y se disolvi con 2 ml de
solucin salina 0.15M.En otro tubo de ensayo, como control se coloc 2 ml de
la solucin salina.se aadi a cada tubo 1 ml de la solucin de sulfato de cobre,
luego 2 ml de hidrxido de sodio 10 M. La aparicin de un color violeta indico la
positividad de la prueba (Prueba del Biuret).

Resultados
Luego de haber macerado la arena junto con la levadura y al haber agregado
15 ml de cido tricloracetico la arena se asienta y el lquido queda cremoso con
un color gris parecido al cemento (Figura 1), este fue llevado a la centrifuga, y
luego se observ que el sobrenadante quedo muy lquido y de un color amarillo
oscuro en la parte de arriba, el precitado quedo como una masa similar al color

de la arena en la parte de abajo del tubo; al haber agregado los volmenes de

etanol frio al sobrenadante, el color amarillo de este cambio a un color verde
limn, pero sigui siendo muy liquida. Despus de centrifugar el precipitado por
segunda vez su apariencia cambio observndose de color gris y espeso, como
una masa; a este se agreg el reactivo de yodo (lugol) y se observ que el
glucgeno se torn a un color rojo pardo y comparado con el tubo de prueba
que contena agua destilada con yodo su resultado queda de color cobre
(Figura 2), esta reaccin se dio entre los cidos nucleicos de la levadura y la
solucin de yodo.
Se Calent el tubo que contena cidos nucleicos y protenas, este se dividi en
dos fases en la cual la levadura es ms densa y se posiciono en la parte de
abajo del tubo.
Del precipitado y el sobrenadante producto de la tercera centrifugacin se
obtuvieron 11 ml en partes iguales, el resultado de la cuarta centrifugacin de
este se observ una divisin de colores, un color beige en la parte de arriba, y
un color gris abajo. Cuando se agreg el reactivo de orcinol a estas, y al haber
expuesto al aumento de temperatura se observ como este fue cambiando de
color parcialmente. Al haber agregado a la solucin de protenas solucin salina
0.15M se observ un color verde que represento el ARN de la levadura (Figura
3).Se observ al realizar el ensayo con NaOH y CuSO4 la Aparicin de un color
violeta que es lo que represento la positividad de la prueba de Biuret (Figura 4).

Figura1 Macerado de levadura con arena

Figura 2 Glucgeno de color pardo rojizo

Figura 3 Presencia ARN de la levadura

Figura 4 Prueba de Biuret

Discusin
Al utilizar el glucgeno que es una estructura muy ramificada, y est
formada por varias cadenas que contienen de 12 a 18 unidades de
-glucosa y uno de los extremos de esta cadena se une a la siguiente
cadena mediante un enlace -1,6-glucosdico, la importancia de que el
glucgeno sea una molcula tan ramificada es que aumenta su
solubilidad en disolventes de baja polaridad 2.Con el glucgeno obtenido de
la decantacin en la centrifuga ms 1 ml de agua destilada como solvente y
1ml del reactivo de yodo, se comprob la presencia de este ya que tie el
glucgeno de color pardo rojizo y as saber que la prueba fue positiva para la
presencia de glucgeno.

Al exponer la solucin de protenas y cidos nucleicos obtenidos en la prctica

con solucin salina al 0.15M, y una temperatura elevada en bao mara que era
necesario para que el soluto y el solvente se ayudaran en el intercambio
molecular con los cidos nucleicos y protenas, se pudo comprobar la
presencia de ARN y la carga proteica de la levadura al obtener un color verde
en esta solucin.
Haciendo uso de la levadura de panadera se realizaron procesos con el fin de
conocer y comprobar de la ley de Biuret. El mtodo comprende un ensayo
colorimtrico de un paso donde se cuantifica la formacin de un complejo
estable entre protenas y cobre. El complejo presenta un color violeta
caracterstico, el cual se da por la coordinacin de un tomo de cobre con
cuatro tomos de nitrgeno. El complejo se basa en la desprotonacin de los
grupos amida para formar el enlace con el cobre o por el establecimiento de un
enlace coordinado entre el metal y los pares de electrones libres de los tomos
de oxgeno y de nitrgeno del pptido. Despus de la adicin del reactivo se

requiere de tiempo para desarrollar una coloracin de Biuret 1, donde su

resultado fue positivo en la prueba realizada en el laboratorio, su coloracin fue
de color violeta, a pesar de que no fue completo el proceso puesto que no se
aadi el amortiguador (citrato de sodio al 0.15M).
Conclusiones
Los resultados obtenidos en la prctica de cada una de las pruebas realizadas
muestran que hay presencia de protenas y ARN, pero tambin una alta
concentracin de glucgeno lo que nos indica que esta es la principal fuente de
energa de la levadura.
Para que la extraccin y decantacin de estas macromolculas fuera exitosa se
acudi a medios como la centrifugacin y cambios de temperatura extremas
que permitieran afectar las solubilidades y as permitir con mayor facilidad
obtencin de estas.
Anexos
Preguntas
1. Cules son los fundamentos de las tcnicas de extraccin (cul es la utilidad de
cada uno de los pasos que se sigue y de cada uno de los reactivos que se
utiliza para purificar las macromolculas y de las pruebas de identificacin
empleadas en esta prctica)
Centrifugacin: La centrifugacin es un mtodo por el cual se pueden separar
solidos de lquidos, de diferente densidad median una centrifugadora, la cual
imprime a la mezcla un movimiento rotatorio con una fuerza de mayor
intensidad que la gravedad, provocando la sedimentacin del solido o de las
partculas de mayor densidad.
Ley de Biuret: El nombre de la reaccin procede del compuesto coloreado
formado por la condensacin de dos molculas de urea con eliminacin de
amonaco. Si una solucin fuertemente alcalina de sulfato cprico (CuSO4) se
aade a una solucin de protena se forma una complejo entre el ion cprico y
los enlaces peptdicos, con aparicin de una coloracin violeta-prpura. 3

2. Escriba las reacciones qumicas correspondientes de las diferentes pruebas de

identificacin utilizadas.
H2N- CO- NH2
H2N CO NH2
Urea
FICHAS TECNICAS

H2N CO NH2
Biuret

 cido tricloracetico al 5%

 Reactivo de yodo (lugol)

 Cloruro de sodio al 10%

 Reactivo de orcinol

 Sulfato de cobre

 Hidrxido de sodio

 Citrato de sodio

Referencias
1
2

k. Bachmann, Biologa para Mdicos

https://nadiazg.files.wordpress.com/2012/04/practica-2.pdf

Prcticas de Qumica Aplicada V1.7, Grado en Nutricin humana y diettica,

2011