MANUAL DE PRCTICA DE MICROBIOLOGA AMBIENTAL

ING. AMBIENTAL

PRCTICA N5
SIEMBRAS BACTERIOLGICAS Y TOMA
DE MUESTRA
I.

OBJETIVOS
Comprender las diferentes tcnicas de siembra en medios de cultivos.
Conocer las diferentes caractersticas culturales de las bacterias y mohos
en los medios empleados.
Identificar los pasos a seguir para realizar una adecuada toma de muestra
de agua.

II. MATERIALES
02 frascos de vidrios de boca ancha. Cap. 250ml.*
02 Bolsas plsticas de primer uso.*
10 Bolsas ziplox (Hermticas). Medianas.*
04 Mecheros de alcohol
04 Asas bacteriolgicas
04 Asas de Drigalsky
04 Gradillas porta tubos
08 Placas de Petri por mesa
08 Tubos de ensayo por mesa
01 Balanza
04 Matraces Erlenmeyer
04 vasos de precipitacin cap. 250 ml con alcohol
04 Pipetas cap. 2 mL. por mesa
02 micropipetas automticas
10 putas estriles de 1 ml
100 ml Alcohol*
250 g Algodn*
Pabilo*
Guantes quirrgicos*
Hisopos largos estriles (presenta una sola cabeza de algodn)*

Observar: Todos los materiales indicados con *, deber

traer el alumno REACTIVOS
Agua peptonada
Caldo nutritivo
Agar nutritivo
Agar Mc. Conkey
01 lt.SSFe (Solucin Salina Fisiolgica Estril) con boquilla.

MUESTRAS
Cultivo puro de Escherichia coli
Cultivo puro de Staphylococcus aureus
III. FUNDAMENTO
Teniendo en cuenta que los microorganismos son ubicuos es decir que
se encuentran en cualquier ambiente, pueden aislarse igualmente de
diversos substratos, la decisin para elegir un substrato de muestreo depende
del
1

grupo de microorganismos de inters. En ambientes como el suelo y agua de

ecosistemas naturales es comn encontrar gran diversidad de organismos, en
ambientes como las cavidades gastrointestinales, mucosas de animales, zonas
volcnicas y otros, la diversidad es menor. Algunas veces los
microorganismos se han adaptado a condiciones muy especficas y podran
requerir procedimientos de trabajo ms complejos para su aislamiento y
siembra, como es el caso de microorganismos anaerobios, auttrofos, etc.
El cultivo es un mtodo para la multiplicacin de clulas o microorganismos, o
para el crecimiento de tejidos en el que se prepara un medio ptimo para
favorecer el proceso deseado; es empleado como un mtodo fundamental para
el estudio de las bacterias.
Esto se lleva a cabo al cultivarlas en un medio lquido o en la superficie de un
medio slido de agar. Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van,
desde azcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto
de caldo de carne. Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una
muestra formada por muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo
slido donde las clulas que se multiplican no cambian de localizacin; tras
muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por fisin binaria una
colonia macroscpica compuesta por decenas de millones de clulas similares a la
original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecer
como cultivo puro de un solo tipo de bacteria.
3.1 SIEMBRA DE MICROORGANISMOS
Sembrar una bacteria es colocarla en un medio de cultivo, elegido de acuerdo a
las exigencias vitales del microorganismo, lo que permite su desarrollo y
multiplicacin, si se incuba en condiciones adecuadas, un tiempo conveniente.
Para ello una pequea porcin de cultivo o muestra, que se denomina inculo se
transfiere al medio con precauciones especiales de asepsia a fin de evitar la
introduccin de otros microorganismos ajenos al inculo.
El conjunto de pasos a efectuar para lograr una siembra correcta, se conoce
como tcnica asptica
A. TOMA DEL INCULO

La toma del inculo es simple, pero se requiere tener en cuenta lo siguiente:

La siembra siempre debe realizarse al abrigo de las corrientes de aire
(cerrar bien puertas y ventanas), con movimientos pausados, poco
amplios, sin brusquedad y sin hablar.
Coloque frente a usted el mechero y la preparacin o muestra que contiene
los microorganismos, as como el resto del material necesario (portaobjetos,
tubos, placas). Todo ello ha de ser alcanzado con facilidad y sin tropiezos.
Se debe trabajar a una distancia no mayor de 15 cm. de la llama de
un mechero.
El ansa o aguja de siembra se esteriliza por llameado directo (flamelo
hasta que alcance un rojo incandescente) y antes de retirar el inculo debe
facilitarse su enfriamiento, a fin de evitar el deterioro del material a sembrar
(enfrelo en la proximidad de la llama unos 10 segundos). (Ver figura)

Una vez realizada la siembra se esteriliza nuevamente el ansa o aguja a

la llama del mechero antes de depositarla sobre la mesada de trabajo.
Nunca debe depositarse un tapn sobre la mesada o gradilla, pues
estos elementos estn cargados de microorganismos.
Cuando est destapado, mantener el tubo en la forma ms horizontal
posible para evitar que los microorganismos del ambiente, en su cada,
tengan acceso al interior.
La boca de los tubos de donde se toman
los cultivos y la de aquellos a donde
sern
transferidos,
deben
pasarse
ligeramente
sobre
la
llama
inmediatamente antes de que el ansa o
aguja sea introducida. Tambin se debe
flamear la boca del tubo antes de
taparlo. Este procedimiento fija al vidrio
los microorganismos que pueden estar en
dicha boca y tiende a crear corrientes
hacia afuera (el aire tiende a salir),
disminuyendo
as
el
riesgo
de
Fig. 5.1 Tcnica asptica en siembra
contaminacin.

Para retirar el inculo o sembrar medios de cultivos en cajas de Petri,

coloque la placa invertida sobre la mesada de trabajo y levante la parte que
contiene el medio de cultivo con los microorganismos. Llvela a la
proximidad de la llama del mechero y tome el inculo con el ansa de
siembra. Otro mtodo permitido consiste en retirar el inculo o sembrar,
levantando la tapa solo lo suficiente para permitir la introduccin del ansa
o aguja, para evitar que los microorganismos ambientales se depositen en la
superficie del medio.
Si la siembra se realiza con pipeta, sta debe estar convenientemente
preparada y esterilizada hasta el momento de su empleo. Una vez utilizada
se descarta introducindola en una solucin antisptica.
Transfiera el inculo a otro medio de cultivo estril, tomando las
mismas precauciones en su manejo (flameando bocas de tubos,
trabajando en la proximidad de la llama, etc.)
La finalidad de una siembra puede ser la de realizar una transferencia o
un aislamiento. La primera se efecta con cultivos puros (una sola especie
bacteriana), ya sea con el objeto de renovar el medio de cultivo para perpetuar
la especie, o bien para conocer alguna de sus, propiedades culturales o
bioqumicas. El aislamiento, en cambio, se realiza a partir de un material
que contiene una mezcla de especies bacterianas y su objeto es
separarlas para obtener cultivos puros.
B. DILUCIONES
Una dilucin es la disminucin de concentracin por volumen de una
sustancia, en este caso de microorganismos. Dado que en la mayora de los
casos las poblaciones microbianas son altas, de varios miles y /o millones, no
es posible contarlos en su densidad original. Por esta razn es necesario
disminuir su concentracin por volumen, agregando agua u otra sustancia
lquida a la muestra.
La dilucin primaria tiene por objeto obtener una distribucin lo
ms
uniforme posible de los microorganismos contenidos en la muestra
destinada en el anlisis.
La preparacin de diluciones decimales adicionales, si son necesarios,
tiene como objetivo reducir el nmero de microorganismos por unidad de
volumen, para permitir, despus de la incubacin, la observacin de la prueba
en el caso de tubos y la cuenta de colonias de placas.

Fig. 5.2 Proceso de disolucin

Cuando se considera que la muestra tiene una alta poblacin, se recomienda

usar este mtodo, pues al diluir de manera calculada la muestra, se asegura la
separacin de microorganismos presentes en ella y por tanto se logra la
formacin de colonias separadas cuando se hace recuento en placa,
facilitndose el clculo del nmero de clulas.

C. TCNICAS PARA SIEMBRAS EN MEDIOS DE

CULTIVO SIEMBRA EN MEDIOS LQUIDOS
Siembra por transferencia: Con el asa bacteriolgica previamente esterilizada
por incineracin, se toma una o dos asadas de la suspensin bacteriana,
previamente homogenizada, y se transfiere a un caldo de cultivo sin sembrar.
Tambin se puede usar pipetas estriles. Si se hace con pipetas, unas pocas
gotas (2-3) son suficiente para el desarrollo bacteriano.

Fig. 5.3 Esquema de sembrado de un cultivo liquido

SIEMBRA EN MEDIOS SEMI-SLIDOS
Siembra por picadura: Con el asa bacteriolgica en punta previamente
esterilizada, se toma un inculo de la muestra, y se transfiere a un medio
semi-slido en tubo, introduciendo toda el asa hasta antes de topar el
fondo del tubo. Luego se retira el asa cuidando que siga el mismo curso o
trayectoria de ingreso al medio.
SIEMBRA EN MEDIOS SLIDOS
Siembra por superficie: Se deposita el inculo sobre el medio slido
contenido en la placa con una pipeta del material a sembrar, que luego se
extender por toda la superficie del medio con el asa de Drigalsky,
asegurndose de cubrir toda la superficie del medio. El asa de
Drigalsky se introduce inmediatamente despus de su uso en un recipiente
para su esterilizacin en autoclave o en formaldehdo al 5 %.

Fig. 5.4 Tcnica de siembra por superficie

Siembra por incorporacin: Se deposita el inculo con pipeta en el centro

de la caja de Petri y luego se vuelca sobre el mismo el medio de cultivo
fundido y enfriado a 45C. Se homogeneiza por rotacin para lo cual se le
imprime a la caja movimientos circulares, en sentido horario y en sentido
antihorario y movimientos rectilneos, horizontales y verticales. Se debe tener en
cuenta que de las cajas de Petri preparadas con medio de cultivo para
sembrar,
debe eliminarse
el
agua de
sinresis
(condensacin) antes de efectuar dicha operacin. Para tal fin
es aconsejable preparar las placas con 24 horas. de anticipacin y
dejarlas invertidas a temperatura ambiente.
Fig. 5.5 Tcnica siembra por incorporacin

Siembra por diseminacin con hisopo: Se sumerge el hisopo estril en la

suspensin que contiene al microorganismo, se escurre el exceso de lquido
sobre la pared interior del tubo y se estra en la placa de Petri, partiendo de
los bordes hacia el centro, luego se gira 90 y se estra nuevamente,
finalmente se gira 45 y se vuelve a estriar.
Siembra por estra (agotamiento): Haciendo uso del asa bacteriolgica
previamente esterilizada (incineracin), se toma una muestra de la
suspensin bacteriana, deslizando el asa sobre la superficie y marcando
surcos o estras.

Fig. 5.6 Tcnica siembra por estras

D. Morfologa Colonial
MORFOLOGIA COLONIAL EN PLACA BACTERIANAS
Una vez sembrada la laca la descripcin de cada una de las colonias debe incluir:
a. Tamao: Dimetro en mm, los lmites de tamao de las colonias varan desde
fracciones de milmetros hasta 10mm de dimetro. La mayora de los
microorganismos forman colonias de tamao limitado al tiempo de incubacin.
b. Forma: Es la apreciacin general de su figura la cual puede ser: Puntiforme, ...

FORMA
ELEVACIN

c) Borde o margen: Se refiere al contorno de las colonias y puede ser: Entero,

d) Color: Puede adquirir el color blanco, amarillo, negro, marrn, anaranjado, etc.

e) Superficie: Lisa o rugosa

f) Aspecto: Hmedo, seco algodonoso, pulverulento, aterciopelado, vellosos,
granuloso..
g) Consistencia: Suave, viscosa, membranosa o dura, esta prueba se realiza con la
ayuda de una asa bacteriolgica.
h) Luz reflejada: Las colonias pueden ser brillosas o mate.
i) Luz trasmitida: Las colonias pueden ser brillantes o mate.

Fig. 5.7 Morfologa de las colonas de bacterias

3.2 TOMA DE MUESTRA (Para la prxima clase)

Descripcin del proceso o procedimiento de Toma de muestra:
A. Agua de Playa
La muestra se tomar en los lugares donde haya ms afluencia de baistas
(zona de bao) de acuerdo a las siguientes consideraciones:
En playas donde el oleaje es tranquilo, se debe tomar la muestra en la zona
donde la profundidad del agua, llegue a 1 m. aproximadamente (cintura del
muestreador), la muestra debe tomarse a contracorriente del flujo entrante y a
30 cm. aproximadamente bajo la superficie del agua.
En playa con rompiente cercana a la orilla, pasar la rompiente a una
profundidad del agua de 1 m. El muestreador debe colocarse a contracorriente
del flujo entrante y tomar la muestra de agua a 30 cm. bajo la superficie del
agua. Si la pendiente del fondo es pronunciada tomar la muestra en la orilla,
donde la profundidad del agua est entre el tobillo y la rodilla, llenar el frasco de
muestreo procurando que contenga un mnimo de arena.
Para realizar la respectiva toma de muestra se debe tener las siguientes
consideraciones:
Aflojar levemente la tapa del frasco y el papel de proteccin, manejndolos
como una unidad y evitando que se contamine la tapa o el cuello del frasco.
Introducir el frasco con la boca hacia abajo hasta la profundidad de 30 cm. de
la superficie.
Llenar el frasco hasta que quede 1/3 del frasco del volumen libre y tapar.
En la orilla de la playa se realiza las anotaciones en la cadena de
custodia, la codificacin de campo de la muestra y la hora. Llenar los datos
en la etiqueta del envase con fecha y hora del muestreo, identificacin de la
muestra e iniciales del muestreador.
B. Agua potable
Para ello se requiere de un recipiente estril como un frasco de vidrio de
boca ancha.
La recoleccin se har directamente del grifo o caera, abriendo la llave
para dejar salir la primera agua, luego recolectar el chorro intermedio
llenando aproximadamente hasta los de la botella. Tapar el frasco
asegurando de no dejar algn espacio vaco donde la muestra tenga
contacto con el medio externo para evitar su contaminacin.
Etiquetar o roturar de acuerdo los parmetros solicitados.
El traslado de dicha muestra debe ser inmediato, en un promedio de 06
horas antes de su proceso.
Si la muestra fuera de lugares distantes el traslado se efectuara en
un dispositivo a temperatura aprox. de 4C (Culer con hielo) o de lo
contrario se utilizaran medio de transporte.

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ING. AMBIENTAL

Fig. 5.8 Etiqueta de identificacin de muestra.

Fig. 5.10 Tcnica de toma de muestra

Fig. 5.9 Diagrama de flujo del proceso de Toma

de muestra de agua de mar

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ING.
11 AMBIENTAL

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C. Agua de ro
Con el frasco estril se proceder a la recoleccin de la muestra en contra
de la corriente.
La muestra se tomara lo ms lejos posible de la orilla, procurando no
remover el fondo y evitando los remansos o zonas de estancamiento.
Para tomar una muestra del agua de un ro se sujetar el frasco por el fondo
en posicin invertida, sumergindolo completamente y dndole la vuelta en
sentido contrario a la corriente.
IV. PROCEDIMIENTO
-1

-2

-3

-4

1. Marcar los tubos en forma seriada 10 ,10 , 10 , 10

2. Realizar 2 suspensiones bacterianas del cultivo puro de Escherichia coli y
de Staphylococcus aureus, tomando con el asa bacteriolgicas una pequea
muestra de colonia bacteriana las que se suspendern en solucin salina fisiolgica
(10 ml)
3. Teniendo en cuenta la metodologa antes mencionada y las recomendaciones
-1
del docente, realizar diluciones de las suspensiones bacteriana hasta 10 hasta 10
4
.
-3
4. De la dilucin 10 sembrar por estra y por incorporacin en placas con PCA.
(ver marco terico pg. 5 y 6)
-4
5. De la dilucin 10 sembrar por diseminacin (hisopo) y por superficie (asa
Drigalsky) en placas con agar Mc Conkey.
6. Incubar las placas sembradas en la estufa a la temperatura de 37C por 24 horas.
7. Observar y anotar los resultados. (hacer conteo de UFC)
SIEMBRA POR ESTRIAS

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SIEMBRA POR INCORPORACIN

SIEMBRA POR DISEMINACIN

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SIEMBRA POR SUPERFICIE

Precauciones generales:
Asegurarse de que el medio de cultivo este perfectamente fundido (sin grumos
y transparente) antes de ser vertido a las cajas Petri.
Antes de esterilizar el material para su desecho, retirar etiquetas, maskin-tape
y escritura con plumn.
Asegurarse de tener todo el material de trabajo a la mano para evitar movilizarse
y no facilitar la contaminacin de los medios.
Cada grupo de trabajo deber contar con los materiales de asepsia
solicitados anteriormente.
V. INVESTIGAR

1. Qu precauciones se debe tener en cuenta al realizar tomas de

muestra de agua y suelo?
Muestra de agua
Precauciones generales
Todos los recipientes utilizados para la toma de muestra deben estar
limpios, como por ejemplo las botellas deben estar totalmente
esterilizados, en caso de emplear botellas de agua mineral, asegurarse de
que las mismas no hayan sido usadas previamente, no es recomendable
emplear envases de bebidas de gaseosa, jugos, bebidas alcohlicas u
otros
Evitar el uso de detergentes u otro tipo de sustancias de limpieza
Se recomienda el uso de guantes latex durante la manipulacin

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Precauciones especiales
ANALISIS MICROBIOLOGICOS:
Las muestras se deben recolectar en frasco estril preferentemente de vidrio
aproximadamente de 500 ml y de boca ancha para facilitar la toma. En su defecto
pueden usarse envases de plstico estriles o botellas de agua mineral limpias
(enjuagada 2-3 veces con la misma muestra a analizar).
ANALISIS FISICO-QUIMICO
Pueden usarse envases de plstico estriles o botellas de agua mineral limpias
(enjuagada 2-3 veces con la misma muestra a analizar).
ANALISIS RESIDUOS DE AGROQUIMICOS
Las muestras deben recolectarse en envases limpios de color mbar
preferentemente secados a temperatura de 100 C luego del lavado.
Se deber usar solamente el tipo de frasco recomendado para cada grupo o tipo
de parmetros.
Se debern usar los mtodos de preservacin recomendados.
La parte interna de los frascos de muestreo y tapas no deben ser tocados con la
mano, guantes etc.
Los frascos de muestreo deben ser guardados en un ambiente limpio, lejos del
polvo, gases, tierra, etc. La limpieza del vehculo de transporte y el ambiente en
donde se acomodan los envases de transporte es un factor importante en el
control de los problemas de contaminacin.
Los gases del tubo de escape pueden contaminar la muestra con plomo u otro
metal pesado.
Los frasco que han sido esterilizados deben permanecer estriles hasta que la
muestra se colectada. Descartar el frasco si el sello o cubierta de papel se
encuentra rota.
PRECAUCIONES PARA MUESTRA DE SUELO
tener cuidado de no muestrear en reas cercanas a taperas viejas o corrales,
caminos, aguadas, sectores de carga y descarga de fertilizantes y construcciones;
teniendo siempre la precaucin de dejar una distancia de 50 metros desde los
alambrados perimetrales. Si existen manchones o problemas localizados,
considerar cada uno individualmente. Si estas superficies son tan pequeas que
no pueden ser tratadas por separado en el manejo del suelo, deben ser omitidas
en el muestreo. Si hay problemas limitantes, es conveniente tomar paralelamente
muestras de control de los suelos adyacentes, donde stos no se manifiesten y
el crecimiento de los cultivos sea normal, para efectuar una comparacin entre los
mismos.

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2. Menciona 04 importancias de las tcnicas de siembra realizadas

en el laboratorio.
Sirve para aumentar el nmero de individuos de la poblacin y formar
colonias
Sirve para aislar microorganismos que se encuentran en bajo numero
Sirve para que el microorganismo crezca
Determinar que bacterias entre las que se desarrollan tienen ms
probalidades de ser causantes de la infeccin y cules son sus posibles
contaminantes o colonizadores.

3. Investigar las caractersticas de las colonias bacterianas en medios

slidos.
Las caractersticas macroscpicas de las colonias, habitualmente se lleva a cabo
con la ayuda de un microscopio por medio de la observacin visual del crecimiento
en la superficie de las placas de agar.
Las caractersticas de las colonias obtenidas en medios solidos suelen ser bastantes
constantes y precisa para cada gnero y/o especie bacteriana, hecho que se puede
utilizar como caracterstica diferencial. Las caractersticas ms comunes son:
Tamao de las colonias
Pequeo: colonias puntiformes con aprox. 0,5 mm de dimetro o inferiores
Mediano: de 1 a 2 mm de dimetro
Muy grande: colonias extendidas en forma de velo invadiendo toda la superficie del
medio de cultivo
Formas de las colonias
Segn la forma se divide en puntiforme, circular, rizoide, filamentosa, irregular y
fusiforme
Elevacin de las colonias
Segn la elevacin son planas, convexas (semiconvexas), cncava (semiconcava),
umbiculada, acuminada, plano-convexa, papilada, en meseta, semiesfrica,
umbeliforme, elevada, etc.
Bordes de las colonias
Segn los bordes son enteros, lobulados, rizoide, filamentosos, ondulados,
aserrados, espiculados, redondeados, etc.
Superficie de la colonia
Corresponde al aspecto de la colonia. Estas pueden ser lisas, rugosas, planas,
acuminadas, umbilicadas, mucosas, secas, etc.

16

Transparencia y coloracin
El tipo de color en las colonias es muy diverso y esto se debe a la elaboracin de
algn tipo de pigmento, a la formacin de alguna sustancia por parte de la bacteria o
por la utilizacin de algn sustrato del medio que acidifique o alcalinice a ste de
forma que ante la presencia de indicadores de pH que estn en el medio, cambia de
color, hecho que nos ayuda a conocer la utilizacin de este sustrato por parte de la
bacteria.
Caractersticas macroscpicas de colonias bacterianas en medios slidos en
caja Petri
Medio

Mc conkey

Sal manitol

EMB

Forma

Fusiforme

Fusiforme

Circular

Elevacin

Plana

Convexa

Convexo

Bordes

Filamentoso

Ondulado

Ondulado

Textura

Plana

Membranoso

Membranoso

Color

Rosada

Morado

Morado

Ejemplo:
Klebsiella sp en agar Mc conkey
Colonias grandes planoconvexas, mucoides, brillantes, forma irregular, tambin se
observan redondeadas, bordes ondulados, lactosa positivo (consume el
carbohidrato lactosa lo cual acidifica el medio y el indicador rojo de fenol cambia a
rosado.

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4. Investigar que otros requisitos se debe tener en cuenta para la toma

de muestras de agua de mar, piscinas, aguas residuales, pozos y ros.
Agua residual
Es importante que previo a la realizacin del monitoreo delos vertimientos, se haga
una revisin de los siguientes documentos: Plan de Saneamiento y Manejo de
Vertimientos y del Plan Maestro de Acueducto y Alcantarillado si existe, ya que
estos instrumentos darn informacin sobre los puntos existentes. Para establecer
los puntos de muestreo de las aguas domesticas de un municipio, se debe conocer
en primera instancia las condiciones y cobertura del sistema de alcantarillado, con
lo cual se identifican los puntos de vertimientos. Si no se cuenta con una Planta de
Tratamiento de Aguas Residuales, es necesario identificar los puntos de vertimiento
sobre las diferentes fuentes hdricas y de ser posible muestrear todos; si existe un
gran nmero de puntos dispersos y poco representativos de vertimiento, se debe
determinar claramente el caudal de todos y tomar muestra de los ms
representativos, con los cuales ser posible establecer una concentracin promedio
de los vertimiento. Esta salvedad aplica nicamente si los vertimientos son 100%
del tipo domstico, ya que si existe otro tipo de vertimiento que alteren su
naturaleza como mataderos, rellenos sanitarios, industria, etc. no ser posible y
debern caracterizarse de forma individual. Si se cuenta con Planta de Tratamiento
de Aguas Residuales, se debe establecer su punto o puntos de descarga y tomar
muestras a la entrada y salida de la PTAR. Para conocer el impacto de estas
descargas sobre las fuentes hdricas receptoras es importante monitorearlas como
se describe en este documento. Se recuerda que la norma (decreto 1594-84)
establece que la remocin del sistema de tratamiento debe ser mnimo del 80% en
carga (DBO y SST)
Agua de pozo
Para la forma de muestras en pozo cuyo suministro se hace por medio de una
bomba, se recomienda realizarse luego de haber bombeado una cantidad suficiente
de agua para que la muestra extrada represente el agua del subsuelo, y no de
depsitos intermedios que pueda haber en el circuito. Si se tomar de muestra de
un grifo verificar que el mismo est comunicado directa con la caera ascendente
del pozo
Agua de ros
Se requiere observar los alrededores si hay aportes accidentales de otros cursos o
descargas de liquidos industriales o cloacales, tener en cuenta la influencia de los
mismos en el recurso a muestrear
a) si no se observa corriente de agua, quitar el tapon con una mano y con la otra
sumergirlo rpidamente el frasco con la boca hacia abajo unos 30 cm, invertir, llenar
y tapar, si es para anlisis fisicoqumicos sin espacio de aire, y si es para anlisis
microbiolgico dejar espacio de aire
b) si hay corriente de agua dirigir la boca del frasco en contracorriente para evitar
que se introduzcan bacterias o contaminantes procedentes de los dedos

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AGUA DE PISCINAS
El punto de toma de la muestra para el control de calidad del agua de la piscina,
segn lo sealado en el artculo 11.4 del Real Decreto 742/2013, podr ser tanto en
el punto de muestreo del circuito (segn lo especificado en el punto a, "en el circuito
a la entrada del vaso o a la salida del tratamiento antes de la entrada al vaso. En
las piscinas de nueva construccin se dispondr de grifos adecuados para la toma
de muestra instalados en el punto de muestreo del circuito", como en el punto de
muestreo del vaso (segn lo especificado en el punto b) "en el propio vaso, en la
zona ms alejada a la entrada del agua al vaso", o en cualquier otro punto
representativo del vaso o del circuito.
En principio, la eleccin de uno u otro punto para la toma de muestra depender del
criterio del responsable de la instalacin, teniendo en cuenta las caractersticas de
la misma, a no ser que la autoridad sanitaria competente, en uso de sus
competencias, no disponga otra cosa.
La frecuencia de muestreo para los anlisis peridicos de la calidad del agua de la
piscina viene recogida en el anexo III del Real Decreto 742/2013, y es de una vez al
mes.
El punto de toma de la muestra, segn lo sealado en el artculo 11.4 del Real
Decreto 742/2013, podr ser tanto en el punto de muestreo del circuito, como en el
punto de muestreo del vaso, o en cualquier otro punto representativo del vaso del
circuito. En principio, la eleccin de uno u otro punto para la toma de la muestra
depender del criterio del responsable de la instalacin, teniendo en cuenta las
caractersticas de la misma, a no ser que la autoridad sanitaria competente, en uso
de sus competencias, no disponga otra cosa.
AGUA DE MAR
a) Las muestras se tomarn en los lugares donde haya ms afluencia de baistas
(zona de bao) de acuerdo a las siguientes consideraciones:
En playas donde el oleaje es tranquilo, se debe tomar la muestra en la zona
donde la profundidad del agua llegue a 1 m aproximadamente (cintura del
muestreador), la muestra debe tomarse a contracorriente del flujo entrante y a 30
cm aproximadamente bajo la superficie del agua.
En playa con rompiente cercana a la orilla, pasar la rompiente a una profundidad
del agua de 1m. El muestreador debe colocarse a contracorriente del flujo entrante
y tomar la muestra de agua a 30 cm bajo la superficie del agua. Si la pendiente del
fondo es pronunciada tomar la muestra en la orilla, donde la profundidad del agua
est entre el tobillo y la rodilla, llenar el frasco de muestreo procurando que
contenga un mnimo de arena.
b) Para realizar la respectiva toma de muestra se debe tener las siguientes
consideraciones:
Aflojar levemente la tapa del frasco y el papel de proteccin, manejndolos como
una unidad y evitando que se contamine la tapa o el cuello del frasco.
Introducir el frasco con la boca hacia abajo hasta la profundidad de 30 cm de la
superficie.
Llenar el frasco hasta que quede 1/3 del frasco del volumen libre y tapar.
c) En la orilla de la playa se realiza las anotaciones en la cadena de custodia, la
codificacin de campo de la muestra y la hora.
d) Llenar los datos en la etiqueta del envase con fecha y hora del muestreo,
identificacin de la muestra e iniciales del muestreador.
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VI. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

TORTORA.FUNKE.CASE. Introduccin a la microbiologa. 9 ed., Editorial Medico
Panamericana. 2007. Colombia. ISBN:978-950-06-0740-7
MADIGAN, M., Martinko, J. y J. PARKER. Biologa de los microorganismos.
Editorial Pearson educacin, S. A. 2006. ISBN: 0-13-066271-2.
WILLEY Y OTROS., Microbiologa de Prescott, Harley Klein. 7 ed., Editorial Mc
Graw Hill.2009. ISBN: 978-84-481-6827-8
Gua Tcnica de procedimiento y toma de muestra del agua de mar en
toma de bao y recreacin, disponible en
http://bvs.minsa.gob.pe/local/MINSA/1592.pdf
REFERENCIAS EXTRAS
MORFOLOGA DE LAS COLONIAS BACTERIANAS disponible en:
https://microdonto.files.wordpress.com/2009/03/morfologia-de-las-colonias-bacterianas.pdf
Morfologa colonial bacteriana en medios de cultivo. Disponible en:
http://microbitosblog.com/2010/06/14/morfologia-colonial-bacteriana/
Tcnicas microbiolgicas disponibles en:
http://es.slideshare.net/leo-canis-lupus/mtodos-de-siembra-y-aislamiento?next_slideshow=1
instructivo para la toma de muestra de agua para anlisis microbiolgicos. Disponible en
http://www.ciati.org/ciatiac/Documentos/LOG001-Anexo7-rev1-Instructivo%20toma%20de%20muestras%20Aguas.pdf
Protocolo para la toma de muestras de aguas residuales disponible en:
http://www.corpoamazonia.gov.co/files/protocolo_para_toma_de_muestras_de_aguas_residuales.pdf

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AO DE LA CONSOLIDACIN DEL MAR DE GRAU

FACULTAD DE INGENIERIA

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE INGENIERIA

AMBIENTAL

Practica de laboratorio n| 05

AUTORES

Atoche Suclupe Olexis Yamir

Paredes campos Paola dolores

ASESOR

GELDRES VIGIL, MARIA ELENA

Trujillo- Per
(2016-II)

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