SIGNIFICANT FIGURES, THE PERIODIC TANLE, AND MASS SPECTROMETRY: THE

CHALLENGE OF LARGE BIOMOLECULES

Overview
Mass spectrometry, a tool long used by chemists to identify small compounds,
is now being used by scientists in biological and health sciences as well as by
chemists to characterize large biomolecules. The development of new
techniques has made it possible to put intact large molecular ions in the gas
phase. Two techniques, matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI)(1)
and electrospray ionization (ESI) (2) have been particularly successful. Values
of mass as high as 80,000Da are now being reported from mass spectrometric
studies, and it is expected that the next improvements in instrumentation will
continue to expand the range of observable masses.
So how many significant figures are required for meaningful mass
spectrometric data for biomolecules?. The answer depends on what question is
being asked and on the molecular weight. To detect deamination, or formation
of a disulfide bond, the experimental measurements need to detect small mass
changes.
Table 1 illustrates that the number of significant figures needed depends on the
molecular weight of the substance.
From a mass spectrum, it is possible to obtain information on the composition
and structure of a compound. The former comes from measured ion masses
and the latter primarily from the way molecules fragment. We focus here on
the first topic, the masses of ions and molecules. This paper expands the
discussion presented in a recent article in this Journal (3) describing the
arithmetic used to predict isotopic cluster patterns. For large molecules, hand
calculations of isotope patterns give way to calculations by computer, and Web
sites that provide the programming to allow students and faculty to calculate
isotopic patterns for compounds of any size are listed. This paper also explores
the relationship between masses acquired by mass spectrometry and
calculated molecular weights. This relationship is important because mass
spectrometry date are now often routinely presented in lieu of molecular
weight data obtained by other means.
This discussion is likely to be useful to teachers of chemistry at different levels.
Examples that deal with accuracy, precision, and significant figures of
measurements are always useful.
All four molecules have known structures and are well characterized. The
stander way to calibrate a mass spectrometry signal to bracket the signal with
signals from compounds of known mass. For this purpose, it is necessary to

know the mass of the calibrant peaks quite accurately. The four compounds
above have been used in mass spectrometer calibration.

The challenge facing mass spectrometrists is twofold: the experimental

problem that involves spectrometer resolution (the ability to experimentally
differentiate two peaks) and the calibration problem (the assignments of mass
values). Two different definition of resolution are commonly used. Mass
spectrometrists most often define resolution R as R = M/M, where M=m/z and
M is the peak width at half maximum (Fig.1). This definition is different from
the one chromatographers and spectrophotometrists use: R=M.
Calculation of Isotope Patterns
To understand mass spectrometry of large molecules, it is useful to first
examine the mass spectrum of a small molecule such as acetic acid. The
typical electron impact spectrum recorded for acetic acid contains three peaks,
at 60, 61,62 m/z. The mass 60 peak, by far the most intense one, corresponds
to 12C2 1H4 16O2 and is called the monoisotopic peak. The two lower-intensity
peaks are due to molecules containing one or more atoms with higher masses.
The simple three-peak pattern for acetic acid belies the complexity of the
isotopic cluster. Statistical analysis, taking into account the mass and relative
abundance of each isotope quickly confirms this (4). Even with weight atoms,
the number of isotopic combinations is fairly staggering. With two carbon
isotopes. 12C and 13C, two hydrogen isotopes. 1H and 2H, and three oxygen
isotopes, 16O, 17O, AND 18O, 90 different isotopic combinations are possible,
ranging in mass from 60 to 70. This does not count positional isotope
possibilities such as 13CH312CO2H and 12CH3CO2H, since they have the same
mass.
The expected abundances (A) for any small isotopic composition can be
calculated fairly easily. For small molecules like acetic acid, all that is needed is
pen, paper, and calculator (or computer spreadsheet). Yergeys paper (4a)
gives an informative example 16O4717O218O1:
A=
where A is the expected abundance, 50 is the total number of oxygens, r16 is
the abundance of 18O, r17 is the abundance of 17O, and r18is abundance of
18O. To calculate the abundance for any formula, an element abundance is first
calculated for each element present. These element abundances are then
multiplied together go generate an abundance value for a particular isotopic
composition.

How many of acetic acids 90 masses can we separate and measure? This
depends on the resolution of the mass spectrometer being used and on the
relative abundances of the masses. With R=M/M, unit resolution can be
estimated as Runit= M/0.5. For acetic acid, unit resolution would be 120. Is this
enough resolution to separate the 99 isotopic combinations?
Table 2 shows the masses for a selection of abundant species in acetic acids
isotope cluster. A mass spectrometer operating at unit resolution would see the
six species listed in Table 2 as three peaks, one at m/z 60, one at m/z 61, and
one at m/z 62. In order to separate the three species shown at mass 61, a
much higher resolution, approximately 122000, would be needed
(61.02/0.0005=122000). Most mass spectrometers can resolve acetic acid to
unit resolution, but not to isotopic resolution. The masses and relative
abundances were calculated using the values shown in Table 3.
The arithmetic behind the fourth entry in Table 2 is as follows:
A=
To obtain a complete isotope distribution, calculations for all combinations need
to be done. Most people end up discarding the very low abundance ones. This
means some rounding error may be present in some calculations. Clearly, it is
easier to use a computer program already set up to calculate abundances, and
computer is really helpful when isotopic patterns for larger molecules are
needed. Thanks to the World Wide Web, anybody with a molecular formula can
obtain calculated isotopic cluster numbers. Perhaps the most comprehensive
site is the one designed by Mark Winter at the University of Sheffield. For the
other interesting software that mass spectrometrists use, Kermit Murray at
Emory University has compiled a good section on software.
The molecular weight of acetic acid is the average of the values shown in Table
2 weighted by abundance. The practical consequence of this calculation is that
the molecular weight does not correspond exactly to any of the peaks in acetic
acids isotope cluster.. its monoisotopic peak-the peak containing only the
lowest stable isotope for each element.
This discrepancy between measured mass values and calculated molecular
weights can be seen in the mass spectrum for the peptide bradykinin shown in
Figure 2. The MALDI mass spectrum shows an isotopic cluster for protonated
bradykinin. An arrow in the figure indicates where the value for the formula
weight (C50H74N15011) falls; its deviation from the monoisotopic peak is quiet
noticeable.
Table 4 contains the calculated unit resolution isotopic pattern for bradykinin.
To see the 10 isotope compositions found in the fourth peak in the cluster, a
resolution over 1,000,000 would be needed. Please note that the second peak

in the protonated bradykinin spectrum is significantly more abundant than the

second peak in acetic acids cluster.
As mass increases, the width of an isotopic cluster also increases. Figure 3
shows the calculated isotopic cluster for the very small protein (large peptide)
ubiquitin at two different resolutions. As can be seen, the resolution obtainable
with a mass spectrometer becomes very much of an issue with larger
molecules. The 20,000 resolution needed to easily resolve ubiquitin to unit
resolution can be routinely obtained using Fourier transform ion cyclotron
resonance mass spectrometry (FTMS)(6).
Protonated ubiquitin has the elemental formula C378H630N105O118 and
contains more than 1200 atoms. Unlike acetic acid and bradykinin, the
monoisotopic ion is not most abundance ion in the pattern. However, the most
abundant ion is still close to, but does not exactly match, the molecular weight
calculated for protonated ubiquitin. For ubiquitin, the monoisotopic peak is only
4% f the tallest peak in the cluster, making it a poor choice for calibration
purposes. The most abundant peak in an isotope cluster is going to have the
best signal-to-noise ratio and will be the easiest to measure.
With a small protein such as soybean trypsin inhibitor A, whose elemental
formula for the protonated molecule is C892H1393N238S6, the monoisotopic
peak is predicted to have a relative abundance of less than 0.01%compared to
the tallest peak in the isotope cluster. Although a resolution of 30,000 can
separate the peaks shown. So mass calibration using this cluster must depend
on calculating a value for the tallest peak using what is known about the
relative abundances of the isotopes and their significant figures. Interestingly,
the tallest peak has a multiplicity of 10.907-meaning that there 10.907 isotopic
combinations with a mass of this value. No current instrumentation is capable
of resolving this pattern completely.
Figure 5 shows the calculated isotopic cluster for the protonated protein
glycogen phosphorylase b, from rabbit muscle. The monoisotopic mass of
97,163.8 is 29 mass units tower than a peak with 0.01% relative abundance
compared to the tallest peak in the cluster, and 61 mass unit lower than the
tallest peak in the cluster. The formula used to calculated the isotopic pattern
was C4367H6812N1211O1249S30.
The challenge of large molecules
As we deal with larger and larger biomolecules, another interesting issue
arises. The ability to generate an accurate calculated isotope pattern is clearly
crucial. Such calculations require accurate masses and abundances for atoms.
Masses are known very accurately, often to as many as 10 significant figures.
Abundances of isotopes are not so accurately known. It comes as no surprise
that the number of significant figures in a calculated molecular weight is

dependent on the number of significant figures known for isotope abundances.

Not all the values listed in Table 3 have 6 significant figures. Note that only the
mass for the monoisotopic mass can be calculated to more than 6 significant
figures.
For proteins the most influential isotope in determining the isotope pattern is
13C/12C ratio varies with protein source (7, 8). Beavis (7) states that the
13C/12C ratio in proteins varies between 12.0107 and 12.0111. For soybean
trypsin inhibitor A, calculation of the average mass using , low and high ratios
results in a difference of 0.4 Da (20090.3 and 20090.7).
One way to do this experimentally is to burn a protein and compare the
13C/12C ratio the CO2 produced with a standard CO2, whose 13C/12C ratio is
known. Given the large number of proteins known today, this may be a bit
impractical. However, the take home message from soybean trypsin inhibitor
and glycogen phosphorylase b is be careful with significant figures when
dealing with large molecules.
Despite the significant figure limitations in known isotopic relative abundances,
two experimental mass spectrometric approaches to calibrating large molecule
spectra are available that address the significant figure limitations in isotopic
relative abundances. Marshall and coworkers have demonstrated the feasibility
of growing proteins in doubly depleted isotope media using 99.95% glucose
12C and 99.99% ammonium sulfate 14N (9). In the isotopic clusters for
biomolecules obtained from such experiments, the higher mass peaks are
greatly diminished. For example the FK506-binding protein isolated from such a
medium produced a spectrum is which the most abundant ion is the
monoisotopic ion.
Depleting the 13C present in a protein begs the question of how to calculate a
value for the tallest peak in an isotopic cluster.
However, several such proteins could be used to calibrate the peaks found in
normal proteins. Green and coworkers have shown the feasibility of internal
calibration with a small protein whose monoisotopic peak is present, in
assigning a value to the tallest peak in a well-resolved cluster of a larger
protein. This technique and Marshalls doubly depleted proteins method yield
precise experimental values but not calculated values for tallest peaks in large
molecule clusters. And it should be noted that the precision of the FTMS
experiment with large molecules allows differences between experimental
values for samples and calibrants to be meaningful even if calculation of the
actual value is limited by a lack of significant figures in the isotope abundance
data.
Conclusion

Proteins are not the only large biomolecules. Nucleic acids are often larger,
while carbohydrates and lipids come in all sizes. The above discussion shows
that care must be used in assigning mass values to large molecules. Currently
it is possible with FTMS to make mass measurements with great precision.
However, what is known about isotope abundances limits calculation from
formulas of numbers with the same number of significant figures and limits the
precision of the periodic table. Obtaining detailed elemental isotopic ratios for
specific samples or careful calibration with compounds whose monoisotopic
masses can be used will be necessary for reporting mass spectrometric
experimental results with numerous significant figures, especially for large
molecules. Meanwhile, being able to work with and calculate details of small
molecule isotope clusters is the first step in preparing students for the
challenge of large molecule calculations.

CIFRAS SIGNIFICATIVAS, TANLE PERIDICA Y ESPECTROMETRA DE MASAS: EL

DESAFO DE LAS GRANDES BIOMOLCULAS
Resumen
Espectrometra de masas, una herramienta de largo utilizada por los qumicos
para identificar compuestos pequeos, ahora se est utilizando por los
cientficos en las ciencias biolgicas y salud, as como por los qumicos para
caracterizar biomolculas grandes. El desarrollo de nuevas tcnicas ha hecho
posible poner los iones moleculares grandes intactos en la fase gaseosa. Dos
tcnicas, asistida por matriz de desorcin/ionizacin del laser (MALDI)(1) y Fire
orar ionizacin (ESI) (2) han sido particularmente exitosos. Valores de masa tan
alta como 80, 000Da estn ahora divulgando estudios de espectrometra de
masa, y se espera que las mejoras siguientes en instrumentacin seguir
ampliar el rango de masas observables.
As que cuntas cifras significativas se requieren datos de espectrometra de
masa significativa para biomolculas?. La respuesta depende de lo que
pregunta y el peso molecular. Para detectar la desaminacin, o formacin de un

enlace disulfuro, las mediciones experimentales necesitan detectar pequeos

cambios de masa.
Tabla 1 muestra que el nmero de cifras significativas es necesitada depende
del peso molecular de la sustancia.
De un espectro de masas, es posible obtener informacin sobre la composicin
y estructura de un compuesto. El primero viene del ion medido masas y esta
ltima sobre todo de la manera de fragmentan las molculas. Nos centramos
aqu en el primer tema, las masas de los iones y molculas. Este documento
ampla la discusin presentada en un reciente artculo en esta revista (3)
describir la aritmtica para predecir patrones de cluster isotpico. Para
molculas grandes, clculos de mano de los patrones de istopos dan lugar a
clculos por ordenador, y se enumeran los sitios Web que ofrecen la
programacin para permitir que estudiantes y profesores calcular patrones
isotpicos para compuestos de cualquier tamao. Este documento tambin
explora la relacin entre las masas por espectrometra de masas y pesos
moleculares calculados. Esta relacin es importante porque la fecha de la
espectrometra de masas ahora se presentan a menudo rutinariamente en
lugar de datos peso molecular obtenidos por otros medios.
Esta discusin es probable que sea til a los profesores de qumica en
diferentes niveles. Ejemplos con exactitud, precisin y cifras significativas de
las medidas que siempre son tiles.
Todas las cuatro molculas han conocido las estructuras y estn bien
caracterizadas. La manera de stander para calibrar una seal de
espectrometra de masas en el soporte de la seal con las seales de los
compuestos de masa conocida. Para ello, es necesario conocer con bastante
precisin la masa de los picos de calibrant. Los cuatro compuestos anteriores
se han utilizado en la calibracin del espectrmetro de masas.

El reto de spectrometrists masa es doble: el problema experimental que

implica la resolucin del espectrmetro (la capacidad para distinguir
experimentalmente dos picos) y el problema de calibracin (las asignaciones
de valores de masa). Se usan dos diferentes definicin de resolucin.
Spectrometrists masa suele definen resolucin R como R = M/M, donde M =
m/z y M es la anchura del pico a media mxima (Fig. 1). Esta definicin es
diferente de los cromatgrafos de uno y utilizar spectrophotometrists: R = M.
Clculo de patrones de istopos
Para entender la espectrometra de masas de molculas grandes, es til
examinar primero el espectro de masas de una molcula pequea como el

cido actico. El espectro de impacto de electrn tpico grabado de cido

actico contiene tres picos, a los 60, 61,62 m/z. La masa 60 un pico, el ms
intenso, corresponde a 12C 2 H 1 4 16O2 y se llama el pico de monoisotopic.
Los dos picos de menor intensidad se deben a molculas que contienen uno o
ms tomos con masas ms altas.
El patrn simple de tres picos para cido actico desmiente la complejidad del
cluster isotpico. Anlisis estadstico, teniendo en cuenta la abundancia
relativa y masa de cada istopo rpidamente confirma este (4). Incluso con
tomos de peso, el nmero de combinaciones isotpicas es bastante
asombroso. Con dos istopos de carbono. 12C y 13C, dos istopos del
hidrgeno. 1H y 2 H y tres istopos de oxgeno 16O, 17O, 18O, 90
combinaciones de istopos diferentes son posibles, que van en masa de 60 a
70. Esto no cuenta posibilidades posicionales istopo como 13CH312CO2H y
12CH3CO2H, ya que tienen la misma masa.
La abundancia esperada (A) para cualquier pequea composicin isotpica
puede calcularse fcilmente. Para molculas pequeas como el cido actico,
todo lo que se necesita es pluma, papel y calculadora (u hoja de clculo de
computadora). Papel de Yergey (4a) da un ejemplo informativo
16O4717O218O1:
A=
donde A es la abundancia esperada, 50 es el nmero de oxgenos, r16 es la
abundancia de 18O, r17 es la abundancia de 17O y abundancia r18is de 18O.
Para calcular la abundancia de cualquier frmula, una abundancia de elemento
primero se calcula para cada elemento. Estos elemento abundancia entonces
se multiplica juntos van generar un valor de abundancia por una particular
composicin isotpica.
Cuntos de 90 masas de cido actico podemos separar y medir? Esto
depende de la resolucin del espectrmetro de masas se utiliza y en la
abundancia relativa de las masas. Con R = M/M, resolucin de la "unidad"
puede estimarse como Runit = M/0.5. Para el cido actico, unidad resolucin
sera 120. Es esta suficiente resolucin para separar las combinaciones
isotpicas 99?
La tabla 2 muestra las masas de una seleccin de especies abundantes en
cluster de istopo de cido actico. Un espectrmetro de masas en la
resolucin de la unidad a ver que las seis especies listadas en la tabla 2 como
tres picos, uno en m/z 60, en m/z 61 y a 62 de m/z. Para separar las tres
especies que se muestra en total 61, una resolucin mucho mayor,
aproximadamente 122000, sera necesario (61.02/0.0005=122000).
Espectrmetros de masas ms pueden resolver cido actico a la resolucin de

la unidad, pero no a resolucin isotpica. Las masas y la abundancia relativa se

calcul utilizando los valores indicados en la tabla 3.
La aritmtica detrs de la cuarta entrada en la tabla 2 es la siguiente:
A=
Para obtener una distribucin completa de istopo, clculos para todas las
combinaciones hay que hacer. Mayora de las personas termina desechando la
abundancia muy baja unos. Se trata de que un error de redondeo puede estar
presente en algunos clculos. Claramente, es ms fcil utilizar un programa ya
configurado para calcular abundancias y computadora es realmente til
cuando se necesitan patrones isotpicos para molculas ms grandes. Gracias
a la World Wide Web, cualquier persona con un frmula molecular puede
obtener los nmeros de cluster isotpico calculado. Quizs el sitio ms
completo es el diseado por invierno de marca en la Universidad de Sheffield.
Por el otro software interesante que spectrometrists masa, Kermit Murray en la
Universidad de Emory ha compilado una buena seccin sobre software.
El peso molecular del cido actico es el promedio de los valores mostrados en
la tabla 2, ponderados por abundancia. La consecuencia prctica de este
clculo es que el peso molecular no corresponde exactamente a alguno de los
picos de cluster de istopo de cidos actico... su pico-el pico del monoisotopic
que contiene solamente el istopo estable ms bajo para cada elemento.
Esta discrepancia entre los valores de masa medicin y pesos moleculares
calculados se puede ver en el espectro de masas de la bradiquinina pptido
que se muestra en la figura 2. El espectro de masas MALDI muestra un cluster
isotpico de bradicinina protonada. Una flecha en la figura indica donde cae el
valor del frmula peso (C50H74N15011); su desviacin desde el pico de
monoisotopic es tranquilo sensible.
La tabla 4 contiene el patrn isotpico de unidad calculada resolucin de
bradicinina. Para ver las 10 composiciones de istopo encontrado en el cuarto
pico del clster, sera necesaria una resolucin de ms de 1.000.000. Tenga en
cuenta que el segundo pico en el espectro de bradicinina protonada es
significativamente ms abundante que el segundo pico en cluster de cido
actico.
Medida que aumenta la masa, la anchura de un cluster isotpico tambin
aumenta. La figura 3 muestra el cluster isotpico calculado para la ubiquitina
protena muy pequea (gran pptido) en dos resoluciones diferentes. Como
puede verse, la resolucin puede obtenerse con un espectrmetro de masas se
convierte en mucho de un tema con molculas ms grandes. La resolucin
20.000 deban resolver fcilmente la ubiquitina a la resolucin de la unidad

puede obtenerse rutinariamente usando Fourier transform ion ciclotrn

resonancia espectrometra de masas (FTMS)(6).
Protonada ubiquitina tiene la frmula elemental C378H630N105O118 y
contiene tomos de ms de 1200. A diferencia del cido actico y bradiquinina,
el ion monoisotopic no es ms iones de abundancia en el patrn. Sin embargo,
el ion ms abundante est todava cerca de, pero coincide exactamente, el
peso molecular calculado para ubiquitina protonada. De ubiquitina, el pico de
monoisotopic es slo 4% f el pico ms alto en el cluster, lo que es una mala
eleccin para fines de calibracin. El pico ms abundante en un clster de
istopo va a tener la mejor relacin seal a ruido y ser el ms fcil de medir.
Con una protena como inhibidor de la tripsina de soja A, cuya frmula
elemental para la molcula protonada es C892H1393N238S6, el pico de
monoisotopic se prev que tiene una abundancia relativa de menos de
0.01%compared que el pico ms alto en el clster de istopo. Aunque una
resolucin de 30.000 puede separar los picos se muestra. Calibracin de masas
tan usar este cluster debe depender de calcular un valor para el pico ms alto
con lo que se conoce sobre la abundancia relativa de los istopos y sus figuras
significativas. Curiosamente, el pico ms alto tiene una multiplicidad de
significado 10.907 eso combinaciones isotpica all 10.907 con una masa de
este valor. Instrumentacin actual no es capaz de resolver completamente este
patrn.
La figura 5 muestra el cluster isotpico calculado para la protonada protena
fosforilasa "b", de msculo de conejo. La masa de monoisotopic de 97,163.8 es
29 torre de unidades de masa que un pico con 0,01% de abundancia relativa
en comparacin con el pico ms alto en el grupo y 61 unidad masa menor que
el pico ms alto en el grupo. La frmula utilizada para calcular el patrn
isotpico fue C4367H6812N1211O1249S30.
El reto de molculas grandes
Que nos ocupamos de biomolculas ms grandes, se presenta otra cuestin
interesante. La capacidad para generar un patrn exacto calculado istopo es
claramente crucial. Tales clculos requieren masas exactas y abundancia de
tomos. Las masas conocen muy exactamente, a menudo a 10 cifras
significativas. Abundancia de istopos as que exactamente no se conoce.
Viene como ninguna sorpresa que el nmero de cifras significativas en el peso
molecular calculado es dependiente en el nmero de cifras significativas,
conocida por la abundancia de istopos. No todos los valores indicados en la
tabla 3 tienen 6 cifras significativas. Tenga en cuenta que slo la masa para el
monoisotopic se puede calcular la masa a ms de 6 cifras significativas.
Para las protenas el istopo ms influyente en la determinacin del patrn de
istopos es cociente 13C / 12C vara con la fuente de la protena (7, 8). Beavis

(7) afirma que el cociente 13C/12C en protenas vara entre 12.0107 y 12.0111.
De inhibidor de tripsina de soya A, clculo de los ratios promedio de masa usar,
altos y bajos resulta en una diferencia de 0.4 Da (20090.3 y 20090.7).
Una forma de hacerlo experimentalmente es quemar una protena y compara
la relacin de 13C/12C del CO2 producido con CO2 estndar, cuyo cociente
13C/12C se conoce. Dado el gran nmero de protenas conocidas hoy en da,
esto puede ser un poco imprctico. Sin embargo, el mensaje de inicio toma de
inhibidor de tripsina de soja y glucgeno fosforilasa "b" es tener cuidado con
cifras significativas cuando se trata de molculas grandes.
A pesar de las limitaciones de la cifra significativa de abundancias isotpicas
conocidas, existen dos enfoques de espectrometra de masa experimentales
para calibrar espectros de molcula grande que resuelven las limitaciones de
cifra significativa en abundancias isotpicas. Marshall y colaboradores han
demostrado la viabilidad del cultivo de protenas en medios isotpica
doblemente empobrecido con 99.95% glucosa 12C y 99.99% sulfato de amonio
14N (9). En los clsteres isotpicos para biomolculas obtenidos de dichos
experimentos, los picos ms altos de la masa se disminuyen grandemente. Por
ejemplo la protena de unin a FK506 aislada del medio producida un espectro
es que el ion ms abundante es el ion monoisotopic.
Agotar el presente en una protena de 13C plantea la pregunta de cmo
calcular un valor para el pico ms alto en los clsteres isotpicos.
Sin embargo, varias de estas protenas podran utilizarse para calibrar los picos
encontrados en protenas normales. Verde y compaeros de trabajo han
demostrado la viabilidad de calibracin interna con una protena cuyo pico
monoisotopic est presente, en asignar un valor al pico ms alto en un grupo
bien resuelto de una protena ms grande. Esta tcnica y el mtodo de
Marshall protenas doblemente agotado rendimiento precisa valores
experimentales pero no calculados valores de picos ms altos en grupos de
molculas grandes. Y debe tenerse en cuenta que la precisin del experimento
FTM con grandes molculas permite diferencias entre los valores
experimentales para las muestras y calibradores para ser significativo incluso
si el clculo del valor actual est limitada por la falta de cifras significativas en
los datos de abundancia de istopos.
Conclusin
Las protenas no son las nica grandes biomolculas. Los cidos nucleicos son
a menudo ms grandes, mientras que los carbohidratos y lpidos en todos los
tamaos. La discusin anterior muestra que el cuidado debe ser utilizado en
asignar valores de masa a grandes molculas. Actualmente es posible con FTM
para hacer masas medidas con gran precisin. Sin embargo, lo que se conoce
acerca de la abundancia isotpica limita el clculo de frmulas de nmeros con

el mismo nmero de cifras significativas y limita la precisin de la tabla

peridica. Obtencin de relaciones isotpicas elementales detalladas para
muestras especficas o calibracin cuidadosa con compuestos cuyas masas
monoisotopic se pueden utilizar ser necesario informar resultados
experimentales espectrometra de masa con numerosas cifras significativas,
especialmente para las molculas grandes. Mientras tanto, ser capaz de
trabajar con y calcular datos de grupos de istopos de molcula pequea es el
primer paso en la preparacin de los estudiantes para afrontar el reto de los
clculos de molcula grande.