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espectrofotomtrico.
Resumen
El objetivo principal de la practica fue la determinacin de la actividad
enzimatica de la tirosinasa, para la determinacin de esta se utilizo el mtodo de
espectrofotometria, por medio de este fue posible determinar la absorbancia de la
tirosinasa a distintas concentraciones. Ya teniendo la absorbancia de estos se
pudo llegar a determinar el comportamiento de la enzima tirosinasa, a partir de la
grfica se puede llegar a determinar la actividad de esta enzima. Para llevar acabo
la experimentacin de utilizo _DOPA como sustrato, ya que el dopacromo posee
un mximo de absorcin de 475nm, por lo que la absorcin a esta longitud de
onda se utilizo para medir la actividad enzimatica. Las enzimas se caracterizan
por sen especificas por el tipo de reaccin y el sustrato. Algunos de los factores
que las influyen son la presencia de inhibidores, activadores, temperatura pH y
concentracin del sustrato.
Introduccin
La tirosinasa es una enzima catecoloxidasa,
segn
la
moderna
nomenclatura moderna y clasificacin
de enzimas es EC 1.14.18.1, tambin
es
llamada
monofenol
monooxigenasa. Esta enzima cataliza
la oxidacin de los orto-difenoles en
orto-quinonas utilizando como su
cofactor
el
DOPA
(dihidroxifenilalanina), mediante la
actividad cresolasa, que consiste en
la hidroxilacin de monofenoles en la
posicin orto para obtener odifenoles, o la actividad catecolasa,
que consiste en la oxidacin de ofenoles a sus respectivas o-quinonas.
La tirosinasa se encuentra en los
tejidos vegetales, principalmente en
las mitocondrias y cloroplastos de las
clulas, tambin se encuentra en las
vacuolas como parte soluble. Esta
enzima es la responsable del
pardeamiento enzimtico, la cual es
una reaccin de oxidacin en la cual
acta como sustrato el oxgeno
molecular.1
Resultados
En base a los resultados obtenidos,
se
pudo
observar
el
distinto
comportamiento de la enzima en las
distintas concentraciones en el
mismo intervalo de tiempo, en el cual
los datos obtenidos no fueron del
comportamiento lineal inicial de la
enzima esperada, deduciendo as
varios factores que pudieron afectar
en base a los clculos obtenidos.
Grfica no. 1 Actividad enzimtica de
tirosinasa
0.1mL
Linear.(0.1mL)
0.2mL
Linear.(0.2mL)
0.5mL
Linear.(0.5mL)
1.0 mL
Linear.(1.0 mL)
y = 0.60
0.0022x + 0.1532
y = 0.0051x + 0.2159
y = 0.45
0.008x + 0.1806
y = 0.0212x + 0.4812
0.30
0.15
0
1
Discusin
El objetivo principal de la practica fue
el anlisis de la enzima tirosina, la
cual se extrajo de una manzana, esta
enzima es la protena bsica de la
pigmentacin,
se
encuentra
clasificada como una enzima oxido
reductora y tienen como funcin la
oxidacion de fenoles. Este anlisis se
llevo a cabo a partir de un anlisis
espectrofotometrico, el cual nos
mostr
la
absorbancia
de
la
tirosinasa, en la grfica No. 1 se
puede observar el comportamiento
de la absorbancia de la enzima,
cuando se encuentra a distintas
concentraciones. En la grfica se
puede observar que entre un
incremento en la absorbancia, esta
nos indica que entre mayor es el
tiempo de reaccin de la oxidacin
mayor es su capacidad de absorber
luz.
Referencias
1. Koolman, J. 2005. Bioqumica.
Ed.
Mdica
Panamericana.
Madrid, Espaa. 488pp
2. Ferscht, A. 1980. Estructura y
Mecanismo de Enzimas Ed.
Revert. Barcelona, 370pp.
3. Prctica 7. 2013. Enzima,
Tirosinasa. Manual de