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Preparacin de soluciones buffer usadas en inmunologa

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Buffer de acetato
Buffer de borato cloruro
Buffer de carbonato
Buffer de glicina
Buffer fosfatos
Buffer de tris
Buffer veronal
Buffer para complemento

BUFFER DE ACETATO (0,1 M; pH 3,6-5,6)

Solucin A (cido actico 0,2M): disolver 11,55 ml de cido actico glacial en agua destilada
completando 1 litro.
Solucin B (acetato de sodio 0,2 M): disolver 27,2 g de acetato de sodio (3 H2O) en agua destilada
completando 1 litro.
Solucin A (ml)
Solucin B (ml)
Agua destilada (ml)
pH
463
37
500
3.6
440
60
500
3.8
410
90
500
4
368
132
500
4.2
305
195
500
4.4
255
245
500
4.6
200
300
500
4.8
148
352
500
5
105
395
500
5.2
88
412
500
5.4
48
452
500
5.6
Si se desea obtener SN buffer de acetato 0,2 M, se elimina el agua destilada de la mezcla.
BUFFER DE BORATO CLORURO (borato 0,1 M; cloruro 0,1 M, pH 8,1-10)
Solucin A (H3BO3 0,2 m, KCl 0,2 M): disolver 12,4 g de H3BO3 en 400 ml de agua destilada,
completando luego a 500 ml. En otro recipiente disolver 14,91 g de KCl en 400 ml de agua
destilada, llevando a un volumen de 500 ml. Mezclar ambas soluciones.
Solucin B (NaOH 0,2 N): disolver 0,8 g de NaOH en 500 ml de agua destilada, completando a un
litro. Controlar la normalidad con solucin valorada de HCl.
Solucin A (ml)
Solucin B (ml)
Agua destilada (ml)
pH
500
49
451
8.1
500
60
440
8.2
500
72
428
8.3
500
86
414
8.4
500
101
399
8.5
500
118
382
8.6
500
137
363
8.7
500
158
342
8.8
500
181
319
8.9
500
208
292
9
500
236
264
9.1
500
264
236
9.2
500
293
207
9.3
500
321
179
9.4
500
346
154
9.5
500
369
131
9.6
500
389
111
9.7
500
406
94
9.8
500
422
78
9.9
500
437
63
10
BUFFER DE CARBONATO (pH 9-10.8 fuerza inica 0,1)

Solucin A (bicarbonato de sodio 0,1 M): disolver 84 g de NaHCO3 en suficiente cantidad de agua
destilado completando 1 litro.
Solucin B (carbonato de sodio 0,1 M): 106 g de Na2CO3 anhidro se disuelven en agua destilada
completando 1 litro.
Solucin A (ml)
Solucin B (ml)
Agua destilada (ml)
pH
76.8
7.7
915.5
9
67.6
10.8
921.6
9.2
56.8
14.4
928.4
9.4
45.3
18.2
936.5
9.6
34.3
21.9
943.8
9.8
24.6
25.1
950.3
10
17
27.6
955.4
10.2
11.2
29.5
959.3
10.4
7.1
30.8
962.1
10.6
4.1
31.7
964.2
10.8
BUFFER DE GLICINA
Glicina HCl (glicina 0.1 M, pH 2.2-3.6):
Solucin A (glicina 1M): disolver 75.07 g de glicina en cantidad suficiente de agua destilada,
completando un litro.
Solucin B: HCl 1 N.
Solucin A (ml)
Solucin B (ml)
Agua destilada (ml)
pH
100
88
812
2.2
100
64.8
835.2
2.4
100
48.4
851.6
2.6
100
33.6
866.4
2.8
100
22.8
877.2
3
100
16.4
883.6
3.2
100
12.8
887.2
3.4
100
10
890
3.6
Glicina NaOH (glicina 0,1 M, pH 8.6-10.4)
Solucin A (glicina 1 M): disolver 75,07 g de glicina en 1 litro de agua.
Solucin B (NaOH 1 N): disolver 40 g de NaOH en agua destilada llevando a 1 litro. Verificar
normalidad con SN valorada de HCl.
Solucin A (ml)
Solucin B (ml)
Agua destilada (ml)
pH
100
8
892
8.6
100
12
888
8.8
100
17.6
882.4
9
100
24
876
9.2
100
33.6
866.4
9.4
100
44.8
855.2
9.6
100
54.4
845.6
9.8
100
64
836
10
100
77.2
822.8
10.2
100
91
809
10.4
Para preparar SN buffer de glicina- cloruro a diferentes pH, se incorpora a las SN A indicadas,
NaCl a una molaridad 10 veces superior a la deseada.
BUFFER FOSFATOS (fosfatos 0,1 M, pH 7.5)
Solucin A (NaH2PO4 0,2 M): disolver 27.6 g de NaH2PO4 . H2O en agua destilada, completando
un litro.
Solucin B (Na2HPO4 0,2 M): 53.65 g de Na2HPO4. 7 H2O se disuelven en agua destilada,
llevando el volumen final a 1 litro.
Si se desea molaridad 0,2 se suprime el agua destilada.
Solucin A (ml)
Solucin B (ml)
Agua destilada (ml)
pH
467.5
32.5
500
5.7
460
40
500
5.8
450
50
500
5.9
438.5
61.5
500
6
425
75
500
6.1
407.5
92.5
500
6.2
387.5
112.5
500
6.3

367.5
342.5
312.5
282.5
255
225
195
165
140
115
95
80
65
52.5
42.5
35
26.5

132.5
157.5
187.5
217.5
245
275
305
335
360
385
405
420
435
447.5
457.5
465.473.5

500
500
500
500
500
500
500
500
500
500
500
500
500
500
500
500
500

6.4
6.5
6.6
6.7
6.8
6.9
7
7.1
7.2
7.3
7.4
7.5
7.6
7.7
7.8
7.9
8

BUFFER DE TRIS (tris hidroximetil-aminometano) HCl (tris 0,05 M, pH 7.2-9)

Solucin A (tris 0,2 M): se obtiene disolviendo 24.23 g de Tris en agua destilada, llevando a
volumen de un litro.
Solucin B: HCl 1 N
Solucin A (ml)
Solucin B (ml)
Agua destilada (ml)
pH
250
44.2
705.8
7.2
250
41.4
708.6
7.4
250
38.4
711.6
7.6
250
32.5
717.5
7.8
250
26.8
723.2
8
250
21.9
728.1
8.2
250
16.5
733.5
8.4
250
12.2
737.8
8.6
250
8.1
741.9
8.8
250
5
745
9
BUFFER VERONAL
Veronal veronal sdico cloruro sdico (pH 7.4-8.9 fuerza inica 0,1):
Solucin A (veronal 0,025 M): se prepara disolviendo 4,605 g de veronal en agua destilada
llevando a un litro.
Solucin B (veronal sdico 0,05 M): disolver 10,309 g de veronal sdico en agua destilada
llevndolo a un litro.
Solucin C (cloruro de sodio 0,5 M): 29.2 g de NaCl se disuelven en agua destilada hasta 1 litro.
Solucin A (ml)
Solucin B (ml)
Solucin C (ml)
Agua destilada (ml)
pH
639
10
190
161
7.4
403
10
190
397
7.6
636
25
175
164
7.8
401
25
175
399
8
506
50
150
294
8.2
639
100
100
161
8.4
403
100
100
397
8.6
509
200
0
291
8.8
321
200
0
479
8.9
Veronal sdico HCl (pH 6.8-9.6 fuerza inica 0,1):
Solucin A (veronal sdico 0,5 M): 103.09 g de veronal sdico en agua destilada y completar 1
litro.
Solucin B: HCl 1 N
Solucin A (ml)
Solucin B (ml)
Agua destilada (ml)
pH
104.2
47.8
848
6.8
107.2
46.4
846.4
7
110.8
44.6
844.6
7.2
116.2
41.9
841.9
7.4
123.2
38.5
838.3
7.6
132.4
33.8
833.8
7.8

143.2
153.8
164.7
174.2
181.2
187.2
190.4
194.8
197

28.4
23.1
17.8
12.9
9.2
6.4
4.8
2.6
1.5

828.4
823.1
817.5
812.9
809.6
806.4
804.8
802.6
801.5

Soluciones Veronal Veronal sdico para electroforesis (fuerza inica 0,1):

Veronal (g)
Veronal sdico (g)
Agua destilada
4.90
17.4
Hasta 1 litro
3.41
18.95
Hasta 1 litro
2.34
20.62
Hasta 1 litro

8
8.2
8.4
8.6
8.8
9
9.2
9.4
9.6

pH
8.4
8.6
8.8

BUFFER PARA COMPLEMENTO

Debe guardarse en la heladera. En el momento de usar se diluye al 1/5 en agua destilada.
NaCl
42.5 g
c. dietilbarbitrico (veronal cido)
2.875 g
Dietilbarbiturato de sodio (veronal sdico)
1.875 g
CaCl2 anhidro
0.2 g
MgCl2 . H2O
1.0 g
H2O destilada, c.s.p.
1000 ml
Disolver el veronal cido en aproximadamente 500 ml de agua caliente. Disolver el veronal sdico
en agua fra y agregarle en fro, manteniendo el orden, los siguientes componentes: NaCl, CaCl2 y
MgCl2. Mezclar con la solucin de veronal sdico y medir el pH, el que debe oscilar entre 7,3
7,4. Si fuera necesario ajustar con HCl o NaOH de normalidad adecuada. Completar a un litro con
agua destilada.

Trabajo enviado por:

MARIANA PUCCIARELLI
Estudiante de Farmacia Buenos Aires - Argentina

m_pucciarelli@yahoo.es