Aislamiento y cultivo de microorganismos | Practica 2

rea acadmica de qumica

Instituto de Ciencias Bsicas e Ingeniera
Universidad Autnoma del Estado de Hidalgo.

Integrantes:
Cruz Acosta Alfonso
Hernndez Vera Vctor Hugo
Islas Trejo Eltonh
Ortiz Hernndez Mariana
Materia: biotecnologa
Nombre del profesor: Dr. Carlos Alexander Lucho Constantino
Fecha de realizacin: 17, 18,19, 24/ agosto/ 2015
Fecha de entrega: 31/agosto/ 2015

Prctica 2
Aislamiento y cultivo de microorganismos

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1) Objetivo
Que el alumno conozca y maneje las tcnicas bsicas para el aislamiento y
seleccin de colonias de microorganismos.
2) Introduccin
Las bacterias deben ser cultivadas en medios de cultivo de laboratorio para
caracterizar su crecimiento, hacer su identificacin y determinar sus actividades
metablicas. Un medio de cultivo es una solucin acuosa de diferentes
compuestos que contiene todos los elementos indispensables que requieren los
microorganismos para crecer.
Generalmente las bacterias son inoculadas o introducidas en medios lquidos
(clidos) o solidificados con agar para su propagacin y/o conservacin, as como
para estudiar su caractersticas de crecimiento. Es importante recordar que la
inoculacin de los microorganismos en los medios de cultivo, siempre debern
realizarse en zona asptica (cerca del mechero en una campana de flujo laminar),
condiciones

que

limitan

la

presencia

de

microrganismo

indeseables

contaminantes.
Las tcnicas de aislamiento, permiten la obtencin de microrganismos a partir de
muestras complejas (suelo, agua, alimentos, etc.) en las que hay una gran
diversidad microbiana, as como comprobar la pureza de los cultivos obtenidos.
Los cultivos puros estn formados por un solo tipo de microorganismo; y son
indispensables para conocer las caractersticas morfolgicas, propiedades de
tincin, actividad bioqumica, patogenicidad, sensibilidad a antibiticos e
identificacin de las especies microbianas.
El aislamiento de cultivos microbianos puede realizarse por mtodos de dilucin,
en medios solidos por estra en placa o en medios lquidos. En el primer caso se
considera que cada clula bacteriana que se separa dar origen a una poblacin
que formara una colonia caracterstica, visible a simple vista.
La limitacin principal de estas tcnicas de dilucin, es que no es prctica para el
aislamiento a partir de mezclas donde el microorganismo de inters se encuentra

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en pequeas cantidades, donde solamente se obtendrn las bacterias

dominantes.
Para favorecer el aislamiento de cultivos de baja densidad, se aplican mtodos
de cultivo especiales, en los que se utilizan medios que contienen nutrientes
especiales, antibiticos, altas concentraciones de sales y/o condiciones de pH, luz
o temperatura para favorecer el crecimiento de miro organismos de inters y se
conocen como selectivos o de enriquecimiento.
En ocasiones se pueden agregar a los medios de cultivo otros componentes
como: sangre, colorantes, indicadores, etc. Para distinguir especies bacterianas
diferentes por la forma en que metabolizan los sustratos que se manifiesta por
cambios en la apariencia o modificacin en el pH del medio de cultivo. Estos
medios se conocen como medios diferenciales y son de gran utilidad para la
caracterizacin e identificacin de especies bacterianas.
3) Material, reactivos y equipos
Material
Tubos de ensayo
Cajas Petri
Asa de cultivo

Reactivos
Caldo nutritivo
Agar nutritivo
Tortilla, caf, flan

Equipo
Autoclave
Incubadora

4) Metodologa
Se prepararon el agar y caldo nutritivo y se colocaron en el autoclave junto con los
tubos de ensaye, para matar microorganismos. Las cajas Petri no hubo necesidad
de ponerlas en el autoclave ya que ya estaban esterilizadas.
En los tubos de ensayo se colocaron aproximadamente 4 ml de caldo nutritivo, en
las cajas Petri se coloc el agar nutritivo.
Para la siembra de microorganismos se utiliz un asa de cultivo. Los
microorganismos se obtuvieron de tortillas, caf y flan en descomposicin. Se
realiz la siembra tanto en medio lquido y slido.
Para la siembra en medio lquido, primero el asa de cultivo se calent con la flama
de un mechero, posteriormente se dej enfriar por 10 segundos. Ya fra el asa se

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tomaba con la otra mano el tubo de ensayo y se abra cerca de la flama para
matar microorganismos del ambiente, se tomaba la muestra con el asa y se
sumerga dentro del tubo y se agitaba para depositar los microrganismos. Se
flameaba la boca del tubo y se cerraba. Este procedimiento se realiz para todas
las muestras.
Para la siembra en medio slido, el asa se flameaba y se dejaba enfriar, con la
otra mano se tomaba una caja Petri y se abra cerca del mechero, con el asa se
tomaba la muestra y se realizaban estras en el agar nutritivo, cuidando que las
estras no se intersectaran entre s. Despus se cerraba la caja Petri y se pona
boca abajo, esto se hizo ya que si se formaban gotas de agua, estas no cayeran
sobre el rea de crecimiento.
Tanto los tubos y las cajas se etiquetaron, y se incubaron a 37C durante dos
semana. Cada cierto tiempo se sacaban de la incubadora para ver el crecimiento
de los microorganismos.
5) Resultados y Discusin
Al da siguiente del sembrado en medio slido, ya se poda ver crecimiento en los
cultivos, pero donde se notaba ms crecimiento, fue en el cultivo de
microorganismos de tortilla. Donde en las estras se notaban pequeos grnulos
de color blanco.

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Figura 1: crecimiento de
microorganismos en medio solido

Figura 2: crecimiento de microorganismos

en medio solido

Figura 3: crecimiento de microorganismos

en medio solido

En el medio lquido tambin se observ crecimiento de microorganismos, ya que al

compararlos con el blanco, el caldo nutritivo con las muestras estaba turbio, y en
la muestra con flan, en la interface se notaba un aceite color caf.

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Figura 4: comparacin del blanco y el crecimiento

de microrganismos en el caldo nutritivo

6) Conclusiones
Se inocularon los microorganismos de diferentes muestras utilizando las tcnicas
bsicas para el aislamiento y seleccin de colonias de microorganismos,
obteniendo en medio slido y lquido el crecimiento de los cultivos el cual se
observaba por medio de grnulos blancos y turbidez respectivamente.
7) Cuestionario
1 Cul es el objetivo de flamear el asa antes de introducirla en un cultivo?
El objetivo de mantener el asa algunos segundos en la llama es esterilizar el
hilo de metal con el cual se realiza el inculo. (Stanier, Y.R., Ingraham, J.L.,
Wheelis, M.L. & Painter,P.R.,1992).
2 Cul es el objetivo de trabajar alrededor de la flama del mechero?
La superficie externa de un recipiente de cultivo est, por supuesto, sometida a
contaminacin y el interior del matraz o del tubo puede contaminarse cuando
se abre para introducir o retirar el material. Este peligro se reduce al mnimo
trabajando alrededor de la flama de un mechero, inmediatamente de retirar la
tapa o tapn y, de nuevo, justo antes de volver a colocarlos. (Rodrguez
Cavallini, E., Gamboa Coronado, M., Hernndez Chavarria, F. & Garca
Hidalgo, J.D., 2005).
3 Por qu deben incubarse invertidas las cajas Petri?
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Las placas deben incubarse en posicin invertida (con la tapa hacia abajo)
para impedir que la condensacin del agua que esta acumulada en la tapa
caiga sobre el cultivo. (Rodrguez Cavallini, E., Gamboa Coronado, M.,
Hernndez Chavarria, F. & Garca Hidalgo, J.D. ,2005).
4 Defina qu es una cepa
Organismo que presenta un fenotipo caracterstico reproducible de una
generacin a la otra.(Glosario UNAM,2011)

8) Bibliografa
Stanier, Y.R., Ingraham, J.L., Wheelis, M.L. & Painter,P.R.(1992).Microbiologa.(2da
ed.)New Jersey: Revert.
Rodrguez Cavallini, E., Gamboa Coronado, M., Hernndez Chavarria, F. & Garca
Hidalgo, J.D. (2005). Bacteriologa General: Principios Y Prcticas de Laboratorio.
Costa Rica:UCR.
Molina Lpez, J. & Uribarren Berrueta T. (2011). Generalidades de bacterias.
Recuperado

el

30

de

agosto

de

2015

http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/bacteriologia/generalidades.html
Ortega, M. (2009). Catedra de Biotecnologa. Recuperado el 30 de agosto de 2015
http://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/practic
o4.pdf

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