Tcnicas de aglutinacin

En estas tcnicas se hacen visibles los complejos Ag-Ac por la aglutinacin que
producen los anticuerpos cuando el Ag forma parte o se ha unido
artificialmente a la superficie de glbulos rojos, plaquetas, leucocitos,
partculas de ltex, etc. Normalmente se utilizan glbulos rojos
(hemoaglutinacin) o partculas de ltex.
Aglutinacin de partculas recubiertas por antgeno
Mientras que el entrecruzamiento de los antgenos proteicos multivalentes con
el anticuerpo produce una precipitacin, la interrelacin entre clulas o
partculas de gran tamao con los anticuerpos dirigidos contra los antgenos de
superficie conducen a una aglutinacin. Dado que la mayora de las clulas
poseen cargas elctricas, se requiere una cantidad razonable de anticuerpos
entre dos clulas antes de que se supere la repulsin mutua. Por esto, puede
ser difcil lograr la aglutinacin de clulas que slo poseen un nmero pequeo
de determinantes, a menos que se utilicen mtodos especiales, como el
tratamiento adicional
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con un reactivo antiglobulina. De manera similar, la mayor avidez del
anticuerpo multivalente IgM con respecto a la IgG hace que el primero sea ms
eficaz como agente aglutinante, molcula por molcula (Figura 12).
Figura 12. Mecanismo de aglutinacin de partculas recubiertas por antgeno
Las reacciones de aglutinacin se utilizan para identificar bacterias y para
tipificar los glbulos rojos; estas reacciones fueron observadas con leucocitos y
plaquetas, e incluso con espermatozoides en cientos casos de infertilidad
masculina debida a aglutininas presentes en el esperma. Debido a su
sensibilidad y conveniencia, el uso de la prueba se ha extendido a la
identificacin de anticuerpos contra antgenos solubles que de modo artificial
se adhieren sobre eritrocitos, las partculas de ltex o de gelatina. La
aglutinacin de las partculas de ltex recubiertas por IgG se utiliza para
detectar los factores reumatoideos. Pruebas similares que utilizan partculas
recubiertas con antgeno pueden llevarse a cabo en placas de microtitulacin
con fondo en U, donde puede observarse el patrn de sedimentacin en el
fondo de las cubetas; esto proporciona un indicador mas sensible que la
aglutinacin macroscpica. La cuantificacin de grados ms sutiles de
aglutinacin puede lograrse por nefelometra o por un contador Coulter.
Hemoaglutinacin directa
La presencia de antgenos en la superficie de los glbulos rojos se puede
detectar por la hemoaglutinacin producida cuando se aade un antisuero con
anticuerpos frente a dichos antgenos.
Esta tcnica se emplea habitualmente para la identificacin de los grupos
sanguneos y Rh, para lo cual a la sangre heparinizada se le aaden los

antisueros correspondientes: anti-A, anti-B o anti-AB (todos ellos anti-Rh

negativos). Habr aglutinacin cuando los glbulos rojos posean la
especificidad del antisuero aadido (Tabla 4). De igual manera se procede con
antisueros anti-Rh para la determinacin de los distintos grupos Rh.
Tabla 4. Determinacin del grupo sanguneo Aglutinacin con sueroGrupo
sanguneo Anti-A Anti-B Anti-AB O - - A + - + B - + + AB + + +
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Hemoaglutinacin indirecta
Se basa en el principio de la inhibicin de la hemoaglutinacin. Para su
realizacin se precisan glbulos rojos a los cuales se les ha unido la misma
sustancia que se desea detectar o cuantificar (Figura 13). Si estos glbulos
rojos son puestos en presencia de anticuerpos preparados frente a dicha
sustancia se producir su aglutinacin. Por el contrario, cuando se aade un
suero problema que contiene la sustancia a cuantificar entonces los
anticuerpos se unirn a dicha sustancia y no a los glbulos rojos. En este caso
no se producir la hemoaglutinacin. Por tanto, aglutinacin (+) indica
ausencia de la sustancia a estudiar, y aglutinacin (-) indica presencia de la
misma. La medida de gonadotrofina corinica (HCG) para el diagnstico de
embarazo puede realizarse por esta tcnica.
Figura 13. Inhibicin por aglutinacin de glbulos rojos con gonadotr