PRCTICA 7

DETERMINACIN DE ANTICUERPOS ANTI- Helicobacter pylori

EQUIPO 1, 7 A
Wuendy Mara Chavarra Torres, Geraldine vila Martnez, Benjamn Bretado de
Santiago, Gustavo Asael Borjn Arroyo, Mircoles 07:00 a.m. 10:00 a.m. 9 de
noviembre del 2016.
Ciclo escolar agosto diciembre 2016.
Laboratorio de Inmunologa Diagnstica, Unidad Acadmica de Ciencias Qumicas,
Universidad Autnoma de Zacatecas.

Resumen: Helicobacter pylori, bacteria gramnegativa flagelada, causante de

diversas afecciones gastrointestinales como ulcera pptica, gastritis, cncer de
colon, etc; afecta a una gran parte de la poblacin mundial y es por ello que
existen varias pruebas diagnsticas inmunolgicas para detectar la presencia
de este microorganismo y as establecer un diagnstico y tratamiento
oportunos. En el presente trabajo se describe la metodologa que se emple
para detectar anticuerpos IgG, que son producidos como respuesta inmune
humoral ante una infeccin con H. pylori, llevando a cabo una serie de
incubaciones con varios anticuerpos y la muestra de un paciente, con sus
respectivos controles positivo y negativo. Se encontr que en el suero de dicho
paciente no haba presencia de anticuerpos (IgG) contra H. pylori, concluyendo
que no presentaba infeccin alguna por esta bacteria, sin embargo no se
descarta la posibilidad de realizar otra prueba de mayor valor diagnstico para
establecer con mayor seguridad un diagnstico.
Palabras clave: Helicobacter pylori, IgG, Inmunoensayo, reaccin enzimtica, anticuerpos,
prueba diagnstica

Introduccin
Helicobacter pylori es un bacilo
gramnegativo en forma de espiral y se
relaciona con gastritis del antro, lceras
duodenales (ppticas), lceras gstricas y
carcinoma gstrico. Existen otras especies
del gnero Helicobacter que infectan la
mucosa gstrica pero son infrecuentes.
H. pylori se multiplica en condiciones
ptimas a un pH de 6.0 a 7.0 y se
destruira o no se multiplicara con el pH
presente dentro de la luz gstrica. El
moco
gstrico
es
relativamente
impermeable al cido y tiene una potente
capacidad amortiguadora. En el extremo
luminal del moco, el pH es bajo (1.0 a
2.0), en tanto que en el lado epitelial el

pH es de casi 7.4. H. pylori se aloja en

partes profundas de la capa mucosa cerca
de la superficie epitelial donde existe un
pH fisiolgico.
Los mecanismos por los cuales H. pylori
produce inflamacin de la mucosa y
lesin no estn bien definidos pero
probablemente implican factores tanto
bacterianos como del hospedador. Las
bacterias invaden las superficies de la
clula epitelial en un grado limitado. Las
toxinas y los lipopolisacridos pueden
lesionar las clulas de la mucosa y el
amoniaco producido por la actividad de la
ureasa puede tambin daar directamente
las clulas. En el examen histolgico la
1

gastritis se caracteriza por inflamacin

crnica y activa. Se observan infiltrados
de
clulas
polimorfonucleares
y
mononucleares dentro del epitelio y la
lmina propia. Las vacuolas en el interior
de las clulas suelen ser abundantes. Es
frecuente la destruccin del epitelio y
puede ocurrir atrofia glandular. Por
consiguiente, H. pylori constituye un
factor de riesgo importante para el cncer
gstrico.

uno para la muestra problema, y dos para

los controles positivo y negativo.
Enseguida se realiz una dilucin de la
muestra y de los controles, colocando 100
l de diluyente en un microtubo o
micropocillos de titulacin y 10 l de la
muestra y de los controles positivo y
negativo y se homogeneiz con ayuda de
la micropipeta, vaciando y llenando varias
veces.

Se han desarrollado varios anlisis para

detectar anticuerpos sricos especficos
contra H. pylori. Los anticuerpos sricos
persisten aun cuando se erradique la
infeccin por H. pylori y por tanto es
limitado el papel de las pruebas de
anticuerpo en el diagnstico de la
infeccin activa o despus del
tratamiento.
Los pacientes infectados por H. pylori
presentan una respuesta de anticuerpo
IgM a la infeccin. Despus, se producen
IgG e IgA y persisten, tanto generalizados
como en la mucosa en ttulos elevados en
las personas con infeccin crnica. El
tratamiento antimicrobiano inicial de la
infeccin por H. pylori reduce la
respuesta de anticuerpos; se considera que
estos pacientes estn sujetos a una
recidiva de la infeccin.
Material y Mtodos
Primeramente se colocaron todos los
reactivos y las muestras a temperatura
ambiente para despus realizar la prueba a
temperatura ambiente. Se prepar la
bandeja de desarrollo, incubando a 37C
por 20 minutos. Se retir el peine de su
empaque, procurando no tocar los dientes
y asegurar un correcto funcionamiento de
la prueba, se cort una parte del peine, ya
que no era necesario usar todos los
dientes, aunque de ser necesario puede
usarse el peine completo; en nuestro caso
se utilizaron solo tres dientes del peine,

Fig. 1
Despus se tomaron 25 l de la muestra
diluida y con ayuda de una perforadora de
plstico se rompi la cubierta de aluminio
de un pocillo de la fila A (Fig. 1) y se
coloc la muestra hasta el fondo del
pocillo, mezclando la solucin vaciando y
rellenando el pocillo. Y para los controles
positivo y negativo se realiz el mismo
procedimiento (Fig. 2). Posteriormente se
insert el peine en los pocillos de la fila A
que contienen las muestras y los
controles. Se mezcl retirando e
insertando el Peine en los pocillos varias
veces para despus dejarlo por 30
minutos dentro de los pocillos (Fig. 3).

minutos. Una vez transcurridos los dos

minutos se retir el peine y se absorbi el
lquido adherido.

Fig. 2

Fig. 5
Despus se introdujo el peine en los
pocillos de la fila C (Fig. 5), se mezcl y
se dej reposar por un tiempo de 20
minutos. Pasado este tiempo se retir el
peine y se elimin el excedente de
lquido. Se perfor el papel de aluminio
de la fila D y se insert el peine en los
pocillos de la fila D. Se agit
repetidamente durante 2 minutos;
mientras tanto se perfor el papel de
aluminio de la fila E. Despus de 2
minutos se retir el peine y se elimin el
lquido adherido.

Fig. 3
Pocos segundos antes de terminar los 30
minutos se perforaron los pocillos de la
fila B usando el perforador. Al cumplirse
los 30 minutos se retir el peine de la fila
A y se retir el excedente de lquido
absorbindolo con ayuda de papel
absorbente (Fig 4).

Posteriormente se introdujo el peine en

los pocillos de la fila E y se agit
repetidamente durante 2 minutos. Se
perfor el papel de aluminio de la fila F y
despus de 2 minutos se extrajo el peine y
se retir el lquido adherido.

Se insert el peine en los pocillos en la

fila B, agitando vigorosamente durante
10 segundos para que el lavado sea el
adecuado, repitiendo dicha accin cada 2
3

Resultados

Fig. 6
En seguida se insert el peine en los
pocillos de la fila F, se mezcl e incub la
bandeja con el peine por 10 minutos (Fig.
6). Despus de 10 minutos se retir el
peine y se insert de nuevo en la fila E.
Finalmente, despus de un minuto, se
retir el peine y se dej secar al aire (Fig.
7).

De izquierda a derecha. Muestra

problema (negativo), control negativo,
control positivo.
Conclusiones
La muestra analizada no presenta
anticuerpos frente a H. pylori, tanto de
respuesta primaria, como de respuesta
secundaria o tarda, lo que indica que el
paciente nuca ha presentado infeccin por
este microorganismo.
Discusin
La obtencin de un resultado negativo
con esta prueba no define el diagnstico
del paciente, se deben tener en cuenta su
historial mdico, signos y sntomas, entre
otras manifestaciones clnicas, y de ser
necesario se debe corroborar el resultado
con otra prueba de mayor valor
diagnstico.

Fig. 7

Bibliografa
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SHERRIS. MICROBIOLOGA
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