IV Curso de Gentica Humana de la SEG, Barcelona 4 y 5 de Febrero de 2010

TRANSTORNOS DEL
TRAFICO VESICULAR
Gustavo Egea
Dep. Biologa Celular, Inmunologa y
Neurociencias
Facultad de Medicina, UB

MUTACIONES GENTICAS

LA PROTEINA MUTADA SE PLIEGA MAL Y SE AGREGA

SE ALTERA SU PROCESAMIENTO

RETENCIN EN EL RE

DESLOCALIZACIN
INTRA Y EXTRACELULAR

ACUMULACIN
Y/O PROTEOLISIS

MUTACIONES GENTICAS

LA PROTEINA MUTADA SE PLIEGA MAL Y SE AGREGA

SE ALTERA SU PROCESAMIENTO

RETENCIN EN EL RE

ACUMULACIN
Y/O PROTEOLISIS

DESLOCALIZACIN
INTRA Y EXTRACELULAR

MUTACIONES EN LOS GENES

IMPLICADOS DIRECTAMENTE
EN EL TRFICO INTRACELULAR

Vas de trfico intracelular

Membrana
Plasmtica

Va Secretora

Va
de reciclaje

(tarda)

Endosomas

Va
endoctica

Complejo de Golgi

Va Secretora
(inicial)

Lisosomas

Retculo
Endoplasmtico

Vas de trfico intracelular:

secretora o biosinttica
Membrana plasmtica/
medio extracelular

Endosomas

Va Secretora
(tarda)

Complejo de Golgi

Va Secretora
(inicial)
Retculo
Endoplasmtico

Elementos bsicos de la va secretora:

Retculo endoplasmtico
Aparato de Golgi-TGN
Endosomas tardos/lisosomas y de reciclaje
Vesculas de transporte
Modificaciones post-traduccionales
Seales y maquinaria de distribucin
Membrana apical/basolateral
Citoesqueleto y motores

Vas de trfico intracelular:

endoctica y reciclaje/trancitosis
Elementos bsicos de la va endoctica:
Medio extracelular/membrana plasmtica
Endosomas tempranos, tardos y de reciclaje
lisosomas
Aparato de Golgi-TGN
Retculo endoplasmtico
Vesculas de transporte
Seales y maquinaria de distribucin
Membrana apical/basolateral:trancitosis
Citoesqueleto y motores

Membrana plasmtica/
medio extracelular

Endosomas

Complejo de Golgi

Lisosomas
Retculo
Endoplasmtico

Va secretora: El retculo
endoplasmtico

Inicio de la va secretora.
Red tubular de cisternas y sculos.
Retculo rugoso (RER) y liso (REL).
Sntesis y control de calidad de protenas, sntesis de lpidos y
almacenamiento de Ca2+.

Va secretora: El complejo
de Golgi

Organizador del trfico intracelular.

Situado en una posicin central en las clulas de mamfero.
Pila de saculos aplanados.
El cargo entra por la cara cis y sale por la cara trans.
Procesamiento de protenas y lpidos.
Distribucin final de lpidos y protenas (trans-Golgi-network, TGN)
Distribucin inicial de cargo (ERGIC/IC/VTCs)

Va endoctica:
endosomas y
lisosomas

Lamp-1

catepsina

Alteraciones hereditarias que se producen en la maquinaria

del trfico intracelular de membranas:
(1)

En el sistema de control de calidad del RE

(2)

En el reclutamiento del cargo y en la biognesis de

vesculas de transporte

(3)

En las protenas Rab, en otras GTPasas y protenas

asociadas

(4)

En el citoesqueleto y sus protenas asociadas

(5)

En el reconocimiento, acoplamiento y fusin de las

vesculas de transporte

Alteraciones hereditarias que se producen en la maquinaria

del trfico intracelular de membranas:
(1)

En el sistema de control de calidad del RE

(2)

En el reclutamiento del cargo y en la biognesis de

vesculas de transporte

(3)

En las protenas Rab, en otras GTPasas y protenas

asociadas

(4)

En el citoesqueleto y sus protenas asociadas

(5)

En el reconocimiento, acoplamiento y fusin de las

vesculas de transporte

(QUALITY
CONTROL
SYSTEM, QCS)
DEL RETICULO
ENDOPLASMTI
CO

(1) Envo e insercin de protenas de membrana en el RE: topologas

Rmisch, Traffic 2004; 5: 815

Pptido seal

Una vez la topologa de las protenas de membrana queda establecida,

se mantiene a lo largo de toda la va secretora

(2) Plegamiento de protenas y chaperonas: QCS

- Las protenas se pliegan durante o despus de su insercin en el RE
- El plegamiento es facilitado y/o comprobado por el QCS
- Slo las protenas correctamente plegadas parten del RE
- Las protenas mal plegadas permanecen retenidas en el RE, transportadas al
citoplasma y sometidas a proteolisis (sistema ERAD, ER-associated degradation
El CQS en el RE est mediado por:
2.1. Chaperonas: asisten en el plegamiento normal y en la retencin de las mal plegadas
2.1.2. Clsicas: unin a protenas desplegadas (BiP, GRPs)
2.1.3. No clsicas o lectin-like chaperones: unin a protenas N-glicosiladas
2.2. Control de calidad basado en seales (signal-based QC): RXR
Schlein, Rev. Biochem Pharmacol 2004, 151:45

Tres reglas bsicas sobre las chaperonas:

(1)
Distintas protenas emplean distintas chaperonas: alta variabilidad de uso
(2)
Si una chaperona est inactivada, otra puede ocupar su lugar
(3)
La utilizacin de un tipo de chaperonas u otras en N-glicoprotenas depende de
dnde se situen los sitios de N-glicosilacin

El QCS no se da slo en el ER si no tambin en el ERGIC/IC/VTCs

Funcin: concentrar protenas de la va secretora y
participar en el QCS
Mutantes ts del VSV-G
Mutante F508 del CFTR (fibrosis cstica)
Subunidades del receptor del antgeno T (TCR)

antergrado

Implicacin de la secuencia KDEL en BiP (COPI)

Implicacin de la protena ERGIC-53 (lectin-like protein)

retrgrado

ERGIC-53

ERES: ER exit sites

Implicaciones clnicas del QCS

ENFERMEDADES CONFORMACIONALES:
Aquellas producidas por mutaciones en genes que codifican
protenas solubles o de membrana que les comportan un mal plegamiento
y por tanto son reconocidas por el QCS y retenidas intracelularmente

Enfermedades que implican defectos en

el trfico y/o en los componentes del QCS
Fibrosis cstica
Retinitis pigmentosa
Hipercolesterolemia familiar
Deficiencia congnita de la sacarasa-isomaltasa
Hemocromatosis hereditaria
Albinismo oculocutneo
Sndrome de Laron

Enfermedades en donde los estudios

del trfico de membranas y sus
componentes
moleculares
han
permitido un mejor conocimiento
sobre los mecanismos de herencia
dominante-negativa
Sndrome de Charcot-Marie-Tooth
Sndrome congnito del QT largo

FIBROSIS CISTICA
Autosmica recesiva
Clnica:
Obstruccin pulmonar crnica e
insuficiencia pancretica. Produccin
excesiva de moco
Causa:
Mutaciones en el gen CFRP (canal de
cloro regulado por el AMPc). Protena
Tipo II (1482 aa).
Mutaciones conocidas:
1291 y clasificadas en 6 grupos.
Clase 2: aquellas que comportan un procesamiento
y trfico anormal de la protena. 70 % de pacientes.
Mutacin F508 (deleccin de tres pares de bases en
la secuencia que codifica el 1er sitio de unin al AMPc)
Protena incompleta y retenida en el ER.
QCS: calnexina y Hsc70/Hdj-2 y RXR (ER y ERGIC)

RETINITIS PIGMENTOSA
Autosmica dominante
Clnica:
Atrofia de la retina, depsito de pigmento
y reduccin de vasos sanguneos. Alteracin
inicial de bastones y luego de los conos.
Ceguera progresiva
Causa:
Mutaciones en el gen de la rodopsina.
Esencial en la va de transduccin para
convertir la luz en seal lectrica.
Hiperpolarizacin membrana.
Protena tipo III (349 aa)
Mutaciones conocidas:
Ms de 150. Acumulan RP en el ER y
la va secretora temprana.

APROXIMACIONES FARMACOLGICAS PARA CORREGIR

LAS ALTERACIONES ASOCIADAS AL QCS
OBJETIVO: SUPERAR EL QCS

Desarrollo de sustancias que

favorezcan el plegamiento
correcto de la protena mutada

Desarrollo de sustancias que eviten

la interaccin del QCS con las
protenas diana
(QCS es sobreprotector al retener
mutantes funcionales)

Chaperonas qumicas: mejoran el plegamiento

mediante interacciones no especficas
Mutantes CFTR F508, AQP2, 1-antitripsina:
glicerol, 4-fenilbutirato, trimetilaminas
Problema: se nesitan concentraciones muy altas
Chaperonas farmacolgicas: aadir un ligando
O un pptido durante el proceso de plegamiento
del mutante que mantenga la conformacin correcta
Mutante CFTR F508: CPX (se une con alta afinidad
Al primer sitio de unin de nucletido)

Frmacos que inhiban protenas que

reconozcan seales de retencin como
KDEL.
Acido acetilsaliclico inhibe especficamente
lazona de reconocimiento de BiP. Rescata
protenas retenidas en el ERGIC

Acumulacin de protena mutante mal plegada:

activacin de las vas de respuesta al estrs:
sistemas UPR y EOR. Respuesta inflamatoria.
Incremento de sntesis de chaperonas y protenas
del trfico intracelular secretor
Si fallan: se induce apoptosis

Chaperonas farmacolgicas: aadir un ligando

o un pptido durante el proceso de plegamiento
del mutante que mantenga la conformacin correcta
Mutante CFTR F508: CPX (se une con alta afinidad
al primer sitio de unin de nucletido)

Rmisch, Traffic 2004; 5: 815

Alteraciones hereditarias que se producen en la maquinaria

del trfico intracelular de membranas:
(1)

En el sistema de control de calidad del RE

(2)

En el reclutamiento del cargo y en la biognesis de

vesculas de transporte

(3)

En las protenas Rab, en otras GTPasas y protenas

asociadas

(4)

En el citoesqueleto y sus protenas asociadas

(5)

En el reconocimiento, acoplamiento y fusin de las

vesculas de transporte

EL TRANSPORTE VESICULAR: PRINCIPIOS BSICOS

3. Protenas Rab, otras
GTPasas y protenas
asociadas

3. Citoesqueleto y
protenas asociadas

2. Reclutamiento del cargo

y biognesis de vesculas

4. Reconocimiento,
acoplamiento
y fusin
de vesculas

Adaptado de Gissen y Maher, J Med Gent 2007, 44:545

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2. Patologas producidas por el reclutamiento del cargo y la biognesis vesicular

RECLUTAMIENTO DE CARGO:
LIGANDOS Y RECEPTORES
(p23/p24; KDELr; ERGIC-53)

Debido a mutaciones en ERGIC-53 (LMAN1)

Se producen deficiencia de factores de coagulacin V
y VIII.
Ausencia de MCFD2 produce la deficiencia de
mltiples factores de coagulacin 2 (MCFD2):.
ERGIC-53 y MCFD2 interaccionan para
transportar factores de coagulacin desde el ER
al aparato de Golgi

2. Patologas producidas por el reclutamiento del cargo y la biognesis vesicular

BIOGNESIS VESICULAR:
SISTEMAS COPI y COP II,
CLATRINA, PROTEINAS
ADAPTADORAS Y OTRAS
PROTEINAS ASOCIADAS
Caractersticas comunes de las
protenas de cubierta:
Deforman membranas
Tienen protenas asociadas al
cargo que reconocen seales
(aa, cidos grasos saturados,
Carbohidratos, dominios lipdicos)
Necesitan GTPasas de bajo pm
Protenas de fisin

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2. Patologas producidas por el reclutamiento del cargo y la biognesis vesicular

BIOGNESIS VESICULAR:
SISTEMAS COPI Y COP II,
CLATRINA, PROTEINAS
ADAPTADORAS Y OTRAS
PROTEINAS ASOCIADAS

Classical COPI-mediated vesicular transport

2. Patologas producidas por el reclutamiento del cargo y la biognesis vesicular

BIOGNESIS VESICULAR:
SISTEMAS COPI Y COP II,
CLATRINA, PROTEINAS
ADAPTADORAS Y OTRAS
PROTEINAS ASOCIADAS

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Implicaciones clnicas del sistema de protenas de cubierta COP y clatrina

Neuropatologa motora progresiva

y atrofia cerebelar
Autosmica recesiva
Scyl-1 mutada (protena cinasa)

Autosmica dominante
Osificacin retrasada, hipopigmentacin y
cataratas
Retencin de colgeno I en el RE
Mutacin sin sentido F328L en SEC23A
(COPII)

Implicaciones clnicas del sistema de protenas de cubierta COP y clatrina

Autosmica recesiva
Mutaciones en las subunidades de AP3
Mutaciones en al menos 8 genes (varios tipos)
Albinismo oculocutneo y tendencia a sangrar

Problema en la biognesis
de orgnulos relacionados
con los lisosomas:
Melanosomas, rnulos
secretores de plaquetas,
cuerpos lamelares de los
alveolos tipo II, grnulos
lticos de los linfocitos T
citotxicos y clulas killer

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3. Patologas producidas por defectos en protenas Rab y otras asociadas a las mismas

Pequeas GTPasas de la superfamilia de Ras

Se conocen unas 60
Ciclo de activacin/inhibicin:
Activadas (unidas a GTP)
Inactivadas (unidas a GDP)
Secuestradas citoplasma (unidas a GDI)
Asociadas a membrana en estado GTP
(requieren isoprenilacin)

Rab5

3. Patologas producidas por defectos en las protenas Rab y otras asociadas a las mismas
Sndrome de Griscelli (GS)
Autosmica recesiva
Clnica:
Hipopigmentacin de la piel
Pelo con brillo gris-plata
Grandes placas de pigmento en
el tallo del cabello
Melanosomas acumulados en el
de la clula (melanocito)
Alteraciones neurolgicas y linfos T
Transplante mdula sea es curativo
Causa:
Mutaciones en el gen de Rab27A
y protenas que interaccionan con ella.
Segn el gen alterado tendremos un
tipo u otro de GS:
GS tipo II: Rab27A
GS tipo III: MLPH (melanophilin)
GS tipo I: MYO5 (motor Myo5A)

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3. Patologas producidas por defectos en las protenas Rab y otras asociadas a las mismas

Rabs en infecciones virales y bacterianas

Fagocitosis (macrfagos) destruye bacterias
Formacin de fagosomas y fusin con lisosomas: fagolisosomas
(liberacin de toxinas que destruyen los patgenos)
Listeria monocytogenes: inhibe expresin de Rab5a en macrfagos infectados
La sobreexpresin de Rab5a en macrfagos infectados mata al patgeno.

Salmonella: la proteina SopE del sistema de secrecin III (GEF) estabiliza Rab5
en el fagosoma

Virus de la hepatitis C (HCV): expresa un protena activadora de Rab1 que facilita el ensamblaje
del virus.

Los parsitos tienen tendencia a reclutar protenas Rab de la va endoctica para evitar o retrasar
la formacin de compartimentos proteolticos de la clula husped

4. Patologas producidas por defectos en el citoesqueleto

y/o en sus protenas asociadas

Microtbulos

Algunos motores

Trfico intracelular
Posicionamiento CG
Presentan polaridad
Distribucin radial

Microfilamentos
Morfologa celular
Trfico intracelular
Presentan polaridad

Filamentos
intermedios
Morfologia celular
Contactos clula-clula
Contactos con matriz extracelular

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4. Patologas producidas por defectos en el citoesqueleto

y/o en sus protenas asociadas

Wozniak and Allan, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=eurekah&part=A74053

4. Patologas producidas por defectos en el citoesqueleto

y/o en sus protenas asociadas

La mayora de estas alteraciones causan neurodegeneracin

Paraplegias hereditarias (HSPs):
sndrome de Troyer Autosmica recesiva
Otras HSPs son autosmicas dominantes
Clnica:
Degeneracin progresiva de las zonas
distales de las neuronas espinales en el
tracto corticoespinal. Axonopata retrgrada
Disfunciones cognitivas y atrofia cerebelar
y del cuerpo calloso
Media de edad 20-39 aos
Causa:
Mutaciones en el gen SPG4 que codifica
la espatina (spastin). ATPasa tipo AAA que
interacciona con MT. Regula MTs ya que es
homlaga a la MT-severing protein katanin
(mantenimiento del axn)

Transporte axonal antergrado

Transporte axonal retrgrado

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4. Patologas producidas por defectos en el citoesqueleto

y en las protenas asociadas al mismo
Patologas asociadas a protenas motoras de la superfamilia de la cinesinas (KIFs)
Familia de protenas muy variable en su estructura excepto en su dominio motor.
Enfermedad de Charcot-Marie-Tooth de tipo 2(CMT)
Clnica:
Grupo de enfermedades clnica y genticamenteheterogneo que afecta a los nervios perifricos
y que comporta debilidad y atrofia musculares, prdida sensitiva y de reflejos en los tendones.
Tipos:
CMT-1(desmielinizante)
CMT-2 (axonal)
Causa:
Mutaciones en el gen KIF1B.
Transporte anormal de precursores de vesculas sinpticas

4. Patologas producidas por defectos en el citoesqueleto

y en las protenas asociadas al mismo
Patologas asociadas con los microfilamentos y protenas asociadas:
Ataxia espinocerebelar de evolucin lenta (SCA5; Ataxia de Lincoln o Ataxia de Holmes)
Ataxia cerebellar asociada a SYNE-1, ataxia de tipo 1 (ARCA1)
Autosmicas dominantes
Clnica:
Prdida de clulas de Purkinje
Descoordinacin de manos, brazos y piernas.
Prdida de equilibrio al pernacer de pie y al andar y
habla dificultosa (disartia)
Causa:
Mutaciones en el gen SPTN2 que codifica para espectrina-III
Proteina localizada en el aparato de Golgi que une actina y dineina-dinactina a vesculas de transporte
Mutaciones en el gen SYNE-1 que codifica para Syne-1, protena que une espectrina y tambin se localiza
el aparato de Golgi y en la envoltura nuclear.
III-spectrin

GM130

Salcedo y Egea, 2009, sin publicar

Merge

Lucio et al., MBC 2003, 14:2410

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5. Patologas producidas por alteraciones en el acoplamiento y/o fusin de vesculas

Familia de protenas SNAREs: v- y t-SNAREs:

Proteinas transmembrana en donde interaccionan
los amino-terminales.
En emsamblaje es fuerte y aposiciona las membranas.
El complejo se deshace por ATPasa NSF y SNAP.
Bien estudiadas en el terminal nervioso
Les acompaan factores de acoplamiento: tethering factors
(aportan precisin)

5. Patologas producidas por alteraciones en el acoplamiento y/o fusin de vesculas

Hay pocas enfermedades genticas que resulten de mutaciones en protenas SNARE
Sndrome de disgenesis cerebral, neuropata, ictiosis y ceratoderma palmoplantar (CEDNIK)
Clnica: crecimiento limitado, hipotona,movimnientos oculares anmalos, sordera, microcefalia
Escasas vesculas y acumulacin de glicoesfingolpidos
Mutacin: en el gen SNAP29, codifica para SNAP29 (homloga a SNAP25)
que se asocia con sintaxina 6
Linfohistiocitosis hemofagoctica (FHL)
Autosmica recesiva y hay varios tipos.
Clnica: excesiva produccin de citoquinas (-interferon y TNF-). Acumulacin de linfocitos T y
macrfagos
Mutaciones en el gen SINTAXINA-11 que codifica para la proteina t-SNARE sintaxina-11 (endosomas
tardos y en el TGN).
Esta anomala tambin presenta mutaciones en RAB27A o NUMC13-4.
Sndrome ARC
Autosmica recesiva
Clnica: defectos en la formacin de grnulos plaquetarios, continuas infecciones y muerte prematura.
Alteraciones en la polaridad apical en hepatocitos y clulas de los tbulos renales
Mutaciones en el gen VPSS33B codifica para Vps33p que junto con otras de la misma familia
Forma el complejo HOPS implicadas en la biognesis de melanosomas y grnulos plaquetarios
como un factor de acoplamiento en la fusin de vesculas y grnulos.

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CONCLUSIONES
1. Lo mostrado en esta charla es una muestra de las numerosas
enfermedades asociadas al trfico de membranas (hay ms 100).
La mayora son tipo inmunolgico, neurodegenerativo y muscular.
2. Hay otras muchas asociadas con alteraciones en el proceso de
glicosilacin y transporte/metabolismo de lpidos (colesterol y
esfingolpidos) que merecen un captulo aparte por importancia y
complejidad.
3. El conocimiento detallado de la maquinaria molecular implicada
en estas enfermedades puede permitir el diseo de tcnicas de
diagnstico ms precisas y eficientes as como de nuevas estrategias
de tratamiento.
4. La investigacin bsica en el
campo del trfico de membranas es
crucial para avanzar en el
conocimiento de las causas de
muchas enfermedades consideradas
raras o minoritarias.

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