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Resumo
Epidermlise Bolhosa representa um grupo heterogneo de patologias genticas que causam bolhas e
cortes em resposta ao mnimo trauma mecnico na pele. As vrias formas de Epidermlise Bolhosa podem
ser agrupadas em trs tipos principais; Epidermlise Bolhosa Simplex, Epidermlise Bolhosa Distrfica
(forma dominante ou recessiva) e Epidermlise Bolhosa Juncional. Esta condio pode variar de relativamente leve, a uma doena incapacitante e, s vezes, fatal. Epidermlise Bolhosa Distrfica a forma mais
grave deste grupo de doenas, apresentando uma freqncia estimada de 1: 35.000 nascidos vivos na
populao mundial. Epidermlise Bolhosa Distrfica uma doena gentica herdada causada por mutaes que afetam a funo correta do gene do colgeno tipo VII (COL7A1). Este gene codifica para uma
protena que d forma s microestruturas responsveis por manter as camadas da pele unidas. Alteraes
neste gene resultam na adeso defeituosa e na formao das bolhas. Pesquisas no gene COL7A1 concluram que cada paciente tem sua prpria mutao gentica, freqentemente tendo como resultado um
fentipo clnico varivel. Neste trabalho, ns descrevemos o diagnstico clnico e os achados moleculares
de uma paciente brasileira.
Palavras-chave: COL7A1; Doena de bolhas da pele; Epidermlise bolhosa distrfica.
Abstract
Epidermolysis Bullosa is a group of genetic disorders causing blistering and shearing of the skin from even
the gentlest friction, often from everyday activities. The various forms of Epidermolysis Bullosa can be
grouped into three main types: Simplex Epidermolysis Bullosa, Dystrophic Epidermolysis Bullosa (dominant
or recessive form) and Junctional Epidermolysis Bullosa. This condition can vary from a relatively mild to
an incapacitating, and sometimes fatal, disorder. Dystrophic Epidermolysis Bullosa is the severe form of
Epidermolysis Bullosa affecting 1 in 35,000 live births over the worlds population. Dystrophic Epidermolysis
Bullosa is an inherited genetic disorder caused by mutations affecting the correct function of the collagen
type VII gene (COL7A1). This gene encodes for a protein forming microstructures, responsible for keeping
the layers of the skin together. Defects in the gene, result in defective adhesion and in the formation of
blisters. Research into COL7A1 has concluded that patients have their own genetic mutation, often resulting
in variable clinical phenotype. In this paper we describe the clinical diagnosis and the molecular findings of
a Brazilian patient.
Curso de especializao em Gentica Humana PUCPR Pontifcia Universidade Catlica do Paran, Curitiba, Paran, Brasil.
Endereo para correspondncia:
Salmo Raskin, MD, Alameda Augusto Stellfeld, 1516, Curitiba, Paran, Brasil, 80730-150, Fone: 55-41-3232-6838, Fax: 55-413232-5206, E-mail: genetika@genetika.com.br.
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Introduo
Epidermlise Bolhosa (EB) representa um
grupo heterogneo de patologias mechanobulosos, com severidade clnica altamente varivel, podendo apresentar herana autossmica
recessiva ou autossmica dominante (FINE et al.,
1991; CHRISTIANO et al., 1996). A EB dividida
tradicionalmente em trs grandes categorias baseadas no nvel de separao do tecido dentro da
zona da membrana basal (BMZ) (UITTO;
CHRISTIANO, 1992). Na forma simples (EBS), a
separao do tecido ocorre dentro dos
queratincitos basais no lado epidrmico da membrana basal; na forma juncional (EBJ), a formao
da bolha ocorre dentro da membrana lcida do
lado drmico-epidrmico basal prprio da lamina;
e na forma distrfica grave (EBD), a segmentao
do tecido ocorre no lado drmico da BMZ cutnea
(PULKKINEN; UITTO, 1999).
O progresso na definio da base
molecular de diversas formas da EB ilustrado
melhor pelas variantes distrficas de EB (EBD),
um subgrupo da doena que possui padro de
herana autossmico recessivo ou autossmico
dominante (UITTO; CHRISTIANO, 1994).
A epidermlise bolhosa distrfica causada por mutaes no gene do colgeno tipo VII
humano (COL7A1). A organizao de ntron/exon
de COL7A1 demonstra ter 118 xons, maior nmero de exons do que qualquer gene previamente descrito. O COL7A1 tem 31.132 pb, do local do
incio da transcrio ao local da poliadenilao,
aproximadamente trs vezes o tamanho do mRNA
do colgeno tipo VII. Os ntrons do COL7A1 so
pequenos, sendo que o menor destes tem somente 71 nucleotdeos, o menor ntron j relatado
em um gene do colgeno, e somente um ntron
do COL7A1 tem mais de 1 kb de comprimento.
Todos os xons na regio codificante da tripla hlice do COL7A1 que no comeam com as seqncias que correspondem s imperfeies da tripla
hlice, comeam com cdons de resduos de Gli
da repetio Gli-X-Y. Isto remanescente da estrutura fibrilar dos genes do colgeno. Alm disso,
a regio codificante da tripla hlice do COL7A1
contm muitos xons de tamanhos recorrentes (por
exemplo, 25 xons possuem 36 bp, 12 xons possuem 45 bp, 8 xons possuem 63 bp), sugerindo
uma origem evolutiva distinta dos genes nofibrilares do colgeno. Seqncias da poro 5' do
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COL7A1 so apresentadas junto com uma seqncia intergnica, de 3766 pb, que separa COL7A1
do gene subseqente, o qual codifica a protena I
do complexo do citocromo bc1. A regio do
promoter COL7A1 apresenta ausncia de
homologia com regies promotoras de outros genes
expressados na pele (CHRISTIANO et al., 1994a).
A posio genmica do gene do colgeno
tipo VII (COL7A1) foi determinada por hibridao
cromossmica in situ com o DNA K-131. Os resultados mapearam o gene COL7A1 no lcus 3p21
(PARENTE et al., 1991). O colgeno de tipo VII foi
identificado como o componente de protena de
ancoramento de fibrilas em 1986 (BURGESON,
1993). Mutaes neste gene foram relatadas primeiramente em 1993 (Christiano, 1993; Hilal, 1993),
sendo que em 1999, 172 mutaes tinham sido
relatadas (WHITTOCK et al., 1999).
O colgeno de tipo VII o principal componente colgeno de ancoramento das fibrilas,
estruturas acessrias que estabilizam a associao
da membrana basal cutnea derme subjacente.
Ele expresso tanto por queratincitos epidrmico
quanto por fibroblastos drmicos (GRAS et al.,
2001).
Ambas as formas, autossmicas dominantes e recessivas de EBD so causadas por mutaes no gene COL7A1 (HOREV et al., 2003;
WOODLEY et al., 2003).
O local e a natureza das mutaes determinam o fentipo clnico que varia extensamente
de uma doena relativamente leve, herdado tipicamente por herana autossmica dominante, a
uma condio grave de mutilao herdada por
herana autossmica recessiva (HOREV et al.,
2003).
As BMZ dos pacientes com EBD so caracterizadas pela falta ou pela diminuio do
ancoramento das fibrilas (BRIGGAMAN;
WHEEKER, 1975). Anor malidades neste
ancoramento de fibrilas tm sido observado ao
microscpio de eletrnico de transmisso, as quais
podem morfologicamente ser alteradas, reduzidas
em nmero ou inteiramente ausente nos pacientes afetados com EBD (TIDMAN; EADY, 1985;
MACGRATH et al., 1993).
Apesar de existirem duas formas de
epidermlise bolhosa, uma dominante e uma
recessiva, ambas ocorrem devido a mutaes no
mesmo gene e provvel que as mutaes com
expresses heterozigticas produzam uma mudan-
Relato de Caso
A paciente brasileira T.V., do sexo feminino, oito anos de idade, foi encaminhada ao Hospital de Clnicas com 21 dias de idade, apresentando histria de bolhas nos membros e de ausncia
de pele no tero inferior da perna e no p. No h
nenhuma histria similar da doena em sua famlia. Foram observadas bolhas de tamanhos diferentes nos braos, nos ps e no tronco. T.V. apresentou tambm reas brilhantes vermelhas no tero inferior da perna e do p e reduo do dimetro da perna com atrofia dos dedos.
Com sete meses, alm das bolhas, apresentou distrofia da 1. e 2. unhas das mos. Aps
tratamento apropriado, o ferimento no tero inferior da perna esquerda apresentou acentuada melhora com aumento do dimetro da perna e maior
mobilidade dos dedos.
Na evoluo, apresentou algumas infeces secundrias, dificuldade de deglutio, sendo encaminhada para orientao gastroenterolgica
e mais tarde para a correo das aderncias e da
posio viciosa do dedo. Neste momento, foi
diagnosticada com EBD.
Sua primeira consulta com um geneticista
foi aos seis anos de idade, quando foi
diagnosticada com EBD recessivo, uma vez que
ambos os pais so normais e no h nenhum outro
membro afetado da famlia. Foram realizadas anlises moleculares, na regio COL7A1 do gene, e a
mutao Q2417X (Whittock et al., 1999) foi encontrada no gene do colgeno VII, confirmando
o diagnstico. A segunda mutao no foi encontrada at a presente data. A anlise molecular
foi realizada no Departamento de Dermatologia
e Biologia Cutnea da Universidade de Thomas
Jefferson, usando a seguinte metodologia: PCR
para amplificar todos os 118 xons do COL7A1 e
anlise dos heteroduplexes por dHPLC
(denaturing
high-per for mance
liquid
chr omatography, cromatografia liquida
desnaturante de alta performance) para identificar anormalidades. Alm disso, foi realizado
seqenciamento para confirmar mutaes.
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Discusso
A Epidermlise Bolhosa (EB) um grupo heterogneo de doenas bolhosas hereditrias que podem potencialmente apresentar risco
de morte a recm-nascidos e crianas. O diagnstico exato em recm-nascidos pode ser difcil e depende de uma combinao de tcnicas
clnicas, histolgicas e moleculares (DAS;
SAHOO, 2004).
A investigao molecular cuidadosa de
EBD recessiva tem implicaes importantes para o
aconselhamento gentico e para o desenvolvimento
de correo gentica. Estes resultados permitem o
diagnstico pr-natal em famlias de risco (aquelas que tm ao menos uma criana afetada). O
teste baseado na busca de mutaes no DNA fetal
pode ser executado a partir da 10 semana de gestao. A identificao precisa das mutaes permite tambm a definio da terapia gnica especfica
para a alterao em questo. O conhecimento da
conseqncia das mutaes a nvel protico
(detectvel contra a protena no detectvel) tambm importante para definir a metodologia de
terapia gnica a ser utilizada, a fim de restaurar a
expresso normal introduzindo uma cpia do gene
normal do colgeno VII em clulas epidrmicas
(HOVNANIAN, 2001).
A ausncia de outros membros da famlia
afetados no estabelece, por si s, o modo de transmisso como autossmico recessivo, porque a identificao de pessoas afetadas aparentemente isoladas pode tambm ser o resultado de uma mutao
espontnea ou de penetrncia incompleta de uma
caracterstica autossmica dominante (DAS;
SAHOO, 2004).
Embora somente um nmero limitado de
mutaes seja conhecido, grande a
heterogeneidade molecular do EBD, sendo que a
combinao de duas mutaes diferentes leva a
diferentes conseqncias nos polmeros do
colgeno VII, os quais so relacionadas s grandes
variedades de fentipos biolgicas e clnicas. Neste contexto, determinadas situaes mais simples
podem ser preditas: as mutaes que conduzem a
duas terminaes prematuras do cdon (PTC) da
traduo causam um fentipo severo de mutilao; um PTC em combinao com uma outra mutao pode causar um fentipo grave ou leve de
EBD, dependendo da segunda mutao (WINBERG
et al., 1997).
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Referncias
BRIGGAMAN, R.A.; WHEELER, C.E. Jr. The
epidermal-dermal junction. J Invest Dermatol,
65(1):71-84, 1975.
BURGESON, R.E. :Type VII collagen, anchoring
fibrils, and epidermolysis bullosa. J Invest
Dermatol, 101(3):252-5, 1993.
CHRISTIANO, A.M.; ANHALT, G.; GIBBONS,
S.; BAUER, E.A.J. Premature termination codons
in type VII collagen gene (COL7A1) underlie
severe, mutilating recessive dystrophic
epidermolysis bullosa. Genomics, 21, 160-168,
1994b.
CHRISTIANO, A.M.; ANTON-LAMPRECHT, I.;
AMANO, S.; EBSCHNER, U.; BURGESON, R.E.;
UITTO, J. Compound heterozygosity for COL7A1
mutations in twins with dystrophic epidermolysis
bullosa: a recessive paternal deletion / insertion
mutation and a dominant negative maternal glycine
substitution result in a severe phenotype. Am J
Hum Genet, 56, 682-693, 1996a.
CHRISTIANO, A.M.; GREENSPAN, D.S.; HOFFMAN,
G.G.; ZHANG, X.; TAMAI, Y.; LIN, A.N.; DIETZ,
H.C.; HOVNANIAN, A.; UITTO, J. A missense
mutation in type VII collagen in two affected
siblings with recessive dystrophic epidermolysis
bullosa. Nat Genet, 4(1):62-6, 1993.
CHRISTIANO, A.M.; HOFFMAN, G.G.; CHUNGHONET, L.C.; LEE, S.; CHENG, W.; UITTO, J.;
GREENSPAN, D.S. Structural organization of the
human type VII collagen gene (COL7A1),
composed of more exons than any previously
characterized gene. Genomics, 21(1):169-79,
1994a.
<http://www.debra-inter national.or g/
a_hovnan1a.htm>.
MCGRATH, J.A.; ISHIDA-YAMAMOTO, A.;
OGRADY, A.; LEIGH, I.M.; EADY, R.A. Structural
variations in anchoring fibrils in dystrophic
epidermolysis bullosa: correlation with type VII
collagen expression. J Invest Dermatol,
100(4):366-72, 1993.
PARENTE, M.G.; CHUNG, L.C.; RYYNANEN, J.;
WOODLEY, D.T.; WYNN, K.C.; BAUER, E.A.;
MATTEI, M.G.; CHU, M.L.; UITTO, J. Human type
VII collagen: cDNA cloning and chromosomal
mapping of the gene. Proc Natl Acad Sci USA,
88(16):6931-5, 1991.
PULKKINEN, L.; UITTO, J. Mutation analysis and
molecular genetics of epidermolysis bullosa.
Matrix Biol, 18(1):29-42, 1999.
TIDMAN, M.J.; EADY, R.A. Evaluation of
anchoring fibrils and other components of the
der mal-epider mal junction in dystrophic
epider molysis bullosa by a quantitative
ultrastructural technique. J Invest Dermatol,
84(5):374-7, 1985.
UITTO, J.; CHRISTIANO, A.M. Molecular basis for
the dystrophic forms of epidermolysis bullosa:
mutations in the type VII collagen gene. Arch
Dermatol Res, 287(1):16-22, 1994.
UITTO, J.; CHRISTIANO, A.M. Molecular genetics
of the cutaneous basement membrane zone.
Perspectives on epidermolysis bullosa and other
blistering skin diseases. J Clin Invest, 90(3):68792, 1992.
UITTO, J.; PULKKINEN, L.; CHRISTIANO, A.M.
Molecular basis of the dystrophic and junctional
forms of epidermolysis bullosa: mutations in the
type VII collagen and kalinin (laminin 5) genes. J
Invest Dermatol, 103, 39S-46S, 1994.
WHITTOCK,
N.V.;
ASHTON,
G.H.;
MOHAMMEDI, R.; MELLERIO, J.E.; MATHEW,
C.G.; ABBS, S.J.; EADY, R.A.; MCGRATH, J.A.
Comparative mutation detection screening of the
type VII collagen gene (COL7A1) using the
protein truncation test, fluorescent chemical
cleavage of mismatch, and conformation sensitive
gel electrophor esis. J Invest Der matol,
113(4):673-86 entitled, 1999.
29
30