Biologa en Acuicultura

DETERMINACIN CUALITATIVA DE CARBOHIDRATOS

I.

Introduccin
Los
carbohidratos son
compuestos
orgnicos,
formados
primordialmente por carbono, hidrgeno y oxgeno. Se encuentran
en muchos productos naturales y son una de las fuentes principales
de energa para los organismos quimiotrficos.
La unidad fundamental de los carbohidratos son los monosacridos,
estos
son
polihidroxialdehdos
o
polihidroxicetonas.
Los
monosacridos se combinan, con la prdida de molculas de agua
unindose mediante enlaces glicosdicos, formndose oligosacridos
y polisacridos.
En presencia de cidos
no oxidantes, los carbohidratos se
deshidratan y forman furfural si el monosacrido es una pentosa o
hidrximetilfurfural, si el monosacrido es una hexosa.
El almidn, o fcula, es una macromolcula compuesta de dos
polisacridos, la amilosa (en proporcin del 20%) y la amilopectina
(80 %).2 Es el glcido de reserva de la mayora de los vegetales, y la
fuente de caloras ms importante consumida por el ser humano.
La digestin involucra una serie de mecanismos de reaccin, entre
los que encontramos la adicin de agua, conocida como hidrlisis.
Para el caso del almidn, las amilasas secretadas por el pncreas y
las glndulas salivales, son las encargadas de degradar los
carbohidratos. De esta forma, los polisacridos que se encuentran en
el alimento, son degradados a glcidos ms simples con capacidad
para atravesar la pared digestiva o ser absorbidos en el intestino.

II.

Objetivos
II.1.
II.2.
II.3.
II.4.

II.5.

Bioqumica

Reconocer los diferentes tipos de carbohidratos en una

muestra problema.
Identificar la presencia de azucares reductores provenientes
de la hidrolisis acida de muestras de carbohidratos.
Cuantificar los productos de la reaccin enzimtica.
Reconocer y analizar las reacciones que se llevan en cada
una de las pruebas de Molish: Azcares reductores,
Seliwanoff: grupo funcional cetonico, Barfoed: diferenciar
monosacridos de disacridos.
Realizar pruebas cualitativas para detectar carbohidratos con
base en la formacin furfural.

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III.

IV.

MATERIALES
Una papa
Solucin de glucosa 1%, solucin sacarosa 1%
Solucin de maltosa 1%, solucin de almidn 1%
Solucin de fructuosa 1%
Solucin alcohlica de Alfa naftol 5%
cido sulfrico
Reactivo se Selivanoff
Reactivo de Barfoed
cido clorihidrico 1.5%
Solucin de Fehling A y B
Tubos de ensayo
Pipetas de 1.5 y 10 ml
Solucin enzimtica
Solucin cprica alcalina
Embudo
Vasos de precipitacin
Procedimiento experimental
IV.1.

Accin de los cidos oxidantes

IV.1.1. Reaccin de Molish: Es una reaccin general de los
carbohidratos que sirve para detectar su presencia en
una sustancia problema. Una reaccin negativa es una
buena evidencia de la ausencia de azucares, mientras
que una prueba positiva es simplemente indicadora de
la posibilidad de su existencia y requiere una mayor
investigacin.
Primero seleccionamos 4 tubos de ensayos, los
cuales lo en numeramos del I al IV.
Luego en el tubo I agregamos 2.0 ml solucin de
glucosa 1%.
En el tubo II agregamos 2.0 ml de solucin de
sacarosa 1%.
Al tubo III agregamos 2.0 ml de solucin de
maltosa 1%.
Al tubo IV agregamos 2.0 ml de solucin de
almidn 1%.
Luego a los IV tubos agregamos 02 gotas de
solucin de Alfa Naftol 5%.

Bioqumica

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Finalmente agitamos los tubos con cuidado y se

agreg cido sulfrico 2.0 ml en el tubo I, II, III,
IV.
TUBOS (ml)
I
II
III
IV
Sol. Glucosa 1%
2.0
---------Sol. Sacarosa 1%
---2.0
------Sol. Maltosa 1%
----- ----- 2.0 ----Sol. Almidn 1%
----- ----- ---2.0
Sol. Alfa naftol 5% (gotas)
02
02
02
02
Mezclar bien agitando el tubo, agregar lentamente
por las paredes.
cido sulfrico
2.0
2.0
2.0
2.0
Se pudo observar en la interface la aparicin de un
anillo rojo violeta oscuro, lo cual indica una reaccin
positiva. Esta reaccin es debida a la condensacin de
los furfurales formados por la accin del cido con el
alfa naftol.
IV.1.2. Reaccin de Selivanoff: Esta es una reaccin

especfica para azucares con grupo funcional cetonico.

Seleccionamos tres tubos de ensayo.
Colocamos a cada tubo un nmero (I, II, III).
En el tubo I agregamos 1.0 ml de solucin de
fructuosa 1%.
En el tubo II se agreg 1.0 ml de solucin de
Glucosa 1%.
Al tubo III se agreg 1.0 ml de solucin de
sacarosa 1%.
Finalmente en el tubo I, II, III se agreg 5.0 ml de
solucin de Selinanoff.

TUBOS (ml)
Sol. Fructuosa 1%
Sol. Glucosa 1%
Sol. Sacarosa 1%
Rx. Selinanoff

I
1.0
------5.0

II
---1.0
----5.0

III
-------1.0
5.0

Se mezcl bien y se someti a bao mara hirviendo.

Al intervalo de 3 minutos se observ y como an faltaba
la reaccin, se someti a 15 minutos ms.
La reaccin es positiva cuando se observa una
coloracin rojo cereza.

Bioqumica

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IV.1.3. Reaccin de Barfoed: Esta prueba se utiliza para

diferenciar monosacridos de disacridos.
Seleccionamos cuatro tubos de ensayos.
En el tubo I agregamos 1.0 ml de solucin de
glucosa 1%.
En el tubo II se agreg 1.0 ml de solucin de
fructuosa 1%.
Al tubo II se agreg 1.0 ml se solucin de
sacarosa 1%.
Al tubo IV se agreg 1.0 ml d solucin de matosa
1%.
Finalmente se agreg a los cuatro tubos 5.0 de
solucin de Barfoed.
TUBOS (ml)
Sol. Glucosa 1%
Sol. Fructuosa 1%
Sol. Sacarosa 1%
Sol. Maltosa 1%
Rx. Barfoed

I
1.0
-----------5.0

II
---1.0
--------5.0

III
------1.0
---5.0

IV
---------1.0
5.0

Mezclar bien y someter a bao mara hirviendo por

espacio de 5 minutos, controlar el tiempo en que
aparecen las reacciones positivas (precipitado rojo
naranja) en los diferentes tubos.
IV.1.4. Accin de los lcalis sobre los carbohidratos: Se
proceder a identificar el azcar reductor
correspondiente.
Procedimiento:

Bioqumica

Triturar en un mortero una papa sin cascara.

Agregar 5 10 ml de agua destilada, mezclar y
decantar el sobrenadante en un vaso se
precipitacin.
En un tubo medir 2 ml de sobrenadante anterior,
y en otro tubo de ensayo medir 2 ml de solucin
de almidn previamente preparado.
Aadir 2 ml de HCL 1.5% a cada uno de los
tubos.
Calentar los tubos de ensayo en bao mara
hasta que hierba durante 15 minutos; enfriar,
adicionar 5 gotas de KOH 1%.

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VI.

Aadir a los tubos anteriores 1ml de las

soluciones de Fehling A y B, luego someterlos
a ebullicin entre 3 y 5 minutos.

Conclusiones
En la reaccin de Molish en los cuatro tubos se obtuvo el
color adecuado ya que la reaccin fue positiva; en los tubos
se form un anillo color rojo violeta oscuro por la accin del
cido con el alfanaftol.
En la reaccin de Selivanoff en los tres tubos se obtuvo color
rojo-cereza como resultado aunque en diferentes tonos.
Reaccin de Barfoed; solo hubo reaccin en el primer tubo en
el cual se obtuvo color rojo naranja y los tres dems no hubo
ninguna reaccin porque algo fallo.
En la ltima reaccin en los dos tubos se obtuvo la misma
reaccin un color verduzco oscuro.

VII.

Discusiones

Severo Ochoa: nos dice que las pruebas colorimtricas para la

determinacin de azcares se basan en la reaccin especfica de estos
compuestos con determinados reactivos para dar derivados coloreados.
La formacin de color se toma como resultado positivo e indica la
presencia del compuesto en cuestin, mientras que la no formacin de
color es indicativo de su ausencia. Para cada prueba se utilizar un
control negativo, tambin denominado blanco de la reaccin, en el que el
reactivo se aadir a agua destilada (o solvente adecuado). Aunque en
la presente prctica se llevar a cabo slo la determinacin cualitativa de
azcares, las tcnicas que se describen pueden, tambin, ser utilizadas
para la determinacin cuantitativa de dichas biomolculas. Es importante
que el alumno conozca la estructura y propiedades qumicas de los
compuestos que se van a utilizar, por lo que se le recomienda que acuda
a sus notas de clase o a un libro de texto de bioqumica general para un
mejor entendimiento y aprovechamiento de la prctica y para presentar y
discutir los resultados obtenidos en el cuaderno de prcticas.

Jimnez M. (2011) nos dice que Los carbohidratos son compuestos

orgnicos, formados primordialmente por carbono, hidrgeno y oxgeno.
Se encuentran en muchos productos naturales y son una de las fuentes
principales de energa para los organismos quimio trficos. La unidad
fundamental de los carbohidratos son los monosacridos, estos son
polihidroxialdehdos o polihidroxicetonas.
Los
monosacridos
se
combinan, con la prdida de molculas de agua unindose mediante
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enlaces glucosricos, formndose oligosacridos y polisacridos. En

presencia de cidos no oxidantes, los carbohidratos se deshidratan y
forman furfural si el monosacrido es una pentosa o hidrximetilfurfural,
si el monosacrido es una hexosa. Cuando la reaccin de
deshidratacin se efecta con la ayuda del cido sulfrico concentrado y
el color se desarrolla con alfa naftol, la prueba se denomina reaccin de
Molisch.
VIII.

Cuestionario

Cul de las pruebas permite diferenciar aldosas de cetosas? F.R

La prueba de Seliwanoff es una prueba qumica que se usa para
distinguir aldosas y cetosas. Los azcares son distinguidos a travs de
su funcin como cetona o aldehdo. Si el azcar contiene un grupo
cetona, es una cetosa, y si contienen un grupo aldehdo, es una aldosa.
Esta prueba est basada en el hecho de que, al calentarlas, las cetosas
son deshidratadas ms rpido que las aldosas. (Seliwanof - 1887)

el almidn ingerido por el ser humano sufre el mismo tipo de

hidrolisis acida realizada en la prctica? Cmo se hidroliza?
En el ser humano le ha posibilitado sobrevivir ante carestas de carnes o
frutas merced a dietas ricas en almidn como el que se encuentra
en cereales, tubrculos y bulbos. Se considera que la capacidad de
asimilar el almidn por parte de los ancestros del humano ocurri unos 2
millones de aos antes del presente y est asociado al rpido desarrollo
del cerebro debido al rpido aporte de carbohidratos, los cuales son un
excelente combustible para la actividad cerebral. (Seliwanof 1887)

Representa la unin de molculas del almidon, glucgeno, y

celulosa
El almidn es un polmero formado por la unin de molculas de - D glucosa, unidas mediante enlaces glucosdicos a - 1 > 4.

El glucgeno es otro polmero de la glucosa, su estructura es idntica a

la de la amilo pectina, es decir, est constituido por la unin de
molculas de - D glucosa, mediante enlaces glucosricos - 1 > 4 y
Bioqumica

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con ramificaciones - 1 > 6 pero, el glucgeno tiene un mayor nmero

de ellas. Adems, el glucgeno es producido por las clulas animales y
no por las vegetales.

En los vegetales se encuentra otro polmero de la glucosa que se

conoce con el nombre de celulosa, y que est constituida por la unin de
molculas de - D - glucosa, unidas mediante enlaces glucosricos 1 > 4. La celulosa es un polmero no ramificado.

De los siguientes azucares cual no es reductor? Por qu?

Glucosa / lactosa/ sacarosa / fructuosa
Algunos disacridos, como la sacarosa, son azcares no reductores, lo
que significa que no pueden donar electrones a otras molculas. La
sacarosa se compone de dos azcares reductores, glucosa y fructosa, y
no contiene grupos carbonilo libres. La sacarosa se encuentra
naturalmente en muchos alimentos y, a menudo se aade a muchos
alimentos procesados contribuir dulzura.

Referencias bibliogrficas

Dep. de Bioqumica y Biologa Molecular, Edificio C-6 (Severo Ochoa),

Campus de Rabanales, Universidad de Crdoba,14071 Crdoba,
Espaa

massiel Jimnez 17 de noviembre de 2011

Facultad de Ciencias Biolgicas, Universidad Nacional de Trujillo,

Trujillo, Per.

Theodor Seliwanoff, Berichte der deutschen chemischen Gesellschaft,

1887, 20 (1), 181182.

Juan Jos Martnez Guerra

Bioqumica

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http://www.ciens.ucv.ve:8080/generador/sites/mmedina/archivos/Practica
14.pdf

http://quimicaorganica135lab.blogspot.pe/2011/11/determinacion-decarbohidratos_05.html

http://trabajosuniversitarios01.blogspot.pe/2011/11/determinacion-decarbohidratos.html

Bioqumica