1/5/2015

:::... Biotecnologa de la Reproduccin - Gustavo A. Palma ...:::

Protocolodecongelacin
El semen ovino puede ser congelado en forma similar al semen bovino, en pastillas es la forma ms corriente y
econmicadecongelacindesemen.Suusoquedrestringidoalaseconomasemergentes.Lapajillaopajuela,sin
embargo,ofrecelassiguientesventajasparalacongelacindesemen(Buschycol.1986).
ElmtodorequiereslodeN2lquidoparalacongelacin
Lamayorsuperficiedecongelacinaseguraunaptimavelocidaddecongelacin
Mejoridentificacin(impresin,colores)
Mayorpracticidadalainseminacin
Mayorhigieneenlamanipulacindurantelacongelacineinseminacin
Menorprdidadelvolumenparainseminar
Previo a la descripcin de los mtodos de congelacin para pastillas y pajuelas es importante tener en cuenta los
siguientesconceptosparaunaeficientecongelacin:
La temperatura del semen deber describir una curva descendente y gradual desde la extraccin hasta la
congelacin(enCO2secoN2lquido)
ElsemenobtenidopormediodelaV.A.,cuandollegaallaboratorionosuperalos3233Cporloqueelbao
Maradeberestargraduadoa281C.
La dilucin final del eyaculado en el mtodo sugerido para pajuelas se har a T ambiente. En consecuencia es
importantemantenerellugardemanipulacindesemen(laboratorio)aunaTde202C.
Dado que en condiciones a campo no es posible contar con instrumental de medicin para controlar el pH y la
presin osmtica del diluyente, se recomienda evaluar la motilidad progresiva del semen enfriado a 5C luego de
cumplidoeltiempodeequilibracinyantesdedepositarloenlosvaloresdeN2.Estopermitirponerenevidenciasi
eldiluyenteluegode21/2hs.+30encontactoconelsemenestenbuenascondiciones.Delamismaformase
recomienda dejar dos gotas del mismo semen a T ambiente. En condiciones ptimas el primero (a 5C) y el
segundo(aTambiente,20C)debernconservarsimilarmotilidadrectilneaprogresivaquealadilucin.
Dilucindelsemen
LuegodelaobtencindeleyaculadosecolocasteenbaoMara(281C)mientrassellevanacabolatomade
muestras y los exmenes ya descriptos. Despus de establecida la concentracin se calcula el nmero total de
espermatozoides en el eyaculado. Ese nmero deber ser dividido por la cantidad de clulas espermticas que
llevar cada dosis, obtenindose el total de dosis que se podrn lograr en ese eyaculado. Finalmente el nmero
obtenidomultiplicadoporelvolumencorrespondienteacadadsis(0,10parapastillaso0,25parapajuelas)dar
porresultadoelvolumentotal,estoesdiluyente+semen.
Ejemplo
Volumendeleyaculado:0,7ml
Concentracin:3798x106clulasespermticas/ml
3798x0,7=2658x106espermatozoidestotales
Luego:Nro.total/concentracinenladosis
http://www.reprobiotec.com/congel_congel.html

1/2

1/5/2015

:::... Biotecnologa de la Reproduccin - Gustavo A. Palma ...:::

2658mill/40mill=66dosis
Luego:
1dosis=0,25ml
66dosis=0,25x66=16,5mlvolumentotal
Siunadosisesde0,50ml,entonces
Elvalordelvolumentotaldeberrestarseelcorrespondientealdelsemen,estoes:
16,5volumentotal0,7volumendelsemen=15,8mldediluyente
Ladilucinpodrllevarseacaboen1o2pasos.Enelsegundocasoelglicerolseadicionaconlasegundafraccin
(II)deldiluyenteatemperaturade5Cenformalentayagitandoelsemen.
Mtododecongelacinenpajuelas
DiluyenteTrisFructosa(Andersenycol.1976,Neves1980,Ankara1982).
Solucinmadre(ml)
Yemadehuevo(ml)
Glicerol(ml)
Totalvol.diluyente(ml)

76,0
20,0
4,0
100,0

pH6,4Presinosmtica(singlicerol)300,00mOsm
FrmuladelaSolucinMadre
Tris(hidroximetilaminometano)(gr)
DFructosa(gr)
Acidoctrico(gr)
Aguabidestilada(ml)

30,28
12,50
17,80
1000,00

Ladilucinsepuedellevaracaboenunpaso
Dadalaaltadilucin,deberserextravasadoaunrecipientequepermita,adems,cargarlaspajuelas.Paraellose
sugiere hacer una primer dilucin 1+3 ( 4) en el tubo recolector, homogeneizar y extravasar a un vaso de
precipitadocuyasparedesfueronhumedecidascon2ml.dediluyente.Posteriormentesecompletarladilucin.
Luegode5minutos(2)derepososeevaluarelsemen.Serecomiendanocongelarconunamotilidadprogresiva
inferiora70%alaconcentracinindicada.
Luegode5minutos(2)derepososeevaluarelsemen.Serecomiendanocongelarconunamotilidadprogresiva
inferiora70%alaconcentracinindicada.
Elenvasadosellevaracabomecnicamentepormediodeunaspiradoroenformamanual.Luegodelselladocon
alcoholpolivinlicoocalor,sellevarnlaspajuelasaunrefrigerador(5C)enunsoporte,enposicinhorizontal23h
(tiempodeequilibracin).Cumplidoeltiempodeequilibracinsesometernlaspajuelas,enformahorizontalalos
vaporesdeN2lquido(4cm.porencimadelnivelN2,120130C),durante15minutosyluegosesumergirnen
N2paraserenvasadosenlosvasosdeltermocontenedor.
Copyright20032007reprobiotec.com.Todoslosderechosreservados.Allrightsreserved.
CastorPoluxdesignwww.castorpolux.com.ar

http://www.reprobiotec.com/congel_congel.html

2/2