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I.

INTRODUCCION
La enfermedad de Carrin o Bartonelosis humana es una enfermedad infecciosa cuyo agente
etiolgico es la Bartonella bacilliformis, que es transmitida por la picadura de mosquitos del
gnero Lutzomyia.
La enfermedad presenta una primera fase hemtica, anmica o febril, con una letalidad alta cuando
el tratamiento no es administrado oportunamente; la segunda fase es la histioide o verrucosa que
aparece varios meses despus. Entre ambas fases, se presenta una fase intercalar asintomtica
que puede durar de una a tres semanas o varios meses. Esta enfermedad es endmica en algunas
regiones del Per
Las especies de Bartonella. Son bacilos Gram negativos, pleomorfos, de crecimiento lento y cierta
dificultas para aislar en el laboratorio.

Pueden verse en tejidos infectados, teidos con la

coloracin de Wright, Giemsa, Leishman, etc.


Se seala dos etapas de infeccin por B. Bacilliformis:
La etapa inicial es la fiebre de la Oroya, que se caracteriza por anemia infecciosa grave; y
La etapa eruptiva, la verruga que comienza comnmente de dos a ocho semanas despus; aunque
tambin pueden producirse verrugas en ausencia de fiebre de Oroya.
Bartonella bacilliformis, crece en agar nutritivo semislido, adicionado con suero de conejo a 10% y
0.5% de hemoglobina, despus de 10 ms das de incubacin a 28 C se presenta turbidez del
medio y puede observarse bacilos en forma de bastn en preparaciones teidas con Giemsa.
II. OBJETIVOS:

Describir los procedimientos para la obtencin de muestras de sangre para el


diagnstico directo mediante coloracin Giemsa.

Describir los procedimientos tcnicos de tincin del frotis sanguneo mediante el mtodo
de la coloracin Giemsa

Identificar el agente etiolgico de la enfermedad de Carrin.

III. FUNDAMENTO:
Bartonella bacilliformis es una bacteria aerobia facultativa, gramnegativa, perteneciente al grupo
de alfa-proteobacterias, junto con Rickettsia y Brucella. Es responsable de una serie de
enfermedades que, a pesar de lo limitado de su distribucin, se ha dado un gran nmero de
nombres incluyendo bartonelosis, enfermedad de Carrin, fiebre de Oroya y verruga peruana. Es
polimrfico, ya que se presenta de forma bacilar cocobacilar o cocoide, de 2-3 m de largo y 0.20.5 m de ancho.
Epidemiologia:
Bartonella bacilliformis es encontrada solo en Per, Ecuador, y Colombia. Es endmico en algunas
areas del Per, ocurriendo brotes de la enfermedad en nuevas areas epidmicas. 3 La bacteria es
transmitida por mosquitos del gnero Lutzomyia.
Microbiologa:
Para su aislamiento, son requeridos cultivos especiales conteniendo soya agar complementado,
proteasas, peptonas, algunos aminoacidos esenciales y sangre. La temperatura optima de
crecimiento, son los 19-29 C. Las colonias crecen en agar sangre-Columbia suplementado con
10% de sangre bovina desfibrinada e incubado a 19-25 C por 2 semanas.
Patofisiologia:
La bacteria es inoculada por la picadura de Lutzomyias en los capilares, donde en un periodo
variable (alrededor de 21 das), la bacteria produce una invasin masiva de eritrocitos y
consecuentemente una anemia hemoltica intravascular severa (fase aguda de la enfermedad de
Carrin).4 Esta fase es potencialmente mortal y los sntomas son fiebre, anemia e
inmunosupresin. La fase aguda tpicamente dura de 2 a 4 semanas. Un frotis de sangre perifrica
puede mostrar anisocitosis con cocobacilos o cocos en los eritrocitos, debiendo ser el tratamiento
mas agresivo, mientras las formas bacilares suelen responder ms fcilmente al tratamiento, por
eso es importante comunicar la forma predomnate en un frotis perifrico. Es posible observar
trombocitopenia en casos muy severos. Se pueden ver pacientes con compromiso neurolgico
(neurobartonelosis) siendo este ltimo de mal pronstico. La complicacin ms temida son las
infecciones
sobreagregadas
por
enterobacterias Salmonella y
otros
parsitos
tales
como Toxoplasma gondii o Pneumocystis.
Se conoce que las bacterias invaden clulas endoteliales, produciendo la manifestacin crnica de
la enfermedad (Verruga Peruana). Esta fase se caracteriza por la aparicin de lesiones cutneas
benignas de color rojo-violceo nodulares tipo angiomatosas. Es posible visualizar la bacteria
usando una tincin argntica por el mtodo de tincin de WarthinStarry a partir de las biopsias
cutneas.
Enfermedad:
Bartonella bacilliformis es el agente etiolgico de la enfermedad de Carrin o fiebre de la
Oroya (fase aguda de la infeccin) y Verruga peruana (fase crnica de la infeccin). La fase aguda
de la enfermedad es una enfermedad severa caracterizada por una invasin masiva de la
bartonella a los eritrocitos y consecuentemente una hemlisis aguda asociada a fiebre. Si la
infeccin no es tratada, la tasa de mortalidad puede alcanzar hasta un 85% Los pacientes en esta
fase pueden complicarse con infecciones sobregaregadas por, principalmente, enterobacterias
(Salmonella spp) y parasitos (Toxoplasma gondii, Pneumocystis jirovecci). La fase crnica es
caracterizada por lesiones eruptivas benignas que son prurticas y sangrantes y otros sntomas

como malestar y dolor osteoarticular. Bartonella puede ser aislada de hemocultivos y secrecin de
las lesiones en personas de reas endmicas.

IV. MATERIALES:
MUESTRAS
Para el diagnstico directo:
Frotis sanguneo de sangre perifrica en lminas portaobjetos.
b) Para aislamiento - cultivo:
Sangre total con anticoagulante en tubos al vaco con citrato de sodio, heparina o EDTA.
Sangre total inoculada directamente al medio de cultivo bifsico (inmediatamente despus de la
extraccin de la muestra sangunea).
Biopsias de las lesiones, colocadas en recipiente estril.
c) Para diagnstico histopatolgico:
Biopsias de las lesiones en formol al 10%
Colorante Giemsa (stock).
Metanol.
Varillas de vidrio para coloracin.
Bandeja.
Frascos gotero.
Papel de filtro.
Pinza.
Embudo.
Tampn fosfato.
Lminas coloreadas procedentes de cultivos de Bartonella bacilliformis.
Microscopio

V. PROCEDIMIENTO:
COLORACIN DEL FROTIS SANGUNEO CON GIEMSA
La coloracin de Giemsa es una modificacin de la coloracin de Romanowsky, y nos permite
detectar los glbulos rojos infectados por Bartonella bacilliformis en sus formas bacilares,
cocobacilares o cocoides. La muestra debe ser fijada con metanol antes del proceso de tincin.
PROCEDIMIENTO DE LA COLORACIN DE LA MUESTRA SANGUNEA

Se colocan las lminas con los frotis sanguneos sobre la varilla, separadas una de otra
para poder manipularlas con seguridad

El frotis sanguneo debe estar seco antes de la fijacin

Fijar el frotis sanguneo sumergiendo la lmina en un frasco con metanol por tres
segundos. Sacarlo y dejar secar o colocar la lmina sobre una varilla de vidrio y cubrir la
superficie con metanol y dejar que se evapore por completo

Filtrar el colorante Giemsa con papel filtro

Se cubre la extensin con el colorante por 15 minutos, el tiempo de coloracin se ajusta de


acuerdo con las caractersticas del colorante preparado

Descartar el colorante y lavar la lmina a chorro suave y continuo de agua de cao hasta
que arrastre todo exceso de colorante.

Colocar las lminas inclinadas para que escurra el agua y dejar secar a temperatura
ambiente.

Observar al microscopio con objetivo de inmersin

VII. CUESTIONARIO:
1.

Cules son los mecanismos que concurren en la adquisicin de la bartonellosis?

Esta enfermedad puede adquirirse por la transfusin de sangre infectada o por la picadura de
un mosquito (diptero phlebotomus) conocido con el nombre de titira o manta blanca.

2.

Qu caracterstica deben de reunir las pruebas de laboratorio para el diagnstico de la


bartonellosis?

Una de la caracterstica es que el cultivo en placas convencionales no es fcil, y requiere de


incubaciones prolongadas (hasta 6 semanas de incubacin).
El cultivo requiere de condiciones especiales como el empleo de un medio enriquecido en
sangre (de conejo o de caballo), una atmsfera hmeda y enriquecida con CO2 y una temperatura
de 37 C. El crecimiento de los subcultivos en placas de agar sangre es ms rpido (3-5 das). La
rentabilidad diagnstica mejora si previamente al cultivo se someten los tubos de sangre a
congelacin (24 h a 85 C) y posterior descongelacin a temperatura ambiente con el fin de
destruir los hemates y facilitar la salida de las bartonellas al exterior. A diferencia de los mtodos
de cultivo convencional, los medios de cultivo que emplean lneas celulares (clulas endoteliales
L929, HeLa) son ms sensibles y en ellos el crecimiento es ms rpido. Las muestras empleadas
para el cultivo pueden ser sangre o tejidos (vlvulas cardacas).
3.

Cules son los vectores de la enfermedad de Carrin?

Los insectos vectores, dependiendo el tipo de bartonella son:


B. bacilliformis: mosca de la arena, phlebotomus.
B. quintana: piojos.
B. henselae: pulgas.

4.

Qu animales son los reservorios de la bartonellosis?

Se encuentran en una gran variedad de reservorios animales, y estn presentes de forma


caracterstica sin indicios de enfermedad.

B. henselae: gato.

B. baciliformis: humano.

VIII. CONCLUSION:
La coloracin de Giemsa es una modificacin de la coloracin de Romanowsky, est
disponible en cualquier laboratorio y nos permite detectar los glbulos rojos infectados por
Bartonella bacilliformis en sus formas bacilares, cocobacilares o cocoides. La muestra debe ser
fijada con metanol antes del proceso de tincin.

IX. BIBLIOGRAFA:

Ventura G. Padilla C. Diagnstico Bacteriolgico de la Bartonelosis Humana. Instituto


Nacional

de

Salud.

Lima.

2006.

Fecha

de

acceso:

27/10/15.

Disponible

en:

http://www.bvs.ins.gob.pe/insprint/salud_publica/mono/diagnostico_bacteriologico_bartonel
osis_humana.pdf