Beruflich Dokumente
Kultur Dokumente
DAN VALENTINA
MICROBIOLOGIA
PRODUSELOR
ALIMENTARE
VOLUMUL I
> Morfofiziologia microorganismelor
cu implicaii n industria
alimentar
/r
> Factori de control
%
ai creterii microbiene
> Fermentaii
GALAI
DAN VALENTINA
MICROBIOLOGIA
PRODUSELOR
ALIMENTARE
Volumul I
> M orfofiziologia m icroorganism elor
cu implicaii n industria alimentar
> Factori de control ai creterii microbiene
> Ferm entaii
Editura Alma
S.C. Alma-Galai SA .
Romnia
CUPRINS
Capitolul 1
Dezvoltarea tiinelor microbiologice............................................................. 5
5
1.1. Istoricul microbiologiei.............................................................
1.2. Clasificarea i obiectul disciplinelor microbiologice.................... 9
Capitolul 2
Clasificarea general a microorganismelor............................................... 13
Capitolul 3
Caracterizarea principalelor grupe de microorganisme cu importan
n industria alimentar................................................................................... 17
3.1. Drojdii (Levuri) ............................................................................ 17
- Caractere morfologice generale.........................................18
- Structura celulei de drojdie............................................. (2 0
- Caractere fiziologice generale............................................2o
- Reproducerea drojdiilor..................................................... 26
- Clasificarea general a drojdiilor...................................... 34
- Descrierea principalelor caractere de gen i incidena
drojdiilor n produse alimentare........................................ 36
3.2. Mucegaiuri (Fungi filamentoi) .................................................... 39
- Caractere morfologice. Structur.....................................42
- Reproducerea mucegaiurilor............................................. 43
- Clasificarea general a mucegaiurilor..............................49
- Descrierea mucegaiurilor cu importan
n industria alimentar.........................................................50
3.3. Bacterii............................................................................................... 54
- Rolul bacteriilor n natur i industrie.......................... C55
- Caractere morfologice ale bacteriilor....................................... 56
- Structura celulei bacteriene...............................................(56
Capitolul 7
Factori de control ai creterii microorganismelor................................110
7.T) Influena factorilor extrinseci asupra microorganismelor .... 110
- Temperatura....................................................................111
- Umiditatea...................................................................... 118
- Concentraia de oxigen................................................. 119
- Energia radiant............................................................. 121
- Energia sonic................................................................ 122
- Factorii mecanici............................................................123
- Factorii chimici............................................................... 125
7.2. Influena factorilor intrinseci asupra microorganismelor.....134
7 .3 ./Influena factorilor implicii asupra microorganismelor......139
Capitolul 8
Procese metabolice ale microorganismelor i aplicaii
n industria alimentar.................................................................................142
8.1. Metabolismul microbian - funcii de baz...............................142
8.2. Bioenergetica microbian...........................................................144
8^3) Fermentaia alcoolic.................................................................. 149
- Proprieti biotehnologice ale agenilor tipici
ai fermentaiei..................................................................149
- Factorii care influeneaz dinamica
fermentaiei alcoolice...................................................... 150
- Biochimismul formrii produilor principali
i secundari....................................................................... 155
- Bilanul masic i energetic.............................................158
8.4. Fermentaia lactic...................................................................... 160
- Caracterele morfofiziologice ale bacteriilor lactice .... 161
- Caracterele taxonomice i clasificare........................... 162
- Ci de formare a produilor principali i secundari... 164
8.5. Fermentaia propionic.............................................................. 169
- Clasificarea bacteriilor propionice...............................170
- Biochimismul fermentaiei propionice........................170
8.6. Fermentaia butiric i fermentaii deviate............................. 172
- Clasificarea bacteriilor butirice.......................................173
...............................................................................
CAPITOLUL 1
DEZVOLTAREA TIINELOR
MICROBIOLOGICE
n ultimele decenii ale secolului XX, tiinele microbiologice s-au implicat
tot mai profund n practica industrial i pe baza acumulrii de noi cunotine,
se dezvolt continuu n ritm accelerat, biotehnologia. Creterea spectaculoas
a populaiei globului i ca o consecin a eradicrii unor boli microbiene este
corelat cu efortul unanim pentru creterea calitii vieii, inclusiv prin asigurarea
unei alimentaii corespunztoare, diversificat i complet, pentru meninerea
strii de sntate i vigoare uman. n acest context, microbiologia produselor
alimentare ndeplinete un rol primordial, deoarece majoritatea subramurilor
industriei alimentare au la baz biotehnologii microbiene. Calitatea, gradul
de inocuitate i conservabilitate ale alimentelor sunt dependente de manipularea
dirijat, pe criterii tiinifice a microorganismelor utile, de pstrare riguroas a
condiiilor igienico-sanitare la prelucrarea i pstrarea alimentelor, n scopul
prevenirii alterrilor sau a mbolnvirilor prin consum de alimente contami
nate.
A.J. Kluyver (1924) afirma: n lumea, microbilor, omul are cel puin tot
atia prieteni, ci dumani, dar indiferent de ce parte a baricadei sunt arbitrar
situai, numai prin aprofundarea cunoaterii microorganismelor, omul va ti
mereu s le stpneasc.
DAN VALENTINA
DAN VALENTINA
{XI / - .o i - ~>
*------ i
: i _ -
10
DAN VALENTINA
,|U
11
12
DAN VALENTINA
13
CAPITOLUL 2
CLASIFICAREA GENERAL
A MICROORGANISMELOR
Variabilitatea extraordinar a microorganismelor i capacitatea lor de
adaptare la cele mai diferite condiii ale mediului ambiant, fac ca lumea
microbian la nivel planetar s fie deosebit de numeroas i greu de clasificat.
Taxonomia (sistematica) este tiina care se ocup de clasificarea
biologic i const din trei pri aflate n strns conexiune:
Clasificarea - aranjarea organismelor n grupe pe baz de similaritate i
evoluie,
Nomenclatura - denumete grupele taxonomice
Identificarea - reprezint latura practic ce const din procedee prin
care se poate dovedi dac o cultur microbian particular izolat din mediul
su natural aparine unui grup recunoscut taxonomic.
Ca urmare a aprofundrii cunotinelor n domeniul microbiologici,
deoarece prin caracterele lor specifice unele microorganisme nu pot fi clasate
n nici unul dintre cele dou regnuri tradiionale ale lumii vii (vegetal i ani
mal), nc din 1866, Haeckel a propus crearea unui nou regn PROTISTA n
care s fie grupate formele inferioare de via. In baza acelei clasificri, Stainer
n anul 1970 mparte regnul PROTISTA n dou subgrupe: protiste inferioare
n care au fost clasificate microorganismele procariote bacterii/actinomicete i
protiste superioare n care au fost incluse microorganisme eucariote - drojdii
i mucegaiuri.
Clasificarea biologic a lumii vii propus de Whittaker (1969), acceptat
de numeroi taxonomiti cuprinde un sistem de cinci regnuri n funcie de
modul de organizare celular i modaliti de nutriie, avnd urmtoarea
structur:
Regnul Monera - include organisme monocelulare de tip procariot
cu nutriie de tip absorbtiv, cu metabolism fotosintetic sau chimiosintetic.
Reproducere prin diviziune asexuat.
Regnul Protista - include organisme monocelulare de tip eucariot
(inclusiv drojdii). Modul de nutriie este diferit de la un grup la altul, prin
absorbie sau ingestie. Reproducerea - sexuat/asexuat.
Regnul Fungi - cuprinde organisme multinucleate de tip eucariot
(mucegaiuri) cu nuclei dispersai n citozolul hifelor adesea septate, lipsite de
_ I
_ f .__________ i i
. __________________________ - 1 j
. -
-i
14
DAN VALENTINA
____
15
Tabel 1.
Sistematica general a microorganismelor
Supraregn
Caractere generale
I. E U C A R IO T A E
N ucleu definit, separat
prin m em bran de
citozol
A D N + h isto n e n
crom ozom i
Regn
Ram ur
(diviziune)
M IC E T A L IA
(M Y C O T A )
EUM YCOTA
(F U N G I)
PLA N TA E
ALG E
A N IM A L IA
PRO TO ZO A
Alge verzi-albastre
- surse neconvenionale de
proteine
M onocelulare, din care
patogene : Giardia,
Trichomonas, Plasmodium
A D N n m itocondrii i
plasmide
Grupe im portante
16
Supraregn
Caractere generale
II. P R O C A R IO T A E
A D N n citozol
DAN VALENTINA
Regn
Grupe im portante
B A C T E R IA
P R O T O V IR A
R IB O V IR A
- Virusuri ce conin A R N
E U V IR A
D E O X Y V IR A
- Virusuri ce con in A D N
- Prioni - patogeni
transm isibili, ageni ai
m bolnvirilor
degenerative ale sistemului
nervos central.
Ram ur
(diviziune)
17
CAPITOLUL 3
CARACTERIZAREA PRINCIPALELOR
GRUPE DE MICROORGANISME
CU IMPORTANA N INDUSTRIA
ALIMENTAR
r*
C*
M I M * /<m io n X
-J /1
20
DAN VALENTINA
19
Sacch. cerev. e H ip so id e u s
l )
21
22
DAN VALENTINA
23
24
DAN VALENTINA
25
DAN VALENTINA
26
27
28
DAN VALENTINA
nmugurirea. Astfel ntr-o zon (plac) a peretelui celular are loc o nmuiere
enzimatic a peretelui i apare o protuberan - mugurele, care treptat crete
n dimensiuni. ntre celula parental i mugure se perfecteaz un canal - diverticulum prin care se transfer n celula nou format, material nuclear i
citoplasmatic, prin cariokinez i citokinez. Cnd celula fiic va conine toate
componentele necesare unei viei independente^ la nivelul canalului se formeaz
un perete inelar cu o concentraie ridicat n chitin, ce se dezvolt centripet,
pn cnd are loc obturarea i separarea.
Celula fiic, cu activitate metabolic independent poate rmne ataat
de celula mam formnd asociaii sau pseudomkeliu, de exemplu la drojdii
fermentative i oxidaive - formatoare de voal. n mod frecvent celula nou
format se separ de celula parental iar la locul de desprindere rmne vizibil
cicatricea mugural.
n condiii optime de via o celul de drojdie poate forma 9 - 43 noi
celule, apoi celula moare din punct de vedere fiziologic. Celulele diploide pot
produce 23-59 celule fiice n timp ce celulele haploide 2-33 celule. Pentru
drojdiile la care separarea mugurelui are loc prin sciziune, prin nmugurire se
pot forma structuri lineare ce alctuiesc miceliu adevrat.
Prin examinarea ciclului de via al celulei eucariote, a proceselor
complexe ce au loc la cretere i reproducere, se disting mai multe faze, n care
se produc importante transformri la nivel subcelular i molecular. Creterea
celulei are loc n interfaz perioada ntre dou diviziuni nucleare, care poate fi
separat fi trei pri:
'
29
-------------------------------------------------------------------------
') Etapa G1 este timpul n care are loc sinteza activ de ARN, formarea
ribozomilor i a altor constitueni citoplasmatici care determin creterea n
dimensiuni a celulei.
( Etapa S este etapa de sintez n care are loc replicarea activ a ADN-ului.
Sinteza ADN-ului dureaz aproximativ 30 minute n timp ce nmugurirea,
aproximativ 40 minute i reprezint 1/4 din ciclul mitotic. Replicarea
(duplicarea) materialului genetic la fiecare nou generaie de celule, are loc
bidirecional cu separarea de ADN monocatenar pe care apoi se sintetizeaz
copia complementar. Procesul este semiconservativ n sensul c cele dou
molecule de ADN rezultate vor conine fiecare cte o caten veche i una nou
(complementar).
n ADN-ul drojdiei, cele 5 105 perechi de baz n succesiunea lor
specific, alctuiesc uniti de transcripie, gene sau cistroni (secvene de ADN
necesare pentru a produce un ARN sau un peptid), intercalate de secvene
simple (pseudogene) i elemente mobile genetic. Prin transcripie se formeaz
n nucleu molecule de ARN (pseudogene) i elemente mobile genetic. Prin
transcripie se formeaz n nucleu molecule de ARN (mesager, de transfer i
ribozomal) care migreaz prin porii membranei nucleare n citoplasm, unde
prin translaie are loc biosinteza de proteine/enzime, de a cror specificitate
depinde majoritatea reaciilor metabolice.
Replicarea este posibil prin activarea enzimelor, ADN - polimeraza,
ADN - ligaza i endonucleaze, care sunt sintetizate concomitent cu ADN-ul;
procesul dureaz 1 ,2 - 2 ore i are loc nainte de nceperea nmuguririi.
Etapa G2 este o perioada n care celula se pregtete pentru mitoz..
30
DAN VALENTINA
li
31
1. Interfaza
2. Profaza
timpurie
3. Profaza
median
4. Profaza
trzie
5. Metafaza
6. Anafaza
timpurie
7.Anafaza
trzie
8. Telofaza
9. Interfaza
* 1 i*
------- v
* "
DAN VALENTINA
32
1. Profaza
timpurie I
2. Profaza
median I
4. Metafaza I
5. Anafaza I
9. Metafaza II
11. Telofaza II
12. Interfaza
33
Mugure
ftnrwHirt
QStxu'af atfiW
ttf Q/mC
AbrmoJa
an ar/nof o/a
34
DAN VALENTINA
35
Tabel 3
Clasificarea general a drojdiilor
Diviziune.
clasa/ordin
Familie/subfamilie
Ascomycotina/
H em iascom ycctes
Saccharom ycctaccac
Genuri
Specii im portante
Debarvonrivces
Hansenula
Torulaspora
Yarrowia
Zygosaccharomyces
D . hansenii
H . anomala
H . saturnus
I. orientalis
K . lactis, K . tragilis
P. mem branefaciens
P. ferm entans
P. farinosa
Sacch. cerevisiae
Sacch. carlsbergensif
Sacch. bayanus
Saccharom ycopsis
fibuligeia
T. delbrueki
Y. lipolitica
Z. rouxii
c. Nadsonioideac
H anseniaspora
Saccharom ycodes
H . apiculata
Sacch. ludwigii
d. Lipom ycetoideae
Lypomices
Issatchenkia
Kiuyveromyces
Pichia
Saccharomyces
Saccharomycopsis
Basidiomycotina/
Ustilaginalcs
Filobasidiaceac
D euterom ycotina
Cryptococcaceae
Fillobasidiella
Brettanom yces
Candida
K locckera
Rhodotorula
Trichosporon
Sporobolom ycetaceac
Sporobolom yces
B . intermedius
C. m ycoderm a
C. utilis
C. robusta
C. tropicalis
K . apiculata
K . m agna
R h . glutinis
R h . rubra
T. cutaneum
&
37
38^
___________________________________ DAN VALENTINA
39
Torulopsis prezint celule sferice, ovale sau cilindrice. Specii ale genului
ntlnite n mustul de struguri (T. bacillaris, T. stellata) au putere alcooligen
redus. Sunt osmotolerante, psihrofile, sulfitorezistente. Pot produce alterri
ale laptelui concentrat, a siropurilor, a sucurilor.
Trichosporon, gen ntlnit include la fermentarea natural a boabelor
de cacao i poate fi izolat din carnea tocat, carne de pui. Trichosporonpullulans
este predominant i prezint i activitate lipazic. Unele tulpini sunt folosite
la obinerea de SCP.
Zygosaccharomyces cuprinde drojdii haploide cu celule ovale, cu proprieti
fermentative, xerotorelante (osmotolerante). Z. touxii poate crete n medii cu
aw=0,62. Pot produce fermentarea mierii, a siropurilor concentrate de zahr cu
formare de alcool etilic, acid acetic, C 0 2 (Jay, 1992) (Dan V .a., 1999)
3.2.
MUCEGAIURI
(FUNGI FILAMENTOI, MICROMICETE)
Mucegaiurile sunt microorganisme de tip eucariot, monocelulare sau
pluricelulare, difereniate din punct de vedere morfologic i care se reproduc prin
spori formai numai pe cale asexuat sau pe cale mixt (asexuat i sexuat).
Caracterele generale ale fungilor care le difereniaz de alte
microorganisme. Taxonomic, n grupul fungilor sunt incluse drojdiile care se
nmulesc prin nmugurire sau prin sciziune i fungi tipic filamentoi denumii
mucegaiuri. Exist i fungi care pot s prezinte att forme miceliene ct i
forma de drojdii (i invers), ca rspuns la condiiile de mediu. Acetia sunt
considerai fungi dimorfici i includ unii patogeni pentru om, avnd form
micelian la 20-25C i forme de drojdii la 37C. Toi fungii sunt heterotrofi
(chemoorganotrofi) i necesit compui organici preformai ce pot servi att
ca surs de energie ct i pentru biosinteza compuilor ce au carbon n molecul.
Datorit peretelui rigid fungii nu pot ngloba nutrienii nct acetia
absorb nutrienii simpli, solubili ce pot fi obinui din compui macromoleculari
prin eliberarea de ctre fungi a enzimelor extracelulare n mediul ambiant.
Deci fungii sunt eucariotici, caracteristic micelieni, heterotrofi cu nutriie
absorbtiv. Unii fungi atipici sunt grupai n categoria mucegaiurilor
productoare de mucus acetia nu au perei celulari i adesea nglobeaz
nutrienii prin fagocitoz fiind similari cu unele protozoare. Structurile reproductive prezint o variaie extraordinar n dimensiuni i forme ale sporilor i
n modul n carc sunt eliberai de hife. (J.W. Deacon, 1984).
D
2 ____ i
____6 _____ i ! * __ !
*i
DAN VALENTINA
40
I In ii I n m n I i t 1 11 vit< >c><-ni
nnt
41
42
DAN VALENTINA
I
I
I
I
I
I
I
I
I
I
I
I
43
Reticul
endoplasmatic
Aparat
Golgi
Vacuol
vacuoid
Nucleu
Reproducerea mucegaiurilor
I
I
44
DAN VALENTINA
f i m n i l l Hp r ln h ld f P PCfP H p fn if-
rn
f im r *
r\f* rf* c ^ r
n ^ n tm
rlnkl'ir/*-
45
~~
1*
46
DAN VALENTINA
a>/*
*.
47
Fialospori
48
DAN VALENTINA
Sfdii n formarea
Celula
Fuziune
binucleat; nuclear;
binucleat; nuclear;
D iviziu n e
n u c le a r ;
Sfdii n formarea
de zigospori
n u c le a r ;
b a z id io s p o ri;
F o rm a re
a sc o sp o ri.
b a z id io sp o ri
de bazidiospori.
49
Clase
M astigom ycotina
O om ycetcs
Zvpomvcetes
O rd in e
M ucorales
Zygom ycotina
Entom ophthorales
A scom ycotina
(A scom ycctcs)
Plectomycetes
. i'.'. -I..-.:'...
.
Eurotiales
Pyrenomycetes
Sphaem les
Clavicipitales
Hypocreales
Endomycetales
Taphrinales
Pezizalcs
H cm i ascomycetes
Discom ycetcs
Basidiom ycotina
(Basidiom vcetes)
D euterom ycotina
( D cutcrom ycetesfungi im perfeci)
Moniliales
G e n u ri
Achlya, Phytophtora,
Phyttum , Saprolcgnia
Absidja. Blakeslca.
M ucor, Phycom yccs,
Rhizom ucor, Rhizopus,
Tham nidium
Entom ophthora
Byssochlamys,
Em ericella.
Eupenidlium, Eurotium,
Monascus, Neosartorya,
Bctromyccs, Talaromvccs
N eurospora
Claviccps
Gibberella
Erem othecium , Ashbya
M orchella, Tuber,
Sclerotinia
Puccinia
Usdlago
Colletotrichum
Aiternaria, Aspergillus,
Aureobasidium, Botrytis,
Cladosporium ,
Curvularia, Fusarium
G eotrichum ,
Gliocladium ,
M onillia, Paecilom yces,
Pnicillium,
Stachybotris,
Trichoderm a,
_:
DAN VALENTINA
50
52
DAN VALENTINA
Q. ALTERNARIA
G. CLADOSPORIUM
G: MUCOR
G.THAMNIDIUM
G. ASPERGILLUS
G. FUSARIUM
G. PENICILLIUM
G. TRICHODERMA
G. BOTRYTIS
G. GEOTRICHUM
G. RHIZOPUS
G. TRICHOTHECIUM
!..<
54
DAN VALENTINA
3.3. BACTERII
Bacteriile sunt microorganisme monocelulare de tip procariot cu un
cronwzotn unic, cu dimensiuni medii intre 0,5-8/im, care se nmulesc asexuat
prin sciziune binar, izomorfd.
Rspndire. Bacteriile sunt microorganisme cu o larg rspndire n
natur, ca rezultat al adaptrii lor n cursul procesului de evoluie. Rezervorul
natural al bacteriilor este solul unde concentraia de celule poate ajunge la
valori de 107-109 g'1 att n straturile superficiale (bacterii aerobe), ct i n
straturile de profunzime (bacterii aneorobe). Din sol, bacteriile s-au adaptat
3 i-r3iar3 n ane unde rn n ren rratia de feliile noare fi ntre 1 0 r n r 3 n ana de
55
. . . B,,)
*2' .a.
T
In acclai timp trebuie subliniate i unele aspecte negative ale activitii
1).U
n nrlncf-riii Iii\\i*<11 .'< U.-,
IIv
-- 4-:---- --- ----- J -
56
DAN VALENTINA
N ucleoid
In cluziun i
Mr
57
Oligozaharide
Glicoproteine
Protein
Glico- periferic
Protein
Fosfolipid
dublu
stratificat
core
hidrofobic
Citosol
Protein
Proteine
periferice
Gr. acil
lipid
capt
hidrofilic
polar
Fosfolipid
58
DAN VALENTINA
I
I
I
I
I
I
I
I
I
I
I
DAN VALENTINA
60
4
baz folosit n practica de labo
Cltire cu ap 30sec.
rator pentru studiul bacteriilor i
n scop de identificare a acestora,
n tabelul 5 se prezint etapele
Gram-pozitive.
colorrii dupa metoda Gram.
Gram - negative.
Fig. 17. Etapele colorrii Gram
( :a r a c t e r iz a r e a
p r in c ip a l e l o r g r u p e d e m ic r o o r g a n is m e
61
Durata de
aplicare
Reacii
Aspect celule
Celule fr culoare i
dificil de vizualizat
Cristal violet
1 minut, apoi
cltire cu ap
Coloranii bazici
reacioneaz
cu grupe ncrcate
negativ din perete,
membrana i citosol
1 minut, apoi
cltire cu ap
Ambele grupe de
bacterii rmn
colorate n violet
nchis
10-15
secunde, apoi
cltire cu ap
Bacteriile Gram
pozitive
rmn colorate n
violet nchis n timp
ce bacteriile Gram
negative
devin incolore i
dificil de observat.
1 minut; apoi
cltire cu
ap, zvntatc n
aer cald, studiu
cu obiectiv 9 0x
imersat
n ulei de
cedru
Celulc Gram
pozitive rmn
colorate n violet
nchis (culoarea
colorantului primar)
n timp ce celulele
Gram negative devin
colorate n roz sau
rou (culoarea
colorantului de contrast'
DAN VALENTIN/.
62
Exterior
63
DAN VALENTINA
64
A
Punctiform
Circular
Filamentoas N eregulat
Rhizoid
Elipsoid
Profil
Plat
Margine
C rescut
Convex
Pulvinat
U m b onat
Ci Ci C >Ds
2
U niform
Ondulat
L obat
Erodat
Filamentoas
Buclat
65
G ra m pozitive
G ra m negative
Perete celular
Subire, cutat
C om ponena n aminoacizi
n peretele celular
N um r mic
N um r marc
Endotoxine
Absene
Prezente constant
N cccsanil n nutrieni
Sensibilitatea la antibiotice
Relativ ridicat
Relativ sczut
E fect de dizolvare
n 1% K O H
N u se dizolv
Se dizolv
Efectul detergenilor
anionici
Cretere ncetinit,
liz moderat
Liz cu lizozim
U or lizate
M ai rezistente la liz
Cristal violet-bactcriostatic
M ai sensibile
Puin sensibile
C oninut n magneziu
Ridicat
Sczut
(A nderson, D .A ,1 9 8 0 )
DAN VALENTINA
66
(b)
c- o o o
e e
t 0 <D0
DAN VALENTINA
68
B
C
D
Fig. 23. Etape n formarea endosporilor
69
DAN VALENTINA
70
71
72
D A N VAI U N I IN \
73
DAN VALENTINA
74
3.4. VIRUSURI
ARN
75
r j 1 C aractere m orfologice
O
particol viral este alctuit din
genom - respectiv o molecul de acid
nucleic mono sau bicatenar, cu diferite
forme de compactizare. n genomul
virusurilor animale i la bacteriofagi este
prezent ADN n timp ce la virusurile
vegetale ARN. Acidul nucleic este
nconjurat cu uniti proteice denumite
protomere, cu o repartizare ordonat (capsomere) i rol n protecia genomului, a
formei i n recepie de ctre celulele ce
urmeaz a fi parazitate.
Acidul nucleic i m oleculele
proteice asociate alctuiesc nucleocapsida,
cu diferite forme geometrice (cubic,
Fig. 25. Structur viral
icosaedric .a.).
Masa molecular a virusurilor este
de 100 - 120 KDa, iar 50% din aceasta este dat de acidul nucleic. La unele
virusuri mari poate fi prezent o pseudomembran denumit peplos, la suprafaa
creia sunt integrate molecule de proteine/enzime care favorizeaz ptrunderea
particolei virale, n celula agresat.
Virusurile sunt sensibile la diferii factori ale mediului; astfel pot fi inac
tivate pe cale termic la temperaturi de 60-80C/30 minute, n schimb rezist
la temperaturi negative i pot fi conservate prin congelare. Pe cale chimic
inactivarea virusurilor poate fi fcut cu alcooli, detergeni, formol .a., n
schimb au rezisten la antibiotice.
.Ciclul vital al virusurilor '
n replicarea viral se pot distinge mai multe etape:
- adsorbia, cnd are loc contactul infecios, particola viral gsete
locusul receptor pe suprafaa celulei i are loc adsorbia specific
- nglobarea (ptrunderea) este posibil prin transport sau endocitoz
decapsidarea, const n separarea moleculelor capsomere i eliberarea
acidului nucleic
- replicarea, etap ce are loc dup decapsidare cnd acidul nucleic viral
impune celulei parazitate biosinteza proteinelor timpurii i sunt create prin
biosintez, componentele necesare ce alctuiesc matria pentru biosinteza a
DAN VALENTINA
76
>
- morfogeneza, etapa de asamblare prin care moleculele de acid nuclei
viral sunt nconjurate de unitile protomere.
eliberarea particolei virale se poate face prin: exocitoz, transport
prin locusuri ale celulei, sau prin liza peretelui celulei parazitate.
Particolele virale mature (denumite virioni), pot s continue infecia
celulelor adiacente din esutul viu i are loc fie distrugerea acestuia, fie o cretere
anarhic, anormal ce conduce la formarea tumorilor.
Procesul de infecie se oprete cnd esutul este distrus sau cnd intervine
un factor de inhibare a ciclului litic viral.
Un succes al biotehnologiei este obinerea prin inginerie genetic a
interferonului, substan care inhib adsorbia i transmiterea unor virusuri.
Unele virusuri pot avea concomitent un ciclu lizogenic, avnd capacitatea s
se integreze n cromozomul celulei atacate, care se va reproduce normal, pn
cnd un factor favorizant va elibera nucleul vital ce va induce etapele ciclului
litic.
FAGII
Sunt virusuri care paraziteaz celulele microbiene i n funcie de natura
celulei parazitate, se cunosc bacteriofagii i micofagii.
B A C T E R IO F A G II
Sunt virusuri adaptate s paraziteze celula procariot i au fost pui n
eviden de ctre F. Tvvort (1915) i dHerelle (1917).
Rspndire i rol. Bacteriofagii pot face parte din microbiota intestinal
i se elimin prin materii de dejecie. In condiii naturale, bacteriofagii au un
rol ecologic important, ca ageni de
depoluare a apelor fecalo-menajere.
n industria alimentar bacte
riofagii pot contamina i distruge
Core
Collar
(cilin d ru a x ia l
culturi de bacterii lactice. Din acest
C ap om e re
motiv sunt folosite culturi starter
. lizorezistente. In ingineria genetic
F ib re
ale cozii
bacteriofagii sunt folosii pentru
transfer de gene i obinerea de
tulpini bacteriene modificate ge
netic.
Structura. Bacteriofagii sunt
formai dintr-o capsid cu contur
hexagonal, care nchide genomul. n
Fig. 26. Structura bacteriofagului
interiorul capului hexagonal se afl
A
77
M ICO V IRUSURILE
Sunt mai puin studiate compa
rativ cu bacteriofagii. Au n structur
ARN i pot parazita fungi apar-innd
genurilor: Penicillium, Asperjjillus,
Mucor, Fusarium , Saccharomyces
cerevisiae .a. (Zarnea, 1990)
DAN VALENTINA
78
CAPITOLUL 4
COMPOZIIA CHIMIC
A MICROORGANISMELOR
_______________________ 79
organismelor vii; de asemenea In aceast grup mai intr Na, K., i Fc, necesare
n cantiti mari la unele microorganisme specifice.
elementele minore n cantiti de ordinul microgramelor din care fac
parte: Cu, Mg, Zn, Co .a. Dintre acestea Mg are un rol important n creterea
termorezistenei endosporilor bacterieni, Co intr n componena vitaminei
g % su
Carbon
50
Oxigen
20
Azot
14
H idrogen
Fosfor
S u lf
Potasiu
M agneziu
0,5
Calciu
0,5
Fier
0 ,2
Sodiu
C lor
0,5
C o-constituient al vitaminei B 12
0 ,3
(Y. Stanier 1 9 7 7 )
4 .1 . R O L U L A P E I N C E L U L A M IC R O B IA N
Prin analize de compoziie s-a stabilit c bacteriile conin ap n proporie
de 61-85% iar drojdia de panificaie 67-70% . Cantitatea mare de ap n celulele
microbiene se justific prin rolul acesteia n viaa celulei. Apa reprezint n
nediul n care se solubilizeaz diferitele substane necesare nutriiei, n care au
oc reaciile enzimatice, nct viaa celulei nu este posibil n absena apei libere.
Apa n celula microbian poate fi ntlnit sub dou forme: ap liber, ap
olosit de ctre celula vie pentru desfurarea normal a metabolismului i
Iap legat de compui organici: protide, acizi nucleici, fosfolipide, sub forma
1 AP
1+
R esurse pentru
metabolism energetic
i constructiv
Transformri
Ireversibil
M oarta
Via
Trans ormri
ireversibile
Celule
mtcrobtene
Condiii
optime
AP*
|
tl
Preanabicz
Anabioz
I
I
I
I
81
I
I
I
I
|
I
I
I
4 .2 . C O M P U I O R G A N IC I
Raportai la % subtan uscat, compuii organici reprezint 86-98% i
ndeplinesc n celula microbian trei roluri de baz:
Rol structural, intrnd n compoziia nveliurilor celulare; sunt de
natura hidrailor de carbon, ca de exemplu: glucani, manani, celuloze.
- Rol funcional, participnd activ la desfurarea proceselor metabolice,
ca de exemplu: protide cu funcii enzimatice, vitamine cu rol de coeziune,
unele fosfolipide .a.
- Rol energetic, prin acumularea intracelular a compuilor de rezerv
de natur glucidic: trehaloza, glicogenul i incluzii lipidice.
DAN VALENTINA
82
P ro tid e
L ip id e
A cizi
nu cleici
D rojdii
4 5 -5 5
1-6
4 -1 0
M ucegaiuri
10-25
1-7
1-3
Bacterii
4 0 -5 0
10-15
13-25
Virusuri
5 0 -9 0
1-5
5 -5 0
Dintre compuii organici, substanele de natur glucidic reprezint 1640% i sunt ntlnite n structura pereilor celulari (glucani, manani, celuloze)
sau n structuri extraparietale ale bacteriilor (dextran la Leuconostoc mesenteroid.es,
xanthan la g. Xanthomonas, acetat de celuloz la g. Acetobacter, fosfomanani la
drojdii). Glucidele simple nu se ntlnesc n stare liber, fiind uor metabolizate,
dar intr ca uniti de baz n structura poliglucidelor sau a acizilor nucleici
(riboza, deoxiriboza). In celule de drojdii i mucegaiuri se acumuleaz n faza
activ de cretere, trehaloza, glicogenul, iar la bacterii -granuloza, substane ce
pot fi consumate de celule n condiii de nfometare. Unele mucegaiuri pot
produce dup ce a avut loc faza activ de cretere, substane toxice -micotoxine
de natur hidrocarbonat.
Un alt grup important de compui organici l formeaz protidele, cu
procente de 50-55% din biomasa uscat. Structura lor este similar cu cea
ntlnit n produse de origine vegetal sau animal sau pot s prezinte caractere
specifice (ex.mucorine la mucegaiurile inferioare). n general protidele
microbiene au o compoziie echilibrat n aminoacizii eseniali; spre deosebire
de protidele de origine animal acestea conin o concentraie mai redus n
aminoacizii cu sulf - metionin i cistein, iar spre deosebire de protidele
vegetale conin mai mult lizin i triptofan. Datorit coninutului ridicat de
protide,biomasa microbian (dup uscare i inactivarea celulelor) se poate folosi
n nutriia animalelor sau a obinerii dup purificare a proteinelor din
monocelulare folosite ca aditivi alimentari.
In celula microbian numeroase protide ndeplinesc funcii de
biocatalizatori: enzimele pot fi constitutive - mereu prezente n celula vie, si
enzime adaptive (induse), endogene sau exogene sintetizate ca urmare a
adaptrii metabolismului la noi condiii de mediu. Din totalul proteinelor
celulare 1/3 l formeaz nucleoproteidele ce intr n structura materialului
nuclear/nucleu. Unele bacterii pot produce protide cu efect toxic -ca de exemplu
toxina butulinic produs de Clostridium botulinum, enterotoxine produse de
bacterii ale g. Staphylococcus, endotoxine produse de g. Salmonella .a.
A
83
N um r de celule
M asa n grame
2 - IO13
2 ,9
O M -IO *
1-5
Bacterii
2 -IO 10
0 ,0 2
Virusuri
1 0 11
0 ,0 0 0 5
M ucegaiuri superioare
84
DAN VALENTINA
CAPITOLUL 5
NUTRIIA MICROORGANISMELOR
Nutriia este un proces fiziologic complex prin care microorganismele
i procur elementele necesare i energia pentru biosinteza compuilor celulari,
pentru cretere, reproducere i ntreinerea funciilor vitale.
Procesul de nutriie se desfoar n cadrul metabolismului celular prin
reacii de degradare a compuilor macromoleculari n compui cu mas
molecular redus, ce pot fi transportai n interiorul celulei, reacii exergonice
ce au loc n cadrul catabolismului celular. Concomitent cu reaciile de catabolism, folosind compuii simpli i energie, celula vie sintetizeaz compuii celulari
eseniali pentru cretere, n cadrul anabolismului. Viaa celulei microbiene
este posibil att timp ct cele dou procese se desfoar concomitent.
Analiza compoziiei celulei microbiene arat c 95% sau mai mult din
subtana uscat este alctuit din cteva elemente majore: carbon, oxigen,
hidrogen, azot, sulf fosfor, potasiu, calciu, magneziu i fier. Aceste 10 elemente
principale mai sunt denumite macroelemente deoarece sunt cerute de
microorganisme n cantiti mari, n concentraii mai mari de 10'4M.
Primele ase elemente (C,0,H,N,S,i P) sunt componente ale glucidelor,
lipidelor, protidelor i acizilor nucleici. In timp ce C,0,H ,N sunt componente
de baz ale principalelor combinaii organice, sulful este necesar pentru sinteza
aminoacizilor: menionm cisteina i n unele coenzime, iar fosforul intr n
compoziia nucleotidelor ATP, GTP, NAD, FAD, n acizi nucleici (ADN,
ARN), a acizilor teichoici i a fosfolipidelor. Celelalte 4 elemente (K, Ca, Mg,
Fe) exist n celule sub form de cationi i au un rol bine definit. Potasiul (K+)
este necesar pentru activitatea numeroaselor enzime inclusiv a celor implicate
n biosinteza de proteine. Calciul (Ca2+)printre alte funcii contribuie la creterea
termorezistenei endosporilor bacterieni (dipicolinat de Calciu) i ca stabilizator
al unor exoenzime (amilaze i proteaze). Majoritatea esterilor fosforici se gsesc
n complex cu Mg. Fosfolipidele peretelui celular bacterian, formeaz
combinaii chelatice cu ioni de Mg2+. De asemenea Mg are rol de cofactor
pentru multe enzime i este stabilizator pentru ribozomi i membrane celulare.
Fierul (Fe2+ i Fe3+) sunt folosii n sinteza de citocromi i drept cofac
tor pentru enzime i proteine transportatoare de electroni.
Pe lng bioelementele principale, toate microorganismele necesit un
numr variabil de bioelemente minore denumite i microelemente sau
micronutrieni. Majoritatea celulelor necesit mangan, zinc, cobalt, molibden,
NUTRIIA MICROORGANISMELOR
85
nichel i cupru, n cantiti att de reduse nct le pot lua din ap sau din
componenii normali ai mediilor dc cultur. Aceste microelemente pot intra
n componena unor enzime (cofactori, cu rol n catalizarea reaciilor enzimaticc
i meninerea structurii proteinelor).
Alturi de bioelementele majore i minore comune, unele microor
ganisme au necesiti particulare ce reflect condiiile mediului ambiant n
care au habitatul natural. (De exemplu bacteriile halofile care cresc n apa
lacurilor srate i a oceanelor necesit concentraii crescute n sodiu (Na+)
(Prescott L.M et.a.1990)
Celula bacterian poate sintetiza ntre 3000-6000 tipuri de molecule
diferite din care aproximativ 50% sunt reprezentate de molecule de ap i
ioni.
Celula de drojdie poate conine un numr variabil de molecule din care:
Ioni anorganici........................................................................12
Proteine................................................................................. 300
A R N .................................................................................... 1000
A D N ...........................................................................................1
Lipide...................................................................................... 40
Glucide.................................................................................... 50
Molecule aunor compui intermediari............................ 500
Se apreciaz c far a lua n calcul moleculele de ap, celula de drojdie
poate sintetiza pn la 500 molecule mici i peste 4000 de macromolecule
(Konovalov. S.A, 1980)
Pentru a sintetiza aceast diversitate de compui, microorganismele au
posibilitatea s-i procure elementele majore i minore din compoziie, prin
procesul de nutriie, iar energia necesar pentru biosintez, pe cale chimic;
este cazul microorganismelor chimiosintetizante,sau prin fotosintez, de ctre
bacteriile fotosintetizante.
Microorganismele ntlnite n industria alimentar sunt microorganisme
chimiosintetizante i i obin energia prin degradarea compuilor organici cu
eliberarea energiei poteniale a substratului nutritiv (alimentului) pe care acestea
se dezvolt, dnd de cele mai multe ori alterarea specific a acestuia. Prin
substrat nutritiv se nelege acel mediu care conine ap, surse de energie (de
natur glucidic), surse asimilabile de azot, sruri minerale, i facultativ, factori
de cretere.
T I P U R I N U T R I IO N A L E I S U R S E N U T R IT IV E
Necesarul microorganismelor pentru carbon, hidrogen i oxigen poate
fi adesea obinut din aceiai compui organici. Multe microorganisme pot
Heterotrofi
Surse de energie
Fototrofi
Chematrofi
Surse de hidrogen
sau electroni
Litotrofi
Organotrofi
NUTRIIA MICROORGANISMELOR
87
88
DAN VALENTINA
poate utiliza peste 100 surse diferite de C, alte bacterii de exemplu din genul
Leptospira folosesc ca surs principal de C i energie numai acizii grai cu
numr mare de C n molecul (Prescott M.L et. al, 1990)
Dintre sursele de carbon naturale ntlnite n materii prime alimentare
sau utilizate n compoziia mediilor de cultur, sunt preferate urmtoarele:
- poliglucide: amidon, celuloza, substane pectice, care pot fi folosite n
special de ctre bacterii i mucegaiuri productoare de enzime specifice
extracelulare. Drojdiile fermentive ale g. Saccharomyces nu produc amilaze,
motiv pentru care nainte de fermentare, plmezile amidonoase sunt zaharificate
chimic/enzimatic.
- monoglucidele (hexoze, pentoze), diglucide, reprezint att surs de
carbon ct i de energie pentru toate microorganismele i sursa de baz n
nutriia drojdiilor.
- acizi organici (acid lactic, malic, acetic) pot fi o surs de carbon pentru
mucegaiuri i unele drojdii.
- alcoolii sunt utilizai de ctre drojdii oxidative ( g. Candida, g. Pichia)
i de bacterii (g. Acetobacter).
Deoarece carbonul reprezint max. 50% din substana uscat a celulei
la alctuirea mediilor de cultur se calculeaz cantitatea de nutrient ce trebuie
adugat (n funcie de masa molecular i de coninut n carbon),pentru
obinerea unei cantiti corespunztoare n biomas.
5.3. N U TR IEN I CU N, P, S
Pentru cretere, microorganismele necesit cantiti mari de azot, fosfor
i sulf, iar organotrofii ie pot procura fie din sursele organice cu carbon fie din
compuii anorganici.
Se tie c azotul (10-14% din substana uscat a celulei) este necesar
pentru sinteza de aminoacizi, purine, pirimidine, unele lipide, coenzime .a.
Multe microorganisme pot folosi azotul din aminoacizi i amoniac prin
ncorporarea direct, cu ajutorul unor enzime (glutamat dehidrogeneza,
glutamin sintetaza). Unele bacterii pot reduce i asimila azotul atmosferic
folosind un sistem de nitrogenaze i au un rol vital n asigurarea circuitului
natural al azotului.
Pentru organotrofi, nutriia azotat este asigurat de compuii organici
macromoleculari cu azot,produii de hidroUz ai acestora, precum i de alte
sruri cu azot (sruri amoniacale, azotai .a)
Protidele pot fi folosite n nutriie numai de ctre microorganisme ce
produc proteaze extracelulare, respectiv, bacterii - ageni ai putrefaciei i
mucegaiuri - ageni ai putrezirii. Drojdiile care produc numai proteaze
intracelulare, folosesc n nutriia azotat produi de hidroliz ai protidelor i
NUTRIIA MICROORGANISMELOR
89
90
DAN VALENTINA
(^ M O D A L I T I D E TRA N SPO RT A N U T R IE N IL O R
N C E L U L A M IC R O B IA N
Pentru realizarea procesului de nutriie, este obligatoriu ca nutrienii s
ptrund n interiorul celulei pentru a fi metabolizai. Cile de transfer a
moleculelor-nutrient sunt specifice. Astfel microorganismele nu accept
substane pe care nu le poate asimila, au capacitatea de a transporta n celul
nutrienii de care au nevoie chiar dac acetia se afl n concentraii reduse,
(contra unui anumit gradient de concentraie), iar moleculele nutrient trebuie
s ptrund prin membrana plasmatic cu permeabilitatea selectiv, care nu
las s treac liber orice substan.
91
1. DIFUZIE PASIVA
2. DIFUZIE FACILITAT. A
DAN VALENTINA
92
Interior
1o
s i
o ---------------o
---- rvw
Glucoza
*
Situs de
, tegare o
glucozei
Spaiul
sxtraceiular
Glucoza
legat
Membrana
p la s ir iic
C ito s o t
/
D-glucopermeaza
Legarea
glucozei
la permeaz
Modificarea
conformaional
a permeazei
Revenirea
ia conformaia
iniial
93
Prin acclai sistem pot li importai aminoacizi legai de ARN-t sau sunt
eliminai unii catabolii din celul.(Voicule N.,1997)
Microorganismele adesea se ntlnesc n habitate n care coninutul n
nutrieni este foarte redus nct pentru cretere este important transportul i
concentrarea lor n celul. n aceast situaie transportul se face contra
gradientului normal de concentraie, cu consum de energie, prin transport
activ i translocaie de grup.
Transportul activ are urmtoarele particulariti: transportul n celul
este asigurat chiar n absena gradientului de concentraie i se realizeaz cu
consum de energie. Acest transport a fost
demonstrat n cazul drojdiilor care pot acumula
intracelular o cantitate mai mare de glucide i
aminoacizi dect cea existent n mediul de
cultur. Se admite c o molecul-transportor
care consum o cantitate de energie pentru a se
Legend
activa i a produce o legtur instabil cu
N-molecul nutrient.
molecula nutrientului, printr-o reacie catalizat
E^jj-enzime.
enzimatic, transfer nutrientul i l elibereaz n
TMransportor acf-ivat. interior. Transportul se activeaz ca urmare a
energiei eliberate prin transformarea ATP n
Fig. 31. Model pentru
ADP. (fig. 31)
transport activ
Translocaia de g
activ ntlnit la drojdii i mucegaiuri n care intervine un sistem enzimatic
complex de transferaze, care permit ptrunderea glucidelor prin membrane
sub forma esterilor fosforici. Astfel fosfoenol-piruvatul se poate combina cu
molecula de glucid din exteriorul celulei i se transform n piruvat i esterul
fosforic al glucidului, care sub aceast form este transportat n interior.
Celulele pot face schimb cu mediul exterior nu numai cu ioni i glucide
ci i cu compui macromoleculari. Astfel bacteriile de exemplu pot secreta
proteine (enzime exogene, proteine din structura capsulelor) printr-un proces
de exocitoz.
Este posibil i ptrunderea unor astfel de macromolecule n interiorul
celulei prin procese de endocitoz.
Endocitoza poate fi ntlnit la drojdii cnd regiuni mici ale plasmei
sufer plieri n interior cu formare de vezicule cu diametrul de aproximativ
0,lnm .
Endocitoza poate fi mediat de anumii receptori plasai pe suprafaa
membranei care recunosc macromolecula iar regiunea plasmalemei ce conine
complexul receptor ligand sufer invaginri i are loc internalizarea compusului
nutritiv macromolecular.
DAN VALENTINA
94
In cazul microorganis
melor acvatice-protozoare,
Intern
exist sistemul de pinocitoz
E x te rn
prin care nutrientul din exte
1| Transport
rior este nglobat n interior (se
' ' electron
1
formeaz
o pictur suspen
- '- T f r .r J ''Sb*tr
dat
i
are
loc eliberarea n
V-interiorul celulei a moleculei
nutrient). Bacteriilc folosesc
s
* ' . N
2
Na4
N a*
preponderent 2 sisteme diferite
/ V
[/
de
transport a nutrienilor i
O
anume att translocaia de grup
ct i simportul.
Prin translocaie de grup
3
___________
pot fi transportate: glucoza,
manitolul, N-acetilglucozamina, fructoza, maltoza i gli
cerolul, proces n care sunt im
plicate 4 proteine transpor
toare.
Numeroase microor
ganisme, mai ales bacteriile,
mai pot folosi n afara energiei
din legturi macroergice
pentru transport intracelular,
aa numitul gradient protonic
rezultat n urma transportului I
de protoni si ioni care acio- |
neaz permanent n celula vie.
Se admite c acest gradient i
Fig. 32. Transport prin gradient protonic
protonic acioneaz ca o pom-1
p electrochimic deoarece
Na+ de exemplu, ajungnd n i
exterior poate lega o molecul de nutrient, poate modifica conformaia
proteinei membranare, s adere la molecula nutrientului i mpreun s ajung
n interiorul celulei. Daca intracelular ionul de sodiu se afl n concentraie.
redus, el se elibereaz de pe molecula nutrient i este transferat n exterior J
(Fig. 32).
Prin translocaie sau transport de electroni sau protoni bacteriile pot.
acumula intracelular concentraii de substane 10-100 ori mai mari dect n |
mediul extern.
N U T RI IA M IC R O O R G A N IS M E L O R
95
5 .6 . M E D II D E C U L T U R
U.f mediu de cultur, reprezint un substrat nutritiv complex, cu rol de
aliment, care trebuie s asigure microorganismului ce urmeaz a f i cultivat,
cantitatea necesara de ap, surse de carbon, azot, sruri minerale, factori de cretere,
substane care s i furnizeze cantitatea de energie ct i toate elementele folosite de
celul n procese de cretere, reproducere i ntreinerea funciilor vitale.
Mediul de cultur trebuie s ndeplineasc urmtoarele condiii:
s corespund din punct de vedere nutritiv,
s aib o concentraie a substanelor dizolvate n mediu care s nu
influeneze negativ schimburile osmotice ale celulei,
s nu conin substane toxice sau s genereze compui toxici n
urma creterii culturii microbiene,
s aib un anumit pH sau rH
s fie steril (lipsit de microorganisme vii) astfel nct s se dezvolte
numai celulele introduse prin inocul.
Mediile de cultur se folosesc n practica de laborator sau n practica
industrial i sunt foarte difereniate n funcie de scopul urmrit. In tehnica
de laborator mediile se folosesc pentru izolarea din medii naturale a diferitelor
microorganisme, pentru obinerea de culturi pure, pentru cultivarea acestora
n scopul obinerii de biomas sau pentru ntreinerea culturilor pure
selecionate. In scopuri industriale se folosesc pentru obinerea de celule sau a
compuilor rezultai prin activitatea microorganismelor selecionate.
n funcie de destinaia lor, mediile de cultur se difereniaz astfel:
Medii de cultur generale, care asigur dezvoltarea unui numr mare
de specii i genuri deoarece includ n compoziia lor substane aliment
diversificate. Dintre mediile de cultur generale folosite n practica laboratorului
de microbiologie menionm bulionul de carne lichid sau gelozat (BCA);
mediul tripton - extract de drojdie - glucoz - agar (TEGA) pentru cultivarea
bacteriilor i mustul de mal - agar (MMA) pentru cultivarea drojdiilor i
mucegaiurilor. Mediile de cultur pot fi definite atunci cnd n compoziia lor
96
DAN VALENTINA
intr substane chimice pure ce pot fi exact dozate conform reetei sau medii
complexe n care intr compui naturali cu o compoziie variabil.
Medii de cultur selective sunt medii cu o compoziie chimic definit
care permit dezvoltarea unui grup restrns de microorganisme sau chiar a
unei specii. Aceste medii conin pe lng substane nutritive i substane cu
efect inhibitor asupra altor microorganisme nsoitoare ntlnite n microbiota
din care se face izolarea culturii ce dorim s o selecionm. Un mediu selectiv
folosit la determinarea bacteriilor coliforme este BLBV (bulion-bil-lactoz
verde briliant) n care srurile biliare inhib alte bacterii, n timp ce coliformii
simt adaptai. Numrul mediilor selective este foarte mare i permit izolarea
unor specii de interes industrial sau se folosesc pentru identificarea,
determinarea, prezena microorganismelor contaminante, n produse
alimentare.
Medii de cultur de difereniere - aceste medii permit separarea
speciilor n funcie de anumite caractere biochimice atunci cnd acestea au
fost selectate dintr-o microbiot heterogen. De exemplu dac pe un mediu
selectiv s-au izolat bacterii ale grupului coliform, prin folosirea mediilor de
difereniere pot fi definite speciile componente ale grupului.
Medii de mbogire (fortifiate) sunt destinate separrii i cultivrii
unor microorganisme pretenioase din punct de vedere nutritiv i care se afl
n numr redus n produsul analizat din punct de vedere microbiologic. Pentru
a le pune n eviden se fac treceri din produsul alimentar n mediul de
mbogire, steril i se asigur nmulirea celulelor izolate. Din mediu n care
s-a produs nmulirea acestora se face transfer de celule pe medii de difereniere
iar rezultatul se exprim prin prezena/absena lor. De exemplu la determinarea
bacteriilor din genul Salmonella - ageni ai toxiinfeciilor alimentare, normele
microbiologice stabilesc absena lor n 25 g produs.
Clasificarea mediilor de cultur se poate face n funcie de compoziie i
provenien, n medii naturale i medii sintetice.
Mediile naturale sunt cele mai utilizate deoarece reproduc condiiile n
care se dezvolt microorganismele. Mediile naturale de origine vegetal sunt
sucuri de fructe, de legume, mustul de mal, legume fierte/terciuite (morcovi,
cartofi) fructe, infuzii de plante .a. Ca medii de origine animal se folosesc
dup sterilizare, laptele, snge (pentru bacterii facultativ patogene), zerul, came,
bulionul de carne, ficat, ou.
In condiii de laborator se folosesc att medii lichide, n special pentru
cultivarea microorganismelor facultativ anaerobe, pentru studiul proceselor
fermentative, medii solide - pine, cartofi felii, .a i frecvent medii solidificate
obinute prin adugarea n mediile lichide a unor ageni de solidificare.
Pentru solidificarea mediilor de cultur se folosete: agar-agarul
(geloza) un poliglucid obinut din alge ale genului Gelidium avnd n structur
NUTRIIA M1CR()()R(!AN1SMT',1,<)R
_______
97
98
DAN VALENTINA
CAPITOLUL 6
METODE DE IZOLARE I OBINERE
A CULTURILOR PURE
Cultura pur reprezint o biomas de celule prin reproducere dintr-o singur
celul aflat intr-un mediu nutritiv steril, cu volum limitat. Cultur pur este
considerat i colonia care se formeaz ca rezultat al izolrii unei celule, sau a unei
uniti formatoare de colonie, atunci cnd aceasta este localizata pe un mediu
nutritiv solid. Puritatea unei culturi sepoate obine i prin repicare, deci prin transfer
de celule din eprubeta ce conine cultura pur, n alt vas cu mediu de cultur steril.
n practica de laborator se cunosc numeroase metode prin care se poate
realiza separarea unei singure celule din microbiota heterogen a mediilor
naturale. Metodele cunoscute i practicate n laborator n scopul izolrii
culturilor pure, pot fi clasificate n metode fizice-mecanice i metode biologice.
6 .1 . M E T O D E F I Z I C E D E IZ O L A R E I O B IN E R E
A C U L T U R IL O R P U R E
Metode prin rspndire
Se folosesc pe scar larg, fiind uor de executat, avnd ca principiu
rspndirea celulelor din medii naturale unde acestea se afl n numr mare,
prin diluare n medii lichide sau prin diseminare mecanic pe suprafaa mediilor
sterile.
Metode scarificate. n placa Petri se repartizeaz un mediu de cultur
adecvat, de exemplu MMA/BCA i dup solidificarea mediului, cu firul metalic
se recolteaz celule din mediul natural i se execut trasri pe suprafaa mediului,
astfel nct diversele celule rmn distanate ntre ele. Prin termostatare 48-72
ore, din colonia care corespunde microorganismului ce trebuie sa fie izolat, se
face repicare n eprubete cu mediu solid nclinat (eprubete cu slant-agar) i
astfel se obine o cultur pur.
Metoda n strii este similar, n schimb, drept suprafa de rspndire
se folosete mediul nclinat din 2-3 eprubete, prin transferul de celule din
mediul natural, prin realizarea de striuri, n mod succesiv. Aceste metode se
A
I I
99
1
1. METODA
Hu/Ai/6 puri
'pe Slan/Aqor.
n STRii
2 . METODE
SCARIFICATE
In c o u /a rt
ti
sca
MM
(*WC)
*Qutfuro
fHjr
3. METODA DE IZOLARE IN
PLCI
(KOCH)
b ac fb rii
aer&bt.
(37-C)
S o c l e fi/
Qftotrobc.
V
MET
100
DAN VALENTINA
101
O
metod biologic clasica este metoda Burri prin care se face separarea
microorganismelor n funcie de necesarul de oxigen pentru cretere. Dintrun dintr-un mediu natural se face inocularea n BCA fluid (42C) i dup
uniformizare acesta se introduce ntr-un tub de sticl, prevzut la un capt cu
dop de cauciuc. Prin rcire celulele sunt imobilizate n gel i prin termostatare,
n funcie de accesul oxigenului din aer, n zona tubului prevzut cu dop de
cauciuc se vor dezvolta bacterii anaerobe, intermediar bacterii microaerofile
iar n stratul de mediu la care aerul a ptruns prin dopul de vat al tubului,
bacterii aerobe (Fig. 33-4).
Prin metode biologice pot fi selectate bacteriile sporogene din medii
naturale, pe baza termorezistenei deosebite a endosporilor Astfel Bacillus
subtilis se poate izola din infuzie de fn pe care formeaz un voal cutat, deoarece
endosporii rezist la fierbere n timp ce alte bacterii sunt distruse.
Numeroase metode de izolare se bazeaz pe introducerea n medii de
cultur a unor substane chimice cu efect inhibitor asupra microorganismelor
de care trebuie separat cultura dorit. De exemplu prin introducerea de 0,02%
actidion are loc inhibarea dezvoltrii drojdiilor aflate n amestec cu bacterii.
Metoda este folosit pentru izolarea unor bacterii ce pot produce contaminarea
drojdiilor folosite sub form de culturi pure n industrii fermentative.
102
DAN VALENTINA
103
104
DAN VALENTINA
li
106
DAN VALENTINA
Microorganisme
Bacterii
- Escherichia coli
- Bacillus subtilis
- Clostridium botulinum
- M ycobacterium
tuberculosis
Fungi
- Saccharom yces cerevisiae
- M onilia fructicola
40
40
37
37
0 ,3 5
0 ,4 3
0 ,5 8
-1 2
30
25
2
30
(dup L .M . Prescott, 1 9 9 0 )
107
I
I
108
DAN VALENTINA
109
DAN VALENTINA
110
CAPITOLUL 7
I
I
DAN VALENTINA
112
T m in im
Toptim
T m a x im
4
6 ,5
0
10
30
2 5 -3 0
3 0 -3 7
37
37
6 0 -6 5
40
46
44
45
75
0
1-3
2 1 -2 3
4 -1 5
28
4 5 -5 0
15
40
5 0 -5 8
Bacterii
Pseudomonas fluoresccns
Staphylococcus aureus
Entcrococcus faccalis
Escherichia coli
Bacillus sthcarotherm ophillus
Fungi
Candida scottii
Saccharom yces cerevisiae
M ucor pusillus
V ibrio
-5
Yersinia cnterocolitica
-2
Enterococcus
Listeria
m onocytogenes
Clostridium botulinum
Salmonella
Staphylococcus
1
3,3
4
6 ,7
115
116
PAN VALENTINA
1()SC
1 2 0 *C
1 3 0 C
1 4 0 C
150C
1 6 0 C
Bacillus cercus
1' !
4 ,2
2 ,6
1,3
0 ,7
Bacillus subtilis
2 7 ,8
4,5
3,1
2,1
1,1
0 ,5
2857
3 8 ,6
8 ,8
3 ,9
2 ,4
1,4
M ucegaiuri i drojdii
Bacterii asporogene
3 0 m inute la 6 5 C
Pnicillium, Aspergillus
Bissochlam ys, M icrobacterium ,
Alcaligenes, Enterococcus
Endospori bactcrieni
cu
rezistena mic
10 m inute la 90C
Endospori bactcrieni cu
rezisten medie
3 0 m inute la 100C
Endospori bactcrieni cu
rezisten ridicat
10 m inute la 115C
4 minute la 120C
Endospori bactcrieni cu
rezisten de excepie
4 5 m inute la 120C
Clostridium
thcrm osaccharolyticum
Xezones
DAN VALENTINA
119
CONCENTRAIA DE OXIGEN
Aerul atmosferic conine aproximativ 20% oxigen. Microorganismele
necesit oxigen pentru biosinteza compuilor organici i pentru desfurarea
proceselor de oxido-reducere biologice.
n funcie de necesarul n oxigen procurat din aer se distingi tipuri de
comportare difereniat a microorganismelor i anume:
- aerobe sunt dependente de oxigenul din aer, se dezvolt la suprafaa
lichidelor, a mediilor solide. Oxigenul servete ca acceptor final de electroni
transportai prin catena respiratorie. Celulele eucariote folosesc oxigenul n
sinteza steroHlor i a acizilor grai nesaturai (Bacterii acetice .a.).
- facultativ anaerobe, nu necesit 0 2 pentru cretere dar cresc mai bine
n prezena sa. Se dezvolt bine n medii lichide n care solubilitatea oxigenului
din aer este mai redus (Bacterii lactice .a.)
- anaerobe aerotolerante nu necesit 0 2 pentru cretere i cresc la fel
de bine n prezena sau absena sa. (Enterococcus faecalis, Lactobacillus
plantarum).
120
DAN VALENTINA
ENERGIA RADIANTA
Lumea vie este bombardat de radiaii electromagnetice cu lungimi de
unde ntre 1 0 4 la 10* nm n acest domeniu microorganismele sunt influenate
^
de urmtoarele radiaii: .----- Radiaii ionizante (a, P, y j)cu lungimi de und mai mici de 12 nm au
energie radiant intens ce acioneaz prin ionizare cu eliberarea de ioni, radicali
liberi ce acioneaz prin ruperea legturilor de hidrogen, oxidarea i formarea
dublelor legturi, modificri n structur, polimerizri. n prezena oxigenului
aciunea radiaiilor ionizante este amplificat prin generarea de radicali OH'
sunt intensificate procese de oxidare, denaturarea ADN-ului, ceea ce conduce
la moartea celulei. Dintre acestea radiaiile y, emise de 60Co au o putere mare
de penetrare i de aceea se pot folosi pentru sterilizarea ambajalelor. Eficiena ^
acestor radiaii depinde de forma i starea celulei; celulele cu forma coccus
sunt mai rezistente dect formele bacilare .iar formele vegetative sunt mai
sensibile dect n stare sporulat. Succesiunea n sensul creterii rezistenei la
efectul distructiv al radiaiilor este urmtoarea: bacterii Gram-negative >
bacterii Gram-pozitive > fiingi > virusuri. Desi efectul radiaiilor ionizante
se manifest asupra tuturor microorganismelor, acestea au o radiosensibilitate
diferit care se poate aprecia prin determinarea valorii D 10 (adic doza absorbit
care produce distrugerea a 90% din populaia iniial)
n tabelul 15 se dau valori pentru D 10 ale bacteriilor ntlnite pe alimente.
Tabel 15. Valori D 10 pentru bacterii ntlnite pe alimente
Bacterii
D10 (KGy)
Clostridium botulinum
1,5 - 2 ,5
Escherichia coli
0 ,2 -0 ,4 5
Lactobacillus sp.
0 ,8 -2 ,2
M icrococcus radiodurans
Pseudomonas sp.
2 ,1 -8
0 ,0 7 -0 ,3 2
122
DAN VALENTINA
123
Datorit procesului dc cavitaie carc are loc la suprafaa celulei, pot avea
loc rupturi ale peretelui celular, cu modificarea arhitecturii celulare sau pot
interveni schimbri la nivelul plasmalemei, ceea ce determin distrugerea n
proporie de 30-50% a celulelor de drojdie.
Asupra celulei bacteriene, ultrasunetele pot cauza o detaare a moleculelor
de ADN de locusurile prin care acestea se leag de membrana plasmic.
La frecvene mici (=17 KHz generate magnetostrictiv) se observ efectul
dc stimulare al ultrasunetelor ca urmare a unor deplasri sau deformri ale
unor organite intracelulare (lizozomi, mitocondrii) i modificri ale
proprietilor plasmalemei cu influen asupra permeabilitii i vitezei de trans
port a nutrienilor.
Ultrasunetele de joas frecven i intensitate stimuleaz procesul de
nmugurire al drojdiei Saccharomyces cerevisiae ca rezultat al activizrii
echipamentului enzimatic i a unui contact mai bun al suprafeei celulelor cu
nutrienii mediului.
Tratarea celulelor de drojdie cu ultrasunete la o frecven de 905 KHz,
nu a condus la distrugerea total a celulelor, iar celulele rmase viabile s-au
caracterizat printr-o capacitate fermentativ superioar. Se presupune c prin
lezarea parial a nveliurilor celulare se elibereaz enzimele intracelulare i
crete viteza de fermentaie. (Schmidt P, 1987; Dan V, Picu M., 1998).
Ultrasunetele se pot folosi la sterilizarea apei, a saramurilor n industria
preparatelor de carne i pentru distrugerea pereilor celulari n scopul extragerii
unor compui valoroi localizai intracelular.
FACTORII M ECANICI
M
M
124
DAN VALENTINA
Bujie filtrant
Vas de sticl
Pomp
de vacuum
Vas colectare
Amplasare
pe mediu Endo-agar
Incubare 24 h/35C
/','!(
125
126
DAN VALENTINA
12 7
128
DAN VALENTINA
culturi starter adaptate la doze crescute din substana la care alte microorganisme
sunt sensibile. Un exemplu ar fi folosirea de dioxid de sulf n fermentarea
mustului de struguri cu drojdii de cultur sulfitorezistente. Pentru a evita
adaptarea microorganismelor n practic se recomand alternarea substanelor
dezinfectante cnd se constat o reducere a eficienei.
Factori fizico-chimici. Fiecare substan chimic acceptat n industria
alimentar se caracterizeaz prin:
spectrul de aciune reflect efectul specific sau generalizat. Astfel
pentru conservani acesta poate fi general (fungistatic) sau specific levuristatic,
bacteriostatic, n timp ce pentru dezinfectani efectul poate fi microbicid (gen
erai), bactericid, virulicid, fungicid.
putere antiseptic apreciaz efectul substanei chimice n raport cu o
substan etalon stabilindu-se astfel o scar de apreciere. Ca substan etalon
se folosete fenolul, cu stabilirea coeficientului fenolic.
Cf = Doza letal a fenolului/Doza letal a substanei analizate
Se prepar serii de diluii cu fenol i cu soluia dezinfectant n analiz.
Se face inocularea cu microorganismul test Salmonella typhi sau Staphylococcus
aureus i se face termostatarea la 20C sau 37C. La intervale de 5 minute se
scot probe i se inoculeaz n mediu nutritiv i se face incubarea timp de 3 zile.
Cea mai ridicat diluie care omoar bacteriile test dup o expunere de 10
minute dar nu i dup 5 minute se ia n calcul pentru coeficientul fenolic. De
exemplu dac pentru fenol diluia a fost de 1:90 iar pentru dezinfectantul X
egal cu 1:450, coeficientul fenolic este egal cu 5. n timp ce alcoolul etilic 70
are coeficientul fenolic egal cu 0,04, clorul gazos are valoarea 200.
Puterea antiseptic este dependent de aciunea temperaturii i anume
cu creterea temperaturii cu 10 grade a soluiei dezinfectante puterea crete de
20 ori; de aceea n industria alimentar dezinfecia se face cu soluii la
temperaturi de 60-70, cnd eficiena este maxim.
Factori dependeni de mediu. Eficiena substanei chimice depinde
de solubilitate i de factorii care o influeneaz. Substanele chimice nu trebuie
s reacioneze cu componentele mediului. Multe substane cu efect
antimicrobian nu pot fi folosite ca urmare a faptului c reacioneaz cu protidele.
De exemplu clorul i hipocloriii i reduc efectul antiseptic dac se introduc
n ape cu grad ridicat de impurificare.
Eficiena substanelor conservante poate crete ca urmare a unui efect
de sinergism, efect cooperant ce permite utilizarea n amestec a mai multor
substane n concentraii mai mici dect cele necesare pentru a avea aceeai
eficien, la folosirea lor separat.
130
DAN VALENTINA
Acidul sorbic este asimilat dc organismul uman iar doza zilnic admis
este dc 25 mg.kilocorp '.zi. Este utilizat la conservarea sucurilor de fructe, a
margarinei, a brnzemrilor i a carcaselor de carne (pulverizare cu soluie 10%).
La conservarera vinurilor dulci se adaug n doze de 300 rng.dnv3.
Majoritatea drojdiilor sunt inhibate la 50-100 mg.dm5 n timp ce Sctuharomyces oviformis la 200 mg.dnv3/
Clorura de sodiu are efect conservant ca urmare a reducerii de awi
prin eliberarea n ap a CI'. Aciunea conservant este dependent de
concentraie astfel la 4-5% inhib bacterii strict anaerobe, la 10% bacterii
facultativ anaerobe i mucegaiuri n timp ce bacteriile de putrefacie sunt oprite
n dezvoltare la concentraie mai mari de 15%. Nu este eficient i nu
controleaz creterea bacteriilor patogene sau toxicogene. (Se menioneaz c
Hacillus anthracis - agentul antraxului i-a meninut viabilitatea 6 luni n soluie
saturat de sare.)
Nitriii i nitraii de potasiu. Din totalul de nitrii sau nitrai consumai
zilnic prin aportul legumelor, a apei, a cerealelor, laptelui .a., 5-15% reprezint
sruri adugate la obinerea preparatelor de carne.
Ionul nitrat este extrem de stabil i poate fi transformat n organism, n
nitrit de ctre nitrat-reductaza din microbiota bucal.
Ionul nitrit este foarte reactiv i instabil i se poate transforma n monoxid
de azot cu efect antibacterian, ca urmare a interferrii cu anumite etape
metabolice. Astfel nitritul inhib bacteriile de putrefacie anaerobe, inclusiv
pe cea a lui Clostridium botulinum i producerea de toxin botulinic ct i
bacteriile Gram negative (Salmonella). Efectul antibacterian este datorat
reaciei cu grupri a-aminice ale aminoacizilor din proteinele din citosol
(inhibare tip Perigo) sau reaciei cu gmpri SH ale compuilor cu sulf care nu
mai pot fi folosii de microorganisme.
Efectul este mai evident la pH <5,8 i este sinergie n prezen de NaCl.
Un aspect tehnologic pozitiv l constituie reacia dintre monoxidul de
azot i mioglobin cu care formeaz un pigment stabil prin oxidarera Fe+2 din
hem.
Pe de alt parte ionul nitrit, n mediu acid formeaz acidul azotos care
n anumite condiii, n prezen de amine, poate genera nitrozamine ce pot fi
cancerigene n proporie de 75%.
Nitriii n exces au efect toxic asupra organismului uman deoarece pot
reaciona cu atomul de Fe al hemului, care devine nefuncional i poate
determina coninutul n vitamin A i B r
Experi n aditivi alimentari ai Comitetului mixt FAO/OMS au fixat
doza zilnic admis pe care un consumator o poate absorbi zilnic pe parcursul
vieii, fr risc. Aceasta este de 5 mg nitrat i respectiv 0,1 mg nitrit raportat la
kg greutate corporal.zi. (Lenges J, 1992).
132
DAN VALENTINA
Dezinfectani chimici
FACTORI DE CONTROL AI (
I UII MU ROORCANISMFLOR
133
Formaldehid
Oxidul de etilen
O xidul de propilen
Brom ura de metil
P-propion lactona
Celule
vegetative
28
2 .3 0 0
9 .2 0 0
3 9 .0 0 0
1,1
suspensie
apoas
250
1 6 .6 0 0
6 6 .5 0 0
3 3 3 .0 0 0
10
Endospori n:
stare uscat
3500
3 2 .7 0 0
1 3 1 .0 0 0
4 9 3 .0 0 0
1 3 ,2
(M atvcev V E , 1 9 8 1 )
I N F L U E N A F A C T O R IL O R IN T R IN S E C I
A S U P R A M IC R O O R G A N IS M E L O R
Factorii intrinseci se refer la diferitele componente i structur a
produselor alimentare care influeneaz activitatea microorganismelor prezente
pe/n produs. n funcie de prezena concomitent a mai multor factori, din
totalul microorganismelor ce pot contamina produsul este favorizat activitatea
unui numr restrns, de obicei 1-4 specii care vor produce i alterarea sa
specific.
Produsele alimentare au o compoziie chimic foarte diversificat i un
grad de ncrcare cu microorganisme foarte diferit,ce depinde de acela al
materiilor prime i auxiliare, de factorii extrinseci ce intervin la prelucrare i
pstrare.
Dintre factorii intrinseci, dependeni de alimentul care va reprezenta
substratul pentru activitatea microorganismelor (adugate prin culturile starter
sau ocazional contaminante), mai importani sunt:
]/ Compoziia chimic a alimentelor reprezint un factor important
deoarece microorganismele necesit pentru cretere surse de carbon, azot, sruri
minerale, factori de cretere i ap disponibil. Cu ct alimentul este mai com
plex cu att asigur condiii favorabile pentru creterea mai rapid, a unui
numr mai mare de microorgaisme i este mai alterabil. Produsele alimentare
lichide se altereaz mai rapid dect cele solide pentru c celulele microbiene
vin n contact direct cu nutrienii solubili. Produsele vegetale (fructe, legume)
135
136
DAN VALENTINA
sunt mai sensibile dect cele din genul Escherichia, Salmonella, Staphylococcus.
Costridium botulinum are pH-ul minim pentru producerea de neurotoxine
egal cu 4,8, iar la Staphylococcus aureus pH minim pentru cretere este de 4,2.
Tabel 17. Valori limit de pH pentru creterea microbian
Grupe
microorganisme
Valori minime
Valori optime
Valori maxime
D rojd ii
1 ,5 -3 ,5
4 - 6 ,5
8 -8 ,5
M ucegaiuri
1 ,5 -3 ,5
4 ,5 -6 ,8
8-11
Bacterii
4 ,5
6 ,5 -7 ,5
11
Staph. aureus
4 ,2
7 -7 ,5
9 ,3
Escherichia coli
4 ,4
6 -7
9 ,0
Pseudomonas aeruginosa
5 ,6
6 ,6 -7 ,0
8 ,0
Bacillus sp.
5-6
6 ,8 -7 ,5
9 ,4 -1 0
Clostridium botulinum
4 ,8
C lostridium pcrfringcns
5,5
6 -7 ,6
8,5
C lostridium sporogcnes
5 -5 ,8
6 ,8 -7 ,5
9 ,4 -1 0
A cetobacter sp.
5 ,4 -6 ,3
9 ,2
Bacterii lactice
3 ,2
3 ,5 -6 ,5
4 -4 ,6
5 ,8 -6 ,6
6 ,8
3,5
5 ,5 -6 ,5
5 ,5 -6
6,5
Lactobacillus acidophillus
Lactobacillus plantarum
L eu con ostoc cremoris
8 ,2
13 7
138
DAN VALENTINA
Produse alimentare
Produse cu 2 0 % zahr sau 7 % sare
(salam uri, produse panificaie)
0 ,9 5 -0 ,9 1
0 ,9 1 -0 ,8 7
M ajoritatea drojdiilor
0 ,8 7 -0 ,8 0
M ajoritatea m uccgaiurilor
Finuri, orez cu 1 5 -1 7 % ap
0 ,8 0 -0 ,7 0
0 ,7 5 -0 ,6 5
M ucegaiuri xcrofite
Produse cu 10% ap
0 ,6 5 -0 ,6 0
Fructe uscate cu 1 5 -2 0 % ap
0 ,5 0
N u se dezvolt microorganism e
Caramele cu 8 % ap
0 ,4 0
N u se dezvolt microorganism e
Produse cu 3 -5 % ap
0 ,2 0 -0 ,3 0
N u se dezvolt microorganism e
Produse cu u < 5 %
Escherichia coli
0 ,9 5
Bacterii halofile
0 ,7 5
0 ,9 4
0 ,6 2 -0 ,6 5
Penicilium cxpansum
0 ,8 5
Aspergillus flavus
0 ,7 8
Aspergillus repens
0 ,7 0
139
Conservarea prin uscare, n soluii de zahr sau sare se explic prin aceea
. i diminuarea awului antreneaz plasmoliza celulelor microbiene. Mucegaiurile
un osit un aw mai ridicat pentru formarea de spori i micotoxine dect cel
mu esar pentru germinarea sporilor sau cretere.
Este important de precizat c
indiferent de temperatur, capacitatea microorganismelor de a crete
. sie redus, cnd aW este sczut.
domeniul de awla care creterea are loc este cel mai extins la temperatura
optim de cretere.
prezena nutrienilor necesari n aliment crete domeniul de awn care
microorganismele pot supravieui (JayM. J, 1970)
n timp ce produsele conservate prin uscare sufer frecvent mucegirea
deoarece mucegaiurile necesit cele mai mici cantiti de ap pentru germinare
>i cretere, n produse cu valori ridicate de awalterarea este frecvent produs
tic bacterii care au o viteza mai mare de reproducere i ctig n competiie,
linele microorganisme se pot adapta la scderea de aw iar dac produsul
alimentar este pstrat la temperatura lor optim de cretere acestea i extind
d<meniul valorilor eugenezice de aw.
Substane naturale cu efecte antimicrobian. Unele produse vegetale
Iblosite n alimentaie conin substane denumite fitoncide. Astfel ceapa conine
.ilicina, usturoiul - alil sulfonatul, de asemenea conin fitoncide hreanul,
mutarul, cuioarele, scorioara .a. Unele fructe pot conine benzoat, salicilat
(este cazul fructelor de pdure). In produse de origine animal, n ou este
prezent lizozimul, n lapte prospt este prezent pe lng lizozim, lactenine,
lactoperoxidaz. Desigur c aceste substane au un spectru specific i pot
influena activitatea microorganismelor sensibile.
I N F L U E N A F A C T O R IL O R IM P L IC I I
Inter-relaiile ce pot aprea n condiii naturale ntre microorganisme
care triesc n acelai mediu sau pe acelai aliment sunt foarte complexe. Din
cauza proprietilor variate ale diferitelor specii i a intensitii cu care decurg
procesele lor metabolice, aceste relaii au un rol important asupra vieii
microorganismelor i indirect asupra modificrilor pe care le sufer alimentele,
n biotehnologii alimentare n care se folosesc culturi mixte de microorganisme
aflate ntr-un anumit raport cantitativ, procesul tehnologic este astfel dirijat
nct s fie favorizat multiplicarea sau formarea anumitor produse de me
tabolism. Calitatea produselor finite i conservabilitatea lor este dependent
de corelaii care se stabilesc ntre microorganismele existente la un moment
dat pe alimentul care le asigur necesitile nutritive.
140
DAN VALENTINA
I
I
Microorganisme antagonice
Clostridium botulinum
Pseudomonas aeruginosa,
Bacillus subtilis, Lactobacillus sp.
Clostridium perfringens
Clostridium sporogenes,
Lactobacillus sp.
Staphylococcus,
Strcptococus, Pseudomonas,
Enterobacter
Salm onella
Escherichia coli
142
DAN VALENTIN
CAPITOLUL 8
PROCESE METABOLICE
ALE MICROORGANISMELOR
I APLICAII N INDUSTRIA ALIMENTAR
8 .1 . M E T A B O L IS M U L M IC R O B IA N - F U N C II D E B A Z
Viaa celulei microbiene n condiii compatibile este determinat dcl
caracterele genetice care i imprim un anumit metabolism, determinat de'
totalitatea reaciilor biochimice catalizate secvenial de enzimele celulei vii, |
prin care se asigur transferul de mas i energie ntre celul i mediul ambiant.
Viaa microorganismelor continuitatea lor genetic este asigurat dej
desfurarea concom itent a celor dou laturi interdependente ale
metabolismului i anume catobolismul i anabolismul.
Catabolismul - denumit i metabolism degradativ este rezultatull
reaciilor biochimice catalizate enzimatic prin care compuii macromoleculari I
sunt transformai n produi uor asimilabili cu eliberarea concomitent al
energiei poteniale a compuilor cu rol de nutrient (reacii exergonice). Cele
dou funcii specifice ale reaciilor de catabolism sunt:
- Eliberarea energiei chimice din nutrieni (sau generalizat din molecuiecombustibil) i stocarea acestei energii n compui macroergici prin reacii de1
fosforilare, energie disponibil pentru celula microbian i folosit n procese
vitale.
- Cea de a doua funcie care se desfaoar concomitent cu eliberarea d e1
energie, const n conversia substanelor nutritive ale mediului ambiant n
molecule precursori (glucide, aminoacizi, purine, pirimidine), respectiv
subuniti constitutive ce servesc drept material de construcie pentru I
biostructura compuilor celulari.
Anabolismul - metabolismul constructiv, de biosintez, reprezint I
totalitatea reaciilor biochimice endergonice catalizate de enzime, prin care se
realizeaz biosintez compuilor celulari, creterea i reproducerea microbian.
- Funcia specific anabolismului este cea de asamblare a subunitilor
rezultate prin catabolism n compui cu rol plastic i funcional (acizi nucleici,
protide, lipide, polioze). Biosintez acestor compui necesit din partea celulei
un consum de energie.
In cadrul metabolismului microbian are loc biosintez i biodegradarea
intracelular a unor biomolecule de tipul proteinelor/enzimelor, care nu i
143
DAN VAI.HNTINA
144
P ro tid a
P o lio z e
Lipide
8 .2 . B IO E N E R G E T IC M IC R O B IA N
(M E T A B O L IS M O X ID A T IV E N E R G E T IC )
Procurarea energiei este o proprietate vital a celulei microbiene i se
realizeaz prin eliberarea energiei chimice a diferitelor alimente i formarea
compuilor macroergici prin procesul de fosforilare.
n<<)( :e s e m e t a b o l ic i : a u ; mu
iu h >ih , a n is m i .i .or
r ----------------
cO
+ H20
Q;
ADP + P|
ATP
ADP + Pi
>
A jp
Substratul oxidat poate servi drept precursor sau dac nu este util celulei,
nc |X)ate elimina n mediu sub form de catabolit. Cantitatea de energie obinut
prin catabolism, poate fi folosit direct n biosintez, iar energia escedentar
t ste stocat n compui macroergici prin procesul de fosforilare denumit astfel
dcoarece componenta macroergic care stocheaz energia rezultat, conine
grupri fosfat. Principalii compui macroergici sunt: ATP considerat valuta
energetic forte a celulei, format din AMPPP (cu eliberarea a 30 kj/mol
prin desfacerea legturii macroergice); acetil fosfatul (Acetat~P); ADP.
PROCESE
EXERGONICE
PROCESE
ENDERGONICE
BIOSINTEZ
FERMENTAII
ANAEROBE
FOSFORILARE
OXIDATIVA
REPRODUCERE
TRANSPORT
CLDUR
146
DAN VALENTINA
|
L
I
r
I
|
B
1
L
I
F
.
I
m o c i s r : M U T A U O l.H I M
l M I I 1 ) < ) ! ; A N I S M E L O R ____________________________ 1 4 7
0doreduceri IntraceMare
148
DAN VALENTINA
Microorganisme
selecionate
Fermentaii oxidative/
produse dc fermentaie
Microorganisme
selecionate
Saccharomyces sp.
Acetic
(acid acetic, H ,0 )
Bacterii: Acetobacter
Gluconobacter
Aspergillus niger
Propionic (acid
propionic, acetic, CO,)
Bacterii
Propionibacterium
Aspergillus niger
Bacterii: Clostridium
Oxalic, fumaric
Mucegaiuri.
C 0 2,H 2
149
8 .3 . F E R M E N T A IA A L C O O L IC
Fermentaia alcoolic este un proces anaerob prin careglucidele fermentescibile
Mint metabolizate prin reacii de oxido-reducere sub aciunea echipamentului
rnzimatic al drojdiei n produii principali (alcool etilic i C O J iar ca produi
\rcundari: alcooli superiori, acizi, aldehide .a.
Agenii tipici ai fermentaiei alcoolice sunt drojdiile genului Saccharomyces care pot prin fermentarea glucidelor s produc mai mult de 8 alcool
etilic.
Fermentaia alcoolic este un proces ntlnit la numeroase microor
ganisme, dar care produc prin fermentare cantitti mai reduse de alcool etilic
comparativ cu drojdiile. Astfel mai pot produce alcool etilic bacteriile: Bacillus macerans, CI. acetonoetilicus, Zymomonas) dar ele nu sunt considerate ageni
tipici.
Proprieti biotehnologice ale agenilor tipici de ferm entaie
Pentru a putea fi folosite n practic drojdiile genului Saccharomyces
sunt studiate i selecionate n funcie de unele proprieti care le recomand
pentru utilizare industrial, cum ar fi:
Puterea alcooligen care se refer la concentraia mare de alcool ce se
poate acumula cnd n mediu exist un exces de zahr. Drojdiile sunt sensibile
la creterea concentraiei n alcool i n timp ce drojdiile cu putere alcooligen
slab (Kloeckera, Torulopsis) sunt inhibate la o concentraie n alcool de 4-6
drojdiile de vin i spirt (Saccharomyces cerevisiae var. ellipsoideus, Saccharomyces
cerevisiae-cerevisiae) au o putere alcooligen mare i produc fermentaie alcoolic
pn se acumuleaz 16-18 alcool.
Alcoolorezistena se refer la capacitatea drojdiei de a continua
fermentaia la creterea concentraiei de alcool i de a demara fermentaia n
prezen de 8% alcool.
Sulfitorezistena este o proprietate important a drojdiilor de vin care
se pot adapta la concentraii de 200-500 mg S 0 2 dm3care pot influena negativ
activitatea altor drojdii din must neadaptate (peliculare sau oxidative), ca urmare
a scderii potenialului de oxidoreducere.
Se presupune c rezistena la S 0 2este datorat i capacitii acestor drojdii
de a excreta aldehid acetic ce poate lega S 0 2 care astfel i reduce efectul
levuristatic.
Capacitatea de floculare i pulverulena - proprieti datorate structurii
peretelui celular i a modificrii de pH i rH din timpul fermentaiei. Drojdiile
floculante pot forma asociaii ce se depun mai uor, n timp ce drojdiile
DAN VALENTINA
151
Maltoza
_________ ^
2 Glucoz
Invertaz
Celobioza_________ 2 Glucoz
L a cta z S
Lactoza
152
DAN VALENTINA
153
154
DA N VALENTINA
_______________ 155
r.
~H. ^9H,
Glucoza
Cihidro*i(icetof>-<-fofaf
l uoara-6 -fosfat
| (Uterul Im ftftfton)
yB- ^
O
H w OH
-A D P H N L V
Fructoz
^ "a .
OH
AOP
Fructara-6-foifat
(lrul lui Keober^
H ^ N f_ J _ y
JJ5
OH
CHO
Fruchaa-li-dloito
a sttn l luiHortm-Jwnj)
h-
- oh
CHtOPOiH,
(jliccnrwldthid3-fosfo*
r rio io fo jfa t-
0 -C -C K P O jH ,
H -C -O H
+ NAO*+HjPO*
I
-------
CHjOPOrt
-NAOH. H
COOH
H -C -O H
-t-AOP
tT ICtr n? H
I
---------CHOPOjHj
Acid
l.S-drfoslogliceric
H -C -O H fA IP
C H ^P O ^j
Add S-foifogficene
fortogliceraimuteno
1
fostoaruvaf-
cooh
i
hdrofara
H - c - o p o ,H ,
^
CHjOPOjHj
CHjQH
" M ,
Aad 2-fosfogSccnc
cooh
Piruval-- cooh
i
Kinaza l
c - v P O r t + ^ B P ^ : c - oh
CM,
Acid fufoenolpiruvlc
L i,
Acid
enolpiruvic
COOH
c o + a tp
CHj
Acri
piruvic
*0
IH
C
j
PiruvafdecortKnilatt
.......** CHCHO+CO!
Aldehidd acehd
r
l
AlartdehtdrosKiaea rn-nw
r*
CHjNADH.H* ----------- C
Hj +NAO*
Fig. 39. Biochimismul fermentaiei alcoolice (Cotea V, 1985)
156
DAN VALENTIN
2-
c =o
C -O P
OH
NADH
+ H+
CH 2-O H
NAD+
H2o
C H 2 -O H
I
*
C -O H
C -O H
C -O P
CH
Pi
2-
OH
15 7
C OO H
H - C OO H
CH - NH2
CH - OH
CHO
I
+H20
I
I
CH2
------------------------- c h 2 -------------------------------- CH2
I
- NH3
CH2
I
COOH
CH2
I
COOH
CH2
I
COO H
acidului succinic
pnm ol
m e c a n is m
C0~5Co*
c o -s c *
h , c - cooh
FvrfloratMrc- .
Ai doilea m e c a m y n
f unoroza
c -c o o h
^ genw^
1
"
NAOH-H _
H0-CH-C00H H00C~CH
2
h ?c -c o o h
"HU
Acid m a lic
Al treileo m ecanism
A c id u m a n e
COOH
M 9H
'
- nAU
H? C00H
,, _
2 -COOH
COOH
Gluma toxido-
reduefaza _
? =0
cooh
Occarbonlaza
oxidativ
CHj
Acid glutomic
COOH
Acid cetoglutanc
cq
158
DAN VALENTINA
-CO2
R - CH - C O O H -------------I
>>
R - CH2 - OH
-N H j
nh2
H - COOH + R/CHO
159
C H 3 C H O
+
CH3 - CHO
CH 3 - C O O H
n c a n tita te m a re
I -----------
H2
CH3 - CH2OH
NaHSOs
-------
CH3 ~
C- H
NaS03
160_______________ _
Acid piruvic
+
Aldehid
3 fosfog liceric
8 .4 . F E R M E N T A IA L A C T IC
Fermentaia lacticA este un proces anaerob prin care glucidele fermentescibile
sunt metabolizate sub aciunea echipamentului enzimatic al microorganismelor n
acid lactic ca produs principal fi ca produse secundare: diacetil, acetoin, acid ace
tic, alcool etilic fi COT
Calea metabolic de producere a acidului lactic este frecvent ntlnit n
lumea microbian, n schimb randamente superioare de conversie a glucidelor
n acid lactic sunt ntlnite la bacterii i mucegaiuri. Dintre acestea, bacteriile
161
162
DAN VALENTINA
163
1. Genul Streptococus
1.1. Grupul streptococilor lactici inclui n genul Lactococcus cu
.|>cciile: Lactococcus lactis; Lactococcus lactis biovar diacetilactis; Lactococcus lactis
bwvar acetoinicus i Lactococcus cremoris (syn. Str. cremoris - streptococul
smntnii).
1.2. Grupul viridans, bacterii ce aparin genul Streptococcus cu specii
importante: Streptococcus salivarius subsp. thermophillus (SST) (syn. Streptou h x u s thermophillus) cultur folosit la fabricarea iaurtului i Str. bovis.
1.3. Grupul streptococilor fecali, denumii i enterococi, cu specia
icprezentativ Str. fecalis.
1.4. Grupul streptococilor patogeni, cu speciile Str. pyoneges (agentul
scarlatinei) i Str. agalactiae (agentul mastitei, transmisibil prin lapte colectat
dc la vaci bolnave).
2. Genul Lactobacillus (syn. Lactobacterium), include aproximativ
SO de specii clasificate n funcie de tmeperatura optim de activitate i modul
dc fermentare a glucidelor n homofermentativi - lactobacili care produc numai
acid lactic i cantiti minore de substane de arom i n heterofermentativi
lactobacili productori de acid lactic, acid acetic, diacetil, COr
2.1. Lactobacili homofermentativi
a) Termofili (To=40-50C)
Lactobacillus delbruecky, subspecia delbruecki
Lactobacillus delbruecki, subspecia lactis
Lactobacillus delbruecki, subspecia bulgaricus (syn. Lactobacterium
bulgaricum, LDB - cultur pentru prepararea iaurtului).
b) Mezofili (T0=30-35C)
Lactobacillus acidophillus
Lactobacillus helveticus
2.2. Lactobacili facu ltativ heterofermentativi nezofili
Lactobacillus plantarum
Lactobacillus casei
Lactobacillus sake
2.3. Lactobacili heterofermentativi, mezofili
Lactobacillus brevis
Lactobacillus viridiscens, Lb. fermeni
Lb. iulinus (syn. Sporolactobacillus inulinus, fermenteaz inulina)
Lb. bifidum (syn. g. Bifidobacterium bifidus)
3. Genul Leuconostoc - include bacterii sub form de coci, diplococi,
heterofermentativi - produc prin fermentaie acid lactic, alcool etilic, C 0 2, iar
prin biosintez, poliglucidele de tip dextran; sunt mezofile. Dintre speciile cu
importan practic: Leuconostoc mesenteroides sbsp cremoris; Leu. citrovorum i
Leu. paracitovorum - bacterii care pot folosi ca surs de carbon - citraii;
164
DAN VALENTINA
L(+)lactat + NAD
...
Pi ruvat + NADH + H+
D-lactatdehldrogenaz
D (-)la cta t + NAD
,,,
Piruvat + NADH + H+
...
D (-)lactat
+ 2 ADP + 2P.
2 CH 3-CHOH-COOH + 2 ATP + 75 kj
165
(3-galacctozidaz
Lactoza --------------------------------- > Glucoz + Glucoz
n timp ce glucoza este metabolizat direct pe calea EMP, galactoza este
transformat pe urmtoarele ci metabolice:
a) Calea D-tagatozei 6P (g. Leuconostoc) (Fig. 41)
Lactozo 6P
I Fosfogalactozidaz
Galactozo 6P
G lu c o z i-------
Calea EM P
Galactozo 8P-
( Izomerazd
TagatozA 6P
ATD
Tagatozo6Pkinaza
Tagatozo 1,6P
j Aldolaz
F o s fo d lo x i-
to n i
Triozo P-izomaraza
'
"
, p
giicerlci
Calea EM P
Galacto-kinazi
ADP
Galactozo 1P
Galactozo lu rid il transferaz
Galactozo-UDP
UDP-flal.4 opimerazfl
Glucozo-UDP
UDP-fllucozo-fosforilaz
1'
G lu cozo 1P
Fotfogluco-mutazfl
Glucozo 6P
__________________ ^
Calea EM P
166
ATP-J
ADR
6IUC0C0 6P*
{-------CH 3 - C O -C O O H
C H j-C O -C O O H
TPP
CH3 - C 0 - COOH.TPP
CH j - CO - COOH.TPP
co2
CH - CHO.TPP
CH3 - CHO
CO j
Diacetitslntetazi
CH 3 - CHO
C H j-C H O H -C O -C H j
(acatoini)
C H ,-g -J -C H ,
16 7
b)
Lactococcii aromatizani (L. lactis-diacetylactis, L. lactis cremoris)
produc n lapte cantiti de 0 , 1 -1,3 mg % diacetil care pot fi mrite prin adaos
de citrat, controlul aciditii i al gradului de aerare.
Q In Uz
<pH2 - C O O H
CH3-C O O H
A cid acetic
HO - C COOH
CH2 - COOH
A cid citric
COOH
CO
I
QH2
-*
CH3 -C O -C O O H
A cid piruvic
COOH
A cid oxalacetic
D IA C E T IL
DAN VALENTINA \
168
G lucozi
ADP
ATP
Glucqzo 6P
NADP*
NADPH + H-
6 P -G lu c o n o -S -la c to n
6P Gluconat
NADP*
C 02
NADPH H+
Ribulozo 5P
Ribulozo 5 P epimerazfi
Xilulozo
MM 5P
F o sfoce to la zi
Acetil-P
A ld e h id 3 P
i^^-NADPH +H*
g lic e r ic
2
P|
ADP
AQE^
NADP*
EMP
CHj-CHO
2 ATP
ATP
_____ N A D P H + H *
w
N A D P '"
CH3 -C H 2-O H
- *
CHj-COOH
A lcool etilic
Acid a c e tic
169
8 .5 . F E R M E N T A IA P R O P IO N IC
Ferm entaia propionic este un proces anaerob prin care substratul
Irrmentescibil, acidul lactic, sub aciunea complexului de enzime ale bacteriilor
Iiropionice - agenii tipici - este transformat n: acid propionic, acid acetic fi COT
n afara bacteriilor propionice (g. Propionibacterium), formarea prin caubolism a acidului propionic este ntlnit la bacterii anaerobe ale g. Clostridium
(CI. propionicum) i g. Veillonella.
Bacteriile propionice descoperite n 1906 de E.V Freudenreich i O.
Icnsen sunt rspndite n natur n: tractul digestiv al animalelor, n lapte i
brnzeturi din care pot fi izolate.
C aractere m orfofiziologice ale bacteriilor propionice
Bacteriile propionice se prezint sub form de bastonae subiri i scurte,
cu capetele rotunjite i dimensiuni (2-4)x(0,5)/im. n condiii nefavorabile se
produce o aplatizare a terminaiilor celulei avnd o form similar cu cea a
corynebacteriilor.
Sunt bacterii imobile, Gram pozitive, anaerobe. n aerobioz cresc greu
,.i prezint forme alungite, ramificate V, Y sau chinezisme. Pe mediu de bulion,
i arne, agar formeaz colonii lenticulare de culoare alb, crem, galben, rou.
i pot obine energia necesar proceselor vitale pe cale fermentriv, anaerob,
ilar pot fi microaerotolerante deoarece au n catena respiratorie catalaz i
citocromi.
Ca surs de carbon i energie bacteriile propionice prefer lactaii cu
acid lactic L + , citraii, malatul, glicerolul, glucide (lactoz, maltoz, glucoz,
galactoz). Ca surse de azot pot folosi: peptone, peptide, aminoacizi eseniali
pentru cretere. Necesit prezena unor factori de cretere, dintre care biotina
i acidul pantotenic sunt eseniali pentru producerea vitaminei B ]2.
Din punct de vedere al nutriiei minerale necesit n primul rnd
magneziu, apoi alte elemente minore: Na, P, K, Mn, CI, Ca, S, Fe. Prezena
DAN VALENTINA
170
P.
P.
P.
P.
freundereichi
globosum
shermanii
casei
2. Propionibacterium thoenii
P. rubrum
3. Propionibacterium acidipropionici
P. arabinosum
P. pentosaceum
4 . Propionibacterium jensenii
P. raffinosaceum
P. petersonii
P. tcchnicum
P. zcac
171
C H j-
:o - COOH
Metil malonil C o A
transcarboxilaz
* "H O O C - C O - C H 2 - C O O H
NADH
4 H*
H
-J
Malie-
*jA
NAD
CH 3 - CHOH - COOH
Aad
oxal-acatic
H O O C -C H -C H j-C C O O H
Ac,d
mane
OH
Acid lactic
Fumaraz
H20
Biotin
Biotin H O O C - C H = C H - C O O H
Acid
|
fumrie
Fumarat
2|H]
reductazt
ADP
Vatp
H O O C - CH2 - CH2 - COOH
Add
sucdnic
CoA-i
C H ,-C H 2 - C 0 0 H
11
CoA-tran
(ra z i
SCoASucdnil~CoA
CoASH
Bt2
C H J - C H 2 - C O - S C 0A
Propionil-CoA
HOOC - CH - C O -S C o A
CH3
Mat malonil-CoA
H lM M i M M n N i U M V M o n i / ' ^ -i M M m in # ! P
DAN VALENTINA
172
Acld 'cU<=
Lactat dehidrogenaz
NADH +H
CH3 - CO - COOH
Acid piruvlc
yL -C o A S H
c 2
CH3 - CO - SC oA
Acetll-CoA
CoASH
CH3 - CO - P
Acetil fosfat
U"" ADP
y^>-ATP
C H 3-C O O H
Acid acetic
173
Substraturi
Butirat
Acetat
1. Bacterii butirice
C . b u t y r ic u m
C . t y r o b u ty r ic u m
C . p a s t e u r ia n u m
co2
3. Bacterii peptonolitice
C . h is to lit ic u m
C . s p o ro g e n e s
Proteine
Aminoacizi
Acetat, lactat, N H 3, H 2
Alanin, Treonin
A cetat, Propionat, C 0 2
C 0 2+ H j Fructoza
Acetat
C . s t ic k lc m d i
4. Bacterii productoare
de acid propionic
C . p r o p io n ic u m
5 . Bacterii productoare
de acid acetic
C . a c e t ic u m
174
DAN VALENTINA
2 ATP
2 CHj - CO ~ COOH
2H
2 Fd
V * .
2 COj
C H j-C H 2 -C H 2 - C O - C o A
2 CoASH
C o A SH
C H j - C O - C HHr-CC
j- C O - C o A
nadh2
LL
NAD
I* N A D H j
CHj - CH = CH - C O -C o A
2 CHj - CO - CoA
'
6
C H j-^ H r-C H j-C O -C o A
nao
OH
175
176
DAN VALENTINA
NAD
CH3 -C H 2 -C H j-C H O
C H 3 - C H j- CH 2 - C H 20H
->
B u tlrll BldahW a
B u ta n o l
Formarea acetonei
A c a ta t
A c a til CoA
... ^
C H s - C O - C H 2 - C H 2 - C O OH
Aeatoacatai CoA
Acaloacatat
COj
D acarboxllaxi
_____________
C H j - C O - C Hj
Acatoni
2 H
-------------------- ^
CHi-CH-CH,
OH
A c e to n a
A lc o o l Izopropllle (2 p ro p a n o l)
CHj-CO-SCoA
A c a til CoA
4H
, __ _______
CH3 - C H O
CoASH
^^ ------- ')
NAD
CHj-CHj-OH
E ta n o l
_________________ [ 7 7
8 .7 . P R O C E S E M E T A B O L IC E A E R O B E
(F E R M E N T A II O X ID A T IV E)
Spre deosebire de fermentaiile propriu-zise anaerobe, fermentaiile:
.icctic, gluconic, citric .a. sunt procese oxidative simple, care se desfoar
in condiii aerobe i se difereniaz de metabolismul oxidativ (respiraie), prin
.iccea c oxidarea este limitata, rezultnd n condiii industriale acizi organici
cu mare valoare economic.
FERM ENTAIA ACETIC
Fermentaia acetic este un proces metabolic aerob prin care substratul (alcoolul
etilic) este oxidat n prezena oxigenului din aer, sub aciunea echipamentului
enzimatic al bacteriilor acetice, n acid acetic ca produs principal al fermentaiei.
Istoric i caractere taxonomice ale bacteriilor acetice
Pentru prima dat sunt izolate n 1837 de ctre F.T. Kutzing din oet.
Primele studii sistematice ale acestor bacterii sunt fcute de L. Pasteur (1868)
care arat c acestea sunt responsabile pentru transformarea alcoolului n acid
acetic. Pe parcursul anilor, acestea au fost incluse n diferite genuri cu denumirea
de: Mycodemia (Persoon 1822), Acetobacterium (Ludwig 1898), Acetomonas
(Orla-Jensen 1909). Denumirea de Acetobacter este propus de Beijerink n
1909, n 1935 Asai propune diferenierea bacteriilor acetice n dou genuri:
Acetobacter i Gluconobacter (n care erau incluse bacterii care produc acid gluconic). n 1954, Leifson n funcie de mobilitate, separ bacteriile genului
Acetobacter n dou genuri, respectiv Acetomonas (gen care prezint caractere
comune cu g. Gluconobacter) i Acetobacter.
n clasificarea lui Bergey, bacteriile acetice sunt incluse n Fam.
Pseudomonadacee (g. Acetobacter i g. Gluconobacter).
n prezent, prin studii genetice se consider c ambele genuri trebuie
regrupate n aceeai familie: Acetobacteriacee.
Caractere morfologice i fiziologice ale bacteriilor acetice
Bacteriile acetice sunt bacterii strict aerobe sub form de bastonae,
Gram-negative, grupate n pereclii sau lanuri, cu dimensiuni variabile (0,50,8)(0,9-4,2)/im. Pot fi imobile sau mobile, cu cili polari sau peritrichi. n
mediu acid, n timp, pot apare forme de involuie, ramificate, care i pierd
capacitatea de reproducere.
n medii lichide (staionar) se dezvolt sub forma unui voal fragil care
cu creterea n dimensiuni ascensioneaz pe pereii vasului (A. ascendens, A.
aceti). Alte specii: A.xylinum, A. xilinoides, formeaz un strat gelatinos de natur
fl.glucanic (coloidal i fibros) n vin oeit sau n oet.
178
DAN VALENTINA
179
i I
Uinp*
CHrtCHO
2 HjO
CHj-COOH
I3
2 FADH2
- cltocrorn
4 Ft
-d lo c r o ra
180
1)AN VALENTINA
181
F E R M E N T A IA G L U C O N IC
Fermentaia gluconic este un proces oxidativ simplu prin care glucoza, n
prezena oxigenului din aer fi a sistemului enzimatic al microorganismelor
selecionate este transformat n acid gluconic ca produs principal.
Agenii tipici ai fermentaiei gluconice sunt bacteriile din g. Gluconobacter
(Acetomonas), g. Moraxella i mucegaiuri din genul Aspergillus: A. niger, A.
/iboenicis, A. wenti i ale genului Penicilium: P. chrysogenum, P. luteum.
Biochimismul oxidrii biologice a glucozei (Fig. 52)
COOH
OH - C - H
Lactonaz H - c! - OH
C H 2O H
A d d gluconic
H20 2
H20 + 1/2 0 2
182
DAN VALENTINA
183
CH, H,a0 ,
O a lM E M P
OH
COOH
184
DAN VALENTt
I HANSFORM1U MICROUIi'NI
185
CAPITOLUL 9
TRANSFORMRI MICROBIENE
ALE COMPUILOR ORGANICI
MACROMOLECULARI
Se apreciaz c din energia radiaiilor solare care cad anual pe pmnt,
echivalent cu 3 x l0 24J convertit prin fotosintez n energia chimic a
i ombinaiilor organice se acumuleaz 2x10 11 tone C/an. Din aceast biomas
vegetal cea mai mare parte o constituie celuloza, substanele pectice, amidonul
>i n cantitti mai reduse; lipide, acizi nucleici .a.
186
1)AN VALENTINA
9 .2 . D E S C O M P U N E R E A C E L U L O Z E I , H E M IC E L U L O Z E I
Celuloza este un poliglucid foarte rspndit n materiile prime de origine
vegetal i n structura pereilor celulari ai fungilor. Celuloza ajuns n sol i
ape dup moartea plantelor este transformat n timp sub aciunea
microorganismelor capabile s produc enzime celulozolitice i anume a
micromicetelor - ageni ai putrezirii i a unor bacterii aerobe i anaerobe.
Hidroliza general a celulozei are loc dup schema (Fig. 54)
C ELU LO Z
I Endoglucanaze
f
(C1-celulaza)
P1,4- giucodimeraz
(celobiazi)
2 Q lu cozS
187
CH 3-COOH + C 0 2 + 2H 2
188
DAN VALENT
CH 3-CH2-COOH +
(g. Desulfribrio)
H 20 -> CH,-COOH +
co 2+
3H 2
CH4
Fig. 55. Formarea metanului pe cale microbian
i k m Ar i m ic r o b ie n h
189
iii l<)',i adarc activ a CX) 3 i II,, apoi arc loc rcducerca acestor gaze i
nli i i biogazul, n care concentraia de metan reprezint 60-80%.
|mi i Milui de formare a metanului poate fi de 180-500 zile; biogazul
.i/i | i .lidere are o energie echivalent cu 194,4 kcal/mol (811 kj/
|M.|U I.ignarea procesului de metanogenez, mediul rezidual, bogat n
Ctmsinc poate fi folosit ca ngrmnt biologic.
Uim ni combustibil care se poate obine prin fermentarea anaerob a
11 hidrogenul; dac la arderea unui kilogram de metan se elibereaz
Iii iI, l.i arderea aceleai cantiti de hidrogen se obin 28.000 kcal.
2
+ 0 2 2 H 20 + 11 kcal/mol
9 .3 . D E G R A D A R E A S U B S T A N E L O R P E C T I C E
Substanele pectice sunt coninute n cantitate mare n fructe, legume,
Hilpiin. i .idcinoase sub form de protopectin insolubil, parial asociat cu
iii i nni pereilor celulelor vegetale, cu celuloz i alte polioze. Dup recoltarea
I m . ir lor, legumelor, n timpul conservrii lor sau n straturile superficiale ale
Miltniloi, prin activitatea microorganismelor are loc hidroliza substanelor
Ii tur avnd ca efect nmuierea esutului vegetal i pierderea rezistenei lui
|)l|< de agenii de putrezire.
lrotopectina insolubil poate fi transformat n pectin solubil.......... poliglucid format din acizi poligalacturonici solubili n ap (acizi D|Mili),.ilacturonici legai prin legturi oc-1, 4-esterificai cu alcool metilic) sub
lumea protopectinazei produse de mucegaiuri i bacterii.
190
D A N VALENTINA
9 .4 . D E S C O M P U N E R E A L IP I D E L O R
Lipidele prezente n materia nevie, de origine vegetal i animal cara
ajung n habitaturi naturale, precum i cele coninute n materii prime (semine
oleaginoase) sau produse alimentare pot suferi transformri sub aciunca*
microorganismelor productoare de lipaze extracelulare.
Sub aciunea lipazelor are loc hidroliza lipidelor cu formare de gliccrol
ce poate fi metabolizat pe calea EMP i acizi grai, care sunt mctabolizai pe
/ /( I NSFORMRIMICROBIENE
191
192
DAN VALENTIN,
O
degradare pe calc microbian sufer i compuii organici aroma
(vitamine, aminoacizi), care sunt transformai de ctre muccgaiuri i bactct
n compui mai simpli: fiuuarat, acetoacetat, succinat.
"
Practic nu exist compus organic, care s nu fie degradat la compir,i
simpli, ca urmare a adaptrii microorganismelor; dac acest fapt nu ar fi reali
ar fi evidente acumulri n timp, catastrofe ecologice, dezechilibre naturale.
9 .7 . T R A N S F O R M R I M IC R O B IE N E A L E P R O T ID E L O R
Protidele sunt compui macromoleculari ce au n componen: C, 11,
O, N, S, P elemente cu rol vital pentru toate formele de via. n celula vie,
protidele au rol structural i funcional (enzime), iar dup moartea fiziologici
a organismelor, prin procese de proteoliz enzimatic, protidele sunt
transformate n compui mai simpli ce pot servi, ca surs de azot pentru
microorganismele implicate n circuitul natural al azotului. Protidele coninutc
n materia organic nevie, care se acumuleaz n sol i ape, prin moartei
plantelor, animalelor, microorganismelor, pot fi hidrolizate sub aciunci
proteazelor extracelulare produse de ctre bacteri i mucegaiuri - ageni ai
putrefaciei (degradarea protidelor de origine animal) i ai putreziri
(degradarea protidelor de origine vegetal).
Spre deosebire de bacterii i mucegaiuri, drojdiile nu pot folosi protidelr
n procesul de nutriie deoarece ele conin proteaze intracelulare, care se pot
elibera din celule numai prin dezintegrarea nveliurilor celulare sau dup
moarte prin autoliz.
Protide
^
Endoproteaze
Peptone, polipeptide
|
Exoprotaaze
Peptide
|
Peptidaze
Aminoacizi
C02
I
t
G aze
NH3. C 7 . H2;
H2S . H3P
A c iz i
'orrnc
a cetic
propionic
butiric
Amine
cad av erm a
p u trescein a
triptamina
histam ina
C om pui indolici
indol
metil-indol
(scatol)
_______________________ 193
MICROBIENK
M r.H c o o h +
1/2 o 2
L.D-aminoacidoxidazc
Nt-fe
O
(Mucegaiuri, bacterii aerobe j
NADH*
CH j - CH - COOH + NHj
L.D-amlnoacid- dehidrogenaze
R-
iH-NH2 +i =0
I
COOH
I
COOH
-a
<
i.o
Wu
|
COOH
C H -N H j
COOH
I )r /.aminarea desaturant, poate fi produs de bacterii aerobe i anaerH||p |h m rus, Pseudomonas, Clostridium), dup reacia general:
R - ( f H - C H 2 -C O O H
------
R - CH = CH - COOH + NHj
NHj
NAD
COOH -----------------------------------------------____________
R - CH - COOH
= ------------ --
_ ch 2
COOH + NHj
NHj
Dccarboxilarea aminoacizilor are loc intracelular sub aciunea amiiiimi ui decarboxilazelor active mai ales n mediu acid, cu formarea de amine,
ilup.l reacia general:
R -C H -C O O H
NHj
CH i
NHj
COj
194
DA N VLEN I IS
a x t r a c e Iu l a r e
E nd op rola axe
P s o lid e
c e Iu la re
f p N SIO H M R 1 M IC R O H 1HNI-:
__
197
I M I T E
BIBLIOGRAFIE
^|1 I I., Toma N., et al., 1989, Biologia i tehnologia drojdiilor, Ed. Tehnic,
Bucureti, v.l.
^n'lu'l I., Vassu ., Herlea V, Dan V , et. al., 1991, Biologia fi tehnologia
drojdiilor, Ed. Tehnic, Bucureti, v.2.
Ai It ison Dean A., Rodney J. Sobietski, 1980, Introduction to Microbiology,
London.
1988, Food Biotechnology, Can.Inst.Food Sci Tecnhol.J. 21, 4,
334-339
Aik hi I . ,
HIHUQGRA U E ___________________
___________________________________ 199
Publish.
Hum II., 1978, Primary products o f metabolism, Ac. Press.
lit uko N.E, 1980, Droji iz Brettanomyces, Vinogr. i vinod., 3, 25-29.
|l Iill r.cl H.G., 1987,AllgemeineMikrobiologic, Georg Thieme Verlag, Stuttgart
New York.
St 11it 11 1 1987, Theoretical and experimental studies on the influence
o f ultrasound on the cell/enzymes, Biotechn. and. Bioeng., p. 928-935.
Nimih J.E., Berry D .R., 1978, The filamentous fungi, Ac. Press.
Nltinier Y. Adelberg, 1977, General microbiology, Prentice Hall Inc. USA.
fclinmermann F.C., Entian K.D., 1997, Teast Sugar Metabolism,
Tchnomic Publ.
/,ii itea G., 1984, Tratat de microbiologic general, Ed. Academiei, vol. 2.
POSTFA
Microbiologia produselor alimentare este rezultatul unei experiene
acumulate n 40 de ani de activitate didactic n domeniul fascinant al
microbiologici i a oportunitii oferite de grantul major de cercetare (19982000) ctigat de colectivul de microbiologic al facultii de Industrie
Alimentar, Acvacultur i Pescuit, Universitatea Dunrea de Jos din Galai,
care a permis editarea crii.
Dup acest prim volum care i propune familiarizarea celor interesai
cu principalele grupe de microorganisme cu rol important n industria
alimentar i a modului n care poate fi controlat i dirijat activitatea lor
metabolic, urmeaz volumul 2 (cu editare planificat la sfritul acestui an),
n care va fi prezentat microbiologia materiilor prime i a produselor finite,
culturile starter i rolul lor n biotehnologii alimentare, tipurile de alterri
microbiene, controlul microbiologic al produselor alimentare.
Cu sperana utilitii i a nelegerii de ctre cititori, a efortului de a
culege i alege din multitudinea de informaii, pe cele mai semnificative, doresc
s mulumesc mai tinerelor mele colege, dr. ing. Margareta Zara, dr. ing.
Gabriela Bahrim i dr. ing. Anca Nicolau pentru nelegere, sprijin i ndemn
n finalizarea acestei lucrri.