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MARCO TEORICO
Aspectos importantes del cultivo de microalgas:
Parmetros:
Al igual que como cualquier otro organismo vivo las condiciones fsicas tienen gran
influencia en el crecimiento de la microalga. Cada especie presenta un particular intervalo
de temperatura, intensidad de luz, preferencias espectrales, salinidad, bixido de carbono
y oxgeno para la produccin de un mximo crecimiento Tambin se debe mencionar que
ms que la influencia de un solo parmetro es el conjunto de parmetros o que crea
determinadas respuestas en el crecimiento de las microalgas (Caizares 1994).
REQUERIMIENTOS
COMPUESTOS
QUIMICOS
VALORES
Luz
2,000 4,000
lux
Temperatura
15 22C
Fsicos Salinidad
0.37
pH
79
Redox
CO2CO3
g/100 ml
O2H2O
g/100 ml
N2NH4+ NO3
g/100 ml
PO4
g/100 ml
SO4
g/100 ml
Na, K, Ca, Mg
Sales
g/100 ml
Sales
mg/100 ml
Sales
g/100 ml
Vitaminas
g/100 ml
C
Nutritiv O, H
N
os
TABLA 1.
PARMETROS PRINCIPALES DE LOS CULTIVOS DE MICROALGAS
En esta tabla se exponen los requerimientos principales de los cultivos de microalgas y sus valores
aproximados. En cada caso habr que estudiar los requerimientos particulares de la especie y de la variedad
que se vaya a cultivar en las condiciones concretas de cultivo que se van a utilizar, por lo que estos datos son
slo orientacin (Kinne, 1979).
Parmetros Fsicos:
La luz:
las microalgas son fotoauttrofas encargadas de convertir la energa luminosa en
metablica por medio de la fotosntesis y sus periodos de exposicin a sta
pueden ser continuos mediante luz artificial, discontinuos periodos de iluminacin
alternados con periodos de oscuridad, tambin con luz artificial o el ciclo natural
da
y
noche
(
Richmond
1986).
La aireacin:
asegura la distribucin homognea de las clulas y los nutrientes dentro del
cultivo dejndolos disponible para su mejor aprovechamiento, mejora la
distribucin de la luz a las clulas asegurando que permanezcan
fotosintticamente activas evitando que se sedimenten y previene una
estratificacin trmica (Richmond 1986).
Temperatura:
las microalgas en las que se est interesado generalmente para su cultivo son las
consideradas como especies tropicales debido a que su crecimiento no sufre
alteraciones en un intervalo de 16 a 27C presentando un ptimo de 24C. Bajas
temperaturas en referencia con el intervalo anterior no matan a la microalga, sin
embargo puede provocar una disminucin de crecimiento, temperaturas arriba de
35C provocaran que la mayora de las microalgas colapsaran (Hoof y Snell
2001).
Salinidad:
El intervalo ptimo para una microalga depender de la especie. Generalmente en
el cultivo a interiores este parmetro no es controlado y se maneja la salinidad
presente en el agua de mar. En un cultivo a exterior la salinidad se convierte en el
parmetro control en el crecimiento de la microalga (Abalde et al 1995).
Parmetros Qumicos:
Dentro de los requerimientos qumicos necesarios para un buen crecimiento de las
microalgas en cultivo se encuentran entre otras cosas el balance entre los
macronutrientes especficos y los micronutrientes. Un desbalance en la proporcin
suministrada de estos nutrientes invariablemente se manifiesta ya sea como un descenso
en el crecimiento o hasta la detencin del mismo (Hoof y Snell 2001)
Macronutrientes:
se consideran la fuente de nitratos fosfatos y en el caso de las diatomeas la
adicin de silicatos.
Micronutrientes:
son aquellos que se suministran en poca cantidad trazas en comparacin con los
anteriores
mencionados
pero
no
por
ello
menos
importantes.
Se sabe que en soluciones alcalinas algunos metales se precipitan agentes
quelantes tales como el EDTA, Acido Etilen, diamino tetractico se utilizan para
mantener los metales en solucin hacindolos disponibles para las microalgas
(Kaplan et al 1986)
*Un alta o baja excesiva en el pH disminuye el crecimiento de la microalga por el
rompimiento de muchos procesos celulares. Si el nitrgeno no es suministrado al cultivo
como sal de amonio la mayora de las microalgas selectiva mente tomaran el ion amonio
provocando una baja en el pH Si los iones nitratos son eliminados por el alga el pH tiende
a incrementarse pero usualmente controlado por suministro de bixido de carbono del
cultivo.
Contaminacin:
La contaminacin de los cultivos de microalgas puede ser biolgica qumica o fsica, sin
embargo puede afectar de manera particular o ser una combinacin de estos tipos.
Indicadores de Contaminacin Qumica:
Existen diversos patrones indicativos de este tipo de contaminacin, si el cultivo
se ha cado (alta disminucin en el numero celular) recin sembrada la
microalga; conservando sta su color natural; el problema podra deberse a la
composicin del agua, poca circulacin o cambio repentino de temperatura. En
este caso las clulas estn vivas y deben reponerse incrementando la agitacin.
Cuando el cultivo se toma blanco dentro de las 24 h de sembrado probablemente
se debe al cloro residual y otros qumicos disueltos en el agua.
Si el cultivo conserva un color claro despus de 3 4 das observando poco
crecimiento, se puede deber a que la fuente de luz es poca o existe un desbalance
en
los
nutrientes.
Cultivos viejos (de 15 o ms das de cultivo) que inician una deficiencia en
nutrientes generalmente se toman turbios y algunos otros levemente claros.
Esfuerzos por recobrar estos cultivos ya carentes de nutrientes son intiles
Indicadores de contaminacin biolgica:
los tipos ms comunes de contaminacin biolgica son excesivos niveles de
bacterias, otras microalgas, protozoarios o macroalgas. Si un cultivo despus de 3
7 das cambia de color y eventualmente se aclara la causa ms comn se debe
considerar provocada por protozoarios. Excesivo crecimiento de bacterias se
manifiesta como agua turbia bajo crecimiento y colapso del cultivo.
Conteo de microalgas:
HEMATOCITMETRO O CAMARA DE NEUBAUER:
MEDIOS DE CULTIVOS
18 mg
Metal M
30 ml
KC1
600 mg
Fe (as Cl-)
100 g
NaNO3
500 mg
Tris
1g
MgSO4 . 7H2O
5g
Vit.B12
3g
Ca (as Cl-)
100 mg
Na2 SiO3
80 mg
K2HPO4
30 mg
Vitamin Mix
1 ml
H2O
1l
Sulfato de
Amonio
(para la
agricultura
21%)
Superfosfato de Calcio
(para la agricultura
21%)
Urea (para la
agricultura 21%)
Clewat 32
100 g/t
15
g/t
15
g/t
30
50
g/t
OBJETIVOS
Objetivo General:
Objetivos Especficos:
MTODO
Materiales:
Vidrio:
Tubo de ensayo
Matraz Erlenmeyer.
Embudo de vidrio.
Bagueta.
Pipetas.
Mechero de alcohol.
Porta y cubre objetos.
Vasos precipitados.
Cmara neubauer.
Equipos:
Mechero Fisher.
Microscopio.
Autoclave.
Estufa.
Reactivos:
*Para preparara el medio guillard es necesario agua destilada .
Otros:
Frascos de vidrio.
Propipeta.
Asa de siembra.
Gradillas.
Algodn.
Fuentes.
Paliglobos.
Lugol.
Agua de mar.
Botella.
Papel filtro.
Papel aluminio.
Rotuladores.
Manguera.
Llave de unin.
Papel toalla.
Procedimientos:
3 Se prepar por cada alumno 2 tubos de ensayo con cierta cantidad del agua de mar
tratada y nutrida. Se sembr en estas a partir de una muestra otorgada por la profesora, la
especie fue Tetraselmis sp. y se sembr usando una varilla de cobre, y directamente de
tubo a tubo, respectivamente a cada uno de los 2 tubos.
*Toda esta accin se realiz cerca de un mechero encendido para mantener el rea estril
y habiendo tambin esterilizado la zona de trabajo previamente.
Siembra Final:
7 En la botella de 2,5 L ( debe estar llena y sin abrir), se vaca el contenido, se rotula con
la especie y los nombres de los encargados del cultivo.
8 Con el Mechero Fisher encendido y la mesa de trabajo limpia, se procede a llenar la
botella con 1 litro del medio Guillar quemando antes la boquilla del vaso con el mechero y
luego verter el contenido, 1 litro aproximadamente
Conteo diario:
*Se inici el conteo desde el mismo da de siembra, para saber cul fue la densidad inicial
sembrada de la microalga.
16 Con un paliglobo previamente desinfectado con agua caliente; se procedi retirar le
paliglobo con algodn y a tomar una muestra de la botella sembrada, usando el paliglobo
a modo de pipeta, el cual retena cierta cantidad de muestra y esta fue puesta en un
frasco de vidrio.
17 A la muestra obtenida se le agreg unas gotas de lugol, todo este proceso se hace
con el mechero de alcohol encendido y cerca de la boquilla de la botella.
Se coloc unas gotas de la muestra con lugol en la cmara neubauer para su conteo en
el
microscopio.
18 Despus de terminado el conteo los alumnos deban lavar los utensilios y dejarlos tal
y como estaban, acto que fue repetido durante las dos semanas de la siembra, en los que
se anotaron las densidades y los das para luego poder realizar la curva de crecimiento de
la especie cultivada.
Resultados
Del conteo total se obtuvieron los datos mostrados en la tabla 1 a continuacin:
Tabla 1. DATOS OBTENIDOS POR EL CONTEO.
Das
04/06/2014
Densidad
6,2
05/06/2014
06/06/2014
07/06/2014
08/06/2014
09/06/2014
6,3
---Fin de Semana
Fin de Semana
43,4
10/06/2014
11/06/2014
12/06/2014
49,1
41,4
----
13/06/2014
14/06/2014
15/06/2014
26,7
Fin de Semana
Fin de Semana
16/06/2014
8,5
17/06/2014
10,8
18/06/2014
11,4
Conclusiones
Se presentan 3 fases en la curva de crecimiento de las microalgas, la primera es
la fase inestable de siembra, donde la densidad de microalgas cultivadas tiende a
caer pequeamente a corto plazo; la segunda fase es la de reproduccin, en la
cual las microalgas alcanzan su mximo nivel de productividad y la tercera fase de
limitacin y decaimiento, donde las microalgas han excedido la poblacin limite y
el consumo de nutrientes por parte de estas hace que reduzca drsticamente los
mismos nutrientes y el oxgeno.
Se debe considerar que la fase ms conveniente para cosechar las microalgas es
la segunda fase en la que su productividad es mxima, y no cuando su densidad
es mayor.
Referencias Bibliogrficas
Anexos