Manual de Parasitologia 2014 W

INDICE
INTRODUCCIN A LA PARASITOLOGA ..................................................................................... iii

REGLAMENTO DEL LABORATORIO DE PARASITOLOGA ....................................................... v
PRCTICA #1 .................................................................................................................................... 1
MICROSCOPA.............................................................................................................................. 1
PRCTICA # 2 ................................................................................................................................... 6
ASOCIACIONES BIOLGICAS ................................................................................................... 6
PRACTICA #3 (Primera Parte) ........................................................................................................ 9
TIPOS DE MUESTRAS: RECOLECCIN, MANEJO Y CONSERVACIN ............................. 9
EXAMEN FECAL MACROSCPICO .........................................................................................10
PRCTICA #4 ...................................................................................................................................13
PROTOZOARIOS INTESTINALES .............................................................................................13
PRACTICA #5 ...................................................................................................................................17
CULTIVO DE PROTOZOARIOS DE VIDA LIBRE.....................................................................17
PRACTICA # 6 ..................................................................................................................................21
CULTIVO DE AMEBAS DE VIDA LIBRE POTENCIALMENTE PATGENAS ......................21
PRACTICA # 7 ..................................................................................................................................24
COPROPARASITOSCOPICO EN FRESCO Y TINCIONES TEMPORALES .........................24
PRCTICA #8 ...................................................................................................................................27
CONCENTRACIN DE PARSITOS POR FLOTACIN (FAUST) ........................................27
PRACTICA # 9 ..................................................................................................................................29
DIAGNSTICO DE PARSITOS PROTOZOARIOS TISULARES..........................................29
PRACTICA #10 .................................................................................................................................31
ESTUDIO COPROPARASITOSCOPICO DE CONCENTRACIN POR SEDIMENTACIN Y
TINCIONES PERMANENTES .....................................................................................................31
PRACTICA # 11 ................................................................................................................................35
PLATELMINTOS ...........................................................................................................................35
PRACTICA #12 .................................................................................................................................37
NEMATELMINTOS (CLASE NEMATODA)..................................................................................37
PRACTICA #13 .................................................................................................................................40
ARTHROPODA .............................................................................................................................40
BIBLIOGRAFA .................................................................................................................................42
i
ii
INTRODUCCIN A LA PARASITOLOGA
La parasitologa estudia la interaccin entre dos organismos de distintas especies
en la cual uno de los asociados recibe un beneficio (parsito) mientras el otro
asociado recibe un dao o perjuicio (husped). Se denomina parsito a todo aquel
organismo que vive a expensas de otro organismo provocndole un dao.
Aunque los microorganismos patgenos, como los virus, algunas bacterias y
hongos, tambin son parsitos, stos son estudiados por otras ramas de la
microbiologa, como la virologa, la bacteriologa y la micologa respectivamente. La
parasitologa es una rama de la microbiologa que estudia las infecciones producidas
por tres grupos de microorganismos: los protozoarios, los helmintos (gusanos) y los
artrpodos. Estos organismos son eucariotas y contienen estructuras y organelos
similares a los de las clulas humanas, presentan pared celular y se consideran
animales. Por ello es muy difcil crear antibiticos eficaces y seguros contra los
parsitos, ya que la mayor parte de los frmacos antiparasitarios ejercen algunos
efectos adversos en las clulas de los humanos.
Los protozoarios son animales unicelulares, que varan grandemente en forma y
tamao. Se encuentran en casi todos los hbitats hmedos y tienen gran importancia
ecolgica en la descomposicin y en la formacin de la materia orgnica. Tambin
actan como depredadores de otros microorganismos lo que los hace eslabones
fundamentales en la cadena trfica. Algunos viven como comensales o en
asociaciones mutualistas dentro del tracto intestinal de los animales; otros muchos
son parsitos, estos presentan una marcada especificidad por los amnales que
infectan. Dentro del reino Protoctista subreino Protozoa se encuentran varios grupos
parsitos para el ser humano, los Phylas de importancia mdica son:
Sarcomastigophora (flagelados y amibas): incluye los flagelados que se

encuentran en la sangre (Trypanosoma cruzi), tejido linftico (Leishmania spp.) o
aparato digestivo (Giardia lamblia). Entre los sarcodina (amebas) de importancia
mdica se tiene a Entamoeba histolytica (disentera amebiana), y a las amibas de
vida libre como Acanthamoeba sp. y Naegleria fowleri.
Apicomplexa (esporozoarios): se localizan en la sangre, los tejidos o en el intestino

y presentan reproduccin sexual y asexual. Entre los ms importantes se
encuentran Plasmodium sp. (Paludismo),
Pneumocystis carinii (neumona),
Toxoplasma gondii (toxoplasmosis) y Cryptosporidium parvum (cryptosporidiasis).
Ciliophora (ciliados): la nica especie de protozoario ciliado que tiene la capacidad

de provocar infecciones en el ser humano es el Balantidium coli (disentera).
Microsporidios: parsitos intracelulares obligados que se caracterizan por generar

esporas de diminutos tamaos. Crean infecciones en varias partes de la anatoma
del cuerpo humano.
Cerca del 10 % de la poblacin mundial est infectada con E. histolytica. El

paludismo es la segunda causa de muertes relacionadas con enfermedades
iii
infecciosas a nivel mundial. La neumona por Pneumocystis carinii es la principal

causa de muerte en enfermos de SIDA.
Los Helmintos incluyen animales metazoarios denominados gusanos (redondos y
planos) que miden desde unos mm hasta varios metros. Tienen ciclos de vida
complejos en los cuales se observan varios huspedes. Generalmente tienen tres
fases en su ciclo de vida: Huevo, larva y adulto. Los huevos son microscpicos, as
como algunas de sus fases larvarias o etapas juveniles. Los Helmintos de
importancia mdica pertenecen a dos grandes Phylas:
Phylum Aschelminthes: (gusanos redondos), por ejemplo Ancylostoma

duodenale, Ascaris lumbricoides, Enterobius vermicularis, Necator americanus,
Onchocerca volvulus, Strongyloydes stercolaris, Trichinella spiralis y Trichuris
trichura.
Phylum Platyhelminthes: (gusanos planos), como Taenia sp, Hymenolepis sp,

Echinococcus granulosus, Dypylidium caninum, Fasciola heptica, etc..
Todos las etapas de un parsito pueden ser desarrolladas en un slo husped o en

varios, o parte en un husped y parte en el medio ambiente.
En el caso de los parsitos que desarrollan ciclo sexual y asexual, se le denomina
husped intermediario a aqul donde forma las etapas asexuales. Y husped
definitivo, donde desarrolla la etapa sexual.
El parsito despus de penetrar en un husped se establece en un rgano blanco o
en tejidos. La mayora de los parsitos que entran por ingestin de alimentos o agua
contaminados con heces (va fecal-oral) pasan su ciclo de vida en el aparato
digestivo. Los que penetran de manera directa a travs de la piel o se introducen a
travs de un vector, infectan la sangre o los vasos sanguneos o establecen
infecciones en los tejidos subcutneos u rganos principales, incluso en la mdula
sea y en los tejidos linfticos.
Diagnstico de parsitos en el laboratorio.
Se basa sobre todo en el hallazgo del parsito en diferentes fluidos corporales,
como son: Lquido Cefalorraqudeo, tejidos infectados, materia fecal, sangre y sus
derivados, orina,
expectoracin, exudados vaginales y uretrales, biopsias,
necropsias, y algunos de ellos los de mayor tamao como organismos completos.
Casi todos los parsitos se pueden detectar en muestras de los tejidos infectados,
observadas al microscopio. Cuando el parsito es un protozoario, las muestras se
tien y se examinan al microscopio, donde se pueden detectar trofozotos (formas
metablicamente activas que se nutren del husped) o quistes (formas latentes).
Cuando el agente infeccioso es un helminto, el diagnstico se basa en el hallazgo de
huevos del gusano o de larvas en heces, microfilarias en sangre, gusanos adultos en
los tejidos subcutneos o en el aparato digestivo.
iv
REGLAMENTO DEL LABORATORIO DE PARASITOLOGA

Introduccin al laboratorio de Parasitologa
En esta prctica introductoria se explicar al alumno las bases del funcionamiento

del laboratorio, las reglas de seguridad y en general la organizacin durante el
semestre.
Se le entregar por escrito el programa de prcticas y el reglamento interno.
Se explicar la forma de evaluacin en cada prctica, as como la evaluacin final.
Se le asignarn tareas y se formarn los equipos de trabajo. En esta sesin cada
alumno se integrar a un equipo y tendr una idea clara de lo que se realizar
durante el semestre.
Se revisar en general lo que constituye el laboratorio de parasitologa y se
discutir el reglamento interno existente, puntualizando en los riesgos inherentes a
este laboratorio, los procedimientos de seguridad que se deben conocer y las
reglas de seguridad que deben seguirse dentro del laboratorio.
El alumno debe conocer las reglas que hay que respetar y observar en el
laboratorio, para evitar el riesgo de contaminacin con los parsitos estudiados,
tanto personal como de sus compaeros; igualmente debe conocer el manejo
adecuado de los residuos peligrosos biolgico infecciosos.
Se recordar a los alumnos el uso y cuidados del microscopio y se les har
conocer los registros obligatorios que realizarn durante el semestre.
El sistema de Calidad de los laboratorios obliga a los alumnos, maestros, y
personal de la escuela a que realicen actividades obligatorias como el manejo
adecuado de los residuos peligrosos biolgico infecciosos (Nom- 087-Ecol-SSA12002 u otra ms reciente si existe), y el registro en las bitcoras de uso de los
equipos, entre otros.
REGLAMENTO DE LOS LABORATORIOS DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA
Son los espacios acadmicos donde se llevan a cabo prcticas de diferentes

asignaturas con el objeto de que los alumnos refuercen sus conocimientos.
Para los fines de este reglamento:
1. El reglamento debe ser ledo ntegramente en la primera sesin de trabajo de
cualquier curso que requiera uso del laboratorio.
2. Los alumnos sern asignados el primer da del curso a una mesa de trabajo, para
todo el semestre. Ellos sern responsables del material y equipo que se
proporcione a esa mesa y de la limpieza de la misma al finalizar la prctica.
3. Al inicio del semestre se dotar a cada subgrupo del equipo y material que
utilizar, responsabilizndose de la integridad de los mismos, para entregarlos al
final de la prctica o al finalizar el programa de prcticas, segn lo indique el
instructor. El material o equipo que sea destruido o perdido ser restituido por los
alumnos responsables.
4. Los alumnos no deben entrar y salir del laboratorio a voluntad. Deben esperar
fuera del laboratorio hasta que el maestro o instructor llegue y les indique que
pueden entrar.
5. Si los maestros o instructores no se presentan al laboratorio, las prcticas no
podrn realizarse. Es responsabilidad de los tcnicos administrativos que los
alumnos permanezcan fuera del laboratorio hasta la llegada del instructor, as
como la de comunicar a la Direccin por escrito la razn de la suspensin de
prcticas.
6. Los alumnos deben usar bata blanca, larga y limpia para entrar a cualquier
laboratorio. Deben ponerse la bata antes de ingresar.
7. Est prohibido fumar o comer dentro de los laboratorios.
8. Los alumnos deben mantener el orden dentro de los laboratorios.
9. Deben presentarse al laboratorio adecuadamente preparados, habiendo
consultado previamente en su manual la prctica correspondiente. De no cubrir
este requisito no podrn efectuar la prctica.
10. El alumno debe leer con detenimiento la tcnica a seguir, en caso de existir dudas
consultar al profesor antes de iniciar la prctica.
11. Deben emplear las tcnicas descritas en el manual de laboratorio y no improvisar.
12. El profesor debe instruir al alumno sobre la manipulacin de organismos de alto
riesgo, as como el uso de la campana de seguridad, y de las reas de esterilidad.
13. El aseo del laboratorio es de primordial importancia, por lo que los alumnos deben
de cooperar en el mantenimiento de la limpieza de su mesa de trabajo y el material
que as lo requiera. La basura debe colocarse en los recipientes correspondientes.
Las substancias corrosivas o contaminadas se dejarn en los depsitos indicados
por el instructor. Por ningn motivo deben tirarse residuos o desperdicios a los
lavabos.
vi
14. Los alumnos son responsables de que las llaves de agua y de gas de su mesa
queden debidamente cerradas al finalizar cada prctica.
15. Los membretes o etiquetas para marcar el material o instrumentos deben ser
humedecidos con agua de la llave, nunca con saliva.
16. Los alumnos deben abstenerse de colocar sobre las mesas de trabajo cualquier
material que no sea el requerido para la realizacin de la prctica, por ejemplo:
ropa, bolsas de mano, libros, etc., mismos que debern guardarse en los lugares
asignados por el instructor.
17. En caso de cualquier accidente personal de equipo o material de trabajo debe
notificarse inmediatamente al maestro o al instructor.
18. No se debe pipetear con la boca, sino que se debe usar siempre una propipeta o
bulbo.
19. Los maestros y alumnos deben planear su trabajo de manera que la prctica se
complete puntualmente y puedan salir del laboratorio 10 minutos antes de la
siguiente clase o prctica, previendo el tiempo que utilizarn para recoger, ordenar
el material y limpiar su mesa.
20. Por ningn motivo deben permanecer los alumnos en el laboratorio despus de la
salida del maestro o instructor.
21. Los alumnos deben desinfectar la mesa con un algodn impregnado en etanol de
70% (u otros desinfectantes proporcionados por el instructor) y deben lavarse las
manos con agua y jabn al finalizar cada prctica.
22. Los alumnos que tengan el pelo largo deben mantenerlo recogido para evitar
accidentes, sobre todo al trabajar con mecheros. Igualmente no deben entrar con
cachuchas.
23. En las prcticas en que se manejen especies animales de laboratorio, los alumnos
se encargarn de conseguirlos directamente del bioterio y trasladarlos al
laboratorio
24. Los alumnos que no aporten el material que les sea solicitado para alguna de las
prcticas no podrn entrar al laboratorio.
25. Dadas las caractersticas funcionales de cada laboratorio el alumno deber
someterse a las normas especiales, marcadas en cada uno de ellos.
26. Se deben evitar los desplazamientos innecesarios por el Laboratorio. Los
microorganismos deben manejarse cerca de la flama del mechero.
27. Cuando se manipulen microorganismos evite hablar innecesariamente o llevarse
las manos a la nariz, boca, ojos etc.
28. Utilice los recipientes adecuados para depositar los residuos peligrosos, biolgico infecciosos que se generen en la realizacin de la prctica. No tirar nada en los
lavabos. El material de desecho no contaminado como papeles de envoltura
depositarlos en los recipientes de basura comn.
29. Cuando se utilice luz ultravioleta debe tomarse en cuenta que la exposicin a esta
radiacin es peligrosa.
vii
30. En caso de contaminacin bacteriana o con parsitos, o en caso de accidentes en

el Laboratorio, notificar inmediatamente al instructor o al personal tcnico para
tomar las medidas higinicas y de seguridad apropiadas, as como su registro.
31. Incubar el material el tiempo que se indique, en caso contrario ste ser
desechado.
32. No almacenar material en el refrigerador, sin instrucciones del profesor.
33. Esta estrictamente prohibido sacar del Laboratorio cultivos o cepas a menos que
as lo indique el maestro.
34. Al finalizar la prctica entregar el material empleado debidamente ordenado al
profesor.
SANCIONES
Ante el incumplimiento de estas normas por el alumno, ser sancionado por el

profesor:
1. En la primera ocasin suspendiendo al alumno de la prctica correspondiente a
esa sesin, y se le enviar un memorndum por escrito, con copia a su expediente
y a la Direccin General de Servicios Escolares.
2. En la segunda ocasin se le suspender por tres sesiones seguidas.
3. Ante otra reincidencia ser suspendido de las prcticas durante todo el semestre.
NORMAS ESPECIALES DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA Y
PARASITOLOGIA.
El laboratorio de Microbiologa y Parasitologa es un lugar convenientemente
habilitado con las debidas precauciones donde se pueden manejar y examinar
organismos y patgenos. Al manejar cualquier tipo de muestra se debe tener en
cuenta la posibilidad de riesgos que pueden ser biolgicos, del ambiente del
Laboratorio o riesgos asociados como el manejo de substancias qumicas, elctricos ,
fugas de gas, etc.
Todos los organismos que se manipulen deben ser manejados con precaucin por su
potencial patogenicidad. Todos deben ser entregados al profesor al final de la
prctica, para que ser guardados o desechados en la forma conveniente.
viii
PRCTICA #1
MICROSCOPA
OBJETIVO DE LA PRCTICA.
Que el alumno se familiarice con las partes del microscopio de luz, con su manejo y
sus cuidados. Que conozca el fundamento de las diferentes clases de microscopios.
INTRODUCCIN.
El microscopio es el instrumento ms frecuentemente utilizado y el ms til en el
laboratorio de microbiologa. Este, proporciona la amplificacin o agrandamiento
aparente que nos permite ver organismos y estructuras invisibles a simple vista, con
una amplificacin desde cien a cientos de miles de veces. Las dos categoras de los
microscopios disponibles son los microscopios pticos (de luz) y los microscopios
electrnicos.
Los microorganismos son medidos en micrmetros (m). Las bacterias miden cerca
de 1 m. Los virus miden mucho menos de 1m. Los dems microorganismos miden
varios micrmetros.
Unidades de medicin utilizadas en microbiologa:
-6
1 m = 10 m
-3
1 m = 10 mm
-9
1 nanmetro (nm) = 10 m
1 m = 1000 nm
1 = 10
-10
El microscopio de luz (ptico):

Microscopio Simple: presenta un solo lente.
Microscopio compuesto: utiliza un sistema de lentes pticos que van amplificando la
imagen sucesivamente y comprende:
1.- Microscopio de Campo Claro
2.- Microscopio de Campo Obscuro
3.- Microscopio de Fluorescencia
4.- Microscopio de Contraste de Fases.
1. El Microscopio de Campo Claro: Es el instrumento ms ampliamente utilizado
para microscopa de rutina. Aqu el rea observada est brillantemente iluminada y los
1
objetos en estudio aparecen ms obscuros. Generalmente producen un aumento til

de unos l000 dimetros. La amplificacin se logra mediante el uso de sistemas de
lentes diseadas y acomodadas para proporcionar la amplificacin en forma ptima.
Presenta lentes en el condensador, en los objetivos y en los oculares. La lente del
condensador enfoca un cono de luz sobre el campo donde se coloca la muestra.
Algunos de los rayos de luz de este cono pasan directamente a la lente del objetivo
para formar el fondo de luz o campo claro. Los rayos de luz que chocan con los
objetos (microorganismos) que hay en la muestra y se "curvan", son conducidos a la
lente del objetivo para formar una imagen del objeto. La imagen es amplificada por la
lente ocular.
Comnmente los microscopios estn equipados con tres objetivos y cada uno de ellos
proporciona distinto grado de aumento, y se encuentran montados en una plataforma
llamada revlver, que al hacerse girar pone a uno de ellos en la lnea del
condensador.
El poder de resolucin de un microscopio est determinado por la longitud de onda de
la luz y por una propiedad del objetivo y de la lente del condensador.
Sistema mecnico: Base, brazo, cuerpo del tubo, tubo intercambiable del microscopio,
platina, revlver, objetivos de 10, 40 y 100 X, tornillo macromtrico, tornillo
micromtrico, condensador y diafragma.
2. Microscopio de Campo Oscuro: Es similar al de campo claro, excepto que va
equipado con un condensador de campo oscuro y una abertura numrica baja. Esta
clase de condensador dirige los rayos de luz dentro del campo de la muestra,
formando un ngulo tal, que solo los rayos que chocan contra el objeto que hay en el
campo de la muestra son refractados (curvados) y penetran en el objetivo. As, el
objeto queda brillantemente iluminado y destaca sobre el fondo oscuro (campo
oscuro)
3. Microscopio de Fluorescencia: Est equipado con una fuente de luz ultravioleta,
varios filtros y un condensador de campo obscuro. Se usa para examinar muestras
teidas con colorantes de fluorocromo, denominados fluorescentes, los cuales
absorben energa de longitudes de ondas cortas invisibles, pero emiten ondas de
longitudes de onda mayores visibles y el fenmeno es denominado fluorescencia.
Esta tcnica permite la identificacin rpida de algunos microorganismos.
4. Microscopio de contraste de fases: Es un tipo de microscopio ptico que permite
un mayor contraste entre substancias de diferente grosor o diferente ndice de
refraccin, mediante el uso de un condensador y un objetivo especiales que controlan
la iluminacin del objeto, de manera que acenta las ligeras diferencias en el espesor
o en los ndices de refraccin de las estructuras celulares. Las diferencias se revelan
2
en forma de distintos grados de brillo o de oscuridad (un mejor contraste), pudiendo

localizarse estructuras dentro de la clula sin teir, que no son visibles en la
microscopa de campo claro.
El microscopio electrnico
Emplea haces de electrones en lugar de ondas de luz, para producir una imagen
amplificada. Un campo magntico substituye a las lentes. Es posible lograr
amplificaciones de un milln de veces, las que posteriormente se logran ampliar ms
en la imagen fotografiada. Esto hace posible la observacin de microorganismos tan
pequeos, que no se ven con el microscopio ptico, como los virus.
- Microscopio electrnico de transmisin: Un haz de electrones finamente enfocados,
pasa a travs de un corte ultra delgado del espcimen. Los electrones son
enfocados a una pequea rea de la muestra y la iluminan, apareciendo con reas
claras y obscuras. La resolucin de es de 2.5 nm y la amplificacin es de 10,000 X
a 100,000 X.
- Microscopio electrnico de Barrido: Resuelve el problema de seccionar los
especmenes, permitiendo observar clulas completas. Unos electrones son
dirigidos a la superficie de la muestra y otros colectados para formar la imagen
tridimensional.
MATERIALES Y MTODOS:
Ejercicio para el transporte y manejo del microscopio:
1. El transporte del microscopio de un lugar a otro debe ser muy cuidadoso. Con una
mano se debe sujetar del brazo, mientras se coloca la otra mano bajo la base para
sostenerlo, mantenindolo en posicin vertical durante el transporte. Esto evita el
desprendimiento de algunas de las partes que no son fijas.
2. Nunca deposite el microscopio en la orilla de la mesa, sino a unos cm de distancia
del borde.
3. No toque las lentes con los dedos.
4. No juegue con los componentes del instrumento. Si no funciona en forma
adecuada, notifquelo al profesor y no intente arreglarlo usted mismo.
5. No permita que ningn reactivo qumico entre en contacto con alguna parte del
microscopio, a excepcin del aceite de inmersin usado con la lente de l00 X.
6. Limpie las lentes solo con papel especial (papel seda) sobre todo al terminar de
usarlo, para que no queden restos de aceite de inmersin.
7. El profesor le proporcionar una preparacin fija de bacterias en un portaobjetos
para el ejercicio.
3
Ejercicio de enfoque
1. Encienda el microscopio. Coloque el portaobjetos en la platina y ajstela en el
carro. Haga coincidir el haz de luz del condensador con el espcimen.
2. En base a las indicaciones del profesor vaya identificando las diferentes partes que
constituyen el microscopio.
3. Mueva cuidadosamente el revlver y coloque el objetivo de 10 X sobre la
preparacin. Mueva el tornillo macromtrico para acercar el objetivo a la platina,
totalmente hasta el tope.
4. Posteriormente, sin dejar de observar a travs del ocular, mueva lentamente el
tornillo macromtrico para ir alejando el objetivo de 10 X, hasta detectar una imagen
o un color en la preparacin; enseguida mueva lentamente el carro en la platina. Si
la imagen se mueve, indicar que est enfocando la preparacin. Mueva el tornillo
micromtrico y afine el enfoque. Una vez logrado el enfoque, ya no suba ni baje el
tornillo macromtrico, solo use el micromtrico. Si se desenfoca, vuelva a repetir el
paso 10.
5. A continuacin mueva el diafragma y determine la cantidad de luz ms efectiva
para la observacin.
6. Mueva el revlver lentamente para retirar el objetivo de 10X y cambie al objetivo de
40 X. Ajuste el enfoque con el tornillo micromtrico. Con el diafragma determine la
cantidad de luz adecuada.
7. Mueva el revlver lentamente para retirar el objetivo de 40X y coloque una gota de
aceite de inmersin sobre la preparacin. A continuacin mueva de nuevo el
revlver con cuidado, dejando que la lente del objetivo de 100 X contine en
contacto con el aceite. Ajuste el enfoque con el micromtrico. Si no lo logra, repita el
paso 10, regresando directamente al objetivo de 10 X, sin pasar por el de 40 X para
no ensuciarlo con el aceite. El aceite aumenta la cantidad de luz que pasa a la lente
del objetivo.
8. Al terminar, mueva el revlver antes de sacar la preparacin y enseguida limpie el
aceite de la lente, con papel seda. Puede usar un pauelo desechable por el lado
que no suelta pelusa. No utilice algodn ni otros materiales.
9. Nunca olvide retirar la preparacin de la platina al terminar.
10. Apague el microscopio y enrolle el cable.
11. Haga dibujos de las observaciones a diferentes amplificaciones. Comente su
experiencia obtenida al hacer las observaciones y las dificultades encontradas, as
como las ventajas y desventajas que not en la tcnica.
4
RESULTADOS, DISCUSIN y CONCLUSIN.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
French, E; Hebert, T. (1980). Mtodos de Investigacin Fitopatologa. 4 Ed. Instituto
interamericano de Ciencias Agrcolas. Costa Rica: pp 59-70.
Garca, V. (2005). Introduccin a la Microbiologa. 8a Ed. Editorial Universidad Estatal
a Distancia. Mxico: 21-99.
Kapitza, H. G., & Lichtenberg, S. (1997). Microscopy from the very beginning. Zeiss.
Tortora, G; Funke, B; Case, C. (2007). Introduccin a la Microbiologa. 9 Ed. Editorial
Mdica Panamericana. Buenos Aires, Argentina: pp 55-68.
PRCTICA # 2
ASOCIACIONES BIOLGICAS
OBJETIVO DE LA PRCTICA:
Que el alumno aprenda los diferentes tipos de asociaciones entre individuos de
distintas especies utilizando como referencia a la cucaracha (Periplaneta americana).
INTRODUCCIN
Desde que se inici la vida en la tierra los organismos vivos han tenido que
adaptarse al medio que los rodea. Algunos organismos se adaptaron a vivir en
ambientes acuticos y otros a ambientes terrestres. En este proceso de adaptacin
algunos de estos organismos se vieron en la necesidad de asociarse con otros
organismos para poder sobrevivir, a este tipo de asociacin se le denomina simbiosis.
Las simbiosis son asociaciones entre organismos vivos, y existen dos tipos de
simbiosis, las homoespecficas y las heteroespecficas.
Se le denomina asociacin homoespecfica a la relacin entre dos organismos de
la misma especie, como ejemplos de este tipo de asociaciones en la naturaleza
tenemos las comunidades de mamferos (lobos, hienas, ballenas, elefantes, etc.) y
las colonias en los insectos (abejas, hormigas, termitas, mariposas, etc.).
Se le denomina asociacin heteroespecfica a la relacin entre dos individuos
distinta especie. Como ejemplos de Asociaciones heteroespecficas tenemos:
Mutualismo: Es una relacin entre seres de distintas especies en la cual ambos

asociados reciben un beneficio.
Comensalismo: Es una relacin entre seres de distintas especies en la cual uno de
los asociados recibe un beneficio (comensal) mientras que el otro no se afecta ni
se beneficia (husped).
Foresis: Es una interaccin entre seres de distintas especies en la que el husped
sirve como medio de transporte mecnico al otro organismo denominado foronte.
Parasitismo: Es una asociacin entre seres de distintas especies en la que uno de
los asociados recibe un beneficio (parsito) mientras que el otro de los asociados
recibe un dao o perjuicio (husped).
Uno de los seres vivos mejor adaptados en la naturaleza es la cucaracha domstica.

Las cucarachas son artrpodos transmisores de enfermedades que pueden actuar
como vectores mecnicos (huspedes para la foresis) y como reservorio natural de
grmenes patgenos. En el aparato digestivo de las cucarachas se encuentran varios
protozoarios, helmintos y algunos artrpodos que son comensales para la misma y
encuentran el hbitat ideal para su desarrollo.
MATERIALES Y MTODOS
Experimento #1: FORESIS
1. Colocar a la cucaracha en una caja petri y taparla.
2. Agitarla vigorosamente para desorientarla y reduzca su movilidad.
3. Colocar la cucaracha en una caja con agar nutritivo .Mover la caja para que la
cucaracha se mueva por la superficie del agar. Sacar la cucaracha, depositarla en
un contenedor o caja petri vacia e incubar el medio de cultivo por 24 h a 37C
4. Observar el crecimiento de bacterias forontes de la cucaracha.
Experimento #2: COMENSALISMO Y MUTUALISMO
1. Colocar a la cucaracha en una caja petri y taparla.
2. Agitarla vigorosamente para reducir su movilidad.
3. Con unas pinzas tomar a la cucaracha.
4. Colocar a la cucaracha con el abdomen hacia arriba y cortarle la cabeza.
5. Con ayuda de unas pinzas arrancar las patas hasta tener solamente el cuerpo.
6. Localizar el segundo segmento del abdomen de arriba hacia abajo y de abajo hacia
arriba.
7. Sujetar con una pinza estos segmentos y jalar en direcciones opuestas para
exponer los rganos internos de la cucaracha.
8. Localizar un tubo digestivo de color caf o marrn y extraerlo con las pinzas.
9. Colocarlo en una caja petri con una gota de solucin salina fisiolgica.
10. Triturar y formar una suspensin con la ayuda de un bistur.
11. Tomar una gota de la suspensin y colocarla en un portaobjeto limpio y
desengrasado.
12. Hacer una tincin colocando una gota de lugol y colocar el cubreobjetos. Observar
al microscopio con el objetivo de 40x y 100x
13. Repetir el procedimiento del punto 11 y realizar una preparacin con una gota de
solucin salina. Realizar la observacin al microscopio.
RESULTADOS
Hacer dibujos detallados de los forontes, comensalistas y mutualistas de la cucaracha
DISCUSIN
CONCLUSIN
BIBLIOGRAFA
Ramirez P.J. (1989). La cucaracha como vector de agentes patgenos. Bol Of
Saint Panam. 107(1): 41-53.
Botero M.D. (1998). Parasitosis Humanas. Tercera edicin. Corporacin para
Investigaciones Biolgicas. Medellin, Colombia. pp: 5-6
Manual de Parasitolgia. 2010-2011. Departamento de microbiologa y
parasitologa. Facultad de medicina. Universidad Nacional Autnoma de Mxico.
Ciudad Universitaria, DF., Enero del 2011
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PRACTICA #3 (Primera Parte)

TIPOS DE MUESTRAS: RECOLECCIN, MANEJO Y CONSERVACIN
OBJETIVO DE LA PRCTICA
El alumno conocer los diferentes tipos de muestra utilizados en el diagnstico de
enfermedades parasitarias, as como los mtodos de toma de muestras y los
materiales para su transporte y conservacin.
INTRODUCCIN.
En el manejo de los productos biolgicos es donde va a radicar el xito o fracaso de
un diagnostico en enfermedades parasitarias. Es necesario seguir ciertos
lineamientos preestablecidos para cada tipo de muestra siendo las principales en
parasitologa: la materia fecal, la expectoracin, los exudados vaginales y uretrales, el
lquido cefalorraqudeo, la sangre y sus derivados, la orina, las biopsias y necropsias y
los parsitos como organismos completos.
Una inadecuada toma de la muestra, un mal manejo de la muestra y una deficiente
conservacin de la misma darn como resultado un mal diagnostico parasitolgico.
Por ejemplo una materia fecal recolectada con orina destruye los embriones de
Necator americanus y Ancylostoma duodenale por ende estos no sern
diagnosticados en el estudio coproparasitoscpico.
En suma, las muestras mal recolectadas, inadecuadamente conservadas y con
mucho tiempo despus de haber sido obtenidas, no servirn para observaciones y
estudios ulteriores, e inclusive pueden conducir a resultados errneos o falsos.
MATERIALES Y MTODOS
1. En esta prctica se analizaran las principales muestras utilizadas para el
diagnstico parasitolgico, determinando la cantidad de muestra que debe ser
obtenida para un buen anlisis de las diferentes muestras en parasitologa.
2. Tambin en esta prctica se estudiaran las formas de recoleccin, manejo,
transporte y conservacin de las muestras que se utilizan para el diagnstico
parasitolgico.
3. RESUMEN
2. El profesor mostrar los diferentes materiales para el transporte de muestras, as
como diferentes tipos de muestras parasitolgicas: Material fecal, sangre, fluidos
corporales, biopsias, otros.
CONCLUSIONES:
Haga un breve comentario acerca de la prctica
(Segunda Parte)
EXAMEN FECAL MACROSCPICO
Aprender a colectar correctamente un espcimen fecal para examen de parsitos.
Describir correctamente la consistencia y tipo de parsitos encontrados en las
diferentes muestras.
Determinar correctamente la presencia de sangre fresca y/o oculta en un espcimen
fecal.
INTRODUCCIN
Examen fecal: Es de gran importancia la consistencia de una muestra fecal, es decir,
si son heces bien formadas, blandas (pastosas), semilquidas o lquidas, con
indicacin del tipo de parsitos encontrados. Los trofozotos de protozoarios son
usualmente encontrados en heces lquidas o blandas pero casi nunca en heces bien
formadas; en cambio los quistes son usualmente encontrados en heces bien
formadas y raramente son observados en heces lquidas, a menos que se administre
un laxante. Los huevos de Helmintos pueden observarse tanto en heces lquidas
como en bien formadas, sin embargo, si las heces son lquidas, usualmente estn
bastante diluidas y con frecuencia puede dificultarse su deteccin.
En la superficie de la muestra total y en su interior deben buscarse parsitos
macroscpicos. En la superficie frecuentemente pueden ser vistos gusanos del tipo
Enterobius, en cambio los progltidos de Taenia pueden encontrarse tanto en la
superficie como en el interior de espcimen, motivo por el cual debe romperse la
muestra con un abatelenguas para buscar helmintos.
En el caso de hallazgos de sangre, la de color rojo brillante en la superficie de heces
formadas es con frecuencia un signo de sangrado por hemorroides; el moco
sanguinolento en heces lquidas o semilquidas es altamente sugestivo de
ulceraciones amebianas en el intestino grueso, aunque puede deberse a otros
motivos. Acmulos de moco en la superficie, particularmente con sangre, deben
examinarse con mucho cuidado para buscar trofozotos de amebas. La sangre oculta
puede estar presente debido a parasitosis, pero tambin puede ser indicativa de otros
desrdenes gastrointestinales. Un examen de sangre oculta es con frecuencia
rutinario en todas las muestras en que se sospecha de parsitos. Las muestras
frescas sin conservadores son esenciales para la deteccin de trofozotos de amebas
y de flagelados. Por lo tanto, todas muestras lquidas o blandas deben examinarse
dentro de la media hora siguiente, despus de haberse tomado, a menos que se
hayan preservado en forma apropiada. El examen inmediato de heces totalmente
formadas no es tan importante, pero deben ser guardadas en refrigeracin, o
mantenidas en conservador cuando el examen va a demorarse. Las muestras nunca
deben incubarse a 37C, ya que esto promueve la desintegracin de trofozotos y de
quistes, as como la maduracin de huevos de uncinarias, con liberacin de las larvas.
Un espcimen fecal bebe colectarse en un recipiente con tapn de rosca, limpio (no
necesariamente estril), que no debe estar contaminado con orina. En la etiqueta se
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debe marcar la hora en que se deposit la muestra y la fecha, as como los datos de
identificacin del paciente.
Preservacin de especmenes fecales:

Los trofozotos de amibas intestinales mueren y se desintegran rpidamente, por lo
que es muy importante lograr una conservacin adecuada y propia cuando los
especmenes no pueden ser examinados inmediatamente (dentro de los 30 minutos
siguientes a la deposicin). El propsito de los fijadores es prevenir el deterioro de
formas frgiles de parsitos; muchos de ellos son preparados comercialmente. Si el
paciente colecta el espcimen en su casa, se le deben explicar las instrucciones para
la conservacin de la muestra inmediatamente despus de la deposicin, debido a
que algunos organismos pierden rpidamente sus caractersticas morfolgicas.
Uno de los fijadores ms comunes es el formol al 10 % en solucin salina fisiolgica,
as como el alcohol polivinilo. Es importante que el espcimen sea preservado recin
tomado, tan pronto como sea posible, con el fin de mantener los parsitos sin
descomponerse, con su morfologa original. Deben mezclarse una parte de heces y
tres de conservador, usando un abatelenguas. Estas instrucciones deben explicarse a
la persona que tome la muestra, cuando la muestra no es llevada enseguida al
laboratorio. Algunos fijadores pueden ser peligrosos por ser muy venenosos y como
contaminadores del ambiente, por ejemplo los que contienen mercurio; el formol (5 o
10%) es un cancergeno potencial. Sin embargo, los que sean utilizados deben
manejarse con mucho cuidado.
MATERIALES Y MTODOS
I. Descripcin del espcimen
1. Note el color del espcimen.
2. Note la consistencia del espcimen. Heces lquidas o blandas sugieren la posible
presencia de trofozotos de protozoarios intestinales. Los quistes de protozoarios se
encuentran ms frecuentemente en heces formadas. Los huevos y larvas de
Helmintos pueden encontrase tanto en heces lquidas como formadas.
3. Examinar la superficie del espcimen para buscar parsitos (progltidos de
platelmintos o, menos comnmente adultos de Enterobius sp).
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4. Examinar la muestra para buscar sangre y/o moco.

a. La sangre fresca (rojo brillante) indica sangrado intestinal agudo del intestino
grueso.
b. El moco sanguinolento sugiere ulceracin, y algunos de estos materiales
deben examinarse microscpicamente para la bsqueda de trofozotos.
c. Heces negras son indicativas de sangre oculta a partir del intestino delgado
5. La ruptura de la muestra de heces con un aplicador permite corroborar la presencia
de helmintos (progltidos de Taenia sp, adultos de Ascaris sp).
6. Las heces deben guardarse para observarse, despus del tratamiento con
antiparasitarios contra platelmintos, para asegurar la eliminacin del esclex.
II. El estudio de especmenes fecales preservados mediante algunos reactivos,
permite el procesado posterior, aunque no sea inmediato:
Especmenes preservados en formol al 10%
1. Observacin en fresco (helmintos y protozoarios)
2. ELISA (Giardia sp y Cryptosporidium sp)
3. Tincin cromotropo (Microsporidia)
Especmenes preservados con formol y acetato de etilo.
1. Observacin en fresco
2. Epifluorescencia (Cyclospora sp, Isospora sp)
3. Tincin Acido-alcohol resistente (coccidios intestinales)
4. Inmunofluorescencia (Giardia sp y Cryptosporidium sp)
5. Tincin con Safranina (Cyclospora sp)
III. Especmenes fijados con alcohol polivinilo de baja viscosidad (LV-PVA) es el
fijador superior para la elaboracin de preparaciones fijas teidas de quistes y
trofozotos de protozoarios.
RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA
Pietrzak-Johnston SM, Bishop H, Wahlquist S, Moura H, de Oliveira da Silva N,
Pereira da Silva S, et al. et al. Evaluation of Commercially Available
Preservatives for Laboratory Detection of Helminths and Protozoa in Human Fecal
Specimens. J. Clin Microbiol 2000 May;38 (5):1959-1964.
DPDx Selection of laboratory regimens for confirmation of intestinal parasites
http://www.dpd.cdc.gov/DPDX/CEUs/Lab_tech_ceu.asp?body=Lab_Tech/body_labtec
h_collect3.htm
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PRCTICA #4
PROTOZOARIOS INTESTINALES
OBJETIVOS DE LA PRCTICA
Que el alumno conozca la clasificacin general de los parsitos protozoarios,

helmintos y artrpodos
Que el alumno sea capaz de identificar formas de trofozotos y quistes de
protozoarios parsitos intestinales y distinguirlos de los restos del material de la
muestra.
INTRODUCCIN.
La observacin de las formas parasitarias es indispensable para identificar los
protozoarios patgenos intestinales y comprender la importancia de la naturaleza de
los parsitos, as como las diferencias clnicas que se relacionan con las etapas de su
ciclo vital. Esta prctica es fundamental para que el estudiante tome conciencia de la
importancia de las etapas por las que pasa un parsito durante su ciclo y la
correlacin que ste tiene con las entidades clnicas y el diagnstico del Laboratorio.
Los Protozoarios son organismos unicelulares que pertenecen al reino Potoctista,
subreino protozoa. Los phyla que incluyen especies de protozoarios comensales y
parsitos para los humanos son Sarcomastigophora (amebas y flagelados), Ciliophora
(ciliados), Apicomplexa (Coccidios) y Microsporidia.
CLASIFICACIN TAXONMICA
SEGN LOCALIZACIN EN EL
HUSPED
PHYLUM SARCOMASTIGOPHORA
TUBO DIGESTIVO
Sub Phylum Mastigophora
PATGENOS PRIMARIOS
Orden Retortamonadida
Giardia lamblia
Genero Chilomastix
Entamoeba histolytica
Genero Retortomonas
OPORTUNISTAS EMERGENTES
Orden Diplomonadida
Isospora belli
Genero Giardia
Cryptosporidium parvum
Sub Phylum Sarcodina
Cyclospora cayetanensis
Orden Amoebida
Enterocytozoon bieneusi
Genero Entamoeba
Encephalitozoon intestinalis
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Genero Iodamoeba
COMENSALES DEL TUBO

DIGESTIVO
Genero Endolimax
Entamoeba coli
PHYLUM APICOMPLEXA
Endolimax nana
Clase Sporozoa
Chilomastix mesnilii
Sub Clase Coccidia
Iodamoeba btschlii
Sub orden Eimeriida
Blastocystis hominis
Genero Cryptosporidium
Pentatrichomonas hominis
Genero Isospora
Genero Cyclospora
PHYLUM MICROSPORA
Orden Microsporit
Genero Encephalitozoon
Genero Enterocitozoon
PHYLUM CILIOPHORA
Orden Trichostomatida
Genero Balantidium
MATERIALES Y METODOS
1. Se proceder a observar primeramente con el seco dbil las preparaciones
fijas y teidas de Entamoeba histolytica, Entamoeba dispar, Giardia lamblia,
Balantidium coli, Cryptosporidium spp. , Isospora spp , Cyclospora
cayetanensis e Isospora belii.
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Figura 1. 1)Trofozoto de E. histolytica, 2) Trofozoto de E.coli, 3) Trofozoto de

Iodamoeba sp, 4) Trofozoto de Endolimax nana, 5)Quiste de E. histolytica, 6)
Quiste de E.coli, 7) Quiste de Iodamoeba sp., 8)Quiste de Endolimax nana,
9)Quiste de Giardia lamblia, 10)Trofozoto de G. lamblia, 11)Ooquiste de
Cyclospora cayetanensis, 12) Ooquiste de Cryptosporidium parvum,
13)Ooquiste de Isospora belli, 14)Trofozoto de Balantidium coli, 15)Quiste de
Balantidium coli
2. Note las diferencias morfolgicas fundamentales entre los protozoarios
observados, as como de sus estructuras mostradas en cada caso.
RESULTADOS Y DISCUSIN.
- Dibuje los parsitos observados identificando las estructuras ms relevantes,
sealando la fase infectiva para el humano.
- Calcule la densidad de la carga parasitaria en el estudio parasitolgico utilizando
como referencia la tabla que se presenta a continuacin:
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Carta de Frecuencia de Distribucin Sugerida

Densidad
Protozoarios
Helmintos
Raros
2 a 5 organismos por 2 a 5 organismos por

cubreobjetos de 22 mm cubreobjetos de 22 mm
cuadrados
cuadrados
Pocos
1 organismo por 5 a 10 1 huevo/larva por 5 a 10

campos a seco-fuerte campos a seco-dbil
(44x)
(10x)
Moderado
1 a 2 organismos por 1 a 2 huevos /larvas por

campo a seco-fuerte, a campo a seco-dbil
tan pocos como 1
organismo por 2 a 3
campos d seco fuerte
Muchos
Varios organismos en Varios huevos /larvas en

cada campo a seco- cada campo a seco-dbil
fuerte
- Complemente la prctica, consultando los ciclos vitales completos en cada parsito,

indicando cules fases observ en el laboratorio.
CONCLUSIONES
Haga un breve resumen de los puntos que le llamaron la atencin
BIBLIOGRAFA
Introduction To Clinical Microbiology. Lab. Methods. 1995. University of Texas
Houston. http://medic.med.uth.tmc.edu/path/00001450.htm Murray, R.P., E.J. Baron,
J.H.
Jorgensen, M.A. Pfaller and R.H. Yolken. 2003. Manual of Clinical Microbiology.
American Society for Microbiology. ASM Press; 8th edition.
Benson, H. 1990. Microbiological Applications. A laboratory Manual in General
Microbiology. WCB Wm.C.Brown Publishers.
16
PRACTICA #5
CULTIVO DE PROTOZOARIOS DE VIDA LIBRE
Que el alumno conozca las tcnicas bsicas para el cultivo mixto de protozoarios de
vida libre, as como las tcnicas de preparacin y tincin adecuadas para el estudio
microscpico de los protozoarios
Que el alumno aprenda a reconocer y describir las caractersticas morfolgicas y
estructurales de los principales grupos de protozoarios: Sarcodinos (rizpodos),
Mastigophoros y Ciliados.
INTRODUCCIN
Los protozoarios son organismos eucariticos, unicelulares, que varan grandemente
en forma y tamao. Se encuentran en casi todos los hbitats hmedos y tienen gran
importancia ecolgica en la descomposicin y en la formacin de la materia orgnica.
Tambin actan como depredadores de otros microorganismos lo que los hace
eslabones fundamentales en la cadena trfica. Algunos viven como comensales o en
asociaciones mutualistas dentro del tracto intestinal de los animales; otros muchos
son parsitos, estos presentan una marcada especificidad por los amnales que
infectan. El aislamiento y cultivo de los protozoarios de vida libre es relativamente
fcil; generalmente se parte de un cultivo mixto, ya que la mayora de los protozoarios
se alimentan de otros microorganismos. Las infusiones de materiales vegetales son
buenos medios de cultivos para muchas especies de protozoarios, en tales infusiones
se desarrollan numerosas bacterias que les sirven de alimento. La mayora de los
protozoarios requieren de alimento particulado y pocos crecen en medios nutritivos
completamente solubles, siendo stos ltimos ms fciles de purificar.
Con base a sus mecanismos de locomocin se clasifican en cuatro grupos:
Sarcomastigophoros: en este grupo se incluyen los protozoarios de los
ameboides (Sarcodinos) y los flagelados (Mastigophoros): SARCODINA: estos
protozoarios utilizan como mecanismos de locomocin las elongaciones de su
ectoplasma denominadas pseudpodos (falsos pies). Estos pueden tener un
citoplasma desnudo o poseer testas, caparazones o esqueletos quitinosos de
carbonato de calcio o sulfato de estroncio. Son de vida libre o parsitos;
MASTIGOPHOROS: estos protozoarios utilizan como medio de locomocin unas
estructuras extracelulares denominadas flagelos. Algunos presentan clorofila,
pero la mayora carece de ella. Viven libres o en asociaciones simbiticas y
parasticas.
Cilliophora: estos protozoarios utilizan como medio de locomocin el movimiento
coordinado de unas estructuras extracelulares denominadas cilios. La mayora
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son de vida libre y algunos viven en simbiosis. Solo una especie es parasita para
el ser humano denominada Balantidium coli.
Sporozoa (Apicomplexa): estos protozoarios carecen de organelos de locomocin
extra citoplasmticos, pero dentro del citoplasma tienen unos organelos
denominados mionemas que les permiten generar movimientos por
desplazmiento o por flexiones de la clula. Todos son endoparasitos obligados, y
se asocian con ciclos de vida complejos.
Microsporidios: estos protozoarios mucho tiempo fueron considerados dentro del
reino de los hongos debido a que no poseen organelos de locomocin. En cambio
para su movilidad generan esporas que ayudadas por el aire se distribuyen por la
naturaleza. Todos son endoparsitos obligados y se asocian con ciclos de vida
complejos.
La mayor de parte de los protozoarios parsitos no pueden ser cultivados fuera de un
hospedero, por lo que para su propagacin se requieren animales de laboratorio
como: ratas, ratones, hmster, etc. Algunos se cultivan en medios especiales que
contengan sangre o suero.
MATERIALES Y MTODO
Obtencin de Cultivo Mixtos
1. En un frasco de boca ancha, mezclar a partes iguales la infusin de chcharo,
con la muestra colectada. Tapar el frasco
2. En un frasco de boca ancha, agregar el medio A hasta ocupar tres cuartas
partes del volumen total. Inocular con la muestra de agua, ocupar el volumen
vaco.
3. En otro frasco de boca ancha inocular de igual forma la muestra pero
sustituyendo el medio de cultivo por el medio de Chalkley y agregando 7 gotas
de leche descremada.
4. En una caja Petri vaca colocar una pequea cantidad de suelo o fango, cubrir
la muestra con agua de donde se obtuvo la muestra de suelo y agregar 3
granos de arroz. Tapar la caja Petri.
5. Incubar los frascos y las cajas a temperatura ambiente bajo luz tenue por un
periodo de 7 a 10 das. Mantener el volumen lquido inicial, agregando
pequeos volmenes de agua.
Estudio microscpico
1. Observacin de extrusiones extra-citoplasmticas (cilios y flagelos)
a. Con la sol. de Noland, colocar una gota sobre la superficie de un
portaobjetos
b. Agregar una gota de sus cultivos y colocar el portaobjetos
c. Observar a 10X y 40 X
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2. Observacin de inclusiones de reserva (Vacuolas digestivas)

a. Con la solucin de Lugol , colocar una gota sobre la superficie de un
portaobjetos
3. Observacin de la morfologa de los protozoarios
a. Con la sol. de Azul de metileno, colocar una gota sobre la superficie de
un portaobjetos
RESULTADOS
Realice dibujos detallados de por lo menos tres protozoarios encontrados en cada
medio y teidos con los colorantes no vitales descritos en la metodologa
Medio Chalkley
Medio A Flagelados
Infusin de Chicharos
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DISCUSIN
CONCLUSIN
BIBLIOGRFIA
Brock, .D. y Madigan M.T. (1993) Microbiologa. Editorial Prentice Hall, Mxico DF.
Mxico
Bold , H.C. y Wyne M.J. (1982). Introduction to the algae: structure and reproduction.
Editorial Prentice Hall. Englewood Cliffs. USA
Kudo, R.R. (1985). Protozoologa. 8a impression. Continental S.A. de C.V., Mxico
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PRACTICA # 6
CULTIVO DE AMEBAS DE VIDA LIBRE POTENCIALMENTE PATGENAS
Aplicacin de algunas tcnicas para cultivo y estudio microscpico de amibas de vida
libre potencialmente patgenas.
INTRODUCCIN.
Algunos protozoarios parsitos son relativamente fciles de cultivar en medios de
laboratorio que contengan bacterias, como en el caso de amebas de vida libre
Naegleria fowlerii y Acanthamoeba sp., mismos que se desarrollan en el ambiente,
principalmente en aguas templadas con poco movimiento, como las de albercas,
lagunas y estanques, a partir de las cuales se pueden aislar. N. fowlerii es causante
de Meningoencefalitis Amibiana Primaria (MEAP) y en la mayora de los casos, el
paciente se zambull, lo que provoca entrada brusca de agua en fosas nasales y el
posterior paso de los protozoarios a travs de la lmina cribosa del etmoides. Las
amibas del gnero Acanthamoeba afectan con mayor frecuencia a pacientes
inmunodeficientes, provocando encefalitis amebiana granulomatosa (EAG) o lceras
cornales en usuarios de lentes de contacto.
MATERIALES Y MTODOS
I. Aislamiento de Naegleria fowleri y Acanthamoeba sp. de agua de alberca.
1. Colecta de muestras de agua de alberca:
a) A partir de agua de alberca se obtienen muestras de agua de 800 a 1000 ml, en
botellas estriles, tomadas en horas de atencin al pblico.
b) Se obtienen dos muestras de la superficie, dos a 30 cm de profundidad, dos del
fondo, una en la canaleta lateral de desage y una a la salida del filtro.
c) Se tapan hermticamente y se rotulan convenientemente.
2. Anlisis de las muestras mediante examen directo en fresco.
a) Primeramente se dejan sedimentar las muestras de agua durante tres a cuatro
horas, en botellas de centrfuga estriles con fondo cnico, tapados.
b) Se elimina el sobrenadante y se centrifuga el sedimento a baja velocidad (1.000
r.p.m.).
c) Del centrifugado se realiza el examen directo en fresco, entre lmina y laminilla y se
deja el resto para el inculo en la siembra del cultivo. La lectura directa (4 preparados
por muestra) se efecta al microscopio ptico de luz, a aumentos de 10x y 40x.
d) Este anlisis al microscopio es con la finalidad de una orientacin sobre la posible
presencia de amibas de vida libre.
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e) El resto del sedimento se guarda para el cultivo.

3. Anlisis de las muestras por cultivo para confirmacin y aislamiento:
a) Para la siembra, se dejan caer dos gotas del sedimento respectivo en cuatro placas
de Petri preparadas con medio de agar no nutritivo (ANNE), habiendo extendido
previamente en la superficie una pelcula de Escherichia coli inactivada, con la
finalidad de servir como nutrientes para las amibas. De cada muestra, dos de las
placas se incuban a 37C y otras dos a 45C, durante siete das, examinndolas cada
24 horas bajo el microscopio.
b) Si a los siete das de observacin no hubo multiplicacin de amebas, la muestra se
considera negativa. En cambio, si existi desarrollo, se procede al aislamiento de las
colonias.
c) El aislamiento de colonias de amibas se efecta bajo un microscopio esteroscpico
(lupa), mediante un bistur fino y esterilizado. Se cortan trozos de agar conteniendo
las colonias y se transfieren a otras placas nuevas preparadas en la misma forma ya
mencionada para obtener el cultivo puro.
d) Una vez logrado lo anterior, se procede a estudiar las caractersticas morfolgicas
de los trofozotos y/o quistes al microscopio, con el fin de diagnosticar el gnero y/o la
especie.
e) Naegleria tiene capacidad para crecer a 45 C (termorresistencia) y para producir
flagelos a 37 C.
II. Aislamiento de Naegleria fowleri y Acanthamoeba sp. de agua de los
aparatos domsticos de aire acondicionado (aire enfriado con agua).
1. Se obtienen muestras de agua de 800 a 1000 ml, en botellas estriles, a partir del
agua del depsito del aparato.
2. Anlisis de las muestras mediante examen directo en fresco. Desarrolle el mismo
procedimiento que en el agua de alberca.
3. Anlisis de las muestras por cultivo para confirmacin y aislamiento. Igualmente,
como en el agua de alberca efectu las siembras.
RESULTADOS
Realice dibujos detallados de las amebas encontradas en los diferentes medios de
cultivo
22
DISCUSIN
CONCLUSIN
BIBLIOGRAFA
Huizinga, W.H. and G L McLaughlin (1990). Thermal ecology of Naegleria fowleri
from a power plant cooling reservoir. Appl Environ Microbiol. July; 56 (7): 22002205.
Muoz, V., H. Reyes, P. Toche, C. Carcamo y B. Gottlieb (2003). Aislamiento de
amebas de vida libre en piscinas pblicas de Santiago de Chile. Parasitol Latinoam
58: 106 111.
Woodworth, WT., D T John, and S G Bradley (1982) Biological factors affecting
enflagellation of Naegleria fowleri. J Bacteriol. November; 152(2): 803808.
23
PRACTICA # 7
COPROPARASITOSCOPICO EN FRESCO Y TINCIONES TEMPORALES
Para fines diagnsticos el alumno debe ser capaz de diferenciar los parsitos (formas
biolgicas) presentes en un examen directo, de formas no biolgicas (artefactos), y
que desarrolle tinciones temporales.
INTRODUCCIN.
Un examen coproparasitoscpico es el estudio de material fecal, para la bsqueda e
identificacin de formas parasitarias intestinales. Puede ser cualitativo o cuantitativo.
Las muestras fecales son seriadas con un mnimo de tres y deben colocarse en
frascos de boca ancha, guardados en lugares frescos, mientras se analizan, pues con
el calor se aceleran los fenmenos de degradacin por bacterias y con el fro se
pueden destruir los quistes y trofozotos de protozoos. Los mtodos qumicos
permiten la conservacin durante un tiempo ms prolongado, sin correr el riesgo de
que los parsitos se deformen o se destruyan, por ejemplo con soluciones que
contienen formol, yodo-mertiolate, etc.
Examen microscpico directo: En este tipo de estudio, el material fecal ms utilizado
es el recin obtenido por expulsin natural del paciente, ya sean heces bien formadas
o evacuaciones disminuidas de consistencia, con moco y/o sangre. Los exmenes
directos de heces son la forma ms rpida de hacer diagnstico de parasitosis. Es
importante tomar en consideracin algunas recomendaciones que permitan tener
xito en la bsqueda de parsitos. Con estas tcnicas podemos observar trofozotos o
quistes de protozoarios, lo mismo que larvas o huevos de helmintos, sin embargo, las
diferencias importantes entre los tipos de muestra establecen las diferentes
resultados. Una muestra lquida diarreica o una muestra de moco en exudado vaginal
nos puede mostrar trofozotos en cambio una muestra de materia fecal formada
mostrara quistes.
Un detalle importante es el tiempo de procesamiento de la muestra despus de
emitida. Una muestra aun fresca con menos de una hora de haberse tomado puede
conservar trofozotos mviles, por ejemplo de E. histolytica. Si la muestra tiene un
tiempo mayor de haber sido emitida (ej. 2 horas) es probable que requiera aplicar un
poco de calor, lo que es llamado platina caliente.
Para realizar un examen directo el tiempo es importante por lo que la muestra debe
mantenerse a 37 grados centgrados y procesarse en la siguiente hora.
Este mtodo es de gran utilidad para la deteccin en fresco de trofozotos. En la
suspensin teida con lugol se pueden identificar con facilidad quistes de protozoarios
como Entamoeba histolytica, Giardia lamblia, Balantidium coli, as como de huevos de
helmintos.
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- El examen directo (en fresco) es sencillo, rpido y econmico, pues requiere poco
material.
- Es excelente para la bsqueda de trofozotos y protozoarios.
- Es eficaz en la bsqueda e identificacin de quistes, huevos y larvas.
- Sin embargo, la muestra utilizada es muy pequea y poco representativa.
- Los montajes en solucin salina tienen la ventaja de que retienen la movilidad de los
trofozotos, sin embargo, es difcil la observacin de las estructuras internas, pues con
frecuencia son poco definidas.
- El Yodo se emplea para destacar las estructuras internas de los parsitos presentes,
pero inmoviliza los trofozotos.
MATERIALES Y MTODOS
- Cada alumno debe trabajar por lo menos con dos especmenes diferentes, una
muestra debe ser propia del alumno y una segunda puede ser de otra persona.
- Se debe observar una muestra control positiva, proporcionada por el profesor.
*Las heces son potencialmente infectantes. Se deben extremar las precauciones
durante todo el procedimiento.
Procedimiento.
1. Con un aplicador de madera se toma una pequea cantidad de materia fecal y se
coloca en el centro de un portaobjetos limpio, enseguida se le adiciona una gota de
solucin salina fisiolgica y con el mismo aplicador se hace una mezcla lo ms
homognea posible.
2. Hecha la mezcla, procurando que no hayan restos muy gruesos, se coloca un
cubreobjetos sobre ella, cuidando que no queden burbujas y de ser necesario, se
adiciona ms reactivo por un lado del cubreobjetos para no dejar secar la preparacin.
Se puede sellar con barniz de uas alrededor del cubreobjetos, para evitar que se
seque y prolongar el tiempo para la observacin.
3. Se observa al microscopio a 10 X y despus a 40 X. Con ayuda de un atlas de
Parasitologa, se aprende a diferenciar a los parsitos de los diferentes tipos de
residuos fecales (artefactos).
4. En otro portaobjetos se procede de la misma manera que los puntos 1 a 3,
substituyendo la solucin salina por Sol de yodo (Lugol). Los parsitos y sus
estructuras se tien de amarillo o de caf.
5. En otro portaobjetos se procede de la misma manera que los puntos 1 a 3
substituyendo la solucin salina por colorante de azul de metileno (colorante de Nair),
observando a los parsitos de color azul.
25
NOTA:
En el caso de E. histolytica, se cuenta con tcnicas inmunodiagnsticas
comercialmente disponibles, como las de ELISA (inmunoensayo-enzimtico) para
deteccin de antgenos fecales, para el diagnstico de la amibiasis intestinal. El
organismo patgeno E. histolytica y el no-patgeno Entamoeba dispar son
morfolgicamente idnticos cuando se observan l microscopio. En dicha tcnica se
utilizan anticuerpos monoclonales que detectan la protena de adherencia que es
inhibida por la galactosa en el patgeno E. histolytica. El requisito para esta prueba es
que las heces sean frescas sin conservadores.
RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES.

- Haga dibujos detallados de los parsitos encontrados en las heces estudiadas.
- Hay posibilidad de que encuentren protozoarios y helmintos
- Compare con la literatura para identificarlos.
- Concluya cuales parsitos identific.
- Discuta las dificultades de la tcnica y dibuje los parsitos encontrados.
BIBLIOGRAFA
DPDx Selection of Standard Techniques for Examination of Fecal Specimens
http://www.dpd.cdc.gov/DPDx/CEUs/Lab_tech_ceu.asp?body=Lab_Tech/body_labtec
h_stand7.htm S.L. Marks, 2006. What Constitutes a Proper Fecal Examination?
BVSc, PhD, Dip. ACVIM (Internal Medicine, Oncology), Dip. ACVN University of
California, Davis, School of Veterinary Medicine Davis, California, USA
26
PRCTICA #8
CONCENTRACIN DE PARSITOS POR FLOTACIN (FAUST)
OBJETIVO DE LA PRCTICA.
Desarrollar y comprender el fundamento de la tcnica, para diagnstico de parsitos
intestinales, despus de concentrarlos.
INTRODUCCIN.
La concentracin de parsitos por flotacin en muestras fecales permite comprobar la
existencia de quistes de protozoarios, huevos o larvas de helmintos, aun cuando
estn presentes en pequeas cantidades. Esta tcnica se basa en la propiedad que
tienen las soluciones de densidad mayor, para hacer flotar objetos menos densos,
como los huevos y quistes de parsitos, los cuales son colectados en la superficie del
lquido y observados al microscopio. La tcnica de concentracin con sulfato de zinc
proporciona una suspensin de parsitos muy limpia y es muy buena para la
recuperacin de quistes de protozoarios y de la mayora de los huevos de helmintos.
Esta tcnica se utiliza de forma rutinaria, por su sencillez y por su efectividad.
El mtodo de Faust, con ZnSO4, es uno de los ms utilizados, aunque es poco eficaz
para huevos pesados como los de Trematodos o como los huevos no-frtiles de
Ascaris lumbricoides. Tampoco es muy efectivo para muestras de heces ricas en
grasas. Este mtodo puede realizarse en muestras recientes, refrigeradas o fijadas
con formol (5% 10%).
MATERIALES Y MTODOS.
I. Concentracin por flotacin con ZnSO4 (Faust, d=1.180)
Adems del espcimen o control positivo, proporcionado por el profesor.
1. Con un abatelenguas se toma aproximadamente 1 g de heces (el tamao de
un cacahuate) y se deposita en un tubo 13x100 que contenga de 4 ml de agua
de la llave y se mezclan con un aplicador de madera con movimientos
circulares.
2. Se adiciona agua hasta que la muestra quede a 1cm por debajo del bordo
superior del tubo. Se tapa con un tapn de hule
3. Se centrifuga por 2 minutos a 1500 rpm. Debe romperse cualquier acmulo que
pudiera haberse formado en la parte superior y se decanta el sobrenadante.
4. Se Aaden 2 a 3 ml de agua de la llave y se agita para re-suspender el
sedimento. Se re-suspende nuevamente el sedimento, adicionando agua de la
27
llave poco a poco, hasta que quede la muestra a 1 cm del borde superior del
tubo. Se centrifuga de nuevo.
5. Se decanta el sobrenadante y se agregan al sedimento 2 a 3 ml de sulfato de
zinc (dens. 1.180. Lo cual equivale a 330 g de sulfato de zinc en 1 litro de
agua), moviendo con un aplicador para re-suspender. Se agrega ms sulfato
de zinc hasta que llegue a unos 0.5 cm del borde superior del tubo.
6. Se centrifuga a 1500 rpm durante 3 min y debe sacarse el tubo de la centrfuga
con mucho cuidado.
7. Colocar el tubo de centrifuga con cuidado en una gradilla y agregar ms ZnSO 4
hasta que llegue al borde del tubo y se forme una capa convexa de solucin de
ZnSO4.
8. Colocar un cubreobjetos en la superficie del tubo teniendo cuidado de que el
lquido no se derrame y dejar reposar la preparacin por 5 a 10 min.
9. Se agrega una gota de lugol parasitolgico en la superficie de un portaobjetos.
Se retira el cubreobjetos del tubo y se deposita en la gota de lugol
parasitolgico.
10. La preparacin se observa al microscopio, a 10X y 40X. Es posible el hallazgo
de protozoarios y helmintos.
11. Haga dibujos detallados de los parsitos observados.
12. Compare con la literatura para identificar los parsitos.
13. Concluya cuales parsitos identific.
14. Discuta las dificultades de la tcnica
RESULTADOS, DISCUSION Y CONCLUSIONES.
BIBLIOGRAFIA
Murray, R.P., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.A. Pfaller and R.H. Yolken. 2003. Manual
of Clinical Microbiology. American Society for Microbiology. ASM Press; 8th edition.
Bartlett, M.S, K.Harper, N.Smith, P.Verbanac, and J W Smith. 1978. Comparative
evaluation of a modified zinc sulfate flotation technique.
J. Clin Microbiol. 7(6): 524528.
S.L. Marks, 2006. What Constitutes a Proper Fecal Examination?
BVSc, PhD, Dip. ACVIM (Internal Medicine, Oncology), Dip. ACVN University of
California, Davis, School of Veterinary Medicine Davis, California, USA
Kuczynska,E and D.R. Shelton. Method for Detection and Enumeration of
Cryptosporidium parvum Oocysts in Feces, Manures, and Soils . Applied and
Environmental Microbiology, July 1999, p. 2820-2826, Vol. 65, No. 7
28
PRACTICA # 9
DIAGNSTICO DE PARSITOS PROTOZOARIOS TISULARES
Conocer los protozoarios que pueden detectarse en especmenes de sangre y otros
tejidos, aprender a preparar frotes sanguneos delgados y gruesos para estudios
parasitolgicos.
INTRODUCCCIN
La prueba confirmativa para diagnstico de parsitos sanguneos es efectuada
mediante el examen de preparaciones de frotis sanguneos, para buscar su presencia.
Sin embargo, debe considerarse que la observacin de los frotis consume mucho
tiempo, ya que los parsitos pueden estar presentes en la sangre perifrica en
nmero muy pequeo. La presencia de un solo parsito en un frotis es significativa y
debe identificarse la especie, enseguida. Se requiere un examen muy cuidadoso de
los frotis sanguneos antes de reportar el estudio como negativo para parsitos. Por
tal motivo es necesario adquirir experiencia para un examen acertado de frotis
sanguneos en el diagnstico de parsitos. Con frecuencia las plaquetas sobre los
eritrocitos pueden ser confundidas errneamente como parsitos, por lo que cualquier
cosa sospechosa debe confirmarse.
Los protozoarios parsitos sanguneos posibles de observar en frotis sanguineos son
Plasmodium sp y Trypanosoma sp. El Trypanosoma sp. se puede diagnosticar por
cultivo en sangre y pruebas serolgicas.
Diagnstico de Trypanosoma cruzi, Plasmodium sp.
I. Diferentes tipos de frotes sanguineos.
1. Observacin de sangre en fresco.
Aunque el examen microscpico de sangre fresca no es una tcnica rutinaria, es muy
til en la deteccin de Plasmodium sp, Trypanosoma sp, los cuales pueden ser
reconocidos por sus caractersticas de movilidad en sangre fresca. Se coloca una
pequea gota de sangre en un portaobjetos cubierto con un cubreobjetos. Enseguida
se observa al microscopio a baja amplificacin, pudiendo observarse un movimiento
como circular de las microfilarias, y uno ondulatorio de los trypanosomas.
2. Frote Sanguneo Delgado.
Los frotes delgados de sangre se desarrollan en la misma forma que los frotes hechos
para estudios de hematologa. Este tipo de preparaciones son utilizadas para la
identificacin de Plasmodium sp, Trypanosoma sp. Es esencial que la pelcula de
sangre que quede en el portaobjetos, sea verdaderamente delgada. La ventaja del
frote delgado es que preserva la estructura del parsito con un mnimo de distorsin.
3. Frote sanguneo grueso
El frote grueso es preferido con respecto al delgado, para el diagnstico de
Plasmodium sp, ya que revela al parsito ms rpidamente, debido a que permite
examinar de 10 a 50 veces mayor cantidad de sangre, que en un frotis delgado. Este
29
tipo de frotis es ms efectivo en los casos de infecciones nuevas o crnicas por

Plasmodium sp, cuando los parsitos no son abundantes.
3.1. Coloque una gota grande de sangre conteniendo Plasmodium sp, a un cm de la
orilla del portaobjetos limpio y desengrasado. Use la esquina de otro portaobjetos y
con un movimiento circular extienda la sangre en una gran gota durante cerca de 20
min, con el fin de desfibrinarla.
3.2. Pueden quedar una o ms gotas en el mismo portaobjetos. Se deja secar a
temperatura ambiente y posteriormente se colorea. Las muestras de sangre deben
tomarse a intervalos de 6 a 18 horas durante tres das sucesivos.
4. Tincin de los frotes:
Generalmente se usan dos tipos de tincin:
4.1 Tincin de Wright : contiene una combinacin de fijador y colorante.
4.2 Tincin de Giemsa: contiene por separado el fijador y el colorante.
Interpretacin de los frotes de Plasmodium sp:
El frote grueso es usado para detectar la presencia del genero Plasmodium sp. El
frote delgado es usado para identificar la especie del Plasmodium sp. Se debe
examinar un mnimo de 100 campos microscpicos antes de que un frote sea
reportado como negativo.
5. Observacin de lminas fijas de protozoarios tisulares
5.1 observar laminas fijas de los siguientes parsitos tisulares: Toxoplasma gondii,
Plasmodium sp, Trypanosoma cruzi, Leishmania spp y Trichomonas vaginalis.
BIBLIOGRAFIA
DPDx Diagnostic procedures for blood specimens. 2001. Malaria Plasmodium
falciparum, Plasmodium malariae, Plasmodium ovale, Plasmodium vivax.
Michael J. Yabsley, Gayle Pittman Noblet, and Oscar J. Pung. 1999. Use of the
Indirect Immunofluorescent Antibody Test (IFAT) and Blood Culture to Detect
Trypanosoma cruzi Infections in Raccoons from Georgia. Department of Biological
Sciences, Clemson University, Clemson, South Carolina 29634-0326 USA (Yabsley
and Noblet) and Department of Biology and Institute for Arthropodology and
Parasitology, Georgia Southern University, Statesboro, Georgia 30460-8042 USA
(Pung). http://www.vet.uga.edu/ivcvm/1999/yabsley/yabsley.htm
30
PRACTICA #10
ESTUDIO COPROPARASITOSCOPICO DE CONCENTRACIN POR
SEDIMENTACIN Y TINCIONES PERMANENTES
Desarrollo y comprensin de la tcnica para aprender a concentrar e identificar
parsitos intestinales en heces.
INTRODUCCIN.
La sedimentacin de parsitos intestinales en heces se logra por centrifugacin ligera
o por gravedad del material fecal, conduciendo a la recuperacin de todos los
protozoarios, huevos y larvas, especialmente huevos de tremtodos. Concentra bien
estas formas y elimina bastantes detritus orgnicos. Aunque se inactivan las formas
mviles de los protozoarios, se mantiene la integridad de los organismos. Es efectivo
an en heces con cantidades excesivas de grasas y pueden observarse la mayora de
los quistes de protozoarios, as como huevecillos y larvas de helmintos, incluyendo los
huevos con oprculo y tiene una eficacia moderada para los huevos de Eschistosoma
sp. La tcnica es til para examinar heces que contienen substancias grasas que
interfieren en los mtodos de flotacin.
La tcnica de sedimentacin concentra los parsitos presentes en la muestra fecal. La
tcnica incluye tamizar primeramente las heces para separar los residuos grandes,
tratar con formol para matar y preservar los organismos, y adicionar un solvente como
eter o acetato de etilo para disolver las grasas. Sin embargo, durante la
sedimentacin, aparte de concentrarse los parsitos, se quedan reunidos tambin
algunos otros materiales, abundando los artefactos durante la observacin. Debido a
que se usan varios reactivos resulta poco econmica, no obstante su eficacia.
En la mayora de los casos los parsitos intestinales se pueden observar bien con
tinciones temporales, como es el caso de los exmenes directos con lugol, solucin
salina o Sudn, como se observ en prcticas anteriores. En algunas ocasiones es
necesario teir los parsitos en forma definitiva, para obtener preparaciones
permanentes; otras veces estas tinciones son necesarias porque se necesita
distinguir algunas de sus estructuras celulares, usando tinciones especiales
permanentes. Algunos parsitos requieren tinciones especiales, para poder
observarse. El inmunodiagnstico puede realizarse recurriendo a la tincin con
anticuerpos marcados con colorantes fluorescentes, permitiendo una identificacin
ms fcil.
Las preparaciones fecales permanentes son hechas por diferentes razones:
1. Proporcionan
informacin sobre el material estudiado. (ej: tincin de
Romanowsky)
2. tiles en la identificacin exacta de flagelados (eJ: tincin de Romanowsky,
tincin de Fierro-hematoxilina)
31
3. Cuando el parsito no puede ser detectado en preparaciones en fresco o por

tcnicas de concentracin, la tincin permanente de material fecal fresco puede
revelar la presencia de parsitos intestinales (ej: tincin de Romanowsky,
tincin Trichromo, Tincin de ziehl Neelsen modificada)
4. Son tiles en la demostracin de patrones nucleares de quistes, facilitando la
identificacin (Tincin de fierro-hematoxilina, tincin Tricromo)
- Cada alumno debe trabajar por lo menos con dos especmenes diferentes, una
muestra debe ser propia del alumno y una segunda puede ser de otra persona.
- Se debe observar una muestra control positiva proporcionada por el profesor.
1.-Mtodo del Formol-ter (Mtodo de Ritchie):
Con un abatelenguas coloque en un vasito 1 g de heces (aprox. el tamao de un

cacahuate) y adicione
10-12 ml de solucin salina. Homogenice.
Filtre la suspensin a travs de un colador o malla y reciba el filtrado en un tubo

de centrfuga de vidrio de 14 ml
Centrifugue 1 min a 1500 r.p.m. Elimine el sobrenadante y resuspenda en

solucin salina.
Repita el paso anterior, dos o tres veces, resuspendiendo el sedimento en
solucin salina y homogenizando con un aplicador, para obtener un sedimento
ms limpio.
Agregue al sedimento 10 ml de formol al 10%, mezcle y deje en reposo de 5
min.
Aada 3 ml de ter y agite vigorosamente 30 segundos.
Centrifugue 1 min a 1500 r.p.m.
Despus de centrifugar, se observan 4 capas en orden descendente.
o ter y lpidos en la superficie
o Un tapn de restos fecales
o Formaldehido
o Sedimento en el fondo del tubo conteniendo los parsitos.
Se decanta la muestra y se conserva el sedimento agregando 0.5 ml de formol al
10%. De este concentrado se harn las tinciones permanentes
2. Frotis de materia fecal
Coloque una gota grande de materia fecal proveniente del concentrado de

Ritchie, a un cm de la orilla del portaobjetos limpio y desengrasado. Use la
32
esquina de otro portaobjetos con el fin de extenderla en toda la superficie de la

laminilla.
Este frotis se deja secar completamente y se fija con metanol, dejando que el
metanol deshidrate la preparacin por tres minutos.
Pasado el tiempo de fijacin se retira el exceso de metanol y se deja secar
completamente. Una vez seco el frotis est listo para ser teido.
3.- Tinciones permanentes para las concentraciones por sedimentacin

2.1 Tincin con Giemsa
El colorante de Giemsa puede ser usado para frotes de heces concentradas,
exudados fecales y aspirados duodenales.
Mtodo
Haga un frote delgado del resultado de la concentracin por Faust. Deje secar
al aire libre.
Fije con metanol por 1 minuto. Escurra y deje secar.
Cubra el frote con colorante Giemsa diluido 1:10 con agua destilada. Cada vez
debe prepararse el colorante. Deje colorear por 20-25 minutos.
Lave con agua de la llave y no deje precipitar el colorante en el frote. Deje
secar al aire libre. Examine el frote a 100 X.
Los Flagelos, cilios y ncleos se tien de rojo y el citoplasma azul.
o Colorante de Giemsa: 1 g de polvo de Giemsa + 66 mL de glicerina
calentado a 50 grados durante 2 horas, aadir 66 mL de alcohol metlico
absoluto, dejar a temperatura ambiente 7-14 das (maduracin). Filtrar
antes de su empleo.
2.2 Tincin de Ziehl-Neelsen (cido-resistente) Modificada:

Esta tcnica es til en la identificacin de ooquistes de coccidios como
Cryptosporidium, Isospora, y Cyclospora, que son difciles de detectar con colorantes
rutinarios. Esta tincin de Ziehl-Neelsen Modificada no requiere el calentamiento de
los reactivos al teir.
Espcimen: Puede utilizarse el sedimento concentrado de heces frescas o
preservadas en formalina.
Reactivos para la tincin:
Se efectan cuatro pasos en el proceso, con diferentes reactivos:

o Metanol Absoluto
o Alcohol Acido: 10 ml de cido Sulfrico + 90 ml de etanol Absoluto.
Almacene a temperatura ambiente.
o Carbol fucsina
33
o Verde de Malaquita al 3%: disuelva 3 g de verde de malaquita en 100

ml de agua destilada. Almacene a temperatura ambiente.
Procedimiento de la tincin:
1. Preparar un frote con 1 a 2 gotas del espcimen fecal sobre un portaobjetos y
secar en una platina caliente a 60C. Los frotes no deben quedar demasiado
gruesos.
2. Fijar con metanol absoluto durante 30 segundos. Teir con carbol Fucsina
por un minuto. Lavar con agua destilada brevemente y escurrir.
3. Decolorar con alcohol- cido durante 2 minutos. Enjuagar con agua destilada y
escurrir.
4. Teir con el colorante de contraste verde de malaquita durante 2 minutos.
Lavar brevemente con agua destilada y escurra.
5. Secar el portaobjetos sobre una platina caliente a 60 C durante 5 minutos.
Montar la preparacin con un cubreobjetos usando un medio de montaje.
6. Examinar 200 a 300 campos usando el objetivo seco fuerte 40. Para
confirmar la morfologa interna, use el objetivo de aceite de inmersin 100x.
3. Fuentes comunes de error:
Una suspensin fecal demasiado cargada
Suspensin fecal pobre, Centrifuga mal equilibrada, Tiempo y velocidad de
centrifugacin inadecuados.
12. Haga dibujos detallados de los parsitos encontrados e identifquelos mediante la
comparacin de su morfologa con los manuales y libros.
Discuta las dificultades y las facilidades de la tcnica, con respecto a las anteriores
RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA
Murray, R.P., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.A. Pfaller and R.H. Yolken. 2003. Manual
of Clinical Microbiology. American Society for Microbiology. ASM Press; 8th edition.
Garcia, L.S. 2001. Diagnostic Medical Parasitology, 4th Ed., ASM Press, Washington,
D.C.
DPDx Selection of Standard Techniques for Examination of Fecal Specimens
34
PRACTICA # 11
PLATELMINTOS
OBJETIVOS DE LA PRCTICA
Conocer las diferentes fases de los Platyhelminthes tisulares dentro de su ciclo

de vida.
Que el alumno identifique las estructuras parasitarias inmersas en el tejido,
particularmente el caso de larvas.
Conocer las fases de los Platyhelminthes intestinales dentro de su ciclo vital,
para identificarlos en ejemplares adultos, huevos y larvas.
INTRODUCCIN
Los platelmintos son gusanos planos, pluricelulares, con simetra bilateral,
acelomados y triblasticos. Taxonmicamente pertenecen al Reino Animalia,
Superphylum de los Invertebrados, Phylum Platyhelminthes. La gran mayora de ellos
son hermafroditas con la capacidad de auto-copulacin. Existen tres clases de
Platelmintos de las cuales solo dos son de importancia medica: Trematoda y Cestoda.
La clase Trematoda o "duelas" presenta organismos con forma de hoja alargada,
aplanados dorsoventralmente, con rganos de fijacin consistentes en ganchos o en
depresiones musculares en forma de copa terminada en ventosas. Su aparato
digestivo es rudimentario, comienza en una boca y termina en ciego. De los tres
rdenes de la Clase Trematoda, el Orden Digenea incluye todas las especies
parsitas humanas. Los miembros de este orden tienen ciclos de vida complejos, por
lo menos con un husped intermediario, un molusco. Hay especies hepticas,
hemticas y pulmonares en humanos. Las especies ms comunes son Fasciola
hepatica, Schistosoma mansoni y Paragonimus westermani (ver Figura 1).
Los miembros de la Clase Cestoda tienen cuerpo alargado en forma de cinta

segmentada, que lleva en el extremo anterior un rgano especial de fijacin: el esclex.
Del esclex emerge un cuello del cual se generaran los progltidos, y existen progltidos
inmaduros, maduros y grvidos. Al conjunto de progltidos se le conoce como cadena
estrobilar. Estos gusanos no poseen aparato digestivo. Los cstodos adultos o tenias,
viven en el intestino delgado. Con excepcin de Hymenolepis nana, los cestodos
requieren un hospedador intermediario para el desarrollo larvario. El hombre puede ser
hospedador de los adultos, o de las fases larvarias, dependiendo de la especie.
Ejemplos comunes son Taenia solium, Taenia saginata, Echinococcus granulosus,
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Hymenolepis nana, Hymenolepis diminuta, Diphyllobotrium latum y Dypilidium caninum

(ver figura 2).
MATERIALES Y MTODOS
1. Observe a simple vista (macroscpicamente), parsitos adultos o fragmentos de
ellos y note las diferencias morfolgicas. Escriba el nombre cientfico correspondiente
y los nombres de sus estructuras, aclarando si es ejemplar completo o es fragmento.
Haga dibujos.
2. Observe al microscopio larvas y huevos, montados en laminillas fijas y aprenda a
diferenciarlos morfolgicamente. Anote la etapa de desarrollo correspondiente en
cada caso. Escriba el nombre cientfico en cada caso y los nombres de sus
estructuras.
3. Haga dibujos detallados de los diferentes estados observados en cada parsito
con el nombre de la fase observada. Discuta las similitudes y diferencias, entre ellos,
en sus diferentes etapas. Haga un esquema con dibujos del ciclo vital completo para
cada uno de los parsitos observados. Anote los nombres de las etapas de desarrollo
correspondientes en cada uno.
RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES.
BIBLIOGRAFA
DPDx parasite image library. 2005

Zhang,W. Jun Li, and Donald P. McManus. 2003. Concepts in Immunology and
Diagnosis of Hydatid Disease. Clin Microbiol Rev. 16(1): 1836.
36
PRACTICA #12
NEMATELMINTOS (CLASE NEMATODA)
Diferenciar morfolgicamente huevos, larvas y adultos de los nemtodos principales, ya
sea en forma macro o microscpica, segn el caso, comparando sus ciclos de vida.
INTRODUCCIN.
Los Aschelminthes o Nematelmintos (nemtodos) son gusanos redondos, alargados y
generalmente con los extremos adelgazados. Taxonmicamente pertenecen al Reino
Animalia, Superfilo de los Invertebrados, phylum de los Aschelmintos y clase nematoda.
Son organismos pseudocelomados, triblasticos (poseen tres capas en el desarrollo
embrionario) y con simetra bilateral. Son dioicos esto quiere decir que tienen sexos
separados, y poseen un marcado dimorfismo sexual, siendo el macho generalmente
ms pequeo que la hembra. Tienen un aparato digestivo bien desarrollado compuesto
por una boca generalmente trilabiada, una faringe musculosa, esfago, intestinos y ano.
Cerca del ano se encuentra una regin conocida como cloaca, donde se localizan los
aparatos reproductores masculinos y femeninos segn sea el caso. Poseen una
cutcula gruesa que puede ser lisa, o puede extenderse formando una serie de
estructuras, sobre todo en los extremos anterior y posterior. Esta cutcula est
compuesta principalmente por colgeno, lo que le confiere una gran resistencia. En su
ciclo de vida tienen varias fases, dentro de las cuales se incluyen: el huevo, diferentes
fases larvarias segn sea la especie y los adultos.
Aunque la mayora de los nematodos son de vida libre, numerosas especies parasitan
al hombre, a los animales y a las plantas. Los huevos de algunas especies de
nematodos que parasitan al ser humano requieren madurar en el suelo causando
geohelmintiasis, por ejemplo: Ascaris lumbricoides, Trichuris trichura y la Toxocara sp
(ver figura 1).
Otras especies se trasmiten por el contacto directo con agua contaminada con larvas
filariformes de estos nematodos, por ejemplo: Ancylostoma duodenale, Necator
americanus y Strongyloides stercolaris (ver figura 2).
37
Algunos de estos nematodos tienen transmisin por artrpodos ya sea actuando como
vectores o como huspedes intermediarios, por ejemplo: Onchocerca volvulus,
Mansonella sp, Brugia sp, Loa loa, Dracunculus medinensis (ver figura 3).
Existen tambin nematodos que se transmite por la ingesta de carne mal poco cocida o
mal cocida de cerdo, pato o ancas de rana, por ejemplo: Trichinella spiralis y
Gnatostoma spp (ver figura 4).
Tambin un nematodo es tan liviano que se disemina por el aire y se puede transmitir
mediante la ingesta o aspiracin de los huevecillos, por ejemplo el Enterobius
vermicularis (ver figura 5).
38
I. Estudie en un Ier grupo los nemtodos intestinales.
Observe al microscopio de luz, ejemplares de huevos y larvas microscpicos de
nemtodos, montados en laminillas fijas. Note las diferencias morfolgicas para su
identificacin.
Observe bajo el microscopio de diseccin ejemplares de adultos macroscpicos. Haga
dibujos detallados de todos los parsitos observados, con el nombre de sus
estructuras y el nombre cientfico correspondiente de cada parsito. Compare las
similitudes y diferencias entre los dieferentes gneros observados.
Dibuje los ciclos vitales correspondientes
observadas en el laboratorio.
para cada gnero, indicando las fases
II. Estudie en un 2do grupo los nemtodos tisulares

Observe al microscopio de luz, ejemplares de huevos y larvas microscpicos de
nemtodos, montados en laminillas fijas. Note las diferencias morfolgicas para su
identificacin.
Observe bajo el microscopio de diseccin ejemplares de adultos macroscpicos. Haga
dibujos detallados de todos los parsitos observados, con el nombre de sus
estructuras y el nombre cientfico correspondiente de cada parsito.
Compare las similitudes y diferencias entre los gneros observados. Dibuje los ciclos
vitales correspondientes para cada gnero, indicando las fases observadas en el
laboratorio

Haga dibujos detallados de todos los ejemplares observados, como se indic
anteriormente. Disctalas y concluya.
CUESTIONARIO.
1. Haga separadamente un esquema del ciclo vital completo de cada uno de los
parsitos observados en la prctica.
39
PRACTICA #13
ARTHROPODA
OBJETIVO DE LA PRCTICA:
Observar las diferencias morfolgicas de los artrpodos ms comunes, para aprender a
identificarlos.
INTRODUCCION
Los animales de este phylum poseen apndices articulados y un exoesqueleto quitinoso.
Son organismos invertebrados con simetra bilateral y el cuerpo segmentado. Su ciclo de
vida incluye dos tipos de metamorfosis: Completa (Holometabola) e Incompleta
(Hemimetabola). Taxonmicamente pertenecen al Reino Animalia, Superphylum de los
invertebrados y phylum Artrpoda. Existen seis clases de artrpodos: Crustacea,
Insecta, Arachnida, Chilapoda, Diplapoda y Onychophora. De las cuales solo tres son de
importancia mdica: Crustacea, Insecta y Arachnida. Los artrpodos son tienen una
importancia biomdica ya que pueden ser ectoparsitos, vectores (biolgicos y
mecnicos), huspedes intermediarios, ponzoosos y txico alergenicos.
CLASE CRUSTACEA:
Incluye formas acuticas, como cangrejos, langostas, coppodos, gambas. Algunos son
huspedes intermediarios de parsitos platelmintos humanos. Por ejemplo coppodos
en la infeccin generada por Diphyllobotrium latum, y en el caso de Paragonimus
mexicanus donde los huspedes intermediarios pueden ser Cangrejos y camarones.
CLASE INSECTA:
Incluye artrpodos de importancia mdica. Tienen el cuerpo dividido en tres partes:
cabeza, trax y abdomen. Poseen tres pares de patas y algunos dos pares de alas. En
esta clase se encuentran representantes ectoparsitos (Piojos y pulgas), vectores
biolgicos (Triatoma sp, Anopheles sp, Lutzomyia sp.), vectores mecnicos (Moscas y
Cucarachas), huspedes intermediarios (Pulgas y escarabajos) y Toxico alergenicos
(Hormigas y Abejas).
Los rdenes de importancia mdica son:
Orden Anoplura: Son piojos chupadores, aplastados dorsoventralmente, pteros.
Orden Hemiptera: Chinches verdaderas, ej: las de cama. Pueden ser pteras o aladas.
Los redvidos (de nariz cnica) son vectores de Tripanosomas.
Orden Coleoptera: Son los escarabajos. Algunos son huspedes intermediarios de
cstodos. Tienen alas endurecidas.
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Orden Hymenoptera: Incluyen hormigas, abejas, avispas. Son importantes por el

veneno de sus aguijones. Algunas hormigas son huspedes intermediarios de un
cstodo.
Orden Diptera: Con un par de alas autnticas, incluye moscas y mosquitos. Algunas
larvas de moscas son parsitas del hombre y de animales y los mosquitos transmiten
diferentes patgeno.
CLASE ARACHNIDA:
Tienen el cuerpo dividido en dos partes, llamadas cefalotorax y abdomen. Los adultos
tienen cuatro pares de patas. Ejemplo, los escorpiones (alacranes), araas, garrapatas y
caros. Algunos producen veneno txico en diferente grado. Otros pueden ser vectores
biolgicos de algunos agentes patgenos.
1. Haga observaciones macroscpicas (a simple vista) de artrpodos montados en
preparaciones permanentes. A continuacin valos con el microscopio estereoscpico.
Los ms pequeos puede observarlos bajo el microscopio compuesto. Haga dibujos
detallados anotando los nombres de las partes del cuerpo y el nombre cientfico
correspondiente de cada ejemplar, acompaado del nombre popular.
Compare y discuta las similitudes y diferencias.
2. Improvise una red para cazar artrpodos en la forma siguiente:
Con un gancho de alambre (de los usados para colgar ropa) forme un crculo y sujtelo
a un palo de escoba o similar. Con un pedazo de manta de cielo cosa un cono y
amrrelo al crculo de alambre. Haga una excursin al campo y colecte artrpodos con
la red fabricada. Llvelos al laboratorio y clasifquelos.
CUESTIONARIO.
1. Investigue en la biblioteca los datos sobre los artrpodos ms comunes importantes
en Mxico, ya sea como parsitos o como animales venenosos, que incluya arcnidos e
insectos y su distribucin geogrfica.
41
BIBLIOGRAFA
Benson, H. . 1990
Microbiological Applications.
A laboratory Manual in General Microbiology
WCB Wm.C.Brown Publishers
Colom, J, R. Cano, A. M. Kubinski y D. Grady. 1986.

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Ed. Harper & Row, Publ.
Faust, C. E., P.C. Beaver, y R.C. Jung.

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Ed. Lea & Febiger. Pa. USA.
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Becton Dickinson, S.A. de C.V.
Romero-Cabello, R. 1999.
Microbiologa y Parasitologa humana.
Ed. Mdica Panamericana, Mexixo.
Stevens, R. 1986.
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Parasitologa Mdica.1980.
Ed. Fco. Mndez Cervantes. Mxico, D.F.
43

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INDICE

INTRODUCCIN A LA PARASITOLOGA ..................................................................................... iii

Sarcomastigophora (flagelados y amibas): incluye los flagelados que se

Apicomplexa (esporozoarios): se localizan en la sangre, los tejidos o en el intestino

Ciliophora (ciliados): la nica especie de protozoario ciliado que tiene la capacidad

Microsporidios: parsitos intracelulares obligados que se caracterizan por generar

Cerca del 10 % de la poblacin mundial est infectada con E. histolytica. El

infecciosas a nivel mundial. La neumona por Pneumocystis carinii es la principal

Phylum Aschelminthes: (gusanos redondos), por ejemplo Ancylostoma

Phylum Platyhelminthes: (gusanos planos), como Taenia sp, Hymenolepis sp,

Todos las etapas de un parsito pueden ser desarrolladas en un slo husped o en

REGLAMENTO DEL LABORATORIO DE PARASITOLOGA

En esta prctica introductoria se explicar al alumno las bases del funcionamiento

REGLAMENTO DE LOS LABORATORIOS DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA

Son los espacios acadmicos donde se llevan a cabo prcticas de diferentes

30. En caso de contaminacin bacteriana o con parsitos, o en caso de accidentes en

Ante el incumplimiento de estas normas por el alumno, ser sancionado por el

El microscopio de luz (ptico):

objetos en estudio aparecen ms obscuros. Generalmente producen un aumento til

en forma de distintos grados de brillo o de oscuridad (un mejor contraste), pudiendo

RESULTADOS, DISCUSIN y CONCLUSIN.

Mutualismo: Es una relacin entre seres de distintas especies en la cual ambos

Uno de los seres vivos mejor adaptados en la naturaleza es la cucaracha domstica.

PRACTICA #3 (Primera Parte)

Preservacin de especmenes fecales:

4. Examinar la muestra para buscar sangre y/o moco.

Que el alumno conozca la clasificacin general de los parsitos protozoarios,

Sub Phylum Mastigophora

Sub Phylum Sarcodina

COMENSALES DEL TUBO

Sub Clase Coccidia

Sub orden Eimeriida

Figura 1. 1)Trofozoto de E. histolytica, 2) Trofozoto de E.coli, 3) Trofozoto de

Carta de Frecuencia de Distribucin Sugerida

2 a 5 organismos por 2 a 5 organismos por

1 organismo por 5 a 10 1 huevo/larva por 5 a 10

1 a 2 organismos por 1 a 2 huevos /larvas por

Varios organismos en Varios huevos /larvas en

- Complemente la prctica, consultando los ciclos vitales completos en cada parsito,

2. Observacin de inclusiones de reserva (Vacuolas digestivas)

e) El resto del sedimento se guarda para el cultivo.

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES.

tipo de frotis es ms efectivo en los casos de infecciones nuevas o crnicas por

3. Cuando el parsito no puede ser detectado en preparaciones en fresco o por

Con un abatelenguas coloque en un vasito 1 g de heces (aprox. el tamao de un

10-12 ml de solucin salina. Homogenice.

Filtre la suspensin a travs de un colador o malla y reciba el filtrado en un tubo

Centrifugue 1 min a 1500 r.p.m. Elimine el sobrenadante y resuspenda en

2. Frotis de materia fecal

Coloque una gota grande de materia fecal proveniente del concentrado de

esquina de otro portaobjetos con el fin de extenderla en toda la superficie de la

3.- Tinciones permanentes para las concentraciones por sedimentacin

2.2 Tincin de Ziehl-Neelsen (cido-resistente) Modificada:

Se efectan cuatro pasos en el proceso, con diferentes reactivos:

o Verde de Malaquita al 3%: disuelva 3 g de verde de malaquita en 100

Conocer las diferentes fases de los Platyhelminthes tisulares dentro de su ciclo

Los miembros de la Clase Cestoda tienen cuerpo alargado en forma de cinta

Hymenolepis nana, Hymenolepis diminuta, Diphyllobotrium latum y Dypilidium caninum

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES.

DPDx parasite image library. 2005

para cada gnero, indicando las fases

II. Estudie en un 2do grupo los nemtodos tisulares

RESULTADOS, DISCUSION Y CONCLUSIONES.

Orden Hymenoptera: Incluyen hormigas, abejas, avispas. Son importantes por el