Improvement of the hydrocarbon phytoremediation

rate by Cyperus laxus Lam. inoculated with a microbial

consortium in a model system
E. Escalante-Espinosa a, M.E. Gallegos-Martnez b,
E. Favela-Torres a , M. Gutirrez-Rojas a,*
A Departamento de Biotecnologa, UAM-Iztapalapa, Av. San Rafael Atlixco
#186, Col. Vicentina, C. P. 09340, Mxico
B Departamento de Hidrobiologa, UAM-Iztapalapa, Av. San Rafael Atlixco
#186, Col. Vicentina, C. P. 09340, Mexico
Received 15 December 2003; received in revised form 15 July 2004; accepted
12 October 2004

Resumen
Hidrocarburos fitorremediacin por Cyperus laxus Lam. Crece en perlita y se
inocularon con hydrocarbondegrading se evalu microorganismos. Hidrocarburos
totales de petrleo (TPH) fueron extrados del suelo degradado (60,7 g de TPH kg
-1 de suelo seco) y se trataron en perlita a una concentracin inicial de 5 g de TPH
kg -1 de perlita seca. Fenolgica Se determinaron las caractersticas, los
recuentos viables totales, microbianos degradadores de hidrocarburos e
hidrocarburos residuales 180 das de cultivo. Caractersticas fenolgicas de las
plantas inoculadas fueron mejorados en comparacin con las plantas no
inoculadas: raz de biomasa fue de 1,6 veces mayor, se redujo el tiempo de
floracin (13%), y el nmero de inflorescencias fue de 1,5 veces mayor. Los
rizosfricas recuentos de bacterias y hongos fueron mayores para los tratamientos
plantados (Inoculados y no inoculados) que para macetas sin plantar. La tasa
mxima fitorremediacin (0.51mg de TPH g -1 de planta seca d -1) Para las
plantas inoculadas se alcanz a los 60 das de cultivo, y fue dos veces mayor que
para no inoculado plantas (55% de eliminacin de TPH). Valores de extensin de
fitorremediacin de hidrocarburos similares para inoculado (90%) y no inoculado
(85%) las plantas se obtuvieron a los 180 das de cultivo. El presente estudio
demostr que los beneficios mutuos entre C. Laxus y microorganismos que
degradan hidrocarburos inoculados se mejoraron durante la fitorremediacin. Eso
Es pertinente sealar que este es el primer reporte de la fitorremediacin de
hidrocarburos por Cyperus Lam Laxus., una planta nativa que crece en los
pantanos altamente contaminados.
2004 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.

Palabras clave: La fitorremediacin; hidrocarburos; inculo; planta nativa

Introduccin
Los derivados de petrleo han sido eliminados en el medio ambiente durante
cientos de aos, suponiendo que el entorno absorber adecuadamente; sin
embargo, esto no es una ya los casos y se acumulan los contaminantes son
ahora que afecta a la salud de los seres vivos. A pesar de que tecnologas de
remediacin fsicas y qumicas estn disponibles en el mercado, son perjudiciales
para el medio ambiente (Harvey et al., 2002). Por lo tanto, las tecnologas sobre la
base de las plantas representan una alternativa natural (Hutchinson et al., 2001).
La fitorremediacin se define como el uso de las plantas para eliminar, contener o
neutralizar ambiental contaminantes (Sal et al., 1998). Ha sido propuesto como un
'' biotecnologa verde '', facilitando la eliminacin de los contaminantes
ambientales de los suelos y sedimentos (Gunther et al., 2000). Mecanismos que
se creen pueden afectar el transporte y destino de los contaminantes orgnicos en
las plantas son las siguientes: (i) los efectos del sistema radicular las condiciones
del suelo fsicos y qumicos, (ii) aumento general de la poblacin microbiana y la
diversidad, (iii) suministro de exudados de races y materia orgnica para los
procesos de degradacin cometabolismo, (iv) estimulacin de la humificacin, y (v)
la sorcin, absorcin y translocacin de la planta (Gunther et al., 1996; US EPA,
2000).
Fitorremediacin exitosa requiere de la colonizacin de plantas en el suelo
contaminado (White et al., 2000). Plantas con un sistema de races fibroso, en
particular monocotiledneas, se prefieren debido a su gran superficie rizoplano
zona, que es una ventaja para el establecimiento de activo poblaciones
microbianas (Aprill en y Sims, 1990). Plantas nativas ofrecen ventajas clave, ya
que se adaptan a las condiciones ambientales de una contaminada El sitio y su
supervivencia podran estar seguros. Junto al papel de los microorganismos en la
fitorremediacin ha sido reconocido (Anderson et al., 1993). Estudios recientes
sobre degradacin fenantreno en el suelo por microorganismos rizosfricas, han
demostrado que las comunidades microbiana extradas de cinco especies de
gramneas eran ms eficiente para la degradacin de hidrocarburos de los
microorganismos del suelo sin plantar (de Fang et al., 2001). Los microorganismos
tambin han sido utilizados como inculos para la biodegradacin . THOUAND et
al. (1999) reportaron que la nativa microorganismos fueron ms activas (1625% de prdida en peso crudo) que inculos comerciales.

Estudios de Hidrocarburos fitorremediacin se han centrado en el uso de

molculas de modelo individuales o mezclas de stos a bajas concentraciones
iniciales. Epuri y Sorensen (1997) benzo analizado (a) pireno eliminacin de 14C

en 10 mg kg -1 de suelo en el microcosmos; reportaron el 4,1% de la

mineralizacin y 0,28% de este compuesto incorporado en el planta. Liste y
Alexander (2000) evaluaron la degradacin de pireno en 100 mg kg -1 de suelo
en tubos de ensayo; ellos encontraron que el 74% de pireno desapareci de con
vegetacin del suelo en comparacin con el 40% de la tierra sin sembrar. Binet et
al. (2000) Probaron una mezcla de policclico aromtico 3-6 trica hidrocarburos
(PAH) a 1000 mg kg -1 de suelo en plantada y ollas sin sembrar; que obtuvieron la
remocin del contaminante de 65% y 39%, respectivamente. Tales sistemas
modelo hacen No tener en cuenta las interacciones entre las sustancias qumicas
compuestos presentes en el complejo altamente concentrado mezclas.
Especialmente en suelos contaminados por el tiempo, mezclas complejas como
resultado tanto la toxicidad y restringidos biodisponibilidad que podra conducir a la
subestimacin de las capacidades de fitorremediacin. Con el fin de evitar malas
interpretaciones, proponemos un modelo experimental utilizando hidrocarburos
extrados del suelo degradado en lugar de contaminantes individuales. El objetivo
de este trabajo fue evaluar el efecto de beneficio mutuo entre las plantas y
hidrocarburos degradantes de inculo microbiano para mejorar el grado y
velocidad de la fitorremediacin de hidrocarburos.
Cyperus Laxus Lam. Es una planta nativa crece en pantanos altamente
contaminados con 200-400 g de kg de TPH -1 de suelo seco (Gallegos Martnez et
al., 2000). Esta especie vegetal es resistente a concentraciones de hidrocarburos
hasta 200 g kg -1 de suelo seco (resultados no publicados).
Este es el primer informe de la fitorremediacin de hidrocarburos por C. Laxus en
condiciones de invernadero.
2. Materiales y mtodos
2.1. Plantas
Cyperus Laxus Lam. Se utiliz para la fitorremediacin ensayos. C. Laxus es una
planta nativa crece en un contaminados con hidrocarburos pantano tropical en
Veracruz, Mxico. Las plantas fueron recolectadas con el suelo circundante (1m
de dimetro aproximadamente), se colocaron en macetas y mantenido en
condiciones de invernadero (16-28 C, 75-90% con respecto humedad). Las
semillas fueron secadas al aire y se almacenan en el interior bolsas de papel
oscuras en condiciones de sala para estudios posteriores.
2.2. Modelo del suelo
Perlite (Dicalite, Mxico) fue utilizado para simular el suelo. La perlita se tamiz a
travs de una malla de 4,76 mm y una 1,19 mm de malla, despus de lo cual la

fraccin restante era se lava con agua caliente del grifo y se sec al aire. La perlita
fue enriquecida artificialmente con hidrocarburos totales de petrleo (TPH) a fin de
obtener 5 g kg -1 de perlita seca; TPH tena ha extrado de la tierra contaminada
resistido (5 g suelo de seca, 160 ml de acetona: hexano 1: 1) utilizando el Soxhlet
el mtodo US EPA 3540 (US EPA, 1996). El degradado suelo contaminado
contena 60,7 g de TPH kg -1 suelos de las zonas secas (alifticos 24,29 g kg -1
de suelo seco, aromticos 13,97 g kg -1 de suelo seco y asfaltenos / polares 22,47
g kg -1 de suelo seco).

2.3. Los microorganismos

Un consorcio microbiano compone de 10 bacteriana (cepas de Bacillus cereus,
Pseudomonas sp., Gordonia rubripertincta, Kocuria rosea, oxydans Arthrobacter,
Bacillus subtilis A, Bacillus subtilis B, Micrococcus luteus y dos cepas no
identificadas) y tres cepas de hongos (Penicillium janthinellum, Aspergillus carneus
y Aspergillus terreus) se utiliz como inculo para la fitorremediacin de
hidrocarburos estudios. Las cepas microbianas se haban aislado previamente de
C. rizosfera Laxus y seleccionados sobre la base de su capacidad de degradacin
de hidrocarburos (Daz-Ramrez et al., 2003). A fin de estandarizar el inculo, el
consorcio fue re-constituido por la mezcla de las cepas en volmenes iguales y
unidades de densidad ptica.
2.3.1. Inculo bacteriano
Cepas bacterianas individuales se cultivaron en frascos de suero (125 ml) con 25
ml de caldo nutritivo (Bioxon) bajo condiciones aerbico. Despus de la incubacin
(72 h, 150 rpm, 30 C), 2,5 ml de cada cultivo se transfirieron a un medio fresco
(22,5 ml) y se incub hasta la fase exponencial fue alcanzado. Se recogieron las
clulas, se lavaron tres veces con una solucin isotnica, y, posteriormente, las
suspensiones de clulas se ajustaron entre 0,23 y 0,26 ptico unidades de
densidad (K600 nm) utilizando un espectrofotmetro Ultrospec II (LKB Biochorn).
Finalmente, volmenes iguales de cada cepa se mezclaron y se utiliz como
inculo para obtener un recuento inicial de 4x106 UFC g -1 de perlita seca.
2.3.2. Inculo fngico
Cepas de hongos individuales se cultivaron en frascos de suero (125 ml) con 25
ml de medio de propagacin (en gl -1): NaNO3, 5,14; MgSO4 7H2O, 0,25; KCl,
0,50; KH2PO4, 12,8; K2HPO4, 1,0; glucosa, 2,0; extracto de levadura, 3,0 y 2 ml
de solucin mineral (FeSO4 7H2O, 0.100; CuSO4 5H2O, 0.015; ZnSO4

7H2O, 0.161 y MnSO4 7 H2O, 0,088). Botellas inoculadas se incubaron durante

cinco das en las mismas condiciones que las cepas bacterianas. Al final de la
cultura, los pellets se rompieron con perlas de vidrio hasta una suspensin
homognea se formado. Las suspensiones de clulas se lavaron tres veces con
una solucin isotnica, se mezclaron a volmenes iguales y utilizados como
inculo para obtener un recuento inicial de 7 x 105 CFU g- 1 de perlita seca.
2.4. Los ensayos de fitorremediacin
Trabajos de fitorremediacin se llevaron a cabo en frascos de vidrio oscuro
cilndricos que contienen 35 g (peso seco) de perlita contaminados con
hidrocarburos. Cuatro conjuntos de experimentos (15 macetas por experimento)
se analizaron simultneamente: (i) las plantas inoculadas con el consorcio
microbiano (T1), (ii) las plantas no inoculadas (T2), (iii) un control sin plantas ni el
consorcio microbiano (T3) y ( iv) un control con el consorcio microbiano sin plantas
(T4). Para los experimentos de T1 y T2, dos 60 das de edad, C. plntulas Laxus,
creciendo en musgo de turba, se trasplantaron a cada maceta. Se aadi el
consorcio microbiano (ver arriba) a cada planta en los experimentos de T1 y T4
despus de 15 das (de este momento se considera el inicio del proceso de la
fitorremediacin). Solucin modificada largo-Ahston se aadi como solucin
nutritiva una vez por semana: KNO3, 808; Ca (NO3) 2 4H2O, 944; NaH2PO4
H2O, 184; MgSO4 7H2O, 368; y 1 ml de solucin de oligoelementos (en mgl -1):
MnSO4 4H2O, 2,23; CuSO4 5H2O, 0,25; ZnSO4 7H2O, 0,29; H3BO3, 3,10;
NaCl, 5.90; (NH4) 6Mo7O24 4H2O, 0.088 y FeSO4 7H2O, 0,02. Las macetas
se mantuvieron bajo condiciones de invernadero. Con el fin de evaluar las
caractersticas fenolgicas, los recuentos microbianos y TPH residual anlisis, tres
macetas para cada conjunto experimental se tomaron muestras peridicamente
hasta 180 das de cultivo.
2.5. Mtodos analticos
2.5.1. Procedimiento muestreado
Perlite de cada bote se verti en un recipiente, se mezclaron y se tomaron
muestras para anlisis microbiano y TPH, uno y dos muestras, respectivamente.
Toda la perlita de ollas plantadas se consider como la matriz rizosfrico.
2.5.2. Plantas
Las plantas se cosecharon y las races se lavaron para eliminar perlita. El peso
seco total de la planta y de la raz se determin al alcanzar un peso constante,
despus de secar a 60 C. Se contaron los brotes y las inflorescencias.
2.5.3. Los recuentos microbianos

Los microorganismos fueron enumerados por la tcnica de extensin en placa

(Lorch et al., 1995) utilizando agar soya tripticaseina (TSA, Bioxon) para las
bacterias, y la agar patata dextrosa (PDA, Bioxon) con cloranfenicol de (Sigma) a
100mgl -1, Para los hongos.
Degradadores TPH se cuantificaron al final de la fitorremediacin Los ensayos por
el mtodo del nmero ms probable modificado (Wrenn y Venosa, 1996). Azul de
tetrazolio (Sigma) a 55mgl -1 se utiliz como indicador de crecimiento microbiano.
Las muestras se incubaron durante dos semanas a 30 C.
2.5.4. Hidrocarburos
Hidrocarburos residuales se extrajeron de 5 g de perlita secos utilizando el mtodo
de Soxhlet (ver arriba). Los hidrocarburos extrados se solubilizaron en
tetracloroetileno y cuantificados en 2926 cm -1 con un FTIR Espectroscopia
(Perkin Elmer 2000) con base en los Estados Unidos el mtodo EPA 418.1 (US
EPA, 1983). Se determinaron las composiciones de hidrocarburos inicial y final.
Los asfaltenos se eliminaron por n-hexano precipitacin (Versan et al., 1998). El
aliftico, (resina) fracciones aromticas y polares se obtuvieron mediante
cromatografa en columna (Wang et al., 1994). Muestras de hidrocarburos (0,10 g)
sin asfaltenos se disolvieron en n-hexano y se aplicaron a una columna de gel de
slice (60-200mesh) (10 mm x 100 mm), previamente equilibrada con n-hexano. La
fraccin aliftica se eluy con n-hexano, seguido de una elucin de benceno para
obtener compuestos aromticos. Finalmente, una mezcla de metanol-acetona (1:
1) se emple la mezcla para eluir la fraccin polar (resina). PAH analiza en las
fracciones aromticas (solubilizados en diclorometano a 30 000mgl -1) se llevaron
a cabo usando un gas de la serie II Plus Hewlett Packard 5890. Cromatgrafo
junto con un espectrmetro de masas 5972 Hewlett Packard. Una de slice fundida
DB5 columna capilar (30m) se utiliz con helio como portador. La temperatura del
horno se elev de 40 a 200 C en 13Cmin -1 y de 200 a 290C en 25Cmin -1. La
trampa de iones se ajustado a 220C y se oper el espectrmetro de masas a 70
eV en el modo de impacto electrnico basado en la EPA de EE.UU.
8100 Mtodo (US EPA, 1996).
Con el fin de evaluar las caractersticas fenolgicas y material extrable en las
races, se cultiv C. Laxus en perlita no contaminada con y sin inculo durante 180
das. Al final del cultivo, se extrajeron las races utilizando el mtodo de Soxhlet
(aproximadamente 2 g de races secas, 160ml de acetona: hexano 1: 1). Los
valores de material extrable con races en crecimiento en no contaminada perlita,
se restaron de los obtenidos de material extrable con races en crecimiento en
contaminada perlita en las mismas condiciones.

3. Resultados y discusin
Laxus Cyperus es una especie nativa predominante crece a sitios contaminados
resistidos en pantanos tropicales con concentraciones de TPH hasta 200 g kg -1 de
suelo (Gallegos Martnez Et al., 2000). Con el fin de evaluar el efecto de los
beneficios mutuos entre el consorcio microbiano y C. Laxus en la fitorremediacin
de hidrocarburos, se utiliz perlita para simular las condiciones del suelo. La perlita
es un material ligero preparado a partir de la lava volcnica, que mantiene la
humedad y los nutrientes que favorecen el crecimiento de las plantas (Troeh y
Thompson, 1993). Desde la biodisponibilidad de contaminantes es a menudo uno
de los factores limitantes para la fitorremediacin (Hutchinson et al., 2001), la
perlita se dispar con hidrocarburos extrados del suelo resistido deberan mejorar
los hidrocarburos a estar disponible para los microorganismos y races de las
plantas. La concentracin de TPH fitotxico a C. Laxus, en perlita con pas, fue de
50 g de TPH kg-1 de perlita seca (resultados no publicados). Adems, el uso de
perlita nos permiti medir con precisin las variables que intervienen en el diseo
experimental (nmero y tipo de microorganismos y el tipo de hidrocarburos), sin
interferencias de materiales orgnicos o clulas microbianas suelos naturales de
estao presente.
Crecimiento de la Planta
Se determinaron las caractersticas fenolgicas de C. Laxus (biomasa vegetal, la
biomasa de races, nmero total de brotes e inflorescencias) en toda la
fitorremediacin. Mximas de valores enteros de la planta y la raz de 161 y
49mgg-1 de perlita seca, respectivamente, se obtuvieron con las plantas inoculadas
que eran 1,3 y 1,6 veces superiores a los obtenidos con las plantas no inoculadas
(Fig. 1). Las caractersticas fenolgicas de C. Laxus como toda la planta y la
produccin de biomasa de las races se han mejorado.

(50%y 75%,
mediante
la
Plantrespectivamente)
Biomass (g): Biomasa
Vegetal
adicin
del Biomas
inculo(g): Biomasa
microbiano
sin
Root
races
hidrocarburos pas. Estos resultados
C. Laxusque
pesola seco
de ladelplanta
entera (a) y
muestran
adicin
consorcio
races (b) mejor
durante la
la fitorremediacin
(r: T1, j:
microbiano
biomasa de las
T2). aLas
barrasgrado
de que
errorlo hizo
representan
la
races
un mayor
toda
estndar
plantas.
la desviacin
planta. El
resto dedeseiscaractersticas
fenolgicas de C. Laxus inoculado con el
consorcio
microbiano
tambin
se
mejoraron (Tabla 1). El tiempo de floracin
se redujo ligeramente (13%) y el nmero
de inflorescencias y brotes por planta
fueron de 1,5 veces mayor en el inoculado que en las plantas no inoculadas. Por
lo tanto, se observ un efecto positivo de inculo en las caractersticas
fenolgicas.
C. Laxus creci sanos (no hay signos externos de fitotoxicidad) en 5 g de TPHkg?
1 de perlita seca con o sin inculo. Por otra parte, el mximo crecimiento de brotes
y races, y floracin temprana se logra con el inculo microbiano. Esta tendencia
particular, sugiere que la presencia de microorganismos que degradan
hidrocarburos reduce el potencial efecto txico producido por la biodisponible
claveteado hidrocarburos (Tabla 1).
Tabla 1.

El tiempo de floracin, nmero de brotes e inflorescencias de C. Laxus a los 180

das de cultivo.
Tratamiento
Inoculado
No inoculado

Tiempo de floracin
(d)

Nmero de
inflorescencias por planta

El nmero de tomas
totales por planta

135 3
155 4

3 7.5 1.2
4.5 0.5

La comunidad microbiana rizsfera garantiza la proteccin externa de las plantas,

lo que hace que los beneficios mutuos para ambos. Los microorganismos se
benefician de los exudados de plantas y las plantas, a su vez, de la
desintoxicacin metablica de compuestos potencialmente txicos provocados por
las comunidades microbianas (Walton et al., 1994).
Adicionalmente, poblaciones microbianas se benefician a travs de la planta del
reciclaje y la solubilizacin de nutrientes minerales como as como por el

suministro de vitaminas, aminocidos, auxinas, citoquininas y giberelinas, que

estimulan la planta crecimiento (Atlas y Bartha, 1998).
3.2. Caracterizacin microbiana.
Se evalu el nmero total de bacterias y hongos, y de los microorganismos que
degradan hidrocarburos durante la fitorremediacin. Rizosfricas recuentos
bacterianos de las plantas inoculadas y no inoculadas aument casi tres rdenes
de magnitud a los 60 das de cultivo (Fig.2 (a). 10 8 UFC g-1 de perlita seca) hasta
el final del cultivo. En macetas de control (T3 yT4), el recuento de bacterias fue de
dos rdenes de magnitud menor que la obtenida con las plantas inoculadas.
El recuento de hongos rizosfera de inoculado y no inoculado de plantas
aumentaron un orden de magnitud durante los primeros 60 das de cultivo; este
recuento se mantuvo constante hasta alcanzar los valores finales de 106 UFC g -1
de perlita seca de las plantas inoculadas y 105 UFC g -1 de perlita seca para
aquellos que no inoculado (Fig. 2 (b)). El recuento de hongos de las ollas de
control (T3 y T4) fueron dos rdenes de magnitud menor que la obtenida con
tratamientos T1 y T2. Los recuentos microbianos en macetas no inoculadas fueron
debido a la contaminacin natural durante el perodo de incubacin bajo
condiciones de invernadero.
Fig. 2. Recuento microbiano durante la
cintica de la fitorremediacin bacterias
(a) y hongos, (b): las plantas inoculadas
( , T1), las plantas no inoculadas (
,
T2), control sin plantas ni inculo
microbiano (
, T3), y control con el
inculo microbiano sin plantas (
, T4).
Las barras de error representan la
desviacin estndar de tres macetas
muestras.

Poblacin microbiana del suelo con vegetacin es generalmente ms alta que la

de suelo sin vegetacin (Anderson et al., 1993). Adems, la presencia de
contaminantes y exudados de races puede modificar la composicin y la actividad

de estas poblaciones (Walton et al., 1994). En nuestros experimentos, C. Laxus el

nmero de microbios rizosfricas (bacterias y hongos) fueron similares a los
reportados por Nichols et al. (1997) para la hierba azul alpino (107 UFC g -1 de
suelo para las bacterias y 104 UFC g-1 de suelo para los hongos) que crece en
suelos carpan con una mezcla de hidrocarburos modelo.
Microorganismos degradadores de hidrocarburos se enumeraron al final del
cultivo. No se observaron diferencias significativas entre las plantas inoculadas y
no inoculadas (1x106 48% microorganismos degradadores g -1 de perlita seca);
Sin embargo, el nmero de microorganismos que degradan hidrocarburos no
plantadas en macetas era 7x104 30% microorganismos degradadores g -1 de
perlita seca. Estos resultados demostraron que el crecimiento de microorganismos
degradadores de hidrocarburos se vio favorecido por la presencia de la planta (T1
y T2) en lugar de por el inculo exgeno. Como respuesta a las condiciones
ambientales, las plantas producen compuestos alelopticos, anlogas a los
contaminantes orgnicos que estimulan las defensas microbianas contra
compuestos txicos (Siciliano et al., 2001). Las diferencias entre las macetas
plantadas y no plantadas podran explicarse por el efecto de la rizosfera. La
presencia de las plantas modifica el nmero y la composicin de las poblaciones
microbianas. Estudios de degradacin de HAP en una rizosfera simulado
revelaron un aumento en el nmero de microorganismos degradadores de
hidrocarburos en presencia de una solucin artificial de compuestos exudado por
las races, tales como hidratos de carbono, cidos orgnicos y aminocidos,
NH4NO3 y NaH2PO4 (Joner et al., 2002). El efecto de la entrada de oxgeno en la
rizosfera de plantas (Weibner et al., 2002) mejor el crecimiento microbiano (Fig.
2) y la actividad. Adems, la difusin de oxgeno a travs del sistema de espacio
intercelular de las hojas a las races ha sido bien caracterizado para hierbas y
juncias (cyperaceas) bajo condiciones de inundacin (Salisbury y Ross, 1992).

3.3. Extraccin de Hidrocarburos.

Se evalu la eliminacin de hidrocarburos por rhizodegradation o la absorcin en
las races. Rhizodegradation mecanismo se define como la accin de races de las
plantas, su asociado micro fl ora y / o productos excretados cuales biotransformar
Hidrocarburos
evacuadala
el contaminante en la zona radicular (Cunn-Ingham
y col., 1996). Se determin
durante
la la
fitorremediacin:
eliminacin de hidrocarburos por C. Laxus para
evaluar
medida en la
-1
inocularon
plantas
, T1),
las
fitorremediacin (TPH mg de g removidos de perlita seca) y la tasa( (mg
de TPH
plantas
no inoculadas
( , T2),en
removidos g-1 del da 1 planta seca). La eliminacin
de hidrocarburos
se detect
control sin plantas ni inculo
todos los tratamientos (Fig. 3).
microbiano ( , T3) y el control
con el inculo microbiano sin
plantas ( , T4). Las barras de
error representan la desviacin
estndar de tres macetas en la
muestra.

La
eliminacin
mxima
-1
(2.83mg de TPH g de perlita
seca) se obtuvo con las
plantas inoculadas a los 60
das de cultivo; esto era tres y
seis veces superiores a los
obtenidos con las plantas no
inoculadas (0.97mg de TPH g-1
de perlita seca) y control con
inculo microbiano sin plantas
(0,50 mg de TPH g-1 de perlita
seca),
respectivamente.
Durante los primeros 60 das de cultivo, macetas de control sin plantas ni
consorcio microbiano mostraron hidrocarburos evacuada insignificante. La
eliminacin TPH superior se alcanz con las plantas inoculadas en 120 das. Al
final del cultivo, la eliminacin TPH fue del 90%, 85%, 70% y 76% para T1, T2, T3
y T4, respectivamente. Cuanto mayor medida la fitorremediacin registrado para
las plantas inoculadas (T1) puede estar relacionada con la presencia de la aadido
inculo microbiano. Los resultados obtenidos sugieren que rhizodegradation
prevaleci durante la fitorremediacin. La mejora de la actividad microbiana y la
eliminacin de hidrocarburos podran deberse a los exudados y de entrada de
oxgeno a partir de races. La eliminacin TPH no se observ apreciable de 120 a
180 das de cultivo en todos los tratamientos. Gunther y sus colaboradores. (1996)
informaron de biodegradacin de una mezcla de hidrocarburos modelo en suelo
contaminado artificialmente. Obtuvieron la eliminacin de hidrocarburos en
presencia de raigrs correspondiente a 0.97 mg de TPH g -1 de suelo y para las
ollas no plantadas a 0.82mg de TPH g -1 de suelo en 154 das de cultivo. Estos
valores son bajos con respecto a los registrados en nuestro experimento T1 (4,5
mg de TPH g-1 de perlita seco a 180 das). Sin embargo, las diferencias podran
estar relacionadas con las interacciones entre los hidrocarburos y el suelo,
resultando en una disminucin de la biodisponibilidad.
Considerando los resultados mencionados anteriormente, es importante destacar
que la mxima eliminacin de TPH se lleva a cabo antes de la floracin, lo que
sugiere que la actividad de la fitorremediacin (Fig. 4) podra estar asociada con el
ciclo de vida de la planta (Tabla 1). La exudacin, la absorcin de agua, la
asimilacin de solutos y la composicin de la raz estn fuertemente relacionados
con el estado fisiolgico de la planta (Schwab y colaboradores.,1998). Por
ejemplo, los compuestos fenlicos liberados por las races aumentan de forma
continua desde vegetacin etapas tempranas hasta la senescencia foliar. Este

patrn se asocia con el crecimiento de bacterias capaces de degradar los bifenilos

policlorados (Hedge y Fletcher, 1996).
Fig. 4. Tasa de proceso de fitorremediacin
durante 180 das: plantas inoculadas ( , T1),
y las plantas no inoculadas ( , T2).
Las barras de error representan la desviacin
estndar de tres macetas de muestra.

Los hidrocarburos absorbidos en races de inocularon (T1) y las plantas no

inoculadas-(T2), como un posible mecanismo para eliminar los contaminantes,
representan 15% y 17% del contenido inicial de hidrocarburos, respectivamente

Tabla 2.
Equilibrio del pH para cada tratamiento a los 180 das de cultivo.
Tratamientob

Distribucina de TPH (mg de TPH por maceta)

Inicial
Adsorbido
Residuo

175 3B
26 2
18 3
T1
175 3
31 2
28 13
T2
175 3
52 2
T3
n.d.
175 3
52 2
T4
n.d.
n.d: no determinado
a: Los valores medios y desviacin estndar de tres montones de muestras.
b: Las plantas inoculadas (T1) plantas no inoculadas (T2) control, sin plantas ni
inculo microbiano (T3) y de control con inculo microbiano sin plantas (T4).
c: TPH absorbido en las races.
d: residual TPH en la perlita.

(Tabla 2). Por lo tanto, la acumulacin de hidrocarburos en las races era

independiente del inculo microbiano aadi. La acumulacin de hidrocarburos en
las races se ha informado anteriormente. Schwab y sus colaboradores. (1998)
describieron la adsorcin de naftaleno en las races de Festuca arundinacea y
Medicago sativa por la isoterma de Freundilch y encontraron que la afinidad se

correlaciona con el contenido en lpidos de la raz. Ke y sus colaboradores. (2003)

encontraron una acumulacin significativa de pireno en races de Bruguiera
gymnorrhiza (alrededor de 3,5% a partir de una concentracin de pireno inicial de
3 mg kg-1 de suelo)
La Tabla 3
Muestra la composicin de hidrocarburos inicial y residual a 180 das de cultivo. A
excepcin de T4, para todos los tratamientos, se elimin ms del 95% de la
fraccin aliftica. se logr la eliminacin fraccin aromtica de las plantas
inoculadas y no inoculadas (55%). Compuestos alifticos han sido reportados
como fcilmente fracciones biodegradables, mientras que las fracciones
aromticas y polares se consideran txicos y menos biodegradable (Prince, 2002).
Los asfaltenos / extraccin fraccin polar en macetas plantadas fue del 85%. La
presencia de plantas mejor la eliminacin de aromticos y asfaltenos / fracciones
polares en comparacin a macetas sin plantar (Tabla 3). Garca-Rivero y sus
colaboradores (2002) informaron de la eliminacin de la fraccin polar (17%) y de
los asfaltenos (37%) de suelo contaminado resistido, usando tolueno como agente
de desorcin y los microorganismos de la rizosfera de C. Laxus como inculo. Los
resultados obtenidos con GC-MS de las fracciones aromticas muestran que
algunos PAH considerados como contaminantes prioritarios por la EPA de los
EE.UU. estaban presentes al inicio del cultivo (en mg kg -1 de perlita seca):
fenantreno, 0,033; antraceno, 0.017; pireno, 0,091; criseno, 0.321; benzo [k]
fluoranteno, 0.074 y benzo [a] pireno, 0.059. Estos HAP se eliminaron por
completo en macetas plantado en el final del cultivo la tasa mxima eliminacin de
TPH (Fig. 4) estaba en contenida en 60 das para las plantas inoculadas (0,51 mg
g-1 de planta seca d-1); este valor es 1,75 veces mayor que el obtenido para las
plantas no inoculadas (0.29mg g-1 de planta seca d-1). Para ambos tratamientos, la
tasa disminuy durante el cultivo, llegando a menos de 0,1 mg g -1 de planta seca
d-1 a 180 das. Hutchinson y sus colaboradores (2001) reportaron 49% de
eliminacin de TPH del suelo contaminado resistido con pasto Bermuda y festuca
alta usando una concentracin inicial de 48,8 g de TPH por kg -1 de suelo seco
despus de 180 das de cultivo. La degradacin TPH fue similar para los
tratamientos de control plantado y sin plantar (68% y 57%) despus de un ao. La
tasa de fitorremediacin era 5 mg de TPH g -1 de planta seca d-1 a 180 das y 1 mg
de TPH g-1 de planta seca d-1 a 365 das. Este comportamiento fue similar a la
obtenida en el presente estudio. La tasa de fitorremediacin mximo se alcanz en
la primera etapa del cultivo (hasta 60 das).
Tabla3
Composicin de hidrocarburos iniciales y residuales para cada tratamiento a los
180 das de cultivo.

Tratamientob

Fraccina de TPH (mg kg-1 de fraccin de perlita seca)

Compuestos
Asfltenos/
Aromtico
alifticos
polares

2000 10
1150 6
1850 11
Inicial
28 0.1
267 10
216 3
T1
54 3
423 2
323 10
T2
90 8
552 39
838 49
T3
a: Los valores medios y desviacin estndar de tres macetas muestras.
b: Las plantas inoculadas (T1), las plantas no inoculadas (T2) y de control (T3). No
se determinaron los valores de T4.

4. Conclusiones.
El presente estudio demostr que los beneficios mutuos entre C. Laxus y
microorganismos que degradan hidrocarburos inoculados se incrementan durante
la fitorremediacin de hidrocarburos. La adicin de estos microorganismos mejor
caractersticas fenolgicas. Planta y crecimiento de las races fue mayor en las
plantas inoculadas en comparacin con los que no inoculado, mientras que se
redujo el tiempo de la floracin. En el mismo sentido, los recuentos microbianos
totales, degradadores de hidrocarburos, as como el grado de eliminacin TPH
fueron mayores en la presencia de plantas que en macetas sin plantar. Aunque,
valores similares de hidrocarburos medida en la fitorremediacin para inocularon y
se obtuvieron plantas inoculadas a los 180 das de cultivo, la tasa de
fitorremediacin con plantas inoculadas fue tres veces mayor que los obtenidos
con las plantas no inoculadas y se alcanz antes de la floracin (primeros 50 das
con clara efectos). Este estudio demuestra que Cyperus laxus Lam. pueden ser
considerados para la fitorremediacin de pantanos tropicales contaminados con
hidrocarburos. Otros estudios que incluyen C. Laxus y el inculo se propone aqu
debern dirigirse a la fitorremediacin de suelos contaminados.