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reas Limpias, control e higienizacin despus

de un cambio
Article December 2009
DOI: 10.13140/2.1.3087.8083

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Biunayki Reyes
Center for Genetic Engineering and Biotechnology
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salas blancas
Lic. Biunayki Reyes Daz1*, Ing Caridad A Gasmuri
Gonzlez1, MSc Gudelia Prez2, MSc Ania Daz Ferrer2,
Lic Yadira Mora Lpez2, Tc. Noelia Baltrell Mena1, Tec
Suanai Brown Valds1, Tec Amaury Hierrezuelo Malberty1, Tec Mirelys Cespedes Prez1, Tec Dayanna Ramos
Prez1, Ing. Lazaro Snchez Gonzlez1, Tec Caridad E
Isla1, Tc Dorelis Ortiz1, Tc Olga L Gonzalez1, y Lic.
Luciano Francisco Hernndez3.
1Departamento Control de Procesos. Grupo Control Microbiolgico, 2Direccin Aseguramiento de la Calidad.
3Direccin de Produccin. Centro de Ingeniera Gentica y Biotecnologa P.O. Box 6162, Habana 10600, Cuba

Tener un plan de validacin de limpieza para los procedimientos

de limpieza de la planta es una de las actividades que nos agrega valor, pues nos da seguridad sobre los productos que estamos
elaborando,

reas Limpias, control e higienizacin

despus de un cambio

no de los problemas principales a los

cuales la industria farmacutica se
enfrenta en la actualidad, involucra
demostrar el cumplimiento con los estndares ambientales en sus reas de trabajo,
principalmente en reas consideradas como
reas Limpias. Por los controles requeridos
para este nivel y su compromiso con la elaboracin de medicamentos con la calidad
microbiolgica requerida, por este motivo
es crtico e indiscutible que cualquier empresa, en este rubro, siga las normas de las
Buenas Prcticas de Fabricacin [BPF] (en
nuestra industria la cual se dedica a la obtencin de productos Biotecnolgicos estamos regidos fundamentalmente por las normas ISO, y por diferentes guas regulatorias
como son: Centro Estatal de Calidad de los
Medicamentos (CECMED), Food and Drug
Administration (FDA), Organizacin Mundial
de la Salud (OMS), International Conference
on Harmonization (ICH) y la European Medicines Agency (EMEA).
La validacin es una parte esencial de
las Buenas Prcticas de Fabricacin. Hay
dos principales fuentes de referencia en la

documentacin de la OMS en relacin con

la validacin. En primer lugar, el texto de
BPF de la OMS que cubre la validacin en
la Parte Uno, Seccin 5 recalca que la validacin debe conducirse de conformidad
con protocolos predefinidos. Deben prepararse y almacenarse informes escritos que
resuman los resultados y las conclusiones
registradas. Los procesos y procedimientos
deben establecerse sobre la base de un estudio de validacin. Debe realizarse una revalidacin peridica para asegurar que los
procesos y los procedimientos sigan siendo
capaces de lograr los resultados concebidos. Especial atencin debe prestarse a la
validacin del proceso, los ensayos y los
procedimientos de limpieza.
Siempre que se habla de un proceso de
validacin, referido por las Guas de BPF o
los diferentes artculos publicados, se indica
la planificacin de la revalidacin, en todos
los casos solo es mencionado, y como se
conoce no existe una receta, cada laboratorio y/o institucin rige sus bases, o mecanismos; ejemplo de estas guas donde
se indica que se debe realizar revalidacin

pudiramos mencionar, algunas como:

Guide to Cleaning Validation in API
plant. Cleaning Validation in Active
pharmaceutical Ingredient manufacturing plants. September 1999 APIC, donde en su acpite 6. Poltica de Validacion
de limpieza, menciona que debe existir
la poltica de revalidacin, as como
tambin en el acpite, referido al informe final de la validacin plantea Any
recommendations based on the results
or relevant information obtained during
the study including revalidation practices if aplicable.
Anexo 15 to the EU Guide to Good Manufacturing Practice
Cualificacin y validacin Revalidacin
45. Las instalaciones, sistemas, equipos
y procesos, incluida la limpieza, se evaluarn peridicamente para confirmar
que siguen siendo vlidos. Cuando no
se hayan producido cambios significativos respecto al estado validado, esta
necesidad de revalidacin se cubrir con
una revisin que demuestre que las instalaciones, sistemas, equipos y procesos

Tabla 1. Concentracin de partculas en el aire permitidas para cada grado de

clasificacin de las reas.
Tabla 2. Clasificacin de aire de reas limpias y niveles de accin recomendados para
la calidad microbiolgica. Gua de Normas de Correcta Fabricacin de Medicamentos
de Uso Humano y Veterinario Anexo I Fabricacin de medicamentos estriles. Agencia
espaola de medicamentos y productos sanitarios, 2009.

NOVIEMBRE/DICIEMBRE09

Farmespaa INDUSTRIAL

cumplen las exigencias obligatorias.

Health Products and Food Branch Inspectorate Guidance Document Cleaning Validation Guidelines Date issued:
2000-05-01 Date of implementation:
2000-05-01
7.0 Documentation A cleaning validation protocol should describe the procedure used to validate the cleaning
process. It should include in addition to
other information. acceptance criteria
with rationales and conditions for revalidation.
La revalidacin est fraccionada en dos
categoras:
1. La revalidacin despus de algn cambio.
2. La revalidacin peridica.
En la categora anterior, los cambios caractersticos que requieren revalidacin
incluyen cambios en una materia prima o
el material de envase, los cambios en los
parmetros del proceso, los cambios en el
equipo, incluidas reparaciones mayores y
los cambios en los locales
Los cambios en un proceso de limpieza
validado, y los cambios en un proceso de
fabricacin o equipos que pueden afectar
a un proceso de limpieza validado, deben
hacerse de conformidad con los procedimientos aprobados para el control de cambio. Este cambio puede dar lugar a pruebas
adicionales para demostrar que los procesos de limpieza permanecen en un estado
de control.
Aunque es un requerimiento regulatorio
designado formalmente y bien reconocido,
la validacin de la limpieza contina siendo
un problema para muchos fabricantes e inspectores. Puede ser una exigencia compleja,
ya que requiere de una comprensin profunda del proceso, materiales, y los productos
qumicos involucrados en la limpieza.
Para un mejor entendimiento de estos
procesos damos a conocer algunas consideraciones importantes para llevar a cabo
una tarea como la de reevaluar el proceso
de limpieza e higienizacin de una rea limpia, despus de producido algn cambio.
Primero refrescaremos algunos trminos
importantes:
Validacin de limpieza: prueba documentada de que un procedimiento de limpieza
consistentemente reducir los residuos
de ingredientes farmacuticos activos
(IFA), los agentes de limpieza (AdL) y sanitizacin, las endotoxinas bacterianas y la
carga microbiana en las superficies de los
equipos, que tienen contacto directo con
Farmespaa INDUSTRIAL

salas blancas

Tabla 3. Tabla de Ejemplo de operaciones para preparacin asptica

Tabla 4.

el producto, a niveles aceptables para el

procesamiento de medicamentos.
Revalidacin: Repeticin de la validacin
de limpieza para garantizar que los cambios introducidos de conformidad con los
procedimientos de control de cambios no
afectan negativamente el procedimiento
de limpieza.
Control de Cambios: Procedimiento escrito
que describe la(s) accin(es) a tomar si se
propone un cambio de instalaciones, materiales, sistemas, equipos y/o procesos
usados en la fabricacin, envasado o ensayo de un producto farmacutico o que
puede afectar la operacin del sistema de
gestin de la calidad o de apoyo. Su objetivo es determinar las acciones necesarias
para garantizar y documentar que el sistema se mantiene en un estado validado.
Limpieza: Se define como el grado de aceptacin de sustancias, partculas y microorganismos no deseables cuyo efecto sea
adverso al producto o proceso.
Higienizacin: Proceso que se realiza en las
reas limpias clasificadas con vistas a reducir la contaminacin microbiolgica a un
nivel permisible segn los resultados histricos del control o a un nivel de referencia
segn los establecidos.
rea limpia: rea que cuenta con un control
definido del ambiente respecto a la contaminacin microbiana o por partculas,
con instalaciones construidas y usadas de
tal manera que se reduzca la introduccin,
generacin y retencin de contaminantes
dentro del rea.
Plan de monitoreo: Este debe establecerse
por medio de una Evaluacin del Riesgo y
con base en el tipo de instalacin, las posibles causas de contaminacin y el impacto
de la contaminacin en el producto o proceso, que se lleva a cabo en el cuarto.
Clasificacin de salas limpias y
dispositivos de aire limpio
Las salas limpias y los dispositivos de aire
limpio deben clasificarse segn la norma
4

NOVIEMBRE/DICIEMBRE09

La validacin es una parte

esencial de las Buenas
Prcticas de Fabricacin
EN ISO 14644-1. La clasificacin debe
diferenciarse claramente de la monitorizacin ambiental del proceso en funcionamiento. En la tabla 1 se muestra la mxima
concentracin de partculas en el aire permitidas para cada grado.
Para clasificar las zonas en grado A debe
tomarse en cada punto de muestreo un
volumen mnimo de muestra de 1 m3. Para
el grado A, la clasificacin de partculas del
aire es la ISO 4.8 que indica un lmite de
tamao de partcula 5,0 m. Para el grado
B (en reposo), la clasificacin de partculas
del aire es la ISO 5 para los dos tamaos
de partculas considerados; Para el grado C
(en reposo y en funcionamiento), la clasificacin de partculas del aire es la ISO 7 y
la ISO 8, respectivamente. Para el grado D
(en reposo), la clasificacin de partculas del
aire es la ISO 8. La norma EN/ISO 14644-1
describe la metodologa a seguir a la hora
de clasificar, la cual define el nmero mnimo de puntos de muestreo y el tamao de
la muestra, basados en el lmite de clase
para el mayor tamao de partcula tomada
en consideracin y en el mtodo de evaluacin de los datos recogidos.
Es imprctico y caro establecer un mnimo de puntos a monitorear basado exclusivamente en el rea del cuarto en m2. Este
mtodo trabaja para la certificacin, sin
embargo deben establecerse lineamientos independientemente del proceso y con
base en la Evaluacin del Riesgo siendo extremadamente importante para determinar
qu y donde monitorear.
El enfoque del programa de pruebas
es monitorear el desempeo de una instalacin, con el propsito de identificar
cambios significativos en la eficiencia. Este

proceso asegurar que los cambios pueden

evaluarse, antes de que se conviertan en
una fuente de contaminacin importante,
que afecte la calidad, productividad y rendimiento.
Las designaciones ISO 14644-1 proporcionan los valores uniformes de concentracin de partculas para reas limpias en
mltiples industrias. Una concentracin de
partculas ISO 5 es igual a una Clase 100 y
aproximadamente igual a un Grado A de la
Unin Europea.
Lmites recomendados para la monitorizacin microbiolgica de las zonas limpias
en Operacin y en descanso. Segn
European Medicines Agency
Cuando se realicen operaciones aspticas, la monitorizacin debe ser frecuente
utilizando mtodos como placas de sedimentacin, muestreo volumtrico del aire
y de superficies (por ejemplo, hisopos y
placas de contacto). Los mtodos de muestreo utilizados en funcionamiento no deben interferir en la proteccin de la zona.
Los resultados de la monitorizacin deben
estudiarse al revisar la documentacin del
lote para la liberacin del producto terminado. Las superficies y el personal deben
supervisarse tras las operaciones crticas.
Tambin es necesario realizar una monitorizacin microbiolgica adicional distinta a
la de produccin como, por ejemplo, tras
la validacin de sistemas, limpieza y desinfeccin.
Revalidaciones / Control de Cambios
Los protocolos deben establecer cuando se necesitar realizar la revalidacin
del sistema o de un proceso.
La revalidacin est vinculada al control
de procesos y el control de cambios
El Desafo es Mantener el Proceso Validado
Los cambios son inevitables y siempre acabarn por aparecer. Se deben identificar las
fuentes y mantener procedimientos adeFarmespaa INDUSTRIAL

cuados para su control. La complejidad de

los procesos y la exigencia de mantenerse
al da para ser competitivo se traducen en
una mayor necesidad de cambios.
Existe un procedimiento escrito para describir las acciones que se deben realizar si se
propone un cambio en el entorno (o la instalacin) de fabricacin, el mtodo de limpieza
e higienizacin, o cualquier otro que pueda
afectar a la calidad del producto.
Si los cambios puede que influyan en
la calidad del producto se solicitarn, documentarn y aceptarn formalmente. Se
evaluar y se har un anlisis de riesgos de
los posibles efectos que sobre el producto
originara un cambio de instalaciones, sistemas o equipos. Deber determinarse la
necesidad de una nueva revalidacin, y el
alcance de la misma.
Los procedimientos de limpieza e higienizacin, se evaluarn peridicamente para
confirmar que siguen siendo vlidos cada
2 aos. Cuando no se hayan producido
cambios significativos respecto al estado
validado, esta necesidad de revalidacin

La validacin de la
limpieza contina siendo
un problema para muchos
fabricantes e inspectores

se cubrir con una revisin estadstica histrica que demuestre que los procesos de
limpieza cumplieron en el perodo analizado las exigencias y criterios de aceptacin
pre-establecidos.
Calificacin en Proceso
En este punto el procedimiento puede
ser realizado teniendo en cuenta el Protocolo de la Validacin de limpieza e higienizacin, que anterior al cambio ya fue
aprobado por Aseguramiento de Calidad,
solamente se reajustaron los puntos a
muestrear pues al ampliar el rea y aumentar por ejemplo la cantidad de paredes,
puertas, mesas de trabajo y otros materiales que anteriormente no existan, la selec-

cin de los puntos a ser muestreados debe

ser reajustada, con la inclusin de nuevos
puntos.
El Diseo experimental para realizar el
procedimiento pudiera ser de la siguiente
forma:
Inicialmente, antes de la limpieza, se realiza un muestreo por placa de contacto de
cada uno de los puntos definidos en la Hoja
de Datos diseada para la recogida de estos (ver Tabla 4).
Para la realizacin de la validacin y revalidacin de higienizacin y limpieza de las
reas el diseo sera:
1. La limpieza ser supervisada por el Jefe
de la planta a ser validada.
2. La frecuencia de limpieza ser la habitual acorde al Programa de Higienizacin y Limpieza y los Procedimientos y el
muestreo de las superficies de las reas
y del equipamiento ser de 3 veces, teniendo en cuenta que hasta el momento
es lo generalmente se utiliza para definir
el proceso validado, al menos en cuanto
limpieza se refiere:

salas blancas
Muestrear antes de la limpieza e higienizacin
Muestrear 1 hora despus de la limpieza e higienizacin
Muestrear 8 y 10 horas despus de la
limpieza e higienizacin para demostrar la conservacin de la limpieza en
el tiempo. Se considerar adecuada
la conservacin de la limpieza si para
todos los puntos se cumple el criterio de aceptacin una vez transcurrida
las 24 horas, coincidiendo con la hora
cero del da siguiente de realizada la
limpieza e higienizacin
3. Se tomar la correspondiente muestra
de la solucin desinfectante a preparar
segn lo establecido en el procedimiento de preparacin de soluciones
4. Se realizar este monitoreo por 3 das
consecutivos quedando de la siguiente
forma
El criterio de aceptacin es el cumplimiento, en todos los puntos, del criterio
establecido para superficies en correspondencia con la clasificacin del rea (Clase A,
< 3 UFC/25cm2, Clase B, < 5 UFC/25cm2 y
Clase C, < 25 UFC/25 cm2). Para la superficie exterior de las cortinas de flujos laminares de techo; as como de las cabinas, los
lmites estarn en correspondencia con el
rea que rodee a las mismas.
Qu mtodo es el utilizado para el monitoreo de las superficies?
Control Microbiolgico de Superficies
El control microbiolgico de superficie nos
proporciona informacin sobre la cantidad
de microorganismos presentes sobre una
superficie, la cual puede ser un equipo,
mesa, ropa, manos del personal, etc.
Esta evaluacin generalmente se hace
utilizando: Placas de contacto (RODAC)
Las placas de contacto o RODAC (Replicate Organism Direct Agar Contact) son
placas de 55-60 mm de dimetro llenas con
medio de cultivo hasta obtener una superficie convexa. Estas placas pueden preparase en el laboratorio o adquirirse comercialmente, en nuestra industria contamos con
un grupo de trabajo que estn altamente
especializados en la preparacin de las
placas, recientemente publicamos nuestro
trabajo en LifeScienceLab correspondiente
al #006 Sept-Oct Evaluacin de la productividad de dos medios de cultivo para el
muestreo ambiental microbiolgico
Cmo Procesar los Datos Obtenidos?
El resultado de los Controles Microbiol6

NOVIEMBRE/DICIEMBRE09

Tabla 5. Ejemplo de un rea Clase C muestreado por

placa de contacto, para evaluar higienizacin del rea,
trabajo publicado en FarmaEspaa Industrial mayo-junio,
2009.

sible a la presencia de puntos lejanos que

lo que es una ANOVA de una va y debe
usarse cada vez que la suposicin de normalidad dentro de las muestras no sea razonable.
Segn escribi Flickinger en Pharmaceutical Formulation and Quality (1996);
La Validacin de Limpieza suena lo suficientemente simple, pero lo es engaosamente. Porque si la cantidad de enorme
trabajo que es requerida para validar los
procedimientos de limpieza, no es realizada correctamente y con adecuada planificacin y justificacin cientfica, los resultados
finales pudieran ser menos de lo que es
pretendido. Y esto se convierte en tiempo
y dinero perdido. El resultado final es que
lo van a tener que repetir todo de nuevo.

Tabla 6.

Los procedimientos de
limpieza e higienizacin, se
evaluarn peridicamente
para confirmar que siguen
siendo vlidos cada

2 aos

gicos se expresa en Unidades formadoras

de Colonias (UFC), esta medida no es apta
para Grficos de Controles convencionales, ya que en general la presencia de microorganismos no es un fenmeno lineal,
si no que es muy dependiente de la naturaleza del Microorganismo, de la presencia
de ellos y de su capacidad de crecimiento. Cuando observamos los resultados de
control ambiental gran cantidad de estos
resultados son igual a 0 ufc, con algunos
valores intercalados de 1 y de vez en cuando algn valor anormalmente alto (150)
(en la siguiente tabla ponemos un ejemplo
de esto valores), por lo tanto calcular media y desviacin estndar tpica con tales
conjuntos de valores carece de significado
fsico real.
Todo esto nos hace que su estadstica
sea un poco difcil, pero no imposible. Uno
de los mtodos que usamos ms frecuente
son los No paramtricos con comparacin
de mltiples variables, mediante el paquete
estadstico STATGRAPHICS Centurin versin XV.
Empleando Pruebas de Wruskal-Wallis
y Friedman las cuales son una alternativa
para el anlisis estndar de varianzas que
compara medianas de grupo en lugar de
medias; esta prueba es mucho menos sen-

Conclusin
Tener un plan de validacin de limpieza
para los procedimientos de limpieza de la
planta es una de las actividades que nos
agrega valor, pues nos da seguridad sobre
los productos que estamos elaborando,
debemos seguir la secuencia correcta de
las actividades, que cada paso que damos
nos agregue valor.
La validacin de limpieza provee el significado de probar que los niveles de contaminacin han sido reducidos por debajo de
los lmites de aceptacin establecidos.
El programa de validacin de limpieza
debera contener un programa de monitoreo racional para mantener el estado validado.
La buena preparacin y una apropiada
implementacin de las herramientas de la
validacin de limpieza (matrices y tablas)
es un factor determinante para el xito del
programa de validacin de limpieza.

Bibliografa
1. FDA Guidance for Industry. Sterile Drug Products
Produced by Aseptic Processing -Current Good
Manufacturing Practice. September 2004.
2. Annexes to EU GMP Guide to Good Manufacturing
Practice for Medicinal Products. Pharmaceutical
Inspection Convention. Pharmaceutical Inspection Cooperation Scheme. PE 009-6 (Annexes), 5 April 2007.
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Pharmaceutical Preparations. Fortieth Report. Geneva,
World Health Organization, 2006, Annex 2 (WHO
Technical Report Series, No. 937).
4. International Clean room Standards, ISO 14644. Geneva,
International Organization for Standardization.
5. PROYECTO de Norma Oficial Mexicana PROY-NOM059-SSA1-2004 (modifica a la NOM-059-SSA1-1993,
publicada el 31 de julio de 1998).
6. ISPE Pharmaceutical Engineering Guides for New
and Renovated Facilities. Vol. 3 Sterile Manufacturing
Facilities, 1st Ed. January 1999.
7. Flickinger B. Charting a Course for Cleaning Validation.
The Best of Pharmaceutical Formulation and Quality
(1996): www.pharmaquality.com/ validatn.html.
8. QassureNews. Boletn No33- marzo-abril 2007

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