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ClulasdendrticasI:aspectosbsicosdesubiologayfunciones|Inmunologa
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Inmunologa
Vol.31.Nm.1.EneroMarzo2012
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doi:10.1016/j.inmuno.2011.10.001

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Resumen

Clulas dendrticas I: aspectos bsicos de su biologa y

funciones
Dendritic cells I: Basic biology and functions
M. Begoa Vzquez

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Materialadicional/
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Tabla1
Tabla2

, Manuel Sureda , Joseba Rebollo

Plataforma de Oncologa, USP Hospital San Jaime, Torrevieja, Alicante, Espaa

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Recibido 09 mayo 2011, Aceptado 24 octubre 2011

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Resumen
Las clulas dendrticas (CD) juegan un papel fundamental en la regulacin de la respuesta

Enviaraunamigo

Nmerosanteriores

inmune. Son las principales clulas presentadoras antignicas, por su capacidad de capturar,

Exportarreferenciadelartculo

Suplementos

procesar y presentar antgenos de forma ptima a linfocitos T, y generar respuestas inmunes

ExportaraMendeley

ndiceporsecciones
Losmsledos

especficas. Posteriormente al descubrimiento de esta funcin y al aparecer tcnicas

metodolgicas que permitan su purificacin y maduracin in vitro, se ha comprobado que

Compartir

tambin son capaces de activar otros tipos celulares, como linfocitos B, clulas NK,
macrfagos o eosinfilos, e incluso generar tolerancia inmunolgica. Este mejor conocimiento

Sobrelarevista

de su biologa y funciones ha permitido el desarrollo de ensayos clnicos basados en el uso de

Aadirafavoritos

CD en el campo de la inmunoterapia antitumoral y antiinfecciosa o para inducir tolerancia

Recibirlossumariospor

postrasplante o en patologas autoinmunes.

Envodemanuscritos

Abstract

ComitEditorial

Dendritic cells (DC) play a critical role in the regulation of the immune response. They are the

NormasdePublicacin

main antigen presenting cells, due to their ability to capture, process and present antigens to T

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when methodological techniques allowed their in vitro purification and maturation, it was

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verified that they were able to activate several other immune cell subsets, like B lymphocytes,

+Scopus

NK cells, macrophages or eosinophils, and even to induce immune tolerance. A deeper

tumour and anti-infective DC-based therapies, and also to induce post-transplant tolerance

EMBASE,ndiceMdico
Espaol,MEDES,IBECS,
Scopus,ScienceDirect

Ms...

lymphocytes in an optimal way, and to generate specific immune responses. Subsequently,

knowledge of their biology and functions has allowed the development of clinical trials in anti-

Indexadaen:

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and to treat autoimmunity.

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Palabras clave
Inmunoterapia, Clulas dendrticas, Terapia celular

Keywords

Mtricas

Immunotherapy, Dendritic cells, Cell therapy

SCImagoJournalRank
(SJR):0,14
SourceNormalizedImpact
perPaper(SNIP):0,093

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Introduccin
El hallazgo del papel central de las clulas dendrticas en la respuesta inmune parte de
observaciones de Cohn et al. y Steinman et al.1,2. Estos autores, mediante variadas tcnicas
de separacin celular, eran capaces de enriquecer una poblacin de clulas procedentes de
tejidos linfoides que parecan mucho ms eficaces que los macrfagos promoviendo la
proliferacin de linfocitos T aloreactivos3. Hasta ese momento, se pensaba que los
macrfagos eran las ms potentes clulas presentadoras antignicas profesionales.

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Los conocimientos biolgicos sobre este nuevo tipo celular avanzaron lentamente en la
dcada de los 80, debido a la complejidad metodolgica derivada de la purificacin de una
poblacin minoritaria de los tejidos linfoides. Este panorama cambi radicalmente en los 90,
ya que una serie de descubrimientos metodolgicos permitieron la diferenciacin in vitro de
clulas que compartan marcadores celulares y caractersticas funcionales con las descritas
CD47. En el ao 2000 se caracterizaron una serie de antgenos especficos de las CD
sanguneas, los Blood Dendritic Cell Antigens (BCDA)8 Desde que estas tcnicas de
identificacin y diferenciacin in vitro fueron disponibles, se avanz rpidamente en el
conocimiento de las CD.
En las dos ltimas dcadas se han hecho espectaculares progresos en el entendimiento del
papel que ejercen las CD en el sistema inmune, derivados de los mltiples y variados estudios
en diferentes aspectos del ciclo celular de las mismas. Entre ellos se incluyen los mecanismos
de captura, procesamiento y presentacin de antgenos derivados de patgenos, clulas
apoptticas o tumorales, la sinapsis inmune entre las CD y los linfocitos T, el descubrimiento
de receptores lectina tipo C en la captura antignica, el control de la activacin de las CD a
travs de receptores Toll-like (TLR), la importancia de las CD plasmacitoides en la respuesta
antiviral, el papel de la CD en la polarizacin de la respuesta de linfocitos T helper, la
regulacin de las respuestas de linfocitos B y clulas natural killer (NK), el anlisis in vivo del
trfico de las CD y las interacciones inmunes, el control de inmunidad versus tolerancia por
las CD, el papel de las CD en las infecciones microbianas, patologas autoinmunes,
reacciones alrgicas, rechazo de trasplantes, y respuestas inmunes antitumorales, y las vas
de diferenciacin de las CD.
Estos avances en la inmunobiologa de las CD, junto con las tcnicas de transfeccin y
diferenciacin in vitro, han permitido el desarrollo de prometedoras terapias en el campo de la
inmunoterapia antitumoral y antiinfecciosa, as como para promover tolerancia postrasplante o
en enfermedades autoinmunes.

Caractersticas de las CD
Las CD maduras (CDm) presentan una morfologa propia, caracterizada por la presencia de
numerosos procesos membranosos que pueden tomar la forma de dendritas, pseudpodos o
velos. Contienen altas concentraciones de estructuras intracelulares relacionadas con el
procesamiento antignico, como endosomas, lisosomas o los grnulos de Birbeck de las
clulas de Langerhans de la epidermis. Estn presentes en tejidos y rganos linfoides y no
linfoides, as como circulantes en linfa aferente y sangre perifrica. Reciben diferentes
nombres segn la ubicacin, pero guardan caractersticas y funciones similares entre si.
Fuera de tejidos linfoides, son abundantes en piel, faringe, esfago alto, vagina, ectocrvix y
ano, y en las superficies mucosas de los sistemas respiratorio y gastrointestinal9. Extienden
sus procesos membranosos entre las estrechas uniones de las clulas epiteliales sin alterar la
funcin de la barrera epitelial10. Esto aumenta la captura de antgenos del entorno incluso si
no hay infeccin o inflamacin, conduciendo al silenciamiento del sistema inmune ante los
antgenos ambientales inocuos.
Aparecen en las regiones T dependientes de los ganglios linfticos y bazo, donde se las
conoce como clulas interdigitantes. En el bazo son ms numerosas, ya que hay nidos de
ellas en la periferia del rea de linfocitos T, donde estn posicionadas como puentes a travs
de los cuales deben pasar los linfocitos para entrar en el torrente sanguneo. Las clulas
dendrticas foliculares se encuentran en los centros germinales de los folculos secundarios de
las reas de linfocitos B de ganglios linfticos y bazo, siendo parte integral del microambiente
del folculo. Tambin estn presentes en el timo, sobre todo en la regin medular. En linfa
aferente se las conoce como clulas veladas, representando clulas de Langerhans migrantes
en trnsito desde la piel al ganglio linftico donde se transformarn en clulas interdigitantes.
En sangre perifrica constituyen menos del 2% de las clulas mononucleares.
Tambin se encuentran en corazn, hgado, parnquima pulmonar y lmina propia del
intestino. En el cerebro no se han descrito; sin embargo, las clulas de la microgla se
asemejan a CD por la forma y por sus marcadores de membrana.
Un obstculo para la deteccin y estudio de las CD hasta el descubrimiento de los BDCA ha
sido la ausencia de un marcador en la superficie celular especfico de esta estirpe celular. Se
caracterizan por la elevada expresin de antgenos MHC clase II y la ausencia de marcadores
de linaje como CD14 (monocitos), CD3 (linfocitos T), CD19, CD20 y CD24 (linfocitos B), CD56
(clulas NK) y CD56b (granulocitos)11. Presentan molculas de adhesin comunes con
monocitos y macrfagos (CD11a, CD11c, CD50, CD54, CD58, CD102)12 y molculas
coestimuladoras (CD40, CD80, CD86)13,14. Su fenotipo vara a lo largo de los diferentes
estados de maduracin y activacin. Los precursores circulantes en la sangre pueden
expresar CD2, CD4, CD13, CD16, CD32 y CD33, que van perdiendo gradualmente con la
maduracin15. Por el contrario, las molculas coestimuladoras, de adhesin y los antgenos
del MHC aumentan a lo largo de la maduracin. Otras molculas, como CD80 y CD86,
incrementan su expresin con la activacin, principalmente tras la unin de CD40 a su

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ligando. CD86 es un marcador temprano de maduracin, mientras que CD80 aparece ms
tardamente y est ausente en los precursores circulantes16.

Subclases de CD
Con la excepcin de las CD ganglionares foliculares, que son de origen mesenquimal17, las
CD se originan a partir de progenitores hematopoyticos medulares CD34+ por la influencia
del ligando de FLT-3 (sFlt-3L) y GM-CSF18. Estos precursores CD34+ se diferencian en
clulas progenitoras comunes mieloides (CMP) y clulas progenitoras comunes linfoides
(CLP).
En sangre perifrica circulan dos tipos de CD fenotpica y funcionalmente diferentes. Se
distinguen por su expresin de CD11c y CD12319,8,20. Las CD CD11c+CD123lo tienen una
morfologa monocitoide, por lo que se denominan CD monocitoides o mieloides (MDC),
mientras que las CD CD11c-CD123hi presentan caractersticas morfolgicas similares a las
clulas plasmticas, por lo que se han denominado CD plasmacitoides (PDC). Se diferencian
a partir de CMP y CLP, respectivamente. En humanos, las MDC pueden derivar de
precursores ya comprometidos hacia CD o bien de precursores del linaje de granulocitos y
monocitos. Tambin pueden originarse a partir de diversos tipos celulares previamente a su
diferenciacin definitiva; precursores de monocitos y granulocitos pueden diferenciarse hacia
CD cuando se exponen in vitro a combinaciones apropiadas de citoquinas, que incluyan GMCSF y TNF en presencia o ausencia de IL-421,22. PDC y MDC difieren en numerosos
aspectos, incluyendo su distribucin tisular, su produccin de citoquinas y los factores de
crecimiento necesarios para su diferenciacin.
Las MDC se pueden dividir en dos subpoblaciones segn su expresin de BDCA1 (CD1c) y
CD141: MDC1 (clulas LinCD4+HLA DR+CD11c+CD1c+CD141) y MDC2 (clulas Lin

CD4+HLA DR+CD11c+CD1c-CD141+)8. Tambin se clasifican segn su localizacin:

residentes en tejidos perifricos, residentes en rganos linfoides secundarios y MDC

circulantes. Estas ltimas en humanos sanos suponen un total de 14,2 3,9 clulas/l20. Las
mejor estudiadas son las MDC de la piel, localizacin en la que al menos se pueden
diferenciar tres tipos de MDC: las clulas de Langerhans (CLs), que residen en la epidermis, y
DC CD1a+ y DC CD14+, que aparecen en la dermis. Las DC CD14+ expresan un gran nmero
de lectinas tipo C, como DC-SIGN, DEC-205, LOX-1, CLEC-6, Dectin-1 y DCIR. En contraste,
las CL expresan las lectinas langerina y DCIR. Estos dos subtipos celulares tambin difieren
en el panel de receptores TLR que presentan: las MDC CD14+ drmicas presentan TLR2, 4,
5, 6, 8 y 10, mientras que las CL expresan TLR1, 2, 3, 6 y 102325. Otra discrepancia entre
estos dos subtipos celulares es el tipo de citoquinas que secretan. Mientras que las DCs
CD14+ producen una gran variedad de factores solubles, como IL-1, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12,
GM-CSF, MCP y TGF, las CL secretan una pequea cantidad de citoquinas, entre las que
destaca la IL-1526. Esta produccin de citoquinas diferencial explica las diferentes funciones
biolgicas de los distintos subtipos de MDC. Las MDC CD14+ drmicas inducen la
diferenciacin de los linfocitos T CD4+ naive hacia un subset de linfocitos T CD4+
especializados en la cooperacin con los linfocitos B, activando su produccin de grandes
cantidades de IgM y el cambio isotpico hacia IgG e IgA. De estas funciones es responsable
la IL-21 producida por los linfocitos T CD4+, inducida a su vez por la IL-12 secretada por las
MDCs CD14+ drmicas27. Por el contrario, las LC son eficientes inductoras de respuesta de
linfocitos T CD8+, parece ser que por la accin de IL-1528.
Las PDC son importantes en las respuestas inmunes antivirales y en procesos autoinmunes.
Constituyen la principal fuente de INF I tras las infecciones29. Circulan por el torrente
sanguneo y entran en los rganos linfoides a travs de las vnulas de endotelio alto. En
sujetos sanos suponen 8,9 1,7 clulas/l20. Estas clulas, marcadores de linajeHLA
DR+CD11c, expresan altos niveles de CD123 y marcadores especficos como BDCA-2
(CD303) y BDCA-4 (CD304)30. A diferencia de las MDC, presentan TLR1, 6, 7, 9 y 1029.
Pueden ser activadas por virus31, IL-3 y ligando de CD40 de origen mastoctico32, y por
componentes microbianos como motivos CpG de ADN33. Por su enorme plasticidad funcional,
son capaces de desencadenar diferentes respuestas inmunolgicas. Cuando son expuestas a
virus viables, inician respuestas de memoria, induciendo la expansin y diferenciacin de
linfocitos B de memoria antgeno especficos a clulas plasmticas33, y de linfocitos T
antgeno especficos, a CTL34. Por el contrario, las PDC activadas por motivos CpG o
IL3/CD40L inducen la secrecin de IL-10 por parte de linfocitos T CD4+ reguladores35 y la
activacin de linfocitos T CD8+ supresores por la expresin del ligando de ICOS36.
Se ha comprobado la existencia de dos subtipos de PDC segn su expresin de CD2. Ambos
subtipos se han encontrado tanto circulantes como en amgdala; sin embargo, las PDC
CD2high tambin se detectan en algunas biopsias tumorales, sugiriendo alguna funcin en la
inmunovigilancia tumoral. Tanto las PDC CD2high como las PDC CD2low secretan IFN y
expresan las molculas citotxicas granzima B y TRAIL. Las PDC CD2high son potentes

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activadoras de la respuesta de linfocitos T. En contraste, las PDC CD2low parecen presentar
una capacidad limitada para inducir la proliferacin de linfocitos T alognicos. Estas
diferencias funcionales entre los dos subtipos de PDC estn asociadas con distintos patrones
de transcripcin, secrecin diferencial de IL12p40 y expresin diferencial de la molcula
coestimuladora CD80 tras su activacin37.
En humanos, las PDC pueden ser movilizadas in vivo con citoquinas como el ligando de Flt3 y
GM-CSF, mientras que las MDC son movilizadas nicamente por Flt318,38. La movilizacin
diferencial de diferentes subclases o precursores de CD por estas citoquinas ofrece una
nueva estrategia de manipular las respuestas inmunes en humanos.

Maduracin de las CD
Se han propuesto dos modelos para explicar la diferenciacin de las CD a partir de
precursores hematopoyticos. Uno postula un nico linaje de precursores de CD dotado de
plasticidad funcional, mientras que el otro defiende la existencia de varios linajes de
precursores de CD funcionalmente diferentes39. Ambos modelos definen tres estados de
maduracin: precursores de CD, CD inmaduras (CDi) y CD maduras (CDm). Para comprender
las funciones de las CD, deben de entenderse sus diferentes estados de maduracin.
Los precursores de CD migran de la mdula sea y circulan por la sangre hasta lugares
especficos del organismo donde maduran y actan como centinelas del sistema inmune. Este
trfico hacia los tejidos perifricos est dirigido por la expresin de los receptores de
quimioquinas CCR1, CCR5 y CCR6, y por molculas de adhesin como el ligando de
CD62P4042.
Las CDi expresan CCR1 y CCR3, cuyos ligandos se expresan en los endotelios activados y
en clulas inflamatorias, promoviendo su migracin hacia piel, bazo, hgado, pulmn, corazn,
rin y mucosas, constituyendo una red de CD intersticiales en todos los rganos excepto en
sistema nervios central y testculo11. La funcin principal de las CDi es la captura antignica.
Las CDi procesan antgenos adquiridos tanto endgenamente (sintetizados en el citosol de las
CD) como exgenamente (procedentes del entorno extracelular). Los posibles orgenes de
antgenos extracelulares incluyen bacterias, virus, clulas necrticas o apoptticas, protenas
de choque trmico, inmunocomplejos y otros tipos de protenas. Son capturados por diversos
mecanismos (macropicnocitosis, endocitosis mediada por receptor y fagocitosis) gracias a los
receptores de superficie presentes en las CD, como receptores de Fc43, integrinas44, lectinas
tipo C45, y los llamados receptores scavenger, como LOX-1 y CD9146.
Ya en el interior de las CD, los antgenos proteicos son degradados a pptidos que se unirn
a las molculas del complejo principal de histocompatibilidad de clase I (MHC I) o clase II
(MHC II) y sern transportados a la superficie celular para el posterior reconocimiento por
linfocitos T antgeno-especficos. Los antgenos proteicos endgenos, procesados a travs de
la va del MHC I, son primeramente ubiquitinados y degradados en pptidos por el
proteosoma en el citosol. Posteriormente son transportados al retculo endoplsmico (RE) por
molculas transportadoras asociadas con el procesamiento antignico (TAP), donde son
cargados en el MHC I. Los complejos MHC I-pptido son llevados desde el RE a la membrana
celular a travs de la red trans-Golgi para la presentacin a los linfocitos T CD8+.
Los antgenos proteicos exgenos son procesados en endosomas que se fusionan con
lisosomas portadores de proteasas, responsables de la degradacin de las protenas en
pptidos que se unirn a molculas de MCH II. Los complejos MHC II-pptido son
transportados por tbulos especializados a la superficie celular, donde se presentarn a
linfocitos T CD4+. Estas protenas exgenas tambin pueden ser procesadas por las CD a
travs del MHC I, fenmeno conocido como presentacin cruzada; esto permite la
activacin de una respuesta inmune tanto de linfocitos CD4+ como de linfocitos T CD8+ ante
antgenos exgenos47.
Los antgenos lipdicos, tanto los expresados en patgenos (por ejemplo, micolatos de
micobacterias) como los presentes en tejidos propios (esfingolpidos, fosfatidil inostidos), son
presentados por las CD a travs de la molcula CD1, que heterodimeriza con la 2microglobulina48. El procesamiento de estos antgenos lipdicos hasta las diferentes molculas
CD1(a-d) se realiza en compartimentos intracelulares especializados. El repertorio celular
restringido por CD1d incluye linfocitos T con su caracterstica diversidad en el TCR, as como
clulas NKT invariantes.
El fenotipo de las CDi se caracteriza por la expresin de grandes cantidades de receptores de
quimioquinas inflamatorias, que les permiten extravasarse a los tejidos inflamados49,50 y por
una baja expresin de molculas co-estimuladoras, de adhesin, de MHC y marcadores
especficos de CD.
La maduracin de las CD es un complejo proceso que conduce a la diferenciacin final de las
CD, transformndolas desde unas clulas escasamente inmunoestimuladoras que funcionan
como centinelas perifricos que capturan antgenos, en las ms potentes clulas

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estimuladoras de linfocitos T. Adems de la captura de antgenos, las CD deben recibir las
llamadas seales de peligro originadas por patgenos, inflamacin o dao tisular51,52 para
sufrir este proceso madurativo que les permitir desplazarse a los rganos linfoides
secundarios y estimular de forma eficiente los linfocitos vrgenes. Estas seales madurativas
se deben tanto a molculas inflamatorias originadas en el propio organismo (ligando de CD40,
TNF, IL-1, IL-6, IFN) como a productos microbianos o bacterianos agonistas de los TLR.
Con la maduracin las CD adquieren una gran motilidad y pierden su capacidad de capturar
antgenos al disminuir la expresin de receptores de fagocitosis y endocitosis. Las CDm
optimizan el procesamiento de antgenos aumentando la expresin de los componentes de la
maquinaria enzimtica responsable del proceso53,54, y adquieren la capacidad de presentar
antgenos y estimular a los linfocitos T tras el incremento en la expresin de molculas del
MHC y de molculas de adhesin y co-estimulacin (CD40, CD54, CD58, CD80, CD83,
CD86). La mayora de estos marcadores ya estn presentes en bajos niveles en las CDi; en
cambio, el CD83 est ausente en las CDi y sirve como marcador para distinguir las CDi de las
CDm. Algunas de estas molculas estn implicadas en la sealizacin bidireccional entre la
CD y el linfocito T, modulando tanto la activacin del linfocito como las funciones de la CD.
Durante la maduracin, las CD disminuyen la expresin de los receptores de quimioquinas
CCR1 y CCR5, y aumentan la de CCR7. El ligando de este ltimo se encuentra en las
paredes de los ganglios linfticos y en la zona paracortical ganglionar55. Las propias CD
secretan quimioquinas como TARC, MDC o IP-10, que reclutan diferentes tipos de linfocitos T,
y RANTES, MIP-1 y MIP-1, que reclutan monocitos y otras CD hacia el microambiente
local.

Funciones de las CD
Las CD estimulan a los linfocitos T de una manera mucho ms potente que los macrfagos o
los linfocitos B. Su expresin de molculas de MHC es entre 10 y 100 veces mayor que la de
los linfocitos B3. Imgenes a tiempo real de CD murinas y linfocitos T naive en ganglios
linfticos intactos revelan que una CD puede interaccionar hasta con 500 linfocitos T en una
hora56,57.
La activacin eficaz de los linfocitos T por parte de las CD necesita de varias seales
consecutivas. Las CD pueden activar tanto a linfocitos T CD4+ como linfocitos T CD8+ por
presentacin antignica va MHC clase II y MHC clase I, respectivamente, lo que constituira
la primera seal. La segunda seal se realiza por la interaccin con molculas
coestimuladoras presentes en las CDm: CD80 y CD86 con el receptor linfocitario CD28, y la
familia TNF con los receptores linfocitarios R-TNF. Si falla esta coestimulacin, los linfocitos T
se vuelven tolerognicos.
Tras su activacin, los linfocitos T vrgenes sufren una expansin clonal y una diferenciacin a
clulas efectoras secretoras de citoquinas y clulas memoria. El tipo de respuesta
consiguiente de los linfocitos T depende de varios factores, como la concentracin antignica
en la CD, la afinidad del TCR por el MHC, la duracin de la interaccin de la CD con el
linfocito T, el estado de maduracin de la CD, y el tipo de estmulo responsable de la
maduracin de la CD58. La supervivencia a largo plazo de los linfocitos T y su diferenciacin a
clulas de memoria y efectoras requiere la interaccin con CD maduras. La activacin
inducida por CD inmaduras es de ms corta duracin.
Los linfocitos CD4+ pueden diferenciarse hacia linfocitos Th-1, que producen IFN y secundan
una respuesta de linfocitos T CD8+ citotxicos, o hacia linfocitos Th-2, que producen IL-4, IL-5
e IL-13, e implican inmunidad humoral y disminucin de la respuesta Th-1. El patrn de
citoquinas producido por la CD activada determinar la direccin de esta polarizacin; IL-12,
IL-18 e IL-27 dirigen hacia Th-1, mientras que CCL17, CCL22 o la ausencia de IL-12 lo hacen
hacia Th-2. A su vez, este patrn de citoquinas est regulado por factores como el subtipo de
CD, la localizacin anatmica de la CD o el tipo de estmulo madurador. Estos parmetros
tambin controlan otras caractersticas de la respuesta de los linfocitos T, como la induccin
de tolerancia o la recirculacin (homing) de los linfocitos T.
La cooperacin de los linfocitos T CD4+ en el momento de la activacin es necesaria para
generar linfocitos T CD8+ memoria. Se cree que esta interaccin est mediada por la unin
entre la molcula CD40 de la CD y su ligando en el linfocito CD4 activado, el CD40L59,
aunque hay estudios que sugieren una interaccin directa entre los linfocitos CD4+ y el CD40
de los linfocitos CD8+60. Otras molculas que se han implicado en la generacin de clulas de
memoria y en las respuestas duraderas son protenas pertenecientes a las familias de CD28 y
del receptor de TNF (TNFR).
Adems de su papel central en la activacin de los linfocitos T, las CD interactan
directamente con clulas NK, clulas NKT y linfocitos B. CDm y CDi pueden activar e inducir
la expansin de clulas NK resting por mecanismos no aclarados totalmente, aunque se han
descrito algunos protenas y factores solubles implicados61,62. Las CD activadas tambin

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inducen directamente la proliferacin de linfocitos B, el cambio de isotipo de inmunoglobulinas
y su diferenciacin a clulas plasmticas secretoras de anticuerpos; estas acciones las
pueden llevar a cabo tanto de forma linfocito T-dependiente como linfocito T-independiente.
Es reseable el papel de la CD en la generacin de la tolerancia inmunolgica antgenoespecfica en el control de los fenmenos autoinmunes. Las CD tmicas promueven la
eliminacin de los linfocitos T autorreactivos63, y las CD perifricas inducen tolerancia
principalmente en su estado inmaduro o semimaduro64. Como ya se ha comentado, la
presentacin antignica en ausencia de molculas coestimuladoras o sin IL-12 inducen
linfocitos T reguladores que suprimen la respuesta inmune mediante la secrecin de IL-10 y
TGF. Las propias CD sufren un proceso de parada madurativa y se vuelven tolerognicas en
presencia de sustancias como esteroides, vitamina D3, IL-10, TGF
+

65,66

o CTLA-4 producido

+67

por la poblacin reguladora CD4 CD25 FoxP3

Obtencin de precursores de CD
Desde lo primeros estudios en los que se aislaban CD del bazo de ratones, se han
desarrollado diferentes protocolos para optimizar la obtencin de una cantidad adecuada de
CD que permita su uso clnico, principalmente en protocolos de inmunoterapia tumoral.
Inicialmente se obtenan precursores de CD presentes en sangre perifrica mediante
centrifugacin en gradiente de densidad, pero el proceso no era demasiado rentable dada su
escasa frecuencia. En los ltimos aos se han conseguido obtener del orden de 1x106-1x108
CD mediante tcnicas de cultivo ex vivo.
Una de las tcnicas ms empleadas en la diferenciacin de CD a partir de monocitos de
sangre perifrica. Los monocitos se purifican de productos de afresis por elutriacin,
inmunoseleccin o adherencia. Posteriormente se diferencian a CD en presencia de GM-CSF
e IL-4, y maduran con TNF, IL-1, PGE2 o IL-6, en un protocolo que tiene una duracin de 610 das21,68.
Tambin se pueden usar clulas CD34+ como fuente de CD. En este caso, las clulas se
obtienen a partir de productos de afresis, mdula sea o cordn umbilical mediante
inmunoseleccin y se cultivan con GM-CSF y TNF durante 6-10 das69,70.
Otra alternativa es la expansin de CD in vivo. El uso de citoquinas como G-CSF71 o Flt3L72,73
aumenta considerablemente el nmero de precursores de CD en sangre perifrica, que
pueden ser recogidos mediante una afresis y purificados mediante inmunoseleccin. Esta
estrategia acorta el tiempo de cultivo ex vivo, ya que estos precursores maduran rpidamente,
en 24-48 horas.
Algunos grupos han hecho comparaciones de las CD obtenidas a partir de diferentes tcnicas.
Cuando se comparan CD de sangre perifrica con CD obtenidas a partir de monocitos, se
observa que las primeras fenotpicamente parecen estar ms activadas, ya que precisan de
un menor periodo de tiempo para madurar, mientras que en las segundas ese periodo de
tiempo es muy variable y depende mucho del estmulo utilizado. Sin embargo, parece que las
CD de sangre perifrica son peores productoras de citoquinas, menos activas en endocitosis y
carecen de la expresin de DC-SIGN, pero son mejores iniciadoras de respuestas T antgenoespecficas y presentan una mayor capacidad de polarizar la respuesta hacia un perfil Th171
73

. Si se comparan CD derivadas de monocitos con CD derivadas de progenitores CD34+,

ambos tipos presentan morfologa y fenotipo similares, aunque la induccin de respuesta T

antgeno-especfica est aumentada cuando se utilizan las CD derivadas de progenitores
CD34+7476. Otros autores han publicado ensayos estudiando las diferencias entre distintas
estrategias de diferenciacin de CD a partir de monocitos, variando las citoquinas utilizadas
tanto en su generacin como en su maduracin; los resultados presentados en este sentido
son muchas veces contradictorios.
La induccin de una respuesta anti-tumoral exitosa requiere el uso de CD maduras
inmunoestimuladoras por dos motivos: por su capacidad para inducir una respuesta T
antgeno-especfica y porque las CD inmaduras parecen inducir tolerancia inmune. Se ha
comprobado que las CDi inducen la expansin de linfocitos T reguladores, aunque tambin se
ha descrito que las CDm tambin pueden inducir esta expansin tras ciertos estmulos7779.
Adems,

se

ha

comprobado

que

las

CDm

son

resistentes

ciertos

factores

inmunosupresores producidos por las clulas tumorales, y son fenotpica y funcionalmente

estables en ausencia de citoquinas. En la tabla 1 se resumen los principales estmulos
utilizados en la maduracin de las CD.

Tabla 1. Principales estmulos utilizados en la maduracin de las CD

Mediadores pro- Interleuquinas (IL-1, IL-6), interferones (IFN/, IFN), MCM,
inflamatorios

TNF, PGE2

Agonistas de

CD40L, OX40L, 4-IBBL

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molculas coestimuladoras
Agonistas de
TLR

Peptidoglicano, zymosan, LPS, MPL, Ribomunyl, Luivac,

Biostim, OK432, caTLR4, flagelina, poli(I:C), Ampligen, ssRNA,
R848, poli-G10, oligonucletidos CpG

Quimioquinas

CCL16

Otros

Factor del complemento C5b-9, inmunocomplejos

Carga con antgenos tumorales

La capacidad de las CD para generar respuestas antitumorales in vivo ha sido documentada
en modelos animales y en estudios clnicos humanos. La mayora de los ensayos implican el
aislamiento de CD, seguido de la carga con antgenos tumorales y la posterior infusin de
estas CD portadoras de antgenos. Se han descrito un elevado nmero de antgenos
tumorales susceptibles de ser utilizados en protocolos de inmunoterapia. Los ms
significativos se resumen en la tabla 2.

Tabla 2. Antgenos tumorales potencialmente utilizables en inmunoterapia

Clase de

Antgeno

Tipo de tumor

Antgenos

Idiotipos de

Leucemias/linfomas B, mieloma

tumor

inmunoglobulinas

especficos

TCR

Linfomas T

Ras (p21) mutado

Pncreas, colon, pulmn

P53 mutado

Colorrectal, pulmn, vejiga, cabeza y cuello

Protena de fusin

LMC, LLA

antgeno

bcr-abl
Protenas de

MART-1/Melan-A

Melanoma

desarrollo

MAGE-1, MAGE-3

Melanoma, colorrectal, pulmn, gstrico

Familia GAGE

Melanoma

Telomerasa

Varios

Antgenos

HPV

Crvix, pene

EBV

Linfoma Burkitt, nasofaringe, sndromes

Antgenos

Tirosinasa

Melanoma

de tejido

Gp100

Melanoma

PAP

Prstata

PSA

Prstata

PSMA

Prstata

Tiroglobulina

Tiroides

a-fetoprotena

Hgado

Antgenos

Her-2/neu

Mama, pulmn

expresados

CEA

Colorrectal, pulmn, mama

Muc-1

Colorrectal, pncreas, ovario, pulmn

virales
linfoprolifetativos pos-trasplante
especficos

sobre-

CEA: antgeno carcinoembrionario; EBV: virus de Epstein Barr; HPV: virus del papiloma
humano; LLA: leucemia linfoblstica aguda; LMC: leucemia mieloide crnica; PAP:
fosfatasa cida prosttica; PSA: antgeno prosttico especfico; PSMA: antgeno
prosttico especfico de membrana; TCR: receptor de clulas T.

La exposicin al antgeno puede hacerse siguiendo diferentes estrategias. La ms frecuente

es la incubacin de las CD con pptidos derivados de protenas tumorales restringidos por
MHC y con eptopos definidos para la estimulacin de linfocitos T, principalmente CD8+.
Desde finales de la dcada de los 90 se han hecho ensayos utilizando pptidos derivados de
antgenos tumorales como MART-1, MAGE-1, gp100, CEA, PSMA o HER-2/neu, por citar
algunos8082. Esta metodologa se basa en algoritmos predictivos que identifican pptidos con
alta afinidad por la molcula de HLA, ms comnmente con los alelos HLA*A0201. Este
sistema tiene las ventajas de evitar procesos autoinmunes y el no requerimiento de clulas o
tejido tumoral. Sus principales inconvenientes son la necesidad de conocer los eptopos
tumorales y la posibilidad de aplicarla nicamente a los pacientes cuyo HLA sea el adecuado.

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Para evitar los mecanismos de escape tumoral, es frecuente el uso de varios pptidos
simultneamente, en lugar de un nico pptido.
En caso de que el eptopo no est definido, se suele utilizar la protena tumoral completa. De
esta forma se evita la restriccin por un HLA concreto. Se han utilizado diferentes mtodos
para introducir las protenas solubles en interior de las CD, como microinyeccin83, fusin
mediada por liposomas84, electroporacin85, o a travs de su unin a otras molculas que
faciliten su transporte, como pueden ser fragmentos de receptor de Fc86, toxinas bacterianas87
o protenas vricas88.
Con el objeto de intentar inducir una respuesta dirigida contra el mayor nmero de antgenos
tumorales posibles, se han desarrollado estrategias en las que se cargan las CD con
antgenos derivados de las clulas tumorales completas; esto tambin puede reducir la
posibilidad del escape tumoral que puede ocurrir si la vacunacin se hace con un pequeo
nmero de antgenos. La congelacin repetida o la sonicacin de las clulas tumorales
producen extractos que pueden aplicarse en este tipo de protocolos89,90. Otra opcin es el uso
de clulas tumorales a las que previamente se ha inducido apoptosis91 o necrosis92. Una
estrategia ms reciente emplea la fusin de las CD con las clulas tumorales mediante
tcnicas de electroporacin93 o polietilenglicol94.
Por ltimo, existen tcnicas en las que se introduce ARN95,96 o ADN97,98 de las clulas
tumorales en las CD, de forma que se consigue la expresin de los antgenos tumorales
dentro de la CD y su posterior presentacin en la membrana unidos al MHC.
Cada uno de los sistemas expuestos presenta ventajas e inconvenientes caractersticos,
incluso se han obtenido resultados contradictorios utilizando el mismo mtodo.

Conclusin
Desde su descubrimiento, las CD se han confirmado como las principales clulas
presentadoras de antgenos, desempeando un papel central en la respuesta inmune. Por ello
constituyen la base de los intentos de conseguir un tratamiento inmunoterpico antitumoral
eficaz. Durante dcadas la generalizacin de protocolos en esta direccin ha estado
dificultada por numerosos problemas metodolgicos basados en la escasa informacin sobre
su biologa y funciones. En la actualidad se disponen de las tcnicas y los conocimientos
necesarios para introducir las terapias basadas en CD dentro del arsenal de la oncologa
moderna, as como en el tratamiento de otras patologas de origen infeccioso o inmunolgico.

Conflicto de intereses
Los autores declaran no tener ningn conflicto de intereses.

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