DETERMINACIN DE AMINOCIDOS TERMINALES CON GRUPO ALFA AMINO LIBRE

MTODO DE SANGER
20M1

Seccin 1

INTRODUCCION
Las protenas estn conformadas por cadenas de
aminocidos, que son molculas orgnicas que
contienen un grupo amino y un carboxilo. La
secuenciacin de protenas permite predecir la
funcin de la protena, clasificar las protenas en
familias, detectar secuencias de aminocidos
relacionados con funciones importantes, as como
conocer relaciones genticas y evolutivas, entre
otros. Existen tres importantes tcnicas para
secuenciar los pptidos de aminos terminales:
Sanger, Edman y Dansyl Chlorid. La ms antigua
es la utilizada por el cientfico Frederick Sanger
desde 1975. Este mtodo utiliza el compuesto
2,4-dinitrofluorobenceno (DNFB) que reacciona
con el residuo N-terminal bajo condiciones
alcalinas que junto con otros procesos y una
cromatografa en papel permite la identificacin
del aminocido N-terminal.
OBJETIVO
Determinar e identificar el aminocido alfa-amino
terminal de las cadenas de la molcula de la
hemoglobina mediante el mtodo de Sanger.

RESULTADOS
Tabla 1 Calculo de Rf (Factor de
Solucin
Distancia de Distancia de
Rf
la marca a
la marca a
recorrido
lnea sonrisa
Alanina
20.8cm
34.6cm
0.6
Valina
22.4cm
34.6cm
0.65
Fenilalanina
19.2cm
34.6cm
0.55
DNFB
18.5cm
34.6cm
0.53
Problema
21.5cm
34.6cm
0.62
retencin) cromatografa 1>2

Fig 1. Cromatografa del amino -terminal de la

hemoglobina y su escala a 1:2
DISCUSION
La hemoglobina es una molcula formada por 2
cadenas y 2 , cada cadena beta (Pea, et. al,
2004), gracias a la prctica, se pudo determinar
su amino alfa terminal teniendo como resultado a
la valina, siendo el Rf 0.65 es decir, el ms
cercano a 1. Esto se puede corroborar gracias a
que en base al Protein Data Bank se encuentra
que el alfa amino terminal de la hemoglobina de
bovino es la hemoglobina (cabe mencionar que
la hemoglobina que se maneja en laboratorio es
proporcionada por un proveedor que maneja a
este grupo de vertebrados). Por otra parte, en el
cromatograma puede observarse una mancha
que puede compararse con el DNFB que adems
con el Rf muestra que en nuestro problema
existe presencia de este reactivo, esto puede
deberse a que no se desech por completo la
fase etrea quedando rastros del dinitrofenilado;
tambin
puede
mencionarse
que
el
cromatrograma pudo presentar ciertos problemas
en el momento de desarrollarse debido a que la

cmara se abra y cerraba constantemente

Pea, A, et al. 2004. Bioqumica. Editorial Limusa: Mxico.
afectando el resultado.
P.p.: 84.
Lippicott W. 2000. Pruebas bioqumicas para la identificacin
de bacterias de importancia clnica. 3A ed. Editorial
CONCLUSION
Panamericana. Espaa. 185-187 pp.
Se identific al a la Valina como el aminocido alfa-terminal
de las cadenas de la molcula de hemoglobina.
Hemoglobina. Protein Data Bank. Disponible en lnea en:
http://pdb101.rcsb.org/motm/41. Consultado el 24-08-2016
BIBLIOGRAFIA