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. Laboratoire de Microorganismes et Biomolcules Actives, Facult des Sciences de Tunis, Campus universitaire, 2092 Tunisie ;
. Laboratoire de Protection des Vgtaux, Institut National de la Recherche Agronomique de Tunisie (INRAT) 2049 Ariana
Tunisie ;
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. Dpartement de Microbiologie et de Gntique, Universit de Salamanque, 37002 Espagne.
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RSUM
Le genre Trichoderma renferme des espces connues en tant quagents de lutte biologique contre les champignons
phytopathognes et comme source denzymes et de mtabolites d'intrts industriels. Dans le but dexploiter le potentiel
biologique des Trichoderma indignes, une tude a t entreprise pour tablir une large collection despces rsidentes
dans les sols du nord Tunisien. En se basant sur laspect des colonies et la morphologie des fructifications, une collection
de 150 isolats a t subdivise en 5 groupes phnotypiques. Cette identification morphologique a t confirme par des
analyses molculaires bases sur le squenage de la rgion ITS1 de lADN ribosomal. Le pouvoir antagoniste de ces
espces est en cours dvaluation contre les moisissures de post- rcolte des fruits et des lgumes.
Mots-cls : Trichoderma - sol phnotype analyse molculaire
ABSTRACT
Trichoderma is the most fungal strain used as biological control agent in agriculture, besides its production of enzymes
and secondary metabolites of biotechnological interest. With an aim of exploiting the biological potential of local
Trichoderma strains, a study was undertaken to establish a broad collection of species resident in north Tunisian soils.
Based on the aspect of colonies and morphology of fructifications, a collection of 150 isolates was subdivided into 5
phenotypic groups. This morphological characterization was confirmed by a molecular analysis based on the sequencing
of the ITS1 region of the ribosomal DNA. The antagonistic potential of these species is in the course of evaluation against
the post-harvest moulds of fruits and vegetables.
Key-Words: Trichoderma - soil phenotype molecular analysis
Introduction
Les Trichoderma spp. sont des champignons
cosmopolites, caractriss par leur croissance
rapide, leur capacit dutiliser divers substrats et
leur rsistance des agents chimiques nocifs (Klein
et Eveleigh, 1998). Ils constituent les lments
prdominants de la mycoflore des sols de divers
cosystmes (forts, champs agricoles, prairies,
marcages, dserts, lacs sals ) (Danielson et
Davey, 1973 ; Roiger et al., 1991 ; Smith, 1995 ;
cellulose des vgtaux (Klein et Eveleigh, 1998). Le
genre Trichoderma renferme des espces les plus
utilises en tant quagents de lutte biologique
contre les phytopathognes et comme source
denzymes et de mtabolites secondaires d'intrts
biotechnologique (Kubicek et Penttil, 1998 ;
Sivasithamparam et Ghisalberti, 1998).
Echantillonnage et isolement
Une centaine dchantillons ont t collects de
diffrents cosystmes de la Tunisie (sols forestiers,
sols agricoles, fruits darbres fruitiers et feuilles de
lgumineuses). Chaque chantillon de sol (10g) a
t vigoureusement brass avec 20 ml deau
distille strile afin de librer les conidies et les
hyphes adhrant aux particules de sol. Une srie de
dilution de 10-1 10-4 a t prpare pour chaque
suspension de sol. Une aliquote de 0.1 ml de
chaque dilution a t tale sur les milieux PDA
(Potato dextrose agar, Difco) et MEA (Malt extract
agar, Difco) additionns de 50 mg/l dantibiotique
(ampicilline et streptomycine, Sigma). Les boites ont
t incubes 25C pendant 7 10 jours. Les
colonies de Trichoderma ont t purifies suite
des repiquages successifs sur milieu PDA.
Culture monosporale de Trichoderma
Une suspension sporale de chaque culture pure
de Trichoderma a t prpare aprs raclage des
spores en prsence deau distille strile. Aprs une
srie de dilutions et talements sur milieu PDA puis
incubation pendant 48h 25C, les conidies
Tr. 1
Tr. 4
9,00
Tr. 2
Tr. 5
Tr. 3
8,00
7,00
6,00
5,00
4,00
3,00
2,00
1,00
0,00
18h
24h
38h
44h
48h
Temps
Fig. 3 Aspect macroscopique des colonies des isolats reprsentant les cinq groupes phnotypiques de Trichoderma.
(a): T. citrinoviride, (b): T. atroviride, (c): T. hamatum, (d): T. harzianum, (e): T. longibrachiatum
Fig. 4 Aspect microscopique du myclium (a), des spores (b) et des phialides (c) de Trichoderma spp.
Isolat
Espce
T. harzianum
T. longibrachiatum
T. atroviride
T. hamatum
Trichoderma spp.
TNS 35, 36
TNS 37, 38, 39, 40, 44, 41, 42, 43
T. hamatum
T. longibrachiatum
TNS 45, 47
TNS 46
TNS 48
T. citrinoviride
T. hamatum
T. viride
Arbres fruitiers
Fruits de citronnier
Fruits de pcher
Lgumineuses
Feuilles de fve
Fig. 5. Sparation sur gel dagarose (1.5%) des produits damplification par PCR de lADN des isolats de Trichoderma en
utilisant les amorces ITS1 et ITS4.
M: marqueur de poids molculaire 100 pb, pistes 1-26 (isolats TNS1-TNS26); T: tmoin ngatif, pistes 27-48 (isolats
TNS27-TNS48).
TNS 1-18 (isolats de sol forestier); TNS 19-34 (isolats de sol agricole); TNS 35-44 (isols sur fruits de citronnier et de
pcher) et TNS 45-48 (isols sur feuilles de fve)
Fig. 6. Phylogramme bas sur les squences de la rgion ITS1 du gne ARNr dmontrant la position phylogntique des
48 isolats (TNS 1-46) lintrieur des sections tablies de Trichoderma (T.) (Hermosa et al., 2004).
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