Mg.

Marden Alfaro Gaviln

FUENTES DE ERROR EN LAS

DETERMINACIONES ANALTICAS
Errores inherentes a la muestra:
Usar tubos que no activen la coagulacin(plstico
vidrio siliconado)
Anticoagulante: Citratado de Sodio 0.109 mol. (3.2 %)
La proporcin de 9:1 sangre/anticoagulante.
En tubos preparados, el anticoagulante no se pipeta con
la boca porque se contamina con bacterias que utilizan
citrato como fuente de energa.
La estasis venosa por un torniquete prolongado
aumenta el calcio en la muestra.

FUENTES DE ERROR EN LAS DETERMINACIONES

ANALTICAS

Errores inherentes a la muestra

La compresin mayor de 1 minuto puede elevar los valores
de fibringeno. Mas de 3 minutos acorta el TP, APTT, y
TT; e incrementa el F VIII.
El orden de coleccin de muestra es importante.
Muestra: Sangre arterial o venosa, pero no sangre capilar
Homogenizacin inmediata de la muestra .Sin producir
espuma.
Centrifugacin: 15 a 2000g, tapadas.
Las pruebas deben procesarse lo antes posible y si hay
demora se deben congelar a 40C (4h).Para evitar el
consumo de los factores lbiles

PRUEBAS PARA LA
HEMOSTASIA
PRIMARIA

RECUENTO DE PLAQUETAS
RECUENTO EN LAMINA: Mtodo Damesheck.
Este mtodo consiste en contar las plaquetas en 1000
hemates y multiplicar el resultado por el hematocrito del
paciente, el cual ser corregido de acuerdo a la cantidad de
Hematocrito que tenga.
Recuento de plaquetas=No plaquetas contadas en 1000
hemates multiplicados por el Hto.
FACTOR DE CORRECCIN:
valor Hto + 5 cuando Hto es < o igual 35
valor Hto + 3 cuando Hto esta entre 36 -37
valor Hto + 1 cuando Hto est entre 38 40
valor Hto + 0 cuando Hto > de 40.

RECUENTO DE PLAQUETAS
MTODO DE FONIO:
Consiste en contar plaquetas en 1000
hemates y multiplicar el resultado por la
cantidad de glbulos rojos.
Ejm:
RBC:3.8 x 109/L
# de plaquetas contadas en 1000GR= 60
Recuento de plaquetas =
3.8 x109/L X 60 = 228 x 109/L

VALORES NORMALES: 150000 a 450000/mm3

RECUENTO DE PLAQUETA METODO AUTOMATIZADO

Las plaquetas son contadas por medio de enfoque hidrodinmico
(deteccin corriente directa)

TIEMPO DE SANGRIA
METODO DE IVY
Explora la adhesin de las plaquetas al
endotelio vascular y su capacidad de
formar el trombo plaquetario. Consiste en
realizar una pequea herida y medir el
tiempo que tarda en dejar de Sangrar.

TCNICA DEL METODO DE

IVY
Escoger una zona libre de
vnulas en el antebrazo del paciente
Limpiar y colocar el tensimetro
en el brazo del paciente regulando a
40mm Hg.
Luego hacer una incisin en la
zona elegida e inmediatamente
controlar el tiempo
Cada 30 secar con papel filtro
sin tocar los bordes de la incisin. Se
anota el tiempo en que cesa la
hemorragia

INTERPRETACIN

Valores Normales = 2 a 8
Valores mayores a 10 se pueden considerar
patolgicos. Cuando el tiempo se alarga mas de
20, debe detenerse la hemorragia aplicando una
compresa de algodn sobre la herida.
El tiempo de sangra por este mtodo es la mejor
valoracin de la funcin plaquetaria

TIEMPO DE SANGRIA

METODO DE DUKE
Explora la adhesin de las plaquetas al
endotelio vascular y su capacidad de
formar el trombo plaquetario

TCNICA

Limpiar con suavidad el lbulo de

la oreja utilizando algodn
embebida en alcohol. No frotar .
Dejar secar
Haces una incisin en el lbulo de
la oreja con cierta profundidad, al
mismo tiempo cronometrar
Cada 30 secar la gota de sangre
con un papel secante, sin
tocar
la piel
Cuando las gotas de sangre dejen
de fluir detener el
cronmetro
o contar el nmero de gotas
recogidas en el papel secante y
multiplicarlo por 30

INTERPRETACION
VN = 1 a 4
Cuando se hallan valores alterados se
debe examinar un extendido en lmina
para observar si hay trombocitopenia.

FUENTES DE ERROR
Una mala arterializacin del lbulo de la oreja.
Una mala puncin afecta el flujo de la sangre que sale de la
herida.
La medicacin con antiagregantes plaquetarios como
aspirina, otros analgsicos, algunos antibiticos (penicilinas),
anticoagulantes, pueden prolongar falsamente el tiempo de
sangra, se recomienda no tomar la medicacin durante una
semana antes de la prueba.

PRUEBA DEL LAZO

Rumpel Leede
Trazar un circulo de 5 cm de dimetro en
la cara anterior del antebrazo a 5 cm de la
flexura del codo.
Insuflar el esfingomanmetro y mantenerla
5 minutos.
Contar las petequias producidas

INTERPRETACIN
Resultado Negativo=
Resultado dudoso=
Resultado positivo=

< 10 petequias
10 a 20
> 20

LUGAR DE APARICIN:
Solo cara anterior del antebrazo: dbil +
Otras reas del antebrazo:
median. +
Si petequias tienden a confluir:
fuerte +

Prueba del Lazo:

Interpretacin
La prueba es positiva en :
Trombocitopenias
Enf. Von Willebrand
Escorbuto y sobre todo en
prpuras vasculares.

RETRACCION DEL COAGULO

se produce fundamentalmente a travs
de la interaccin de la GPIIb/IIIa con la
actina del citoesqueleto, proceso que
lleva
el
reordenamiento
de
la
membrana plaquetaria. depende de
varios factores: cantidad y calidad de
plaquetas, concentracin de fibringeno
y el hematocrito.
Es una prueba poco sensible y debe
trabajarse en material completamente
limpio.

RETRACCION DEL COAGULO

Material y Mtodo
Se coloca en tres tubos de hemlisis bien limpios,
1ml de sangre en cada uno y se mantiene a 37oC.
A la hora se observa la magnitud de la retraccin.
Valores Normales
El resultado de la prueba se expresa en cruces.
Cuando el cogulo ha retrado y se ha separado
completamente del vidrio se considerar retraccin
total, equivalente a 3 cruces (+++). La retraccin
debe ser completa.

INTERPRETACION
Retraccin deficiente:
Alteraciones Plaquetarias
Cuantitativas
Cualitativas

Fibringeno bajo

AGREGACION PLAQUETARIA
Se mide el proceso de agregacin de las
plaquetas que
registra el cambi en la
transmisin de luz del PRP.
Se usan una serie de sustancias agregantes .
El ADP y la adrenalina provocan curvas
bifsicas, la primera onda es resultado del
agregante y la segunda curva es resultado dela
liberacin del contenido de los grnulos.
Los agonistas potentes como el colgeno y la
ristocitina definen una sola onda.

PRUEBAS PARA
HEMOSTASIA
SECUNDARIA

PERFIL DE COAGULACIN
Pruebas de rutina:
T. de protrombina, INR.

T. de tromboplastina parcial activado.

T. de trombina.
Dosaje de fibringeno.
Rcto de plaquetas.

Pruebas especiales:

Prueba de mezcla o de correccin.

Dosaje de factores: va extrnseca e intrnseca.
Dosaje de Factor von Willebrand.
Anticoagulante lpico.

Perfil trombtico
Pruebas de rutina:
Dmero D.

Pruebas especiales:
AT III, protena C, protena S, Plasmingeno,
alfa 2 antiplasmina, F V Leiden, homocisteina.

TIEMPO DE PROTROMBINA

MATERIALES :
Plasma citratado: F: VII, X, II y V.
Bao Mara. a 37 C
Tromboplastina clcica.
Pipetas automticas de 100 y 200 uL.
Tubos de 13 x 100
Cronmetro.

Tiempo de protrombina
REACTIVO BASE

Extracto de
tromboplastina

EXTRACTO DE FT

Cerebro de conejo
Cerebro humano
Cerebro bovino
Cerebro de mono
Placenta humana

Tiempo de
protrombina
prueba de Quick): tiempo de coagulacin
en plasma citratado al que se aade
tromboplastina tisular (normalmente extracto de
cerebro de conejo o recombinante) y calcio y se
ve aparecer el agregado de fibrina que se
detecta
por sistemas foto pticos o
electromecnicos.

FACTOR
TISULAR

(TP,

F XIIa, IXa y Xa + Plasmina

VIA
EXTRINSECA
Ca++

VII

VIIa

FACTOR
TISULAR

Ca++

TCNICA
Pipetear en un tubo.

-Plasma citratado
-Incubar 2 min. a 37C
-Tromboplastina clcica (37C)

100 l
200 l

Complejo (Factor tisular+VIIa+Ca++)

Tiempo de protrombina
EXPRESIN DE RESULTADOS:
Seg.
% de actividad.
INR: ( PT pac. / PT control) ISI
RATIO(PT problema/PT control)

RAZN INTERNACIONAL NORMALIZADA

Tiempo de protrombina del plasma del pac. en seg.

INR =

ISI

Tiempo de protrombina del plasma normal en seg.

ISI
Indice de sensibilidad internacional. Comparacin del reactivo de trabajo con respecto a
tromboplastina referencial OMS.
Dato que viene en el inserto del reactivo, vara de acuerdo al lote, origen y equipo con
el que se trabaje.

Sensibilidad de las tromboplastinas

clcicas
SENSIBILIDAD

ISI

Muy alta.............
Alta....................
Mediana............
Baja...................

menor de 0.9
0.9 a 1.1
1.2 a 1.3
mayor de 1.4

 Mide tiempo de coagulacin del plasma

en presencia de cefalina ( trompoplastina
parcial, sustituto plaquetario ) y un activador.

Extracto de fosfolpidos:
Cerebro humano.
Cerebro de conejo.
Vegetales.
Grano de soja.
Activadores:
Particulados:
Caoln, slica
No particulados: Acido elgico.

Tecnica de la prueba de
TTPa
Tiempo de troboplastina parcial activado (TTPa)=
tiempo de coagulacin en plasma citratado al que
se aade cefalina, caoln (para proporcionar cargas
negativas para activar FXII y XI) y calcio: 25-43 seg.
Mide el sistema intrnseco.

Pipetear en una cubeta

Plasma citratado
Reactivo de PTT
Incubar 2 min. a 37C
CaCl2 0.025 M (37C)

100 l
100 l
100 l

Con la adicin del CaCl2 0.025 M se dispara

el cronmetro, parndolo cuando se forma
un cogulo estable. El resultado se expresa
en seg.

CONTACTO
Superficie Cargada
Negativamente

XII

XIIa
XI

XIa
Ca++

VIA
INTRINSECA
IX

VIII

IIa

VIIIa

IXa
PF-3
Ca++

Complejo (IXa+PF-3+VIIIa+Ca++)

APTT
Prolongado
Def. cong. De
factores.
Def de vit. K, RN.
Hepatopatas.
Alt. por Fb. < 50 mg%.
Inhibidor .
Disfibrinogenemia.
Hematocrito > 60%.

Acortado
Hematocrito < 20.
Hemlisis.

Correcin con Plasma Normal :

0.1 ml Plasma Paciente

+
0.1 ml Plasma Normal

Corrige
: dficit de factores
No corrige : presencia de inhibidores

Tiempo de Trombina :
Estudia etapa de Fibrinoformacin

Se altera en :
PDF/pdf > 40 mg/ml
Presencia de heparina
Anomalas cualitativas y
cuantitativas de fibringeno
[Fib] < 0.75 mg%

Tiempo de Trombina
Mide el tiempo de coagulacin del plasma
En presencia de una cantidad fija de trombina.

Plasma :
Factores de la Coagulacin
Fibringeno

Reactivo :
Trombina

TIEMPO DE TROMBINA
Al plasma se le aade trombina y se ve cuanto tarda en aparecer el cogulo .
Valora la disponibilidad de fibringeno o la presencia de inhibidores de la
trombina.
Se utiliza en pacientes heparinizados
X
X
VIA
COMUN

Tcnica
Pipetear en una cubeta
Plasma citratado 200 l
Incubar 2 min. a 37C
Reactivo de trombina(37C)200 l

IIa

Va

PF-3
Ca++

Complejo Protrombinasa (Xa+Va+PF-3+Ca++)

XIII
II

IIa
Ca++

XIIIa

El resultado se expresa en seg.

Fibringeno

VALORES NORMALES : 15 21 Seg

Fibrina

Fibrina Estable

Fibringeno
a
b

a
b

Fibringeno

Trombina

Proteolisis
Proteolisis
Monmeros de
fibrina

Polimerizacin

F XIII

Estabilizacin
Estabilizacin

FIBRINGENO
TCNICA:
-Previamente se hace una dilucin del plasma con un
diluyente tampn de Owren (BARBITAL SDICO
0.028M,NaCl 0.125 M,pH 7.35).
-Incubar 200ul de la dilucin por 2 a 37oC.
-Aadir 200 ul de trombina.
-Determinar el tiempo de coagulacin.
-El resultado en segundos se compara con una curva
previamente diseada o con una tabla que viene junto
con los reactivos.
VN: 150 400 mg/dl. (1.5 4g/L.)

TIEMPO DE REPTILASE
Mide el tiempo de coagulacin del plasma
por efecto de una cantidad fija de
Reptilase, enzima similar a la trombina
que cliva exclusivamente las cadenas alfa
del fibringeno, a diferencia de la trombina
que cliva las cadenas alfa y beta.

TIEMPO DE REPTILASE

TCNICA:
-En un tubo 12 x 75ml colocar 150uL de plasma e
incubar en bao Mara x 2 minutos
-Agregar 50 ul de reactivo de Reptilase y
poner en marcha el cronmetro.
-Mezclar e Incubar por unos segundos ms.
-Determinar el tiempo de coagulacin.

TIEMPO DE REPTILASE
INTERPRETACION
VN: < 22 segs.
PROLONGADO.
-En alteraciones de la molcula de
fibringeno. Es de utilidad para estudio de
las disfibrinogenemias congnitas y
adquiridas

PRUEBAS PARA LA EVALUACION DE PACIENTES CON

SOSPECHA DE TROMBOSIS

PRUEBAS DE ESTUDIO

Resistencia a la Protena C
PCR de la Mutacin de PT G2021A
Pruebas funcionales de AT,PC,PS
Nivel de Actividad del Factor VIII
Pruebas de descarte de Anticoagulante Lpico
Pruebas de Elisa- AC. Anticardiolipina
Nivel Plasma de Hemocisteina

Casos para resolver: Diga cual es el

posible diagnstico?
1.-

TP Alargado
TTPA Normal
Tiempo de trombina Normal
Fibringeno Normal
Recuento plaquetario Normal

2.-

TP Normal
TTPA Alargado
Tiempo de trombina Normal
Fibringeno Normal
Recuento plaquetario Normal

3.-

TP Alargado
TTPA Alargado
Tiempo de trombina Alargado
Fibringeno Bajo
Recuento plaquetario Bajo

AUTOMATIZACIN EN HEMOSTASIA
Mtodos Coagulomtricos.
- Foto pticos
- Electromecnicos
Mtodos Cromognicos/amidolticos.
Mtodos Inmunolgicos.
Mtodos de Agregometra.
Mtodos Moleculares.