Universidad de Chile

Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacuticas

Prof. Rita Alay P., Sonia Otrola M., Osvaldo
Piones O.
Radiobioqumica y Proteccin Radiolgica

Sntesis, afinidad y
marcacin del
Tc-Trodat para el diagnstico
de

Parkinson
Alumnos: Francisco Guajardo G.
Camila Lpez T.
Constanza Soto S.
Francisco Soto B.
Fecha: 14 de noviembre 2016

Introduccin

El diagnstico precoz de enfermedades extrapiramidales como la enfermedad de

Parkinson requiere de imagenologa funcional de caractersticas especficas,
diferente a la clsica relacionada con flujo sanguneo cerebral. Kung y
colaboradores han desarrollado derivados de tropanos que tienen la caracterstica
de permitir la marcacin con Tc99m para demostrar la distribucin del
transportador de Dopamina. El transportador de Dopamina humano (DAT) es un
miembro de la familia de los transportadores dependientes de NA+ y CL- y
modula la captacin sinptica de la Dopamina en la neurona Dopaminergica, a
travs de un mecanismo electrognico acoplado a las variantes de NA+ y CL-. La
Dopamina y bloqueadores caractersticos de la recaptura presinptica de ella,
como cocana, se unen tanto a dominios iguales como distintos del transportador,
lo que es fuertemente influenciado por la presencia de cationes en el medio. La
recaptacin de Dopamina libre de la sinpsis es el principal mecanismo de
modulacin de funcin dopaminrgica, y es bloqueada por neurotxicos como la
cocana. Esto explica el efecto estimulador dopaminergico de esta droga. Por el
contrario, la disminucin del transportador de Dopamina, que se observa
precozmente en la enfermedad de Parkinson, explica la prdida de las funciones
especialmente motoras relacionadas a esta enfermedad del sistema
extrapiramidal. (1)

Qu es el Parkinson?
La enfermedad de Parkinson ha afectado a la humanidad desde tiempos remotos,
civilizaciones antiguas de la India ya hacan referencia a esta enfermedad cerca
del ao 2500 a.C. que era conocida en la medicina Ayurveda por el nombre
kampavata (Proveniente del snscrito Kampa, que significa temblor). Sin
embargo, fue en 1817 que el cirujano britnico James Parkinson public un
ensayo en la literatura mdica sobre la parlisis agitante, enfermedad que
posteriormente llevara su nombre. A pesar de ser una publicacin muy relevante
y aplaudida en su poca, muchas interrogantes
quedaban an sin responder, y fue el trabajo
de mltiples investigadores el que permiti
llegar a los conocimientos que se tienen
actualmente de la enfermedad.
El Parkinson es una enfermedad
neurodegenerativa que se produce por la
muerte de las neuronas encargadas de
producir dopamina, ubicadas en la sustancia
negra del cerebro, especficamente las de la va
nigroestriatal (Ver figura 1) (2)
Este neurotransmisor tiene como funcin
principal el correcto control del movimiento, y
es por esto que una reduccin significativa en
los niveles de dopamina trae como
consecuencia los temblores, rigidez, lentitud en
los movimientos, inestabilidad postural, entre otros sntomas.
Cabe destacar que el prkinson es la segunda enfermedad neurodegenerativa en
prevalencia e incidencia despus del Alzheimer. Actualmente afecta a cuatro
millones de personas a nivel mundial y se estima que hay un 30% que an no son
diagnosticados. Del total de afectados un 70% superan los 65 aos, por lo que la
edad es considerada como un factor de riesgo principal, pero no es exclusiva de
la gente mayor.
Figura 1: Esquema de la va
nigroestriada, desde la sustancia

La etiologa de la enfermedad an no se conoce negra en el mesencfalo hasta el

y por ende tampoco se sabe cmo prevenirla,
cuerpo
estriado.
A)
va
nigroestriada
(neuronas
puede evolucionar de manera lenta o rpida
dopaminrgicas)
en
cerebros
dependiendo de cada individuo y es por esto
normales. B) va nigroestriada en
que se hace necesario detectarla a tiempo para personas que padecen EP, gran
utilizar un tratamiento adecuado. La mayora de las veces se detecta en estados
avanzados debido a los sntomas clnicos ya mencionados anteriormente, pero se

sabe de la existencia de sntomas pre motores que aparecen aos antes, tales
como depresin, reduccin del olfato, estreimiento y trastorno de conducta del
sueo REM (ensoaciones muy vvidas). Son estos sntomas junto a las tcnicas
de diagnstico los principales aliados para lograr combatir el prkinson en
estados iniciales, haciendo que su evolucin sea ms lenta para as mejorar la
calidad de vida de quienes lo padecen.
Cmo afecta a nivel fisiolgico?
El origen de dicho trastorno reside en la perdida de, al menos, el 50% de las
neuronas de un rea del mesencfalo conocida como sustancia negra. En
condiciones normales, dichas neuronas son las encargadas de producir dopamina,
una catecolamina que viaja a lo largo de las vas nerviosas desde la sustancia
negra hasta otra regin llamada cuerpo estriado (caudado y putamen), donde son
liberadas al espacio pre sinptico y luego captadas por los receptores D1 y D2.
En el cuerpo estriado la dopamina activa a las clulas nerviosas que coordinan la
actividad muscular normal, y por ende sin la dopamina adecuada las clulas
nerviosas del cuerpo estriado no funcionan de forma correcta, lo que deteriora la
capacidad de la persona para controlar los movimientos.
La causa de la muerte de estas neuronas est an en estudio, pero la mayora de
los investigadores creen que se trata de un conjunto de factores genticos (genes
PARK), agentes medioambientales (algunos herbicidas como el paraquat y
rotenona), y fallos en los procesos celulares (sistemas de degradacin de
protenas ubiquitina-proteosoma, estrs oxidativo).

Tc-TRODAT-1: Sntesis, propiedades y

administracin
99m

El Tc 99m-TRODAT-1 es un radiofrmaco empleado en el diagnstico y

seguimiento del tratamiento de pacientes con Enfermedad de Parkinson.
El TRODAT-1 es un derivado del tropano que forma un complejo con tomos de N
y S antes de ser marcado con el 99mTc. Una vez que la molcula es marcada con
[99mTc] se posibilita que el puente de anillo de bi-sulfito se cierre, permitiendo
que el frmaco con el Tc cruze la barrera hematoenceflica, ya que la molcula
por s sola no lo puede hacer.
El nombre TRODAT, hace referencia a la molcula de tropano (TRO) de la cual
deriva el compuesto y el DAT corresponde a las siglas en ingles de los
transportadores de dopamina (Dopamine Active Transporter) a los cuales se une
el radiofrmaco. (3)

Es necesario que los radionclidos que son utilizados en medicina para el

diagnstico y estudio de algn rgano o sistema sean capaces de concentrarse
en la zona que se desea estudiar. Como esto no se cumple en la mayora de los
casos para un radionclido aislado, es que por un procedimiento llamado marcaje
se une al radionclido con una molcula que s tiene afinidad por la zona o tejido
de estudio, formando as a un radiofrmaco. Para el diagnstico de Parkinson, el
radionclido empleado es el 99mTc y la molcula a la que se une corresponde al
TRODAT-1 [1].
Se denomina elucin, al proceso de obtencin de un radionclido hijo de vida
media corta a partir de un radionclido padre de vida media ms larga mediante
un generador de radionclidos. En este caso el radionclido empleado es el
99mTc (emisor gamma de 140 keV; vida media 6hr) que es obtenido a partir del
99Mo (vida media 66hr).
El mayor aporte del 99mTc es la posibilidad de poder utilizarlo como marcador en
distintos preparados farmacuticos (kits fros) para obtener un radiofrmaco
capaz de concentrarse en el rgano diana o blanco y por medio de su emisin
gamma poder ser detectado.
Un kit frio contiene la molcula que se desea marcar sin el radionclido, por lo
tanto, no es radiactivo. Contiene bsicamente tres elementos: la molcula a
marcar que sea afn al rgano o tejido de estudio; un agente reductor que
comnmente es cloruro de estao que reduce la valencia del Tc recin eludo
aumentando su reactividad y permitiendo el marcaje; y por ltimo
estabilizadores como agentes bacteriostticos de la solucin.
La solucin kit se ajusta a un pH ligeramente cido entre 5 y 7, una vez
preparada se somete a liofilizacin (conservacin de medicamentos), que
consiste en un proceso en el que se congela la solucin y posteriormente se
introduce en una cmara de vaco para realizar la separacin del agua por
sublimacin. De esta manera se elimina el agua por sublimacin directa. Para
acelerar el proceso se utilizan ciclos de congelacin-sublimacin con los que se
consigue eliminar prcticamente la totalidad del agua libre contenida en el
producto original, pero preservando la estructura molecular de la sustancia
liofilizada. La solucin es purgada y sellada hermticamente; de este modo el kit

TRODAT-1 puede almacenarse largos periodos de tiempo sin especiales

precauciones a temperaturas entre 2 a 8 C, estando as, listo para su uso luego
de que se le agregue el pertecnetato.
La adicin del marcador (radionclido) a la molcula se hace generalmente por
formacin de enlaces covalentes. El Tc eludo como pertecnetato de sodio
(valencia +7) es muy estable, es decir, poco reactivo y por lo tanto intil para el
marcaje mediante adicin directa, por lo que debe ser reducido a estados de
valencia +3, +4 o +5.
Esta es la razn por la que el kit TRODAT 1 contiene como agente reductor el
cloruro de estao que reduce al Tc pasando de un estado de oxidacin +7 a +4
en un medio ligeramente cido que tambin se cumple en el kit. Las especies
reducidas del Tc son muy reactivas y se combinan con una gran variedad de
compuestos, unindose entre ellos al grupo -SH del TRODAT 1 formando enlaces
covalentes. La composicin del kit TRODAT-1 comercializado y utilizado en el
diagnstico del Parkinson es un Todo en Uno, ya que la solucin viene
preparada y liofilizada, y solo se debe agregar el pertecnetato para administrar el
radiofrmaco en un paciente. A continuacin, se resume el detalle de la
composicin del kit de diagnstico y el protocolo de preparacin:
1. Coloque un vial de kit TRODAT-1 liofilizado en un contenedor de proteccin de
plomo adecuado.
2. Utilizando una jeringa de 5 ml, inyecte en el vial protegido 5 ml de
Pertecnetato de Sodio.
3. Agitar el vial blindado durante 10 segundos para asegurar la disolucin
completa del contenido.
4. Autoclave el frasco protegido a 121 C durante 30 min.
5. Despus de enfriar a temperatura ambiente, mida la radiactividad total.

SPECT

La tomografa computarizada de emisin de fotn nico o SPECT (por sus siglas

en ingls), es una tcnica utilizada en medicina nuclear de tomografa
(procesamiento de imgenes por secciones) en la que se capta la radiacin
gamma emitida por un radiofrmaco que es administrado al paciente.
Como en una radiografa, cada una de las imgenes que se obtienen es
bidimensional, pero pueden combinarse muchas imgenes tomadas desde
distintas posiciones alrededor del paciente para obtener una imagen
tridimensional. Esta imagen tridimensional puede despus manipularse
informticamente para obtener secciones dimensionales del cuerpo en cualquier
orientacin.
La SPECT utiliza los rayos gamma que producen istopos radioactivos en este
caso el tecnecio 99m que se une al trodat. El procedimiento es similar al de
la tomografa por emisin de positrones (PET), pero en la SPECT es el istopo el
que produce directamente el rayo gamma, mientras en la PET el istopo produce
un positrn que despus se aniquila con un electrn para producir los dos rayos
gamma. Estos dos rayos gamma salen en direcciones opuestas y su deteccin
simultnea permite localizar el istopo de forma ms precisa que en la SPECT. La
SPECT es, sin embargo, ms simple porque pueden usarse istopos ms fciles
de obtener y de vida media ms larga.
La cmara de rayos gamma se gira alrededor del paciente. Se adquieren
imgenes en ngulos definidos, tpicamente cada 3-6 grados. En la mayora de
los casos se realiza una rotacin completa de 360 grados que permite una
reconstruccin tridimensional ptima. Cada imagen tarda tpicamente 1520 segundos, con lo que el proceso completo tarda de 15 a 20 minutos. Se
pueden utilizar tambin cmaras gamma con varios cabezales para acelerar el
proceso. Por ejemplo, se pueden utilizar dos cabezales espaciados 180 grados
para obtener dos proyecciones simultneamente, o tres cabezales espaciados
120 grados. (4)
Una Gammacmara, como su nombre lo indica es capaz de detectar emisin
gamma. Esto puede ser a modo de una imagen planar como una fotografa en
2D, que es la tcnica ms utilizada, o por medio de la Tomografa de Emisin
de Fotn nico, SPECT, que permite la obtencin de imgenes en
reconstruccin tomogrfica con cortes de un rgano en sus planos sagital,
coronal, transaxial y la reconstruccin de imgenes de tipo 3D. La capacidad de
realizar cortes tomogrficos, elimina la atenuacin fotnica por sobreposicin de
estructuras, y as la interferencia que se produce en las imgenes en 2 planos,
mejorando la sensibilidad y resolucin espacial de un estudio.

Una Gammacmara planar o una de tipo SPECT (figura A), consta bsicamente

de: a) un cabezal detector de radiacin, que esta constituido por, b) un

colimador, que permite slo el paso de
radiacin emitida paralela al cabezal, c)
un cristal de centelleo, de 9 mm de
grosor de Ioduro de Sodio, que es capaz
de detectar los fotones y transformarlos
en un impulso elctrico a travs de, d)
los foto tubos multiplicadores, para
posteriormente, ser amplificados y
procesados en cuanto a su ubicacin
espacial, manejados en un sistema
conectado a, e) un computador que
permite ver y procesar las imgenes
funcionales del rgano estudiado. (5)
Ilustracin A . Gammacmara planar
Gammacmara Millenium GE SPECT/CT
Existen Gammacmaras 1, 2 o 3 detectores, siendo las mas comunes de 1 o 2
detectores
La deteccin de parkinson mediante la tcnica SPECT mediante el uso del
radiofrmaco Tc99m-Trodat es posible debido a la propiedad que posee este
compuesto organico de atravesar la barrera heamtoencefalica y de unirse a los
transportadores presinpticos de dopamina en regiones especficas del cerebro
que sufren degenaracion en la enfermedad de parkinson.
En la EP se produce degeneracin del sistema nigroestriatal con prdida de
neuronas dopaminrgicas de la sustancia nigra y formacin de cuerpos de Lewy
intracelulares
El transportador de la dopamina (DAT) es una protena de las terminaciones
nerviosas responsable de la recaptacin de dopamina de la sinapsis. Se ha
demostrado que el DAT est presente exclusivamente en las neuronas que
sintetizan dopamina y por ello es considerado como un marcador especfico de
estas neuronas en el sistema nervioso central 7. Se encuentra distribuido
ampliamente en los axones y las membranas de los axones, por lo que se piensa,
que adems de su funcin especfica en la sinapsis dopaminrgica ejerce tambin
una funcin reguladora de los niveles de dopamina extracelular en el estriado 8.
La mayor concentracin de DAT se encuentra en el estriado y el tubrculo
olfatorio, con niveles muy inferiores en amgdala, hipotlamo, hipocampo,
algunos ncleos talmicos y neocrtex.
El transportador de la dopamina (DAT) es un marcador especfico de las neuronas
que sintetizan dopamina en el sistema nervioso central y su densidad en el
estriado refleja el grado de degeneracin dopaminrgica nigroestriatal.

A continuacin, se muestran gammagrafas de un caso clnico donde se observan

mediante el uso del mtodo SPECT con Tc99m-trodat un cerebro de una persona
sana y otra con parkinson avanzado.

Ac se muestra el SPECT normal de

una persona de 65 aos y se observa
que existe una gran captacin del
radiofrmaco especfica por los
transportadores de dopamina en las
regiones del cuerpo estriado, en
contraste con la baja captacin
inespecfica de otros receptores en
otras reas del cerebro

Ac se ve el SPECT de un paciente con

10 aos de evolucin de Enfermedad de
Parkinson y se observa que la captacin
inespecfica es mucho mayor que lo
normal debido a que se perdieron
neuronas dopaminergicas de los
ganglios basales y esto provoca que
aumente la captacin de otras del
cerebro

Figura 1. Trodat-1 NeuroSPECT

Normal. Mujer de 65 aos de
edad.Imagen transaxial: extremo
superior corresponde a lbulo frontal.

Figura 2. Trodat-1 NeuroSPECT en

Enfermedad de Parkinson. Hombre de
69 aos de edad con cuadro clnico
severo.

Conclusin

Este informe da cuenta, que la evaluacin de la densidad de DAT con SPECT tiene
una buena sensibilidad para el diagnostico de la EP. La baja densidad estriatal
que se observa es un indicador de la perdida de neuronas pre-sinapticos y por
esta razn esta metologia puede tener una buena precisin (especificidad) para
ser utilizada para el diagnostico diferencial entre pacientes con EP y controles
sanos.(6)
El diagnostico precoz de esta enfermedad es por lo cual esta tcnica es
altamente eficaz y requerida, ya que beneficia directamente al paciente
disminuyendo la evolucin del deterioro extrapiramidal.
El uso de marcadores radioactivos como el 99mTc -TRODAT-1 aprovechando su
especificidad a canales DAT , que se encuentran en neuronas pre sinpticas para
observar el dao neurolgico a travs de la perdida de neuronas en reas
especficas del cerebro, obteniendo una imagen clara que nos permite diferenciar
la EP de otras patologas y adems el avance y/o deterioro que esta misma a
generado en el paciente.
Es importante recalcar que la sensibilidad del marcador radioactivo, la
accesibilidad a este, la concentracin a las cuales nos podemos exponer, su vida
media, hacen que sea una de las tcnicas mas usadas e importantes, mas an a
nivel latinoamerica y tambin local, ya que este se sintetiza, a diferencia de otros
agentes marcadores como I-123, teniendo de esta forma el 99mTc una ventaja
logstica y econmica bastante alta.
Por ltimo, es siempre dejar en claro que nosotros como cientficos tenemos una
responsabilidad de educar a la poblacin con respecto al tpico de la radiacin,
ya que sin saberlo convivimos con ella da a da y como bien lo vimos plasmado
en este trabajo investigativo, el uso de estos mismos y su importacin en la
medicina, como este informe lo expresa, son de suma importancia, para no tan
solo pesquisar enfermedades, si no tambin para tratarlas, y mejorar tambin la
calidad de vida de muchos pacientes, y principalmente en la enfermedad de
parkinson en adultos mayores.

Referencias
(1)Shih, Ming C. MD; Amaro, Edson Jr. MD, PhD; Souza, Sayuri de E. et al. et al.
Dopamine Transporter Density by [99mTc]-TRODAT-1 SPECT and
Neurocognitive Performance - a preliminary pilot study. Alasbimn Journal
8(33): July 2006.
(2)
Hernndez-Montiel, H.. (2005). Aspectos moleculares y prospectos de
terapias en la enfermedad de Parkinson. 2006, de medigraphic Sitio web:
http://www.medigraphic.com/pdfs/bioquimia/bq-2006/bq064e.pdf
(3)Kung, M.P., Stevenson, D.A., Plssl, K., Meegalla, S.K., Beckwith, A., Essman,
W.D., et al., 1997. [99mTc] TRODAT-1: a novel technetium-99m complex as
a dopamine transporter imaging agent. Eur. J. Nucl. Med. 24, 372380.
(4)D. Garca Sols. (2005). Imagen de neurotransmisin dopaminrgica en los
sndromes
parkinsonianos.
2016,
de
elsevier
Sitio
web:
http://www.elsevier.es/es-revista-revista-espanola-medicina-nuclear-e-125articulo-imagen-neurotransmision-dopaminergica-los-sindromes-13076646
(5)Daz, F., Mena, I., & Gmez, G.. (2001). NeuroSPECT en el diagnstico
precoz de enfermedad de Parkinson: 99mTc-Trodat-1 demuestra distribucin
del transportador de dopamina (DAT). Alasbimn Journal,
(6)Daz, Fernando, Mena, Ismael, & Gmez, Ariel. (2002). Diagnstico precoz
de enfermedad de Parkinson: neurospect del transportador de
Dopamina. Revista
chilena
de
neuro-psiquiatra, 40(3),
243252. https://dx.doi.org/10.4067/S0717-92272002000300006