Cromatografa

tidades de dichos componentes. Diferencias sutiles en el

coeciente de particin de los compuestos dan como resultado una retencin diferencial sobre la fase estacionaria y, por tanto, una separacin efectiva en funcin de los
tiempos de retencin de cada componente de la mezcla.
La cromatografa puede cumplir dos funciones bsicas
que no se excluyen mutuamente:
Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos ms puros y que puedan ser usados posteriormente (etapa nal de muchas sntesis).
Medir la proporcin de los componentes de la mezcla (nalidad analtica). En este caso, las cantidades
de material empleadas suelen ser muy pequeas.

Cromatgrafo de gases

1 Historia
La cromatografa, como indica su nombre (proviene del
griego chrma y grph, que signican
respectivamente color y escribir, registrar, literalmente escritura de color, o mejor registro de color) ,
fue empleada originalmente con sustancias coloreadas.
Ya en 1850, Runge describi la formacin de zonas coloreadas cuando se depositaban gotas de sustancias colorantes sobre papel secante, pero el desarrollo ms importante vino con los experimentos de Mijal Tsvet[1] (18721919), que emple por primera vez en 1906 el trmino
cromatografa. A comienzos del ao 1903, Mijal Tsvet, botnico ruso, logr separar una mezcla de pigmentos de plantas (clorolas) en una columna de carbonato
de calcio. Ms tarde, en 1910, cromatogra un extracto
de yema de huevo en una columna de inulina. Sus investigaciones, sin embargo, no fueron utilizadas por otros
investigadores hasta 1931. Esta demora quiz se debi al
hecho de que los trabajos de Tsvet fueron publicados en
ruso y en una revista que no tena amplia circulacin.
El rpido desarrollo de la cromatografa como herramienta analtica sensible no ocurri hasta 1931, cuando
Kuhn, con Lederer y con Winterstein, emple la tcnica para el anlisis de pigmentos de plantas, conrmando
los primeros trabajos de Tsvet y su prediccin de que el
caroteno no era una sola sustancia, sino una mezcla de
varios homlogos estrechamente relacionados. Al mismo
tiempo, el tamao de las columnas empleadas fue aumentando para poder recuperar los componentes separados.
La tcnica, por lo tanto, no era solo analtica sino preparatoria.

Colector automtico de fracciones y de muestras para la cromatografa

La cromatografa es un mtodo fsico de separacin para la caracterizacin de mezclas complejas, la cual tiene
aplicacin en todas las ramas de la ciencia; Es un conjunto
de tcnicas basadas en el principio de retencin selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de
una mezcla, permitiendo identicar y determinar las can1

3 TRMINOS EMPLEADOS EN CROMATOGRAFA[3]

2
La cromatografa en columna por estos tiempo tena aplicaciones limitadas, dado que los componentes que se podan separar eran invariablemente lpidos. Pasaron 10
aos antes de que Martin y Synge desarrollaran una tcnica mediante la cual se pudieran separar compuestos acuosos o hidroflicos. Esto marc un nuevo inters en la tcnica y en 1944 Consden, Gordon y Martin lograron separar mezclas complejas de aminocidos en papel y fueron
premiados con el Premio Nobel por sus trabajos. Al poco
tiempo, en 1947, en Estados Unidos de Norteamrica, la
Comisin de Energa Atmica dio a conocer informacin
sobre el uso de la cromatografa de intercambio inico
para la separacin de productos de sin nuclear.
El desarrollo ms reciente en el campo de la cromatografa se deriva de los trabajos de Stahl, quien en 1956
present una tcnica prctica mediante la cual una capa delgada slice gel, celulosa o almina era diseminada
sobre una placa de vidrio. Esta tcnica, llamada cromatografa de capa na, result en un anlisis ms rpido
y ms sensible para el examen de mezclas complejas y,
en muchos casos, ha sustituido a otros mtodos similares
ms antiguos de cromatografa en papel toche.
En 1959, Porath y Flodin introdujeron una nueva tcnica llamada cromatografa de ltracin de gel. Esta se ha
convertido en una poderosa y nueva herramienta para la
separacin de sustancias de alto peso molecular, particularmente las protenas, y ha encontrado muchas aplicaciones en los campos de la bioqumica, la medicina, la
siologa y la biologa. La mayora de las tcnicas de ltracin en gel utilizan columnas y recientemente se han
hecho trabajos con una combinacin de ltracin en gel y
materiales de intercambio inico, logrando que las separaciones complejas sean extremadamente rpidas y ecientes.
Los primeros equipos de cromatografa de gases aparecieron en el mercado a mediados del siglo XX. A su vez,
la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC High
Performance Liquid Chromatography, en ingls) comenz a desarrollarse en los aos 1960, aumentando su importancia en las dcadas siguientes, hasta convertirse en
la tcnica cromatogrca ms empleada. Sin embargo esto se ir modicando con el paso de los aos.

Clasicacin de los mtodos de

separacin en cromatografa

Las distintas tcnicas cromatogrcas[2] se pueden dividir

segn cmo est dispuesta la fase estacionaria:
Cromatografa plana. La fase estacionaria se sita
sobre una placa plana o sobre un papel. Las principales tcnicas son:
Cromatografa en papel
Cromatografa en capa na

Cromatografa en columna. La fase estacionaria se

sita dentro de una columna. Segn el uido empleado como fase mvil se distinguen:
Cromatografa de lquidos
Cromatografa de gases
Cromatografa de uidos supercrticos
La cromatografa de gases se aplica a numerosos compuestos orgnicos. En el caso de compuestos no voltiles,
se recurre a procesos denominados de derivatizacin, a
n de convertirlos en otros compuestos que se volatilicen
en las condiciones de anlisis.
Dentro de la cromatografa lquida, destaca la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC, del ingls High
Performance Liquid Chromatography), que es la tcnica
cromatogrca ms empleada en la actualidad, normalmente en su modalidad de fase reversa, en la que la fase
estacionaria tiene carcter no polar, y la fase mvil posee
carcter polar (generalmente agua o mezclas con elevada
proporcin de la misma o de otros disolvente polares, como por ejemplo, metanol). El nombre de reversa viene
dado porque tradicionalmente la fase estacionaria estaba
compuesta de slice o almina, de carcter polar, y por
tanto la fase mvil era un disolvente orgnico poco polar.
Una serie eluotrpica es un rango de sustancias de diferentes polaridades que actan como fase mvil y que permiten observar un mejor desplazamiento sobre una fase
estacionaria.

3 Trminos
empleados
[3]
cromatografa

en

Analito es la substancia que se va a separar durante

la cromatografa.
Fase mvil es la fase que se mueve en una direccin denida. Puede ser un lquido (cromatografa
de lquidos o CEC). un gas (cromatografa de gases) o un uido supercrtico (cromatografa de uidos supercrticos). La muestra que se est separando/analizando (formada de analito/s y el disolvente)
se inyecta en la fase mvil que se mueve a travs de
la columna. En el caso de la cromatografa lquida
de alta resolucin, HPLC, la fase mvil es un disolvente no polar como el hexano (fase normal) o bien
algn disolvente polar (cromatografa de fase reversa).
Fase estacionaria es la sustancia que est ja en una
posicin durante la cromatografa. Un ejemplo es la
capa de gel de slice en la cromatografa en capa na.
Cromatografa analtica se emplea para determinar la existencia y posiblemente tambin la concentracin de un analito en una muestra.

En el eje X se representa el tiempo de retencin, y en el eje Y una seal (obtenida, por

ejemplo, a partir de un espectrofotmetro, un
espectrmetro de masas o cualquier otro de los
diversos detectores) correspondiente a la respuesta creada por los diferentes analitos existentes en la muestra. En el caso de un sistema
ptimo, la seal es proporcional a la concentracin del analito especco separado.
Separacin de clorolas mediante cromatografa en papel

Cromatgrafo es el equipo que permite una separacin sosticada. Por ejemplo, un cromatgrafo de
gases o un cromatgrafo de lquidos.

Fase enlazada es una fase estacionaria que se une

de forma covalente a las partculas de soporte o a las
paredes internas de la columa.

Cromatografa es el mtodo fsico de separacin

en el cual los componentes que se van a separar se
distribuyen entre dos fases, una de las cuales es estacionaria (fase estacionaria) mientras la otra (la fase
mvil) se mueve en una direccin denida.
Eluyente es la fase mvil que atraviesa la columna.
Serie eluotrpica es una lista de disolventes clasicados segn su poder de dilucin.
Fase inmovilizada es una fase estacionaria que est inmovilizada sobre partculas de soporte, o en la
pared interior del tubo contenedor o columna.

Cromatograma es el resultado grco de la cromatografa. En el caso de separacin ptima, los diferentes picos o manchas del cromatograma se corresponden a los componentes de la mezcla separada.

Cromatografa preparativa se usa para puricar

suciente cantidad de sustancia para un uso posterior, ms que para anlisis.
Tiempo de retencin es el tiempo caracterstico
que tarda un analito particular en pasar a travs del

ENLACES EXTERNOS

5 Referencias
[1] La cromatografa. Fundamentos de tecnologa de productos toteraputicos. Nikolai Sharapin. Editorial Convenio
Andrs Bello, 2000. ISBN 9586980014. Pg. 159-190.l
[2] Tcnicas de bioqumica y biologa molecular. Jorge David Roriguez Miranda. Editorial Revert, 1991. ISBN
8429118195. Cap. 8: Cromatografa. Pg. 179
[3] Glosario de los trminos ms usados en cromatografa. Introduccin a la Cromatagrafa. Stella Torres de
Young. Ediciones de la Univ. Nacional de Colombia.
ISBN 9581701192. Pg. 15

Cromatograma correspondiente a una cromatografa lquida en

fase reversa para compuestos fenlicos

sistema (desde la columna de entrada hasta el detector) bajo las condiciones jadas. Vase tambin:
ndice de retencin de Kovats
Muestra es la materia que va a ser analizada en la
cromatografa. Puede consistir en un simple componente o una mezcla de varios. Cuando la mezcla
es tratada en el curso del anlisis, la fase o fases que
contienen los analitos de inters es llamada igualmente muestra mientras el resto de sustancias cuya
separacin no resulta de inters es llamada residuo.
Soluto es cada uno de los componentes de la muestra que va a ser separado.
Disolvente es toda sustancia capaz de solubilizar a
otra,y especialmente la fase mvil lquida en cromatografa de lquidos.
Capacidad de carga Es la cantidad mxima de
muestra que puede ser separada en una sola carga.
Capacidad de fraccionamiento Es el nmero mximo de componentes que pueden ser separados en
una sola operacin.
Selectividad Es la capacidad de poder discriminar
y distinguir entre dos componentes.

Vase tambin

Wikimedia Commons alberga contenido multimedia sobre CromatografaCommons.

Proceso de separacin
Serie eluotrpica
Cromatografa de gases
Cromatografa cuantitativa en capa delgada
Cromatografa de inmunoanidad

6 Enlaces externos
Cromatografa. Universidad de Granada.
Separaciones por cromatografa. Universidad de Las
Palmas de Gran Canaria.

Origen del texto y las imgenes, colaboradores y licencias

7.1

Texto

Cromatografa Fuente: https://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa?oldid=94982990 Colaboradores: Untrozo, Zwobot, Dodo,

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