LECCIN 2

FISICOQUMICOS MTODOS DE ANLISIS EN BIOQUMICA.

FOTOMETRA.
IMPORTANCIA BIOMDICA
El mtodo colorimtrico fotoelctrico de anlisis sirve para la determinacin de las
concentraciones de sustancias en soluciones coloreadas, lquidos biolgicos o extractos
de tejidos.
Puede tambin ser utilizado para la determinacin de concentraciones de sustancias
incoloras si pueden ser transformados en estado coloreado con los reactivos
especficos. El mtodo es uno de los ms difundidos en la bioqumica y la medicina
clnica.
TRABAJAR N 1. LA DETERMINACIN CUANTITATIVA DE IONES DE HIERRO EN
SOLUCIN POR UN MTODO COLORIMTRICO FOTOELECTRO.
El EQUIPO: un fotoelectrocolorimetro (FEC).
Principio de mtodo.
Hay una dependencia lineal entre la concentracin de la sustancia en una solucin y el
tamao de la densidad ptica (extincin). Esta dependencia se divisa por la ecuacin:
Dnde:
Densidad ptica de una solucin de color
El coeficiente molar de absorcin de la luz
El espesor de una capa de la solucin.
La concentracin molar

EL CURSO DEL TRABAJO

Construccin de un grfico de calibracin.
Verter 10 ml de una de las soluciones estndar con la concentracin de hierro: 0,1 mg /
ml; 0,2 mg / ml; 0,4 mg / ml, respectivamente, en tres matraces de 25 ml de medicin.
Aadir 1 ml de cido saliclico en cada matraz para formar el complejo coloreado y
llevar hasta el volumen del lquido en los matraces por el agua destilada a una
etiqueta. Lavar la cubeta experimental de un FEC con las soluciones preparadas (el
espesor de cubetas para el anlisis es de 10 mm). Medir la densidad ptica de la
solucin contra el agua con un colormetro fotoelctrico (FEC) de acuerdo con la
descripcin siguiente. Colocar los valores de concentracin y densidad ptica de las
soluciones estndar en los ejes de los grficos de calibracin, y construir el grfico de
calibracin.

EL ORDEN DE ANLISIS CON UN PHOTOELECTROCOLORIMETER (FEC).

1.- Calentar FEC con una cubierta abierta durante 15 minutos.
2.- Establecer un filtro luz (verde para este anlisis, 540 nm.
3.- Ponga las cubetas en un compartimento de cubetas FEC (la cubeta distante, que
contiene agua destilada, se marca como '' control ''. La cubeta contiene ms cerca de
la solucin para el anlisis y se marca como '' experimental ''.
4.- Establecer la palanca a la posicin izquierda.
5.- Pulse el botn '' ITYCK '' ('' START - UP '').
6.- Pulse el botn '' III0 ''
7.-Cierre la tapa.
8.-Pulse el botn '' K1 ''
9.- Mueva el nivel a la posicin correcta.
10.- Pulse el botn '' D5 '' ('' La densidad ptica '')
11.- Lea el resultado en la ventana del aparato y antelo.
12.- Mover la palanca a la posicin de la izquierda.
13.- Abra la tapa.
14.- Saque el 'experimental' 'cubeta'.
15.- Limpie cuidadosamente el compartimiento de la cubeta de la FEC. Despus de que
el aparato est listo para la siguiente medicin.
El anlisis de un lquido que la concentracin de iones de hierro es desconocida
(solucin de una tarea).
Tome una botella que contiene el lquido para el anlisis (anote el nmero de una
botella).
Medir 10 ml de una solucin investigado en 25 ml matraz aforado, agregar 1 ml de
cido saliclico y conducir hasta el volumen del contenido del matraz a una etiqueta con
agua destilada. Mezclar con cuidado. Medir la densidad ptica (D) de la solucin con el
grfico de calibracin.
Tambin es posible determinar la concentracin por la manera ms simple, por una
eleccin de una solucin estndar, que la densidad ptica (Dst) es el ms cercano a la
densidad ptica de una muestra para anlisis (Dx), y por la solucin de una proporcin:

LECCIN 3
ESTRUCTURA Y PROPIEDADES DE LAS PROTENAS, LA
ESTRUCTURA PRIMARIA DE LAS PROTENAS.
IMPORTANCIA BIOMDICA
Las protenas son sustancias de alto peso molecular que consta de 20 clases de
aminocidos unidos entre s por enlaces peptdicos. Hay cuatro niveles de la
organizacin estructural de la molcula de protena. La estructura primaria es una
cadena de polmero no ramificado que contiene la secuencia de aminocidos
determinada. La estructura primaria de cada protena es absolutamente nico. Est
codificado en el ADN y se almacena como la secuencia de nucletidos de los genes de
ADN. Hay muchos estados patolgicos hereditarios causados por el afecto de las
estructuras primarias de protenas (por ejemplo. Hemoglobinopatas, enzimopatas y
otros de los llamados enfermedades moleculares).
El mtodo cromatogrfico de la determinacin de los aminocidos se puede utilizar
para el anlisis de la estructura primaria de las protenas y pptidos. La determinacin
del contenido de aminocidos libres en el suero, orina, licor y otros lquidos biolgicos
se aplica para estimar metabolismo de las protenas en el cuerpo del Paciente.
TRABAJAR 1. EL ANLISIS DE LOS CROMATOGRAMAS DE HIDROLIZADOS DE
PROTENAS.
El equipo: una FEC, cromatogramas de diversas protenas, tubos de ensayo con una
solucin de etanol para la extraccin.
Principio de mtodo.
Composicin de aminocidos de hidrolizados de protenas se investiga con la
cromatografa distributiva en el papel. El mtodo se basa en la capacidad de las
sustancias para ser adsorbido de forma diferente en varios adsorbentes, y para ser
disuelto de manera diferente en disolventes polares y no polares. En el presente trabajo
cromatografa mtodo se utiliza como adsorbente. La divisin de aminocidos se lleva a
cabo por una mezcla de disolventes (butanol + cido actico hielo + agua en la
relacin de 4: 1: 5). As, el agua se mantiene por un papel, mientras que el movimiento
disolvente orgnico a lo largo del papel con cierta velocidad. Las sustancias (en este
caso aminocidos), que son solubles en un disolvente orgnico, se mueven en el papel
junto con un disolvente. Las sustancias solubles en agua, ocupan posiciones
intermedias en un cromatograma entre una lnea de salida y una lnea de frente de un
disolvente. Despus de la terminacin de una divisin y el secado, el cromatograma es

tratado por la solucin de ninhidrina y se secan de nuevo. Despus de que las manchas
de los aminocidos divididos se hacen visibles y accesibles para el anlisis cualitativo y
cuantitativo ms.

CURSO DEL TRABAJO.

Listo cromatogramas hechas de varias protenas tienen que ser analizados.
1 . El anlisis cualitativo de un cromatogramas (identificacin de aminocidos
manchas) se lleva a cabo por cuenta del coeficiente de Rf para cada mancha:
Dnde:
el coeficiente de distribucin (vase la tabla siguiente).
La distancia desde la lnea de salida para el centro de la mancha de cido
amino.
La distancia de la lnea de salida a la primera lnea de un disolvente.
El uso de valores tabulados de Rf para cada aminocido es posible identificar
cada clase o aminocidos en el cromatograma investigado. Por cuenta de Rf es
NECESARIO para medir las distancias desde la lnea de salida para el centro de
cada mancha y la distancia de la lnea de salida a la primera lnea de un
disolvente.
Los valores calculados de coeficiente Rf se compara con los datos tabulados y
por lo tanto toda mancha se identifica en el cromatograma.
Aminocidos:
Alanince
arginina
cido
(aspartato)
glicina
serina
cido
(glutamato)
prolina

asprtico

glutmico

treonina
triptfano
fenilalanina
metionina
cistena
cistina
lisina
leucina

2. EL ANLISIS CUANTITATIVO DE LOS CROMATOGRAMAS.

Cortar las manchas de colores que pertenecen a ciertos aminocidos con tijeras, corte
en estas manchas ligeramente como un cepillo y ponerlos los tubos de ensayo, que
contiene una solucin de etanol, para la extraccin del producto coloreado. Cerrar los
tubos de ensayo por fusibles y los puso en la oscuridad durante 30 minutos para la
extraccin completa. Agitar los tubos de vez en cuando. A continuacin, medir la
densidad ptica de los lquidos coloreados por un FEC con un filtro de luz verde (el
espesor de cubetas es de 5 mm). Averiguar la concentracin de cada aminocido en las
tallas recibidos de densidad ptica (D) con un grfico de calibracin.

Trabajar 2. Reaccin de Biuret para la deteccin del enlace peptdico.

Principio de mtodo.
La reaccin es causada por la presencia de enlaces peptdicos que forman los
complejos con los iones de la sal de cobre en el medio alcalino.
Esquemticamente esta reaccin puede presentarse como:
Dependiendo de la longitud de la cadena de polipptido, la solucin ecomes azulvioleta o rosa de color.

CURSO DE TRABAJO.
Aadir 5 gotas de NaOH al 10% y 1-2% 1 gota de CuSO4 a 10 gotas de una solucin de
protena y mezclar. el contenido de una prueba parece ser azul - violeta. Llevar a cabo
la misma reaccin con una solucin de polipptido y una mezcla de aminocidos.
Entonces resolver una tarea: analizar la solucin desconocida (protena, polipptido o
una mezcla de aminocidos) con la reaccin de biuret.

PREGUNTAS BSICAS
1.- protenas como las macromolculas ms importantes del cuerpo. La variedad de las
protenas y su functions.Classification de las protenas.
2.- Las funciones biolgicas de las protenas.
3.- aminocidos como unidades estructurales de una molcula de protena, sus
estructuras, clasificacin, nomenclatura. Aminocidos esenciales - esenciales y no.
4.- La estructura primaria de una molcula de protena. La cadena de polipptido,
enlace peptdico.
5.- alteraciones hereditarias de la estructura primaria de las protenas. Ejemplos de
cambio en el funcionamiento y las propiedades de la protena como resultado del
cambio en la secuencia de aminocidos.

Los ejemplos de la tarea:

Escribir la frmula y llamar a la tetrapptido, que consta de los siguientes aminocidos:
a) cclico cargada,
b) polar no cargado,
c) heterocclico sin carga.
d) cido imino
Qu cargo ser este pptido tener en un medio neutro?