MICROBIOLOGIA CLNICA

COCOS GRAM POSITIVO

Maria Cu Lamas
2013/2014

COCOS
GRAM POSITIVO

MICROCOCCACEAE

STREPTOCOCCACEAE

Staphylococcus
Micrococcus

Streptococcus
Enterococcus

Metabolismo respiratrio e
fermentativo facultativo.

Metabolismo exclusivamente
fermentativo.

Produtores da enzima
catalase.

NO produtores da enzima
catalase.

Permite avaliar a capacidade da bactria catalisar a

converso do H2O2 em O2 + H2O,

protegendo a bactria dos efeitos txicos.

COCOS GRAM POSITIVO

MICROCOCCACEAE

Staphylococcus
Micrococcus spp

Staphylococcus

Descrio do Gnero

Cocos Gram + (0.5 1.5 m de dimetro).

Disposio em cachos (preferencial),

isolados, aos pares, em ttradas,
em pequenas cadeias.

Anaerbios facultativos.

So catalase positiva. Oxidase negativa

Imveis. (principalmente nas espcies

isoladas no Homem)

No formam esporos.

No apresentam cpsula (visvel ao m.o.),

mas alguns so capsulados.

Fermentam a glucose

Staphylococcus spp

Descrio do Gnero

Cresce facilmente em:

Meios ordinrios (so nutricionalmente pouco exigentes),

Meios salgados (Manitol Salgado, Chapman).

Capazes de crescer em concentraes de NaCl (7-10%)

Meios lquidos (2-4 horas)

Toleram temperaturas de 18-40C (t.o. 35-37C).

pH ptimo de 7.5, tolerando grandes variaes.

Staphylococcus spp

Habitat
Este gnero existe abundantemente na natureza,
encontrando-se principalmente na pele e mucosas dos
mamferos e aves.
No Homem, pode encontrar-se
superfcie da pele e nas fossas
nasais, locais que esto na origem
de infees endgenas e
exgenas, tendo como veculo de
transmisso as mos.

Staphylococcus spp

Significado Clnico
Do ponto de vista clnico apenas duas espcies so reconhecidas como
agentes patognicos primrios:

Staphylococcus aureus
Staphylococcus saprophyticus

Existem outros classificados como oportunistas:

Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus hominis
Staphylococcus haemolyticus

Todos os restante so ocasionalmente oportunistas e de potencialidade

discutvel para o Homem.

Algumas espcies de Staphylococcus so frequentemente

agentes etiolgicos de infeo.

Staphylococcus spp

Significado Clnico
Neste gnero, a espcie S. aureus a causa mais frequente de
infeo no Homem. Juntamente com o S. saprophyticus e
S.
epidermidis formam o conjunto das 3 espcies clinicamente mais
importantes.
Os Staphylococcus coagulase negativo, apesar de apresentarem
baixa patogenicidade para o Homem, so cada vez mais
valorizados como agentes oportunistas de infeo.

Coagulase

A presena desta enzima indica patogenicidade; na presena

de plasma, os produtores de coagulase (como o Staphylococcus
aureus) vo desencadear os mecanismos da coagulao.

Staphylococcus aureus
Fatores de Virulncia
TOXINAS
-lisina

MODO DE ACO
Hemolisina, leucocidina e citotoxina.
Danifica as membranas celulares, possivelmente por aco
proteoltica.

lisina

Hemolisina e leucocidina.
A toxina uma enzima que destri um fosfolpideo dos GR e outras
clulas.

lisina

Hemolisina e leucocidina.
Mecanismo de aco desconhecido.

-lisina

Hemolisina e leucocidina.
Destruio das membranas celulares por aco semelhante a
detergente.

Leucocidina

Atua sobre os leuccitos. Principalmente neutrfilos activos na

fagocitose. Tambm activa contra macrfagos presentes nos tecidos.

Toxina A e B

Especificidade de ao sobre a pele. Responsvel pelas leses

cutneas bulhosas (sndrome da pele escaldada).

Toxina TSST-1

Associada ao sndrome do choque txico.

Enterotoxinas

Responsvel pelos sintomas de intoxicao alimentar.

Vrias toxinas: A, B, C, D, E, G, H, resistentes ao calor e c.
gstrico.

Staphylococcus aureus
Fatores de Virulncia
ENZIMAS

MODO DE ACO

Catalase

Enzima que catalisa a converso do perxido de hidrognio em

gua e O2. Todos os Staph. a produzem, protegendo-se deste
produto txico que se acumula durante o metabolismo bacteriano
(libertado aps a fagocitose).

Coagulase
Livre e Conjugada (clumping
factor)

Fibrinolisina

Causa a coagulao do plasma citratado, heparinizado ou

oxalatado do Homem e do coelho em algumas horas. O S. aureus
produz durante a fase exponencial de crescimento.
(Estafiloquinase). Pode dissolver cogulos de fibrina.

Lipase

No est claro o seu contributo para a virulncia. Acredita-se que

seja necessria invaso dos tecidos cutneos e subcutneos
catalisam a quebra de c. gordos e lipdeos na pele, secrees
sebceas. Os S. aureus so geralmente produtores.

Hialoronidase

Enzima termolbil que favorece a disseminao dos Staph. no

tecido conjuntivo. 90% so produtores.

DNAse
-lactamase

Enzima que destri o DNA.

Destri a penicilina, surgindo as bactrias meticilinoresistentes (MRSA)

Staphylococcus aureus
Fatores de Virulncia
OUTROS
Cpsula

Parede Celular

Peptidoglicano

MODO DE AO
Antifagocitose.
imunognico. Possui toxicidade direta e capacidade de ativar o
complemento por via alternativa.

Caracterstica do S. aureus. Possui grande afinidade para a

Protena A ligao ao receptor Fc das IgG1, IgG2 e IgG4.
A sua produo depende das condies de cultura. Os meios
ricos em extracto de carne e desprovidos de sal so os mais
favorveis.
cido teicico responsvel pela carga electronegativa da superfcie celular.
Intervm na adsoro dos fagos. Parece pouco txico, mas
desencadeia uma hipersensibilidade retardada.
Medeia a fixao das bactrias superficie das mucosas.
Atg p13 e p17
Adesinas

Virulncia.
Adeso a recetores especficos.

Staphylococcus aureus

Fatores de Virulncia (Protena A)

Staphylococcus aureus

Factores de Virulncia (Resumo)

Doenas causadas por

Staphylococcus aureus
INFEES PIOGNICAS
(Produtoras de PS)

INFECES MEDIADAS POR

TOXINAS

Furnculos e foliculites
Feridas e queimaduras infetadas

Intoxicao alimentar
(relacionada com carnes frias, sorvetes,
etc.)

Abcessos
Imptigo

Sndrome do choque txico

Pneumonia
Osteomielite
Bacteriemia

Sndrome da pele escaldada

(mais frequente em bbs e
imunodeprimidos)

Endocardite
Adaptado de Pdua, M. 2009

Doenas causadas por Staphylococcus

S. Aureus
1.

As infeces mais frequentes so ligeiras e localizadas na

pele e tecido celular subcutneo, onde o S. aureus
provoca:

Impetigo
Furnculo
Celulite
Abcessos
Infees de queimaduras e feridas

FURNCULO

FULICOLITE

O furnculo (coleo de pus) que se forma sob a pele quando uma bactria infeta
um folculo piloso.
Ao contrrio da foliculite (infeo localizada e restrita ao folculo piloso), o furnculo
surge porque a infeco se alastra pelo tecido subcutneo ao redor do folculo.

IMPETIGO

Impetigo contagioso de pequenas

vesculas

IMPETIGO BOLHOSO
O impetigo bolhoso causado por
bactrias do tipo Staphylococcus
aureus.
Caracteriza-se pelo aparecimento de
bolhas grandes e frgeis com paredes
muito finas que se rompem deixando uma
base avermelhada, inflamada e hmida.
Pode afetar diversas regies do corpo, e
tal como no impetigo comum no costuma
causar dor. No impetigo bolhoso podem
surgir sintomas como febre, mal-estar e
perda de apetite.

Doenas causadas por Staphylococcus

S. aureus
2.

Ocasionalmente, a partir desta infees ou de locais da pele

ou mucosas colonizadas pela bactria, pode ocorrer
disseminao direta para tecidos vizinhos.

3.

Pode tambm ocorrer bacteriemia, com possveis localizaes

secundrias (qualquer local), surgindo por vezes infees
graves:

Endocardites
Osteomielites
Artrites
Pneumonias
Septicemias
Infees relacionadas com cateteres e prteses

Staphylococcus aureus
Doenas por ao das toxinas
1.

INTOXICAO ALIMENTAR

Vrias enterotoxinas, em que a A parece ser a mais

importante clinicamente.

Os sintomas iniciais surgem 4h aps a ingesto de

alimentos contaminados e desaparecem nas primeiras
24h:

Nauseas
Vmitos intensos
Dores abdominais
Diarreia

Staphylococcus aureus
Doenas por ao das toxinas
2.

SNDROME DA PELE ESCALDADA ou Doena de Ritter

Resulta da ao das exfoliatinas (toxinas A e B = epidermolticas).

Inicialmente ocorre uma infeo estafiloccica cutnea ou

respiratria superior. A partir de uma destas infees d-se a
disseminao da toxina por via sangunea.

Doena caracterizada por eritema que rapidamente se estende

por todo o corpo. Seguem-se as leses bulhosas cutneas de
vrias dimenses (contendo lquido lmpido, livre de bactrias e
leuccitos). Finalmente, ocorre a descamao da epiderme
superficial.

SNDROME DA PELE ESCALDADA

ou Doena de Ritter

Staphylococcus aureus
Doenas por ao das toxinas
3.

SNDROME DO CHOQUE TXICO

Resulta da aco da TSST-1 (Toxic Shock Syndrome

Inicia-se por erupo cutnea eritematosa

macular, febre e hipotenso.

Aps 1-2 semanas segue-se descamao de toda

a superfcie cutnea (incluindo palma das mos e
planta dos ps).

Paralelamente, existem efeitos sistmicos:

Toxin-1).

Tubo digestivo
Heptico
Renal
Hematolgico
Muscular
SNC

OUTROS Staphylococcus
Existem pelo menos 30 espcies

S. aureus

S. Coagulase negativa

S. epidermidis
S. saprophyticus

S. haemolyticus
S. hominis
S. capitis
S. warneri
S auricularis
S. simulans
S. cohni
S. lugdunensis
.....................

S. saprophyticus

um agente frequente de infees do trato urinrio em

mulheres jovens, por via ascendente. (atividade sexual
presumvel fator predisponente)

Existe em n reduzido na pele, mucosas e intestino.

Fatores de virulncia:

Capacidade de aderncia as clulas epiteliais da bexiga.

Estruturas que reconhecem e se ligam a recetores especficos das
clulas vesicais.
Atg proteico p51.
Urease.

Laboratorialmente, observam-se no sedimento urinrio

numerosos cocos e piria intensa. Por vezes hematria.

S. saprophyticus

um agente frequente de infees do trato

urinrio em mulheres jovens, por via
ascendente. (atividade sexual presumvel fator
predisponente)

Existe em n reduzido na pele, mucosas e

intestino.

Fatores de virulncia:

Capacidade de aderncia as clulas epiteliais da

bexiga.
Atg proteico p51.
Urease.

Laboratorialmente, observam-se no sedimento

urinrio numerosos cocos e piria intensa. Por
vezes hematria.

Facultative anaerobe
Normal flora-opportunistic
pathogen
White, opaque
Coagulase negative

S. epidermidis
A Staphylococcus aureus biofilm found
on the surface of a catheter

Agente patognico importante, particularmente em contexto hospitalar.

Bactria abundante na pele normal, podendo ser patognico em situaes

de debilidade imunolgica do hospedeiro.
A disseminao pode ser por contacto direto, mas a flora do ind. constitui a
principal fonte de infeo quando o hospedeiro est debilitado.

O principal factor de virulncia a capacidade de aderncia a materiais

sintticos, atravs da produo de slime que o protege do sistema
imunolgico (quimiotaxia e fagocitose) e da ao dos antibiticos.

O slime apenas produzido quando esto presentes

corpos estranhos.

S. epidermidis
O slime apenas produzido quando esto
presentes corpos estranhos.

A Staphylococcus aureus biofilm found

on the surface of a catheter

S. epidermidis
As doenas que ocorrem mais
frequentemente so as infees relacionadas
com a presena de corpos estranhos

cateteres,

prteses,

enxertos vasculares e

estados de imunossupresso.

Endocardites

Sepsis

Staphylococcus
Diagnstico Laboratorial

Colheita de produtos biolgicos

Direta do ps (evitar a zaragatoa, pois absorve muito ps, risco).

Urina (jato mdio) para diagnosticar cistite ou pielonefrite.
Sangue na bacteriemia, endocardite, choque stico, etc.
Fezes ou vmitos intoxicao alimentar
Expetorao doena respiratria.
Zaragatoas nasais despite de portadores sos.

Staphylococcus
Diagnstico Laboratorial

EXAME DIRETO

Colorao de Gram

EXAME CULTURAL (pouco exigentes)

Amostras provenientes de locais com flora mista devem ser
semeadas em meios seletivos:

Manitol salgado ou Chapman

Em gelose chocolate - Gelose com colistina e c. nalidxico
(Columbia ANC)

Em gelose sangue, verifica-se por vezes hemlise (conforme espcie).

Caldos: brain-heart infusion

Prova da Catalase

Staphylococcus
Diagnstico Laboratorial
EXAME CULTURAL

Meio de Manitol Salgado ou Meio de Chapman

Manitol salgado
o
o
o

Meio seletivo e diferencial

Diferencia o S. aureus de outros Staphylococcus.
Aps crescimento, o S. aureus apresenta colnias amarelas
(fermentao do manitol) e os restantes apresentam colnias brancas.

Meio de Chapman

Staphylococcus
Diagnstico Laboratorial
Meio de Manitol Salgado (Manitol Salt Agar)

uma formulao concebida por Chapman para a diferenciao de estafilococos

utilizado para o isolamento de estafilococos provenientes de amostras

clnicas,de cosmticos e nos testes de limite microbiano.

REAGENTES (Frmula/ Litro de gua Purificada)

Extrato de bovino 1,0 g

Hidrolisado pancretico de casena 5,0 g
Hidrolisado pptico de tecido animal 5,0 g
Cloreto de sdio 75,0 g
D-Manitol 10,0 g
Vermelho de Fenol 0,025 g
gar 15,0 g
pH 7,4 0,2

Staphylococcus
Diagnstico Laboratorial
Contm:
Peptonas e extrato de bovino
que fornecem nutrientes essenciais
Cloreto de sdio

a uma concentrao de 7,5% resulta numa inibio parcial ou completa de outros organismos
bacterianos que no os estafilococos.
Manitol
a fermentao do manitol, conforme indicada por uma alterao no indicador vermelho de fenol,
ajuda na diferenciao das espcies de estafilococos. Os estafilococos com resultados positivos
para a coagulase (por exemplo, S. aureus) produzem colnias amarelas e um meio amarelo
circundante enquanto que os estafilococos com resultados negativos para a coagulase produzem
colnias brancas e nenhuma alterao na cor do indicador vermelho de fenol.

Staphylococcus
Diagnstico Laboratorial
Meio de Manitol Salgado (Manitol Salt Agar)

Procedimento do teste

Semear (espalhar) a amostra imediatamente aps esta ser recebida no

laboratrio. A placa para cultura usada principalmente para isolar culturas
puras a partir de amostras com flora mista.

Se o material biolgico estiver a ser cultivado diretamente de uma

zaragatoa, fazer rolar a zaragatoa sobre uma pequena rea da superfcie, na
extremidade e espalhar a partir desta rea inoculada.

Tambm deve ser inoculado um meio no seletivo, como o caso do Agar

de Columbia com sangue de ovino a 5%, para fornecer uma indicao dos
outros organismos presentes na amostra.

Incubar as placas durante 24 a 48 h a uma temperatura de 35

atmosfera aerbia.

2 C numa

Staphylococcus
Diagnstico Laboratorial
Meio de Manitol Salgado (Manitol Salt Agar)

Vrias espcies de Staphylococcus para alm da S. aureus tm resultados positivos para o

manitol e produzem colnias amarelas circundadas por zonas amarelas neste meio (p. ex.,
S. capitis, S. xylosus, S. cohnii, S. sciuri, S. simulans e outras espcies). Por este motivo,
necessrio realizar outros testes bioqumicos para a identificao de S. aureus ou de outras
espcies.

Em meio slido, as colnias

apresentam-se lisas,
redondas, ligeiramente
convexas, brilhantes e
opacas.
A maioria das estirpes produz
um pigmento amarelo
dourado (amarelo citrino) no
difusvel no meio.
Outras espcies apresentam
colnias brancas.

Manitol (+)

Manitol (-)

Staphylococcus
Diagnstico Laboratorial
EXAME CULTURAL
gar Columbia CNA

um meio de cultura seletivo usado pra isolamento de cocos gram-positivos

como Staphylococcus spp. e Streptococcus spp.

Contm peptonas obtidas por hidrlise enzimtica a partir de casena e soja.

Neste meio desenvolvem-se vrias bactrias e os antibiticos colistina e
cido nalidxico impedem o crescimento de bacilos Gram negativo.

Amostra
As amostras de secrees, quando no inoculadas imediatamente aps recolha, devem
ser transportadas em meios Amies ou Stuart. As amostras devem ser colhidas
seguindo cuidados especficos de forma a se obter representatividade do processo
infeccioso, assepsia na recolha da amostra e sem interaes medicamentosas.
Em casos extremos, em que no se pode realizar o inculo imediato, a amostra deve
ser conservada sob refrigerao.

Staphylococcus
Diagnstico Laboratorial

Staphylococcus
Diagnstico Laboratorial
EXAME CULTURAL (pouco exigentes)

Em gelose chocolate

Meio rico e no seletivo.

Permite o crescimento da grande maioria das

bactrias aerbias e facultativas. Quando
incubado em CO2 d suporte tambm ao
crescimento dos microaerfilos.

base do meio, adicionado sangue de cavalo,

carneiro ou coelho em temperatura alta, o que faz
com que os eritrcitos sejam lisados, libertando
hemina e hematina, compostos fundamentais para o
crescimento dos microrganismos.
Pode-se observar halos esverdeados com colnias alfahemolticas

Staphylococcus
Diagnstico Laboratorial
EXAME CULTURAL (pouco exigentes)

Em gelose sangue, verifica-se por vezes hemlise.

S. aureus

Caldos: brain-heart infusion

S. epidermidis

Staphylococcus
Diagnstico Laboratorial
Estudo do Poder Patognico:

Prova da coagulase:
Em tubo (coagulase livre)

Em lmina (coagulase conjugada)

Clumping factor
componente da parede
celular dos
Staphylococcus aureus
que permite a ligao ao
fibrinognio e formar
agregados que dificultam
a fagocitose.

Staphylococcus
Diagnstico Laboratorial

Teste da Desoxirribonuclease (DNase)

Deteta a degradao do DNA, presente no meio de cultura, pela enzima
desoxirribonuclease produzida pelo S. aureus.
Tem a vantagem de poder inocular vrias espcies numa nica placa.
Existem trs verses comerciais do meio.
Dnase Test Agar
Positivo: rea clara ao redor da colnia aps a adio de HCl 1N.
Negativo: no h formao de rea clara e um precipitado forma-se
ao redor da colnia.
DNase Test Agar com Verde de Metila
Positivo: formao de uma zona clara ao redor da colnia em
contraste com a cor do meio.
Negativo: a cor do meio mantm-se inalterada.
Dnase Test Agar com Azul de Toluidina
Positivo: formao de um halo cor-de-rosa ao redor da colnia.
Negativo: o meio ao redor da colnia mantm-se inalterada.

Staphylococcus
Diagnstico Laboratorial
Pesquisa de hemolisinas
Sementeira em Gelose de sangue: -hemlise

Protena A
Ex: Staphaurex

Diagnstico Laboratorial
dos Staphylococcus coagulase negativo

Teste de suscetibilidade Novobiocina

S. epidermidis (+)

Propriedades que ajudam a distinguir as

espcies de Staphylococcus

*Coagulase has a prothrombin-like activity which,through the conversion of

fibrinogen to fibrin, results in the clotting of blood plasma.

Diferenciao espcies Staphylococcus

S. aureus

S. epidermidis

S. saprophyticus

Amarelabranca

Branca

Branca

Hemlise

+/-

Crescimento
anaerbio

+/-

Coagulase

Fermentao
glicose

Fermentao
manitol

Endonuclease
(DNASE)

Protena A

suscetvel

suscetvel

resistente

Cor colnia

Novobiocina

Staphylococcus
Diagnstico Laboratorial

Sistemas de Identificao da espcie (provas bioqumicas).

Antibiograma

Ativos: Penicilinas, cefalosporinas e carbapenemos

aminoglicosdeos, tetraciclinas, macrlidos, lincosamidas,

fluoroquinolonas, rifampicina, trimetropim, cloranfenicol,
vancomicina

Inativos: Polimixinas, nitrofuranos, nitroimidazis, 1 quinilonas,

temocilina, Aztreoname e meciliname.

Antimicrobianos de Eleio
Hospitais sem MRSA
Penicilinas resistentes s -lactamases

Hospitais com MRSA

Vancomicina ou teicoplanina

Estado portador nasal

Mupirocina tpica

Mecanismos de resistncia

Alterao das PBP2 (protenas de ligao penicilina)

MRSA

alterao gene mecA

resistentes a todos os -lactmicos disponveis, mesmo os

resistentes s -lactamases

normalmente s suscetveis vancomicina e teicoplanina

Controlo de surtos MRSA+

Afastamento do
pessoal

Controlo de surtos MRSA+

Isolamento dos
doentes

Afastamento do
pessoal

Descontaminao
do pessoal

COCOS GRAM POSITIVO

MICROCOCCACEAE

Staphylococcus
Micrococcus

Micrococcus

So agentes da populao microbiana normal da pele, mucosa

e orofaringe.

Mecanismos de virulncia no so conhecidos, portanto, so

aparentemente inofensivos e raramente implicados em
doena; quando so isolados temos de saber se devemos ou
no valorizar, o que depende do contexto clnico.

So microrganismos que existem na vida livre, no ambiente,

ao contrrio dos Staphylococcus.

As colnias so muito coloridas amarelas,

laranjas ou vermelhas tm muito pigmento,
o que no acontece com os Staphylococcus