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CUESTIONARIO

1. Explique en que se basa la prueba del Indol.


La prueba de indol es un ensayo cualitativo utilizado para diferenciar
microorganismos en base a la capacidad para separar indol a partir de Ltriptofano.
Es necesario el crecimiento previo del microorganismo en estudio en
medios de cultivo con alto contenido de L-triptofano, como ser los
medios semislidos SIM Medio y MIO Medio o el medio lquido Agua
Triptona.
Al agregar el reactivo de Ehrlich al medio de cultivo, el indol generado se
combina con el grupo aldehdo del p-dimetilamino benzaldehido del
reactivo incorporado y se forma un complejo de color rojo.
Observar el color desarrollado al agregar el reactivo revelador:
Positivo: color rojo en la interfase del reactivo y el medio de cultivo.
Negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento.
2.

Explique que tipos de fermentacin se puede dar en las reacciones


bioqumicas de bacterias.

3. Haga una relacin de bacterias y hongos que se deben encontrar en


agua
a. Los Streptococos fecales: son bacterias anaerbias o aerbias
facultativas, conocidas como bacterias del cido lctico. El hbitat
natural de estos microorganismos es el aparato digestivo de los
animales de sangre caliente. Se han utilizado, junto con los
coliformes fecales, para diferenciar la contaminacin fecal
humana de la de otros animales de sangre caliente. Se ha
observado que la cantidad de coliformes y streptococos fecales
descargados por los seres humanos, son significativamente

diferentes de las cantidades descargadas por el resto de animales.


As, la relacin CF/SF contenidos en una muestra, puede usarse
para demostrar el tipo de contaminacin, humana o animal.
CF/SF < 1 procedencia animal
CF/SF > 4 procedencia humana
b. Los Actinomicetos: son bacterias Gram (+), normalmente no
mviles pero si lo son es por la presencia de flagelos. Estas
bacterias producen olor a tierra mojada en el agua, por lo que
afectan a la calidad y la aceptacin pblica de los suministros
municipales de agua en muchas partes del mundo. Son uno de los
olores ms difciles de eliminar en las plantas de tratamientos
convencionales. Los actinomicetos crecen sobre material en
descomposicin, por lo que transforman una gran variedad de
residuos orgnicos complejos formando parte importante de la
poblacin de lagos, ros y suelos.
c. Los Pseudomonas: son bacilos flagelados Gram (-) e incluyen un
grupo de bacterias muy heterogneas de una amplia distribucin
en la naturaleza, capaces de degradar una gran variedad de
compuestos orgnicos. El grupo zooglea est formado por
bacterias que residen tpicamente en aguas contaminadas y
reactores aerbicos de residuos.
d. Las bacterias acidognicas, acetognicas y metanognicas
son muy importantes en los procesos de digestin anaerbia,
donde la materia orgnica y los fangos contenidos en el agua son
convertidos, bajo condiciones anaerbicas, en los gases dixido de
carbono y metano. Este proceso se desarrolla con detalle en otros
artculos sobre la digestin anaerbia. A continuacin se detallan
algunos de los gneros patgenos ms conocidos relacionados
con el agua:
i. Gnero Shigella: Aunque la mayora de las epidemias de
shigelosis se transmiten por alimentos contaminados o por
contagio persona-persona, tambin pueden ir vehiculadas
por el agua potable. Esto se debe, con frecuencia, a la
interrupcin accidental del tratamiento del agua, excretas
transportadas por inundaciones o por coincidencia de una
va de agua tratada con una que no lo est como es el caso
de las aguas residuales.
e. Gnero Campylobacter. Bacteria propia de la flora intestinal de
mamferos y aves, que puede ser aislada en las aguas con
elevado nivel de contaminacin fecal.
i. Vibrio cholerae. Microorganismo responsable del clera,
enfermedad diarreica de leve a grave que est asociada a
las epidemias de pases en desarrollo aunque tambin han
aparecido en pases en vas de desarrollo. Se trata de un
patgeno autctono de aguas salobres y es posible que las
aguas de los estuarios contribuyan a la transmisin hdrica
del clera y a su persistencia en el ambiente.

ii. Legionella. Estas bacterias se han visto implicadas en


brotes a partir de 1947. Estudios epidemiolgicos han
demostrado que se transmiten por el aire y que estn
vinculados a ambientes hmedos. Los orgenes de la
mayora de los brotes han sido el agua contaminada de las
torres de refrigeracin del aire acondicionado o el sistema
de distribucin del agua potable.
Los hongos encontrados pertenecen principalmente a los gneros
Cladosporium, Alternaria y Penicillium.

4. Explique en qu consiste la Prueba del Nmero ms probable (NMP), e


indique que resultado obtuvieron.
EL METODO DE NUMERO MAS PROBABLE (NMP) es una estrategia
efeciente de estimacin de densidades poblacionales especialmente
cuando una evaluacin cuantitativa de clulas individuales no es
factible. La tcnica se basa en la determinacin de presencia o ausencia
(pos o neg) en rplicas de diluciones consecutivas de atributos
particulares de microorganismos presentes en muestras de suelo u otros
ambientes. Por lo tanto, un requisito importante de este mtodo es la
necesidad de poder reconocer un atributo particular de la poblacin(es)
en el medio de crecimiento a utilizarse. El estimado de densidad
poblacional se obtiene del patrn de ocurrencia de ese atributo en
diluciones seriadas y el uso de una tabla probabililstica.
Algunas de las ventajas del NMP son: (i) la capacidad de estimar
tamaos poblacionales basados en atributos relacionados a un proceso
(selectividad); por ejemplo se puede determinar la densidad poblacional
de organismos que pueden nodular leguminosas en una muestra de
suelo usando el mtodo de infeccin de plantas, (ii) provee una
recuperacin uniforme de las poblaciones microbianas de suelos
diversificados, (iii) determina slo organismos vivos y activos
metablicamente, y (iv) suele ser ms rpido e igual de confiable que los
mtodos tradicionales de esparcimiento en platos de cultivo, entre otros.
1. Muestras: Colecte aspticamente muestras frescas de suelo (10 g)
de varios lugares u obtenga muestras de agua (10 ml) de lagos, ros o
charcas.
2. Extraccin de microorganismos viables: Para muestras de suelo,
las clulas podrn ser removidas y homgenizadas aadiendo 1 g de
muestra a un tubo de ensayo que contenga 9 ml de solucin salina.
Agite moderadamente por 5 minutos en un vortex.
3. Diluciones en serie: El extracto de suelo puede ser diluido
seriadamente transfiriendo 1 ml a un tubo con 9 ml de 0.85% NaCl. Cada
transferencia corresponde a una dilucin de 1 en 10. Repita en serie el
procedimiento de dilucin hasta alcanzar la dilucin 10-7. Para muestras
lquidas, mezcle bien la muestra y proceda a preparar las diluciones
seriadas como fueron descritas anteriormente.

4. Placas Petri: Utilizando un marcador, divida la placa petri en cinco


zonas de igual tamao. Use una placa por cada muestra. Rotule cada
zona con el factor de dilucin a ser inculado:

5. Inoculacin: Transfiera 5 l de la dilucin apropiada al rea


correspondiente. Repita esta operacin cinco veces por cada dilucin:

6. Permita que el incculo seque sobre el medio de crecimiento. Selle la


placa con un tirillade parafina. Invierta la placa e incube a 25C por 7
das.
7. Evaluacin de crecimiento: Para cada dilucin en asendencia
evalue el crecimiento o no crecimiento sobre cada rplica incoculada.
Reporte los resultados como se indican en el ejemplo a continuacin:

5. Haga un resumen de todo el anlisis de agua

SIM: Si hay motilidad, hay difusin. No hay produccin de H2S. Indol positivo,
si hubo enzima triptofanasa porque se hidroliso la muestra porque cambio de
color.

LIA: Presencia de gas. Negativo H2S.

CITRATO DE SIMMONS: Positivo vira a color azul, la bacteria usa como fuente
de carbono al citrato.

TSI: Positivo a gas. Acido/Acido. Negativo a presencia de H2S. Negativo a urea.

MRVP: Positivo a glucosa. Negativo a rojo de metilo no hubo fermentacin


cido mixta. Degrada por va oxidativa a la glucosa y consume el oxgeno.
Negativo a VP, no produce acetina.

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