Licenciatura em Bioqumica 3 ano

Enzimologia
Teste autoavaliao - Cintica Enzimtica e Inibio
1. Considere a seguinte reao catalisada por uma enzima:

E +S

k1
k-1

ES

k2

E + P

Sabendo que:
K1= 1x109
k-1= 1x106
k2= 1x102
a) Complete os valores numricos das constantes de velocidade com as unidades
apropriadas.
b) Calcule o valor da constante de Michaelis (Km).
c) Calcule o valor da constante de dissociao do complexo ES (KS).
d) Esta enzima atingiu a perfeio cataltica?
e) Para concentraes baixas de substrato ([S]<<Km) que parmetro determina
velocidade desta reao?
2. Considere o esquema cintico para uma reao reversivel:

E +S

k1
k-1

k2
ES
Parmetros
[S]0
[P]0
dir
Vmax

EP

k-2

k3

E + P

k-3

Valores
3x10-4 M
4x10-4 M
?

inv
Vmax

6 M.min-1

K mS

4x10-5 M

K mP

4x10-4 M

K eq

a) Em que sentido ocorre a reao (sentido de alterao global)?

dir
b) Calcule Vmax
.

c) Escreva uma expresso que traduza a condio de estado estacionrio para a espcie
EP.
d) Deduza uma expresso para K mP .

3. A hidrlise de vrios de vrios dinucleosidos monofosfato com a enzima ribonuclease foi

estudada como um sistema modelo para inferir sobre a velocidade de hidrolise das
diferentes ligaes fosfodiester durante a digesto de RNA com a enzima ribonuclease.
BASE1
N
HO
O

OH
O
O P O
O
O

BASE1
N

RNAase

BASE2
N

HO
O

O
O P O
O

OH

HO

BASE2
N

H
OH OH

H
OH OH

Km(mM)
Vmax(M.min-1)

C-A
1,00
11,5

U-A
1,03
10,4

G-A
1,10
8,78

A-A
0,803
13,2

A-G
0,437
9,81

A-C
0,495
11,6

A-U
2,61
11,8

a) Que ligao que ser hidrolisada mais rapidamente durante a digesto de RNA pela
enzima RNAase.
4. No metabolismo das purinas a metaloenzima xantina oxidase converte a purina hipoxantina
em cido rico:

hipoxantina + H2O + O2

xantina + H2O2
cido urico + H2O2

xantina + H2O + O2

A acumulao de cido rico provoca a doena gota. O composto alopurinol um inibidor

da enzima xantina oxidase.
O
N
N
H

O
NH

hipoxantina

N
N
H

NH
N
H
xantina

H
N

O
NH

O
N
H

N
H

cido urico

HN
N
H

alopurinol

a) Que tipo de inibidor ser o composto alopurinol?

b) Um inibidor incompetitivo seria uma droga ideal para uma doena deste tipo?
5.

Sabe-se que num extrato celular existem 3 isoenzimas que catalisam a mesma reao com
valores de KM 0,04 mM, 0,2 mM e 5 mM. Para testar a atividade (conjunta) das enzimas
num extrato celular que concentraes de substrato usaria?

6. Foram obtidos os seguintes dados para a velocidade inicial (em unidades arbitrrias) para a
reao catalisada por uma enzima para diferentes concentraes de substrato na ausncia e
na presena de diferentes concentraes de inibidor.
[I] (mM)
0
1
2
3
4

[S]= 1mM
2,36
1,99
1,75
1,60
1,37

[S]= 2 mM
3,90
3,35
2,96
2,66
2,35

[S]= 3 mM
5,30
4,40
3,98
3,58
3,33

Explique sucintamente como poderia identificar o tipo de inibio e calcular a(s)

constantes de inibico.