Ecp

ECP
Siemens Medical Solutions Diagnostics
IMMULITE 2000 ECP

English
Intended Use: For in vitro diagnostic use
with the IMMULITE 2000 Analyzer for
the quantitative measurement of
eosinophil cationic protein (ECP) in serum.
Catalog Number: L2KEO2 (200 tests)
Test Code: ECP Color: Aqua
CDC Analyte Identifier Code: 1616
CDC Test System Identifier Code: 10418
CLIA Complexity Category: Moderate
Summary and Explanation

Eosinophils, originating from bone-marrow
stem cells, appear in large numbers at
inflammation sites and in response to
certain parasitic infections. These
leukocytes, when mature, reside mostly in
tissues, but about 1% of the eosinophil
population circulates in the blood.
Activated eosinophils degranulate to
release four highly basic proteins into the
surrounding tissue. The granular proteins,
which can kill parasites and some
mammalian cells, might cause the tissue
damage associated with asthma and other
inflammatory diseases. Eosinophil
activation accompanies a wide range of
inflammatory conditions, including
bronchial asthma, atopic dermatitis,
rhinitis, allergic eye inflammation, allergic
middle ear effusion, parasitic and bacterial
infections, autoimmune diseases, and
11
chronic fatigue syndrome.
Among the four basic granule proteins,
eosinophil cationic protein (ECP) has
proven a useful monitor for many active
11
inflammatory diseases. ECP
concentrations in plasma and certain other
body fluids increase during inflammatory
reactions marked by activated eosinophils.
Produced by eosinophils exclusively, ECP
is toxic to neurons, some epithelial cell
lines, and isolated myocardial cells. The
positively charged protein binds to heparin
and inhibits blood coagulation.
Several studies report high individual and
group correlations between ECP levels
and clinical asthma symptoms, such as
increases in peak expiratory flow (PEF),
2
prn ("as needed") inhaled 2-agonist,

1,10
airway responsiveness, and spirometry.
Atopic serum samples have higher ECP
levels than nonatopic control samples,
even when the circulating eosinophil count
9
remains within the normal range. In
seasonal asthmatic patients, ECP
measurements reflect changes in disease
1,9
activity throughout the year. Roquet,
et al. reported significant correlations
between ECP levels and bronchial
hyperreactivity in mildly asthmatic
6
patients. Tomassini, et al. showed that
serum ECP concentrations exceed
normal, control levels in both IgEmediated and non-IgE-mediated atopic
conditions. Serum ECP measurements
avoid inconsistencies inherent in
subjective asthma assessments.
Serum ECP concentrations can indicate
2,3
the severity of certain skin disorders.
ECP's neuronal toxicity might contribute to
itching disorders; patients with certain skin
disorders, such as papular erythematous
eruptions and prurigo nodularis, displayed
increased serum ECP levels, which
8,3
normalized when the conditions healed.
Several groups found that serum ECP
concentrations reflect atopic dermatitis
2,3
(AD) activity. The commonly used
clinical scoring system for atopic
dermatitis records lichenification, loss of
sleep, erythema, papules, pruritus, and
excoriations. Czech, et al. showed that
ECP correlates with each of these
symptoms and most highly correlates with
the total clinical score. Although altered
immunological parameters accompany
atopic dermatitis, measured serum IgE
concentrations did not correlate with some
2
of the clinical symptoms. The objective
nature of serum ECP measurements
presents an advantage over the subjective
clinical measures, which are prone to
inconsistencies arising from the broad
range in individual investigator and patient
assessments.
Principle of the Procedure

IMMULITE 2000 ECP is a solid-phase,
two-site chemiluminescent immunometric
assay.
Incubation Cycles: 1 30 minutes.
IMMULITE 2000 ECP (PIL2KEO-12, 2007-11-20)
Specimen Collection
Warnings and Precautions
The patient need not be fasting. Collect

13
blood by venipuncture into Becton
Dickinson SST vacutainer tubes, noting
the time of collection. Fill collection tubes
completely, gently invert, and let the blood
clot for 60120 minutes at room
temperature (1528C). Centrifuge at
1,0001,300xg for 10 minutes at room
temperature, and separate the serum from
the cells. Please note that blood sample
processing parameters, including time and
temperature of blood clotting,
centrifugation, and sample storage, may
7
impact measured ECP concentration.
Variations in blood processing parameters
between sampling may cause inconsistent
ECP measurements.
For in vitro diagnostic use.
Plasma or hemolyzed samples should

not be used.
The use of an ultracentrifuge is
recommended to clear lipemic samples.
Centrifuging serum samples before a
complete clot forms may result in the
presence of fibrin. To prevent erroneous
results due to the presence of fibrin,
ensure that complete clot formation has
taken place prior to centrifugation of
samples. Some samples, particularly
those from patients receiving
anticoagulant therapy, may require
increased clotting time.
Blood collection tubes from different
manufacturers may yield differing values,
depending on materials and additives,
including gel or physical barriers, clot
activators and/or anticoagulants.
IMMULITE 2000 ECP has not been tested
with all possible variations of tube types.
Volume Required: 5 L serum
Storage: 7 days at 28C or 3 months at
12
20C.
Store the serum samples in polystyrene or
polypropylene rather than glass tubes, to
avoid a decrease in ECP values. Do not
attempt to thaw frozen specimens by
heating them in a waterbath. Avoid
repeated freeze/thaw cycles.
Dilution of High Samples: Samples
expected to have ECP levels above the
assay's calibration range should be
manually diluted with ECP Sample Diluent
(LEOZ) before assay.
Reagents: Store at 28C. Dispose of in

accordance with applicable laws.
Follow universal precautions, and handle
all components as if capable of
transmitting infectious agents. Source
materials derived from human blood were
tested and found nonreactive for syphilis;
for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis
B surface antigen; and for antibodies to
hepatitis C.
Sodium azide, at concentrations less than
0.1 g/dL, has been added as a
preservative. On disposal, flush with large
volumes of water to prevent the buildup of
potentially explosive metal azides in lead
and copper plumbing.
Chemiluminescent Substrate: Avoid
contamination and exposure to direct
sunlight. (See insert.)
Water: Use distilled or deionized water.
Materials Supplied
Components are a matched set. Labels on
the inside box are needed for the assay.
ECP Bead Pack (L2EO12)
With barcode. 200 beads, coated with
monoclonal murine anti-ECP antibody.
Stable at 28C until expiration date.
L2KEO2: 1 pack.
ECP Reagent Wedge (L2EOA2)
With barcode. 11.5 mL alkaline
phosphatase (bovine calf intestine)
conjugated to polyclonal rabbit anti-ECP
antibody in buffer, with preservative.
Stable at 28C until expiration date.
L2KEO2: 1 wedge.
Before use, tear off the top of the label at
the perforations, without damaging the
barcode. Remove the foil seal from the top
of wedge; snap the sliding cover down into
the ramps on the reagent lid.
ECP Adjustors (LEOL, LEOH)
Two vials (Low and High) containing
lyophilized ECP in an ECP-free nonhuman
serum/buffer matrix, with preservative.
Reconstitute each vial with 2.0 mL distilled
or deionized water. Mix by gentle swirling
or inversion until the lyophilized material is
fully dissolved. Aliquot and freeze
3
immediately after reconstitution. Stable at

20C for 6 months after reconstitution.
L2KEO2: 1 set.
volunteers yielded a mean of 10.9 ng/mL,

a median of 10.4 ng/mL, and a lower 95%
reference range of:
Before making an adjustment, place the

appropriate Aliquot Labels (supplied with
the kit) on test tubes so that the barcodes
can be read by the on-board reader.
ND 24 ng/mL
ECP Controls (LEOC1, LEOC2)

Two vials containing lyophilized ECP in an
ECP-free nonhuman serum/buffer matrix,
with preservative. Reconstitute each vial
with 2.0 mL distilled or deionized water.
Mix by gentle, intermittent swirling. Aliquot
and freeze immediately after
reconstitution. Stable at 20C for
6 months after reconstitution. Refer to the
control insert for concentration levels.
L2KEO2: 1 set.
Kit Components
Supplied Separately
ECP Sample Diluent (LEOZ)
For the manual dilution of patient samples.
ECP-free nonhuman serum/buffer matrix,
with preservative. Stable at 28C for
30 days after opening, or for 6 months
(aliquotted) at 20C.
LEOZ: 25 mL
L2SUBM: Chemiluminescent Substrate
L2PWSM: Probe Wash
L2KPM: Probe Cleaning Kit
LRXT: Reaction Tubes (disposable)
Also Required
Distilled or deionized water; test tubes.
Assay Procedure
Note that for optimal performance, it is
important to perform all routine
maintenance procedures as defined in the
IMMULITE 2000 Operator's Manual.
See the IMMULITE 2000 Operator's
Manual for; preparation, setup, dilutions,
adjustment, assay and quality control
procedures.
Recommended Adjustment Interval:
2 weeks
Quality Control Samples: Use the
control(s) supplied with the kit.
Expected Values
A study performed with IMMULITE 2000
ECP on 43 apparently healthy laboratory
4
Consider these limits as guidelines only.

Each laboratory should establish its own
reference ranges.
Limitations
Variations in blood processing parameters
could cause inconsistent ECP
7
measurements.
Plasma or hemolyzed samples should not
be used.
Heterophilic antibodies in human serum
can react with the immunoglobulins
included in the assay components causing
interference with in vitro immunoassays.
[See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic
antibodies: a problem for all
immunoassays. Clin Chem 1988:34:2733.] Samples from patients routinely
exposed to animals or animal serum
products can demonstrate this type of
interference potentially causing an
anomalous result. These reagents have
been formulated to minimize the risk of
interference; however, potential
interactions between rare sera and test
components can occur. For diagnostic
purposes, the results obtained from this
assay should always be used in
combination with the clinical examination,
patient medical history, and other findings.
Performance Data
See Tables and Graphs for data
representative of the assay's performance.
Results are expressed in ng/mL. (Unless
otherwise specified, all results were
generated on serum samples collected in
Becton Dickinson SST vacutainer tubes.)
Calibration Range: up to 200 ng/mL.
The assay is traceable to an internal
standard manufactured using qualified
materials and measurement procedures.
Analytical Sensitivity: 0.2 ng/mL.
High-dose Hook Effect:
None up to 1,591 ng/mL
Precision: Samples were assayed in
duplicate over the course of 20 days, two
runs per day, for a total of 40 runs and 80
replicates. (See "Precision" table.)
Linearity: Samples were assayed under

various dilutions. (See "Linearity" table for
representative data.)
Recovery: Samples spiked 1 to 19 with
three ECP solutions (218, 546 and
983 ng/mL) were assayed. (See
"Recovery" table for representative data.)
Bilirubin: Presence of conjugated and
unconjugated bilirubin in concentrations
up to 200 mg/L has no effect on results,
within the precision of the assay.
Hemolysis: Interferes with the assay,
causing elevation of values at levels
above 270 mg/dL. (See "Hemolysis"
table.)
Lipemia: Presence of triglycerides in
concentrations up to 3,000 mg/dL has no
effect on results, within the precision of the
assay.
Method Comparison: The assay was
compared to IMMULITE ECP on 81
samples. (Concentration range:
approximately 2 to 184 ng/mL. See
graph.) By linear regression:
7) Rubira N, Rodrigo MJ, et al. Blood sample

processing affect on cationic protein
concentraion. Ann Allergy Asthma Immunol
1997;78:394-8. 8) Sunohara N, Furukawa S, et
al. Neurotoxicity of human eosinophils towards
periperal nerves. J Neurolog Sci 1989;92:1-7. 9)
Tomassini M, Magrini L, et al. Serum levels of
eosinophil cationic protein in allergic diseases
and natural allergen exposure. J Allerg Clin
Immun 1996;97:1350-5. 10) Vatrella A,
Ponticiello A, et al. Serum eosinophil cationic
protein (ECP) as a marker of disease activity
and treatment efficacy in seasonal asthma.
Allergy 1996;51:547-55. 11) Wardlaw AJ.
Eosinophils in the 1990s: new perspectives on
their role in health and disease. Postgrad Med J
1994;70:536-552. 12) Data on file. 13) National
Committee for Clinical Laboratory Standards.
Procedures for the collection of diagnostic blood
specimens by venipuncture; approved standard.
4th ed. NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA:
NCCLS, 1998.
Technical Assistance
Available outside the United States only.
For technical assistance, contact your
National Distributor.
(IML 2000) = 0.98 (IML) + 1.5 ng/mL

r = 0.998
The Quality System of Siemens Medical

Solutions Diagnostics Limited is certified to
ISO 13485:2003.
Means:
30.5 ng/mL (IMMULITE 2000)
32.6 ng/mL (IMMULITE)
Tables and Graphs
References
1) D'Amato G, Liccardi G, et al. Measurement of
serum levels of eosinophil cationic protein to
monitor patients with seasonal respiratory
allergy induced by Parietaria pollen (treated and
untreated with specific immunotherapy). Allergy
1996;51:245-50. 2) Czech W, Krutmann J, et al.
Serum eosinophil cationic protein (ECP) is a
sensitive measure for disease activity in atopic
dermatitis. Br J Dermatol 1992;126:351-5. 3)
Juhlin L, Venge P. Eosinophilic Cationic Protein
(ECP) in skin disorders. Acta Derm Venereol
1991;71:495-501. 4) Peterson CG, Enander I, et
al. Radioimmunoassay of human eosinophil
cationic protein (ECP) by an improved method.
Establishment of normal levels in serum and
turnover in vivo. Clin Exper Allerg 1991;21:5617. 5) Reimert CM, Poulsen LK, et al.
Measurement of eosinophil cationic protein
(ECP) and eosinophil protein X/eosinophilderived neurotoxin (EPX/EDN). Time and
temperature dependent spontaneous release in
vitro demands standardized sample processing.
J Immun Meth 1993;166:183-90. 6) Roquet A,
Hallden G, et al. Eosinophil activity markers in
peripheral blood have high predictive value for
bronchial hyperreactivity in patients with
suspected mild asthma. Allergy 1996;51:482-8.
Precision (ng/mL)
Within-Run1
3
Total2
Mean
SD
CV
SD
CV
3.28
0.20
6.1
0.26
7.9%
11.7
0.60
5.1
0.83
7.1%
22.9
1.20
5.2
1.70
7.4%
28.3
1.70
6.0
2.27
8.0%
30.5
1.80
5.9
3.24
10.6%
95.8
3.80
4.0
8.47
8.8%
138
6.20
4.5
12.4
9.0%
Linearity (ng/mL)
Recovery (ng/mL)
Observed
1 32 in 32
39.9
16 in 32
20.7
19.9
104%
8 in 32
9.55
9.97
4 in 32
4.86
4.98
2 in 32
2.36
2.49
95%
1 in 32
1.20
1.25
96%
Dilution
Expected
Solution1 Observed2 Expected3
%O/E
%O/E4
27.5
30.5
38.4
79%
96%
47.5
54.8
87%
98%
78.1
76.7
102%
30.0
39.7
40.9
97%
32 in 32
87.8
51.0
57.3
89%
16 in 32
42.5
43.9
97%
73.1
79.1
92%
8 in 32
20.7
21.9
95%
43.3
4 in 32
9.76
11.0
89%
52.7
54.2
97%
2 in 32
4.97
5.49
91%
65.7
70.6
93%
1 in 32
2.15
2.74
78%
88.0
92.5
95%
48.7
57.2
59.6
96%
16 in 16
60.1
8 in 16
28.1
30.0
94%
4 in 16
13.6
15.0
91%
80.1
76.0
105%
2 in 16
6.54
7.51
87%
107
97.9
109%
1 in 16
2.92
3.76
78%
56.9
4 128 in 128
104.8
62.6
67.8
92%
64 in 128
54.2
52.4
103%
79.7
84.2
95%
32 in 128
26.4
26.2
101%
97.0
106
92%
16 in 128
12.9
13.1
98%
102
8 in 128
6.32
6.55
96%
111
113
98%
4 in 128
3.23
3.28
98%
134
129
104%
2 in 128
1.51
1.64
92%
169
151
112%
1 in 128
0.7
0.82
85%
64 in 64
178
32 in 64
83.7
88.9
94%
16 in 64
41.4
44.4
93%
8 in 64
20.3
22.2
91%
4 in 64
10.5
11.1
95%
2 in 64
4.66
5.55
84%
1 in 64
2.38
2.78
86%
Method Comparison
200
IMMULITE 2000 ECP
150
100
50
0
0
50
100
150
200
IMMULITE ECP, ng/mL
(IML 2000) = 0.98 (IML) + 1.5 ng/mL

r = 0.998
Hemolysis (ng/mL)
Deutsch
Hemoglobin1
2
Unspiked 135 mg/dL 270 mg/dL 540 mg/dL

1
7.38
9.22
10.8
15.6
8.39
8.31
10.2
14.9
9.20
11.0
12.3
18.0
78.2
79.1
78.4
87.6
91.3
91.9
93.3
102
109
98.9
105
120
121
131
125
147
145
152
160
172
ECP
Anwendung: Zur in vitro Diagnostik unter
Verwendung des IMMULITE 2000
Systems fr die quantitative Bestimmung
des Eosinophilen kathionischen Protein
(ECP) im Serum.
Artikelnummern: L2KEO2 (200 Tests)
Testcode: ECP Farbe: trkis
Klinische Relevanz
Deutsch. Precision: 1Intra-Assay, 2Gesamt,
3
Mittelwert, 4S (Standardabweichung), 5CV
(Variationskoeffizient). Linearity: 1Verdnnung,
2
Beobachtet (B), 3Erwartet (E), 4% B/E, 532 in
32. Recovery: 1Lsung, 2Beobachtet (B),
3
Erwartet (E), 4% B/E. Effect of Hemolysis:
1
Hmoglobin, 2Ohne Zugabe von. Method
Comparison: ECP: ECP.
Espaol. Precision: 1Intraensayo, 2Total,
3
Media, 4DS, 5CV. Linearity: 1 Dilucin,
2
Observado (O), 3Esperado (E), 4%O/E, 532 en
32. Recovery: 1Solucin, 2Observado (O),
3
Esperado (E), 4%O/E. Effect of Hemolysis:
1
Hemoglobina, 2Sin aadir. Method
Franais. Precision: 1Intraessai, 2Total,
3
Moyenne, 4SD, 5CV. Linearity: 1Dilution,
2
Observ (O), 3Attendu (A), 4%O/A, 532 dans 32.
Recovery: 1Solution, 2Observ (O), 3Attendu
(A), 4%O/A. Effect of Hemolysis:
1
Hmoglobine, 2Non chargs. Method
Italiano. Precision: 1Intra-serie, 2Totale, 3Media,
SD (Deviazione Standard), 5CV (Coefficiente di
Variazione). Linearity: 1Diluizione, 2Osservato
(O), 3Atteso (A), 4%O/A, 532 in 32. Recovery:
1
Soluzione, 2Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A.
Effect of Hemolysis: 1Emoglobina, 2Semplice.
Method Comparison: ECP: ECP.
4
Portugus. Precision: 1Entre-ensaios, 2Total,

Mdia, 4Desvio padro, 5Coeficiente de
variao. Linearity: 1Diluio, 2Observado (O),
3
Esperado (E), 4%O/E, 532 em 32. Recovery:
1
Soluo, 2Observado (O), 3Esperado (E),
4
%O/E. Effect of Hemolysis: 1Hemoglobina,
2
No adicionada. Method Comparison: ECP:
ECP.
3
Eosinophile Zellen sind Abkmmlinge der

Stammzellen des Knochenmarks, die in
groer Zahl in Enzndungsherden und als
Anwort auf verschiedene parasitre
Infektionen gefunden werden. Nach ihrer
Reifung verweilen die eosoinophilen
Leukozyten grtenteils im Gewebe,
sodass nur etwa 1% der
Gesamtpopulation im Blut zirkulierend
gefunden werden. Degranulierende,
aktivierte Eosinophile setzen vier stark
basischen Proteinen in das umgebende
Gewebe frei. Diese granulren Proteine
sind in der Lage Parasiten abzutten
sowie einige Sugerzellen zu schdigen,
beispielsweise erkennbar an den mit
Asthma oder anderen entzndlichen
Erkrankungen assoziierten
Gewebslsionen. Die Aktivierung der
Eosiniphilen findet sich einer Vielzahl
entzndlicher Vorgnge, wie Asthma
bronchiale, atopischer Dermatitis, Rhinitis,
allergischen Entzndungen des Auges,
allergisch bedingtem Mittelohr-Ergu,
parasitren und bakteriellen
Entzndungen, Autoimmunerkrankungen
sowie dem Chronic Fatigue Syndrome
11
gefunden.
Der Nachweis zirkulierender ECP-Spiegel
findet seit langem Einsatz als objektiver
Parameter zur Beurteilung der
11
Krankheitsaktivitt. Als Marker fr die
Aktivierung der Eosiniphilen steigt die
ECP-Konzentration im Plasma und
anderen Krperflssigkeiten whrend
entzndlicher Reaktionen an. ECP ist
toxisch fr Neurone, einige
Epithelzelllinien und isolierte
Myocardzellen. Das positiv geladene
Protein bindet an Heparin und inhibiert die
Koagulation des Blutes.
7
Im Rahmen umfangreicher Studien wurde

die Korrelation der ECP-Spiegel mit der
klinischen Symptomatik bestimmt,
beispielsweise gemessen am Peak
expiratory Flow (PEF), dem Bedarf an
inhalierten 2-Agonisten,
Atemwegsreaktion und mittels
1,10
spirometrischer Messung. Bei
Asthmatikern konnte gezeigt werden, da
unter der Belastung des Pollenfluges
signifikant hhere ECP-Spiegel vorliegen
als im Winter, wenn die Patienten weniger
9
stark ihren Allergenen ausgesetzt sind.
Die Behandlung mit
entzndungshemmenden Medikamenten
fhrt sowohl zu einer Besserung der
klinischen Symptomatik der Patienten, wie
auch zu einer Reduktion der saisonal
1,9
erhhten Spiegel zirkulierenden ECP's.
Daher kann ECP bei Asthmatikern als
sensitiver Marker zur Beurteilung der
Krankheitsaktivitt, wie auch zur
6
Therapiekontrolle eingesetzt werden.
Tomassini et al. zeigten, dass die
Serumkonzentration des ECP sowohl bei
IgE-vermittelten, als auch bei nicht IgE
vermittelten atopischen Zustnden hher
lagen, als bei gesunden Kontrollgruppen.
Die Messung der Serumkonzentration des
ECP vermeidet Unstimmigkeiten bei der
subjektiven Einschtzung des
Asthmaschweregrades.
Der Nachweis der ECPSerumkonzentration kann auch bei
einigen Erkrankungen der Haut zur
Bestsimmung des Schweregrades der
2,3
Erkrankung eingesetzt werden. Bedingt
durch seine neurotoxische Wirkung
scheint ECP an der Ausbildung des
Juckreizes beteiligt zu sein und findet sich
bei Erkrankungen wie Prurigo nodularis,
papulsen erythematsen Eruptionen.
Nach Abklingen der Beschwerden sinken
auch die ECP-Spiegel wieder auf
8,3
Normalniveau. Auch fr die atopische
Dermatitis (Neurodermitis) konnte von
einigen Forschungsgruppen gezeigt
werden das der Serum-ECP Spiegel die
2,3
Krankheitsaktivitt gut reflektiert. So
konnten Czech et al zeigen, da der ECPSpiegel sehr gut mit den Einzelnen
bislang verwendeten Parametern
Lichenifikation, Schlaflosigkeit, Erythem,
Papelbildung, Juckreiz, des ScoringSystems der Neurodermitis korreliert, wie
auch dem Gesamtscore. Gegenber der
subjektiven Beurteilung klinischer
Parameter bietet die objektive
8
Bestimmung von ECP groe Vorteile. Die

breiten Schwankungen durch individuelle
Bewertungen durch den Untersuchenden
und vor allem den Patienten werden so
weitgehend eliminiert.
Methodik
IMMULITE 2000 ECP ist ein Festphasen,
Zwei-phasen Chemilumineszenz
immunometrischer Assay.
Inkubationszyklen: 1 30 min.
Probengewinnung
Der Patient sollte bei der Blutabnahme
nchtern sein. Die Abnahme sollte (wenn
13
mglich) in Becton-Dickinson SST
Vacutainer Rhrchen erfolgen. Bitte
registrieren Sie dabei die Zeit. Lassen Sie
die Abnahmerhrchen komplett fllen,
schwenken Sie sie leicht und lassen Sie
dann das Blut fr 60120 Minuten bei
Raumtemperatur (1528C) gerinnen.
Danach bei 10001300xg fr 10 Minuten
bei Raumtemperatur zentrifugieren und
das Serum separieren. Bitte beachten Sie,
dass in der Serumprobe stattfindende
Prozesse, zusammen mit der Zeit und der
Temperatur whrend der Gerinnung,
Zentrifugation und Probenaufbewahrung
die gemessene ECP-Konzentration
7
beeinflussen kann. Diese die Probe
beeinflussenden Prozesse knnen auch
zu einer Inkonstanz der ECP-Messung
fhren.
Plasma oder hmolysierte Proben
sollten nicht verwendet werden.
Der Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zur
Klrung von lipmischen Proben
empfohlen.
Die Zentrifugation der Serumproben vor
dem vlligen Abschluss der Gerinnung
kann zu Fibringerinnseln fhren. Um
fehlerhaften Analysenergebnissen infolge
von Gerinnseln vorzubeugen, ist
sicherzustellen, dass die Gerinnung vor
der Zentrifugation der Proben vollstndig
abgeschlossen ist. Insbesondere Proben
von Patienten unter Antikoagulantientherapie knnen eine verlngerte
Gerinnungszeit aufweisen.
Blutentnahmerhrchen von verschiedenen
Herstellern knnen differierende Werte
verursachen. Dies hngt von den
verwendeten Materialien und Additiven
(Gel oder physische Trennbarrieren,
Gerinnungsaktivatoren und /oder

Antikoagulantien) ab. IMMULITE 2000
ECP sind nicht mit allen mglichen
Rhrchenvariationen ausgetestet worden.
Erforderliche Menge: 5 l Serum.
Lagerung: 7 Tage bei 28C haltbar oder
12
3 Monate bei 20C.
Um ein Abfallen der ECP-Konzentration
zu vermeiden, sollte das Serum in
Polystyrol- oder Polyprophylen-Rhrchen
aufbewahrt werden und nicht in
Glasrhrchen. Nicht versuchen, die
Proben in einem warmen Wasserbad
aufzutauen. Wiederholtes
Einfrieren/Auftauen vermeiden.
Verdnnung von Proben hoher
Konzentration: Proben, deren erwartete
Ergebnisse grer als der Messbereich
sein knnen, sollten vor dem Einsetzen
manuell mit dem ECPVerdnnungsreagenz (LEOZ) verdnnt
werden.
Hinweise und
Vorsichtsmanahmen
Zur In-vitro-Diagnostik.
Reagenzien: Bei 28C lagern. Unter
Einhaltung der geltenden gesetzlichen
Vorschriften entsorgen.
Die generell geltenden
Vorsichtsmanahmen sind einzuhalten
und alle Komponenten als potenziell
infektis zu behandeln. Alle aus
menschlichem Blut gewonnenen
Materialien wurden auf Syphilis,
Antikrper gegen HIV-1 und HIV-2,
Hepatitis-B-Oberflchenantigen und
Hepatitis-C-Antikrper untersucht und
negativ befundet.
Bestimmten Komponenten wurde
Natriumazid (<0,1 g/dl) hinzugefgt. Um
die Bildung von explosiven Metallaziden in
Blei- und Kupferrohren zu vermeiden,
sollten die Reagenzien nur zusammen mit
groen Wassermengen in die Kanalisation
gesplt werden.
Chemilumineszenz-Substrat:
Kontamination und direkte
Sonneneinstrahlung vermeiden (Siehe
Packungsbeilage).
Wasser: Destilliertes oder deionisiertes
Wasser verwenden.
Im Lieferumfang enthalten
Die Bestandteile der Testpackung sind
aufeinander abgestimmt. Die BarcodeAufkleber auf der Innenverpackung
werden zur Testdurchfhrung gebraucht.
ECP Kugelcontainer (L2EO12)
Barcodiert. 200 Kugeln, beschichtet mit
ECP-Antikrpern (monoklonal, Maus). Bei
28C bis zum Ablaufdatum haltbar.
L2KEO2: 1 Container.
ECP Reagenzbehlter (L2EOA2)
Barcodiert. 11,5 ml alkalische
Phosphatase konjugiert mit ECPAntikrpern (polyklonal, Kaninchen) in
Puffer, mit Konservierungsstoffen. Bei 2
8C bis zum Ablaufdatum haltbar.
L2KEO2: 1 Behlter.
Vor Gebrauch den Aufkleber an der
Perforation abreien, ohne dabei die
Barcodierung zu beschdigen. Die Folie
von der Oberseite des Containers
entfernen. Die Folie von der Oberseite des
Containers entfernen. Den Schiebedeckel
nach unten in die Fhrung des
Reagenziendeckels einrasten lassen.
ECP Kalibratoren (LEOL, LEOH)
Zwei Flschchen (niedrig und hoch) mit
lyophilisiertem ECP in einer ECP-freien
nichthumanen Serum-Puffermatrix (mit
Konservierungsmittel). Flschchen mit je
2,0 ml destilliertem oder deionisiertem
Wasser rekonstituieren. Zum Mischen
leicht schwenken oder umdrehen, bis das
lyophilisierte Material vollstndig aufgelst
ist. Sofort nach der Rekonstituierung
aliquotieren und einfrieren. Nach
Rekonstituierung 6 Monate bei 20C
haltbar.
L2KEO2: 1 Set.
Vor der Kalibrierung die entsprechenden
Aufkleber (dem Kit beiliegend) auf
Glasrhrchen kleben, so dass die
Barcodes vom Barcodereader des
Systems gelesen werden knnen.
ECP-Kontrollen (LEOC1, LEOC2)
Zwei Flschchen mit lyophilisiertem ECP
in einer ECP-freien nichthumanen SerumPuffermatrix (mit Konservierungsmittel).
Flschchen mit je 2,0 ml destilliertem oder
deionisiertem Wasser rekonstituieren.
Vorsichtig durchmischen. Sofort nach der
Rekonstituierung aliquotieren und
einfrieren. Nach Rekonstituierung 6
9
Monate bei 20C haltbar. Die

Konzentrationen entnehmen Sie bitte dem
Kontrolldatenblatt.
L2KEO2: 1 Set.
Separat erhltliche TestsystemKomponenten

ECP Verdnnungspuffer (LEOZ)
Zum manuellen Verdnnen der
Patientenproben. Enthlt eine ECP-freie
nichthumane Serum-Puffermatrix, mit
Konservierungsstoffen. 30 Tage nach dem
ffnen bei 28C haltbar oder 6 Monate
bei 20C (aliquotiert).
LEOZ: 25 ml
L2SUBM: ChemilumineszenzSubstratmodul
L2PWSM: Waschmodul
L2KPM: Reinigungsmodul
LRXT: (Einmal-) Reaktionsgefe
Ebenfalls bentigt
Destilliertes bzw. deionisiertes Wasser;
Testrhrchen.
Testdurchfhrung
Fr eine optimale Funktion des Gertes ist
unbedingt zu beachten, dass die
Wartungen, wie im IMMULITE 2000Handbuch beschrieben, regelmig
durchgefhrt werden.
Hinweise zur Vorbereitung, tglichen
Inbetriebnahme des Systems, der
Kalibrierung sowie Verfahren zur Testund Qualittskontrolle entnehmen Sie bitte
dem IMMULITE 2000-Handbuch.
Empfohlenes Kalibrationsintervall:
2 Wochen
Qualittskontrollproben: Die im
Lieferumfang enthaltenen Kontrolle(n)
verwenden.
Grenzen der Methode

Unterschiedliche Probenbehandlung kann
7
zu inkonstanten Messwerten fhren.
Plasma oder hmolysierte Proben sollten
nicht verwendet werden.
Heterophile Antikrper in Humanseren
knnen mit Immunglobulinen aus den
Assaykomponenten reagieren und
Interferenzerscheinungen innerhalb des in
vitro Immunoassays verursachen. (Clin.
Chem. 1988:34:27-33) Proben von
Patienten, die hufig mit Tier- bzw.
Tierserumprodukten zu tun haben, knnen
die erwhnten Interferenzen verursachen
und zu anomalen Resultaten fhren. Die
verwendeten Reagenzien sind so
konzipiert, dass das Risiko einer
Interferenz mit den zu messenden Proben
minimiert ist. Dennoch knnen potentiell
Interaktionen zwischen seltenen Seren
und den Testkomponenten auftreten. Zu
diagnostischen Zwecken sollten die mit
dem Assay erhaltenen Ergebnisse immer
in Kombination mit der klinischen
Untersuchung, der Patientenanamnese
und anderen Befunden gesehen werden.
Leistungsdaten
Siehe Tabellen und Grafiken mit
reprsentativen Daten fr den Assay. Die
Ergebnisse sind als ng/ml ausgedrckt.
(Sofern nicht anders angegeben, wurden
alle Ergebnisse mit Serumproben, die in
Becton Dickinson SST VacutainerRhrchen abgenommen wurden,
bestimmt.)
Messbereich: bis 200 ng/ml
Die Methode ist rckfhrbar auf einen
internen Standard, der mittels qualifizierter
Materialien und Messmethoden hergestellt
wurde.
Analytische Sensitivitt: 0,2 ng/ml
Referenzwerte
Die Auswertung einer Studie, durchgefhrt
mit dem IMMULITE 2000 System, mit 43
gesunden Labormitarbeitern ergab einen
Mittelwert von 10,9 ng/ml, einen Median
von 10,4 ng/ml und einen 95%-Bereich
von:
High-Dose-Hook-Effect: keiner bis

1 591 ng/ml
nn 24 ng/ml
Przision: Proben wurden innerhalb von

20 Tagen mit jeweils zwei Testanstzen in
Doppelbestimmung gemessen (insgesamt
40 Bestimmungen und 80
Einzelmessungen). (siehe Tabelle
Precision).
Diese Grenzwerte sind lediglich als

Richtlinien aufzufassen. Jedes Labor
sollte seine eigenen Referenzbereiche
etablieren.
Linearitt: Proben wurden in

verschiedenen Verdnnungen getestet.
(Reprsentative Daten entnehmen Sie
bitte der Tabelle Linearity.)
10
Wiederfindung: Die getesteten Proben

waren mit drei ECP-Lsungen (218, 546
und 983 ng/ml) 1:19 versetzt.
(Reprsentative Daten entnehmen Sie
bitte der Tabelle Recovery.)
Bilirubin: Konjugiertes und
unkonjugiertes Bilirubin hat in
Konzentrationen bis zu 200 mg/l keinen
Einfluss auf die Messung, der grer als
die Imprzision des Assays selbst ist.
Hmolyse: Fhrt bei Konzentrationen von
ber 270 mg/dl zu erhhten Werten.
(Siehe Tabelle Hemolysis)
Lipmie: Triglyceride haben in
Konzentrationen bis zu 3 000 mg/dl
keinen Einfluss auf die Ergebnisse, der
grer als die Imprzision des Assays
selbst ist.
Methodenvergleich: Der Assay wurde
anhand von 81 Proben mit dem
IMMULITE ECP Assay verglichen.
(Konzentrationsbereich: ca.
2 184 ng/ml. Siehe Grafik.) Berechnung
der linearen Regression:
(IML 2000) = 0,98 (IML) + 1,5 ng/ml
r = 0,998
Mittelwerte:
30,5 ng/ml (IMMULITE 2000)
32,6 ng/ml (IMMULITE)
Anwendungsberatung
Bei Rckfragen wenden Sie sich bitte an
Ihre Siemens Medical Solutions
Diagnostics Niederlassung.
Das Qualittsmanagement-System der Siemens
Medical Solutions Diagnostics Limited ist
zertifiziert nach DIN EN ISO 13485:2003.
Espaol
ECP
Utilidad del anlisis: Para su uso en el
diagnstico in vitro con el Analizador
IMMULITE 2000 para la medicin
cuantitativa de protena catinica de
eosinfilos (ECP) en suero.
Referencia: L2KEO2 (200 tests)
Cdigo del Test: ECP
Cdigo de Color: Agua
Resumen y Explicacin del

Test
Los eosinfilos, que se originan en clulas
primordiales de la mdula sea, aparecen
en grandes cantidades en los puntos de
inflamacin y en respuesta a ciertas
infecciones parasitarias. Estos leucocitos,
cuando maduran, residen principalmente
en los tejidos, pero alrededor del 1% de la
poblacin de eosinfilos circula en la
sangre. Los eosinfilos activados se
desgranulan para liberar cuatro protenas
muy bsicas en el tejido circundante. Las
protenas granulares, que pueden matar
parsitos y ciertas clulas de mamfero,
pueden causar daos tisulares asociados
con el asma y otras enfermedades
inflamatorias. La activacin de los
eosinfilos acompaa a una amplia gama
de condiciones inflamatorias, entre las
que se incluyen el asma bronquial, la
dermatitis atpica, la rinitis, la inflamacin
alrgica de los ojos, la efusin alrgica en
el odo medio, infecciones parasitarias y
bacterianas, enfermedades autoinmunes
11
y el sndrome de fatiga crnica.
Entre las cuatro protenas granulares
bsicas, la protena catinica de
eosinfilos (eosinophil cationic protein,
ECP) ha demostrado ser un control til
para muchas enfermedades inflamatorias
11
activas. Las concentraciones de ECP en
plasma y otros fluidos aumentan durante
las reacciones inflamatorias marcadas por
eosinfilos activados. Producida en
exclusiva por los eosinfilos, la ECP es
txica para las neuronas, algunas lneas
de clulas epiteliales y clulas aisladas de
miocardio. La protena, cargada
positivamente, se une a la heparina e
inhibe la coagulacin sangunea.
Varios estudios sealan altas
correlaciones individuales y de grupo
entre los niveles de ECP y los sntomas
clnicos del asma, tales como el aumento
del flujo espiratorio mximo (PEF), 2agonista inhalado (segn lo necesario)
prn, grado de reaccin de vas
1,10
Las
respiratorias y espirometra.
muestras de suero atpicas tienen niveles
de ECP ms altos que las muestras de
control no atpicas, incluso cuando el
recuento de eosinfilos circulantes
9
permanece dentro del intervalo normal.
En los pacientes con asma estacional, las
medidas de ECP reflejan cambios en la
actividad de la enfermedad a lo largo de
11
1,9
todo el ao. Roquet, et al. Sealaron

significativas correlaciones entre los
niveles de ECP y la hiperreactividad
6
bronquial en pacientes con asma leve.
Tomassini, et al. Demostraron que las
concentraciones de ECP en suero
sobrepasan los niveles normales, de
control, tanto en condiciones atpicas
mediadas por IgE como no mediadas por
IgE. Las medidas de ECP en suero evitan
las inconsistencias inherentes a la
valoracin subjetiva del asma.
Las concentraciones de ECP en suero
pueden indicar la gravedad de ciertos
2,3
trastornos de la piel. La toxicidad
neuronal de la ECP podra contribuir a los
trastornos que provocan prurito; los
pacientes con ciertas enfermedades de la
piel, tales como las erupciones
eritematosas papulares y prurigo
nodularis, mostraron niveles elevados de
ECP en suero, que se normalizaron al
8,3
sanar. Varios grupos encontraron que
las concentraciones de ECP en suero
reflejan actividad asociada a dermatitis
2,3
atpica (AD). El sistema de valoracin
clnica comnmente utilizado para la
dermatitis atpica registra liquenificacin,
prdida del sueo, eritema, ppulas,
prurito y excoriaciones. Czech, et al.
demostraron que la ECP est
correlacionada con cada uno de estos
sntomas, y se correlaciona en mayor
medida con la valoracin clnica total.
Aunque la dermatitis atpica va
acompaada de la alteracin de los
parmetros inmunolgicos, los niveles de
IgE medidos en suero no estn
correlacionados con algunos de los
2
sntomas clnicos. La naturaleza objetiva
de las medidas de ECP en suero presenta
una ventaja sobre las medidas clnicas
subjetivas, que tienden a presentar
inconsistencias provocadas por la
variabilidad en las valoraciones de los
investigadores y pacientes individuales.
Principio del anlisis

IMMULITE 2000 ECP es un ensayo
inmunomtrico con dos sitios de unin,
quimioluminiscente en fase slida.
Ciclos de incubacin: 1 30 minutos.
Recogida de la muestra
No es necesario que el paciente ayune.
13
Recoja la sangre por venipuncin en
12
tubos Vacutainer Becton Dickinson

SST, anotando la hora de recogida. Llene
por completo los tubos de recogida,
invirtalos suavemente y deje que la
sangre se coagule de 60 a 120 minutos a
temperatura ambiente (15 a 28C).
Centrifugue a 1 0001 300 xg durante 10
minutos a temperatura ambiente y separe
el suero de las clulas. Observe que los
parmetros de procesamiento de las
muestras de sangre, incluyendo el tiempo
y temperatura de coagulacin, la
centrifugacin y el almacenamiento de las
muestras, pueden tener consecuencias
7
sobre la medida del nivel de ECP. Las
variaciones de los parmetros de
procesamiento entre diferentes muestras
pueden provocar medidas de ECP
incoherentes.
No debern ser usadas muestras de
plasma o hemolizadas.
Se recomienda el uso de una
ultracentrfuga para aclarar las muestras
lipmicas.
La centrifugacion de las muestras de
suero antes de que se forme el coagulo
puede ocasionar la presencia de fibrina.
Para evitar resultados erroneos debidos a
la presencia de fibrina, asegurarse que se
ha formado el coagulo completamente
antes de centrifugar las muestras.
Algunas muestras, particularmente
aquellas de pacientes sometidos a terapia
anticoagulante, pueden requerir mayor
tiempo de coagulacion.
Los tubos para recoger sangre de
distintos fabricantes pueden producir
valores diferentes, dependiendo del
material del tubo y de los aditivos,
incluyendo barreras de gel o barreras
fsicas, activadores de la coagulacin y/o
anticoagulantes. El ECP IMMULITE 2000
no ha sido analizado con todos los
distintos tipos de tubos.
Volumen requerido: 5 l suero.
Conservacin: 7 das a 28C, o 3
12
meses a 20C.
Almacene las muestras de suero en tubos
de poliestireno, en lugar de tubos de
cristal, para evitar el descenso de los
valores de ECP. NO intente descongelar
al bao Mara las muestras congeladas.
Evitar las congelaciones y
descongelaciones repetidas.
Dilucin de muestras altas: Las

muestras que esperan tener niveles de
ECP por encima de los rangos de
calibracin del ensayo, deben ser
manualmente diluidas con Diluyente de
Muestra ECP (LEOZ) antes del ensayo.
Antes de usar, cortar la parte superior de

la etiqueta en la perforacin, sin daar el
cdigo de barras. Quitar el precinto del
orificio del vial; encajar la cubierta
deslizante en las rampas de la tapa del
reactivo.
Advertencias y precauciones
Ajustadores de ECP (LEOL, LEOH)

Dos viales (bajo y alto) conteniendo ECP
liofilizado en una matriz de suero no
humano, con preservativo. Reconstituya
cada vial con 2,0 ml de agua destilada o
desionizada. Mezcle por agitacin o
inversin suave hasta que se haya
disuelto completamente el material
iofilizado. Alicuote y congele
inmediatamente despus de su
reconstitucin. Estable a 20C durante
6 meses tras su reconstitucin.
L2KEO2: 1 juego.
Para uso diagnstico in vitro.

Reactivos: Mantener a 28C. Desechar
de acuerdo con las normas aplicables.
Siga las precauciones universales y
manipule todos los componentes como si
fueran capaces de transmitir agentes
infecciosos. Los materiales derivados de
sangre humana han sido analizados y son
negativos para sfilis; para anticuerpos
frente al HIV 1 y 2; para el antgeno de
superficie de hepatitis B y para los
anticuerpos de hepatitis C.
Se ha usado Azida sodica, en
concentraciones menores de 0,1 g/dl,
como conservante. Para su eliminacion,
lavar con grandes cantidades de agua
para evitar la constitucion de residuos de
azidas metalicas, potencialmente
explosivas, en las caeras de cobre y
plomo.
Sustrato quimioluminiscente: Evite la
contaminacin y exposicin a la luz
directa del sol. (Ver el prospecto.)
Agua: Use agua destilada o desionizada.
Materiales suministrados
Los componentes representan un juego
completo. Las etiquetas incluidas en la
caja son necesarias para el ensayo.
Cartucho de bolas ECP (L2E012)
Con cdigo de barras, 200 bolas,
recubiertas con anticuerpo monoclonal
murina anti-ECP. Estable a 28C hasta
la fecha de caducidad.
L2KEO2: 1 cartucho.
Vial de reactivo de ECP (L2EOA2)
Con cdigo de barras, 11,5 ml de
fosfatasa alcalina (de intestino de ternera)
conjugada con anticuerpos policlonales de
conejo anti-ECP, anticuerpo en buffer, con
preservativo. Estable a 28C hasta la
fecha de caducidad.
L2KEO2: 1 vial.
Antes de hacer un ajuste, colocar las

etiquetas a las alcuotas apropiadas
(suministradas con el kit) sobre tubos de
ensayo, de forma tal que los cdigos de
barras puedan ser ledos por el lector.
Controles de ECP (LEOC1, LEOC2)
Dos viales conteniendo ECP liofilizado en
una matriz de suero no humano, con
preservativo. Reconstituya cada vial con
2,0 ml de agua destilada o desionizada.
Mezclar suavemente con movimientos
giratorios intermitentes. Alicuote y congele
inmediatamente despus de su
reconstitucin. Estable a 20C durante
6 meses tras su reconstitucin. Consulte
los niveles de concentracin en el
prospecto del control.
L2KEO2: 1 juego.
Componentes del kit que se

suministran por separado
Diluyente de ECP (LEOZ)
Para la dilucin manual de las muestras
de los pacientes. ECP liofilizado en una
matriz de suero no humano, con
preservativo. Estable a 28C durante
30 das despus de abrise, o hasta
6 meses (alicuotados) a 20C.
LEOZ: 25 ml
L2SUBM: Substrato quimioluminiscente
L2PWSM: Lavado de sonda
L2KPM: Kit de limpieza de sonda
LRXT: Tubos de reaccin (desechables)
13
Tambin necesarios
Agua destilada o desionizada; tubos de
ensayo.
Ensayo
Ntese que para una ptima ejecucin, es
importante realizar los procedimientos de
mantenimiento rutinario definidos en el
manual del operador IMMULITE 2000.
Consulte el Manual del operador de
IMMULITE 2000 para: la preparacin,
instalacin, ajuste, ensayo y
procedimientos de control de calidad.
obstante, pueden darse interacciones

anmalas entre sueros conflictivos y los
componentes del ensayo. Con fines de
diagnstico, los resultados obtenidos con
este ensayo siempre deben ser usados en
combinacin con el examen clnico, la
historia mdica del paciente y cualquier
otro dato clnico relevante.
Caractersticas analticas
Muestras de Control de calidad: Use los

controles suministrados junto con el kit.
Para ver resultados representativos de las

cualidades del ensayo, consulte las tablas
y los grficos. Los resultados se expresan
en ng/ml. (A menos que se especifique lo
contrario, todos los resultados se
generaron en muestras de suero
recogidas en tubos Vacutainer Becton
Dickinson SST).
Valores esperados
Intervalo de calibracin: Hasta

200 ng/ml.
Intervalo de ajuste recomendado:

2 semanas
Un estudio realizado con ECP en el

IMMULITE 2000 en 43 voluntarios
aparentemente sanos, arroj una media
de 10,9 ng/ml, una mediana de
10,4 ng/ml, y un rango de referencia
menor al 95% de:
ND 24 ng/ml
Estos lmites han de considerarse slo
como una gua. Cada laboratorio deber
establecer sus propios intervalos de
referencia.
Limitaciones
Las variaciones en los parmetros de
procesamiento de la sangre pueden
provocar que las medidas de ECP sean
7
incoherentes.
No debern ser usadas muestras de
plasma o hemolizadas.
Los anticuerpos heteroflicos en el suero
humano pueden reaccionar con las
inmunoglobulinas de los componentes del
ensayo provocando interferencias con los
inmunoanlisis in vitro. [Ver Boscato LM,
Stuart MC. Heterophilic antibodies: a
problem for all immunoassays. Clin Chem
1988:34:27-33.] Las muestras de los
pacientes que frecuentemente estn
expuestos a animales o a productos
sricos animales pueden presentar este
tipo de interferencia que potencialmente
ocasione un resultado anmalo. Estos
reactivos han sido formulados para
minimizar el riesgo de interferencia, no
14
El ensayo es trazable a un estndar

interno fabricado usando procedimientos
de medida y materiales cualificados.
Sensibilidad analtico: 0,2 ng/ml,
Efecto de gancho a altas dosis:
Ninguno hasta 1 591 ng/ml
Precisin: Las muestras fueron
procesadas por duplicado durante 20
das, en dos tandas de trabajo por da,
para un total de 40 tandas y 80
replicados. (Vase la tabla "Precision").
Linealidad: Las muestras fueron
analizadas con varias diluciones. (Vase
la tabla "Linearity" para resultados
representativos).
Recuperacin: Se han analizado las
muestras cargadas 1 a 19 con tres
soluciones (218, 546 y 983 ng/ml) de
ECP. (Ver la tabla "Recovery" para
resultados representativos).
Bilirrubina: La presencia de bilirrubina
conjugada y libre en concentraciones
hasta 200 mg/l no tiene efecto en el
ensayo, en lo concerniente a la precisin
del ensayo.
Hemlisis: interfiere con el ensayo,
provocando una elevacin de los valores
a los niveles superiores a 270 mg/dl
(Vase la tabla "Hemolysis").
Lipemia: La presencia de triglicridos en
concentraciones hasta 3 000 mg/dl no
tiene efecto alguno en los resultados, en
lo correspondiente a la precisin del

ensayo.
Comparacin de los mtodos: El
ensayo fue comparado con 81 muestras
de ECP en IMMULITE. Intervalo de
concentracin: aproximadamente
2 184 ng/ml. Vase el grfico.) Por
regresin lineal:
(IML 2000) = 0,98 (IML) + 1,5 ng/ml
r = 0,998
Medias:
Asistencia tcnica
Pngase en contacto con el distribuidor
nacional.
El Sistema de Calidad de Siemens Medical
Solutions Diagnostics Limited est certificado
por la ISO 13485:2003.
Franais
IMMULITE 2000 ECP
Domaine d'utilisation : dosage quantitatif
de la protine cationique osinophile
(ECP) dans le srum. Ce test est rserv
un usage diagnostic in vitro avec
l'Analyseur IMMULITE 2000.
Rfrence catalogue :
L2KEO2 (200 tests)
Code produit : ECP
Code couleur : bleu vert
Introduction
Les osinophiles, qui ont pour origine les
cellules souches de la moelle osseuse,
apparaissent en grand nombre sur les
sites d'inflammation et en rponse
certaines infections parasitaires. Ces
leucocytes rsident maturit pour la
plupart dans les tissus, mais environ 1 %
de la population des osinophiles circule
dans le sang. Les osinophiles lorsqu'ils
sont activs dgranulent et librent dans
les tissus avoisinants quatre protines
fortement basiques. Ces protines
granulaires, qui peuvent tuer des
parasites et certaines cellules de
mammifres, peuvent entraner des
lsions tissulaires associes l'asthme ou
d'autres maladies inflammatoires.
L'activation des osinophiles accompagne

de nombreuses maladies de type
inflammatoire dont l'asthme bronchique,
les dermatites atopiques, les rhinites, les
inflammations allergiques de l'il, les
allergies de l'oreille moyenne, les
infections parasitaires ou bactriennes, les
maladies auto-immunes et le syndrome de
11
fatigue chronique.
Parmi les quatre protines granulaires
basiques, la protine cationique
osinophile (ECP) a prouv son intrt
dans le suivi de nombreuses pathologies
11
inflammatoires actives. Les
concentrations d'ECP dans le plasma et
certains autres fluides de l'organisme
augmentent pendant les ractions
inflammatoires qui entranent l'activation
des osinophiles. Produite exclusivement
par les osinophiles, l'ECP est toxique
pour les neurones, certaines lignes
cellulaires pithliales et les cellules
myocardiques isoles. La protine
charge positivement se fixe l'hparine
et inhibe la coagulation sanguine.
Diffrentes tudes ont montr une
corrlation individuelle et de groupe
importante entre le niveau d'ECP et les
symptmes cliniques de l'asthme comme
une augmentation du pic du flux
expiratoire (PEF), le degr de rponse des
1,10
bronches et la spiromtrie. Les
chantillons de srums de patients
atopiques ont des niveaux d'ECP
suprieurs ceux des srums de contrle
de patients non atopiques, mme quand
le nombre d'osinophiles circulants reste
9
dans le domaine des valeurs normales.
Chez les patients atteints d'asthme
saisonnier, le dosage de l'ECP reflte les
changements d'activit de la maladie
1,9
pendant l'anne. Roquet et al ont
montrs qu'il existe une corrlation
significative entre les niveaux d'ECP et
l'hyperractivit bronchique chez les
6
patients atteint d'asthme moder.
Tomassini et al ont montr que les
concentrations d'ECP sont suprieures
la normale des niveaux de contrle chez
les patients atopiques IgE mdies ou non
IgE mdies. Les dosages d'ECP dans le
srum vite d'tablir un diagnostic
subjectif de l'asthme.
Les concentrations sriques d'ECP
peuvent indiquer le degr de svrit de
2,3
certaines maladies de la peau. La
toxicit neuronale de l'ECP peut tre
15
l'origine de problmes de dmangeaisons.

Des patients atteints de certaines
maladies de la peau comme les ruptions
papulaires rythmateuses ou le prurigo
nodularis prsentent des niveaux d'ECP
levs qui se normalisent au moment de
8,3
la gurison. Diffrents groupes de
chercheurs ont trouv que les
concentrations d'ECP dans le srum
reflte l'activit des dermatites
2,3
atopiques. Les symptmes cliniques
utiliss couramment pour mesurer le
degr d'volution des dermatites
atopiques incluent le dveloppement de
lichens, la perte de sommeil, l'rythme,
les papules, le prurit et les excoriations.
Czech et al ont montr que les variations
du taux de l'ECP corrlent avec chacun de
ces symptmes et sont trs fortement
corrles avec le score clinique total.
D'autre part, certains paramtres
immunologiques modifis qui
accompagnent la dermatite atopique
comme les IgE sriques ne sont pas
corrls avec certains symptmes
2
cliniques. La nature objective du dosage
de l'ECP dans le srum prsente un
avantage par rapport des donnes
cliniques subjectives qui peuvent parfois
conduire des contradictions dans le
diagnostic.
Principe du test
IMMULITE 2000 ECP est un dosage
chimiluminescent immunomtrique, en
deux tapes, en phase solide.
Cycles d'incubation : 1 30 minutes.
Recueil des chantillons

Il n'est pas ncessaire que le patient soit
jeun. Prlever les chantillons sur tubes
vacutainer SST (Beckton Dickinson) en
notant l'heure du prlvement. Remplir
compltement les tubes de prlvement
puis les inverser doucement. Laisser le
sang coaguler pendant 60 120 minutes
temprature ambiante (+15C/+28C).
Centrifuger 1 0001 300xg pendant 10
minutes temprature ambiante et
sparer le srum des cellules. Noter tous
les paramtres de prparation de
l'chantillon sanguin, incluant le temps et
la temprature de coagulation, de
centrifugation, de conservation de
l'chantillon, qui peuvent avoir une
influence sur la concentration d'ECP
7
mesure. Des variations dans la
16
prparation de l'chantillon peuvent

donner des mesures d'ECP variables.
Ne pas utiliser d'chantillons
plasmatiques ou hmolyss.
Il est recommand de clarifier les
chantillons hyperlipmiques par
ultracentrifugation.
La centrifugation des chantillons
sriques avant la formation complte du
caillot peut entraner la prsence de
fibrine. Pour viter les rsultats errons
ds la prsence de fibrine, s'assurer de
la formation complte du caillot avant de
centrifuger les chantillons. Certains
chantillons, en particulier ceux provenant
de patients sous anti-coagulants, peuvent
ncessiter un temps plus long pour la
formation du caillot.
Des tubes pour prlvements sanguins
provenant de fabricants diffrents peuvent
donner des rsultats diffrents, selon les
matriaux et additifs utiliss, y compris
gels ou barrires physiques, activateurs
de la coagulation et/ou anticoagulants. Le
coffret ECP IMMULITE 2000 n'a pas t
test sur tous les types de tubes
possibles.
Volume ncessaire : 5 l de srum.
Conservation : 7 jours +2C/+8C ou 3
12
mois 20C.
Conserver de prfrence les chantillons
de srum dans des tubes de polystyrne
ou polypropylne plutt que des tubes de
verre afin d'viter une diminution des
valeurs de ECP. Ne pas dcongeler au
bain-marie. Eviter de multiplier les cycles
conglation/ dconglation.
Dilution des chantillons levs: Les
chantillons suspects d'avoir des taux
d'ECP suprieurs au domaine de mesure
du dosage doivent tre dilus
manuellement avec le diluant chantillon
ECP (LEOZ) avant le dosage.
Prcautions d'emploi
Rserv un usage diagnostique in vitro.
Ractifs : Conserver les ractifs +2/
+8 C. liminer les dchets conformment
aux lois en vigueur.
Respecter les prcautions d'emploi et
manipuler tous les composants du coffret
comme des produits potentiellement
infectieux. Les ractifs drivs de produits
humains et utiliss dans ce coffret ont subi

un test srologique pour la Syphilis et des
tests de dpistage pour les anticorps antiVIH1 et 2, anti-HCV et pour l'antigne de
surface de l'hpatite B, qui se sont tous
avrs ngatifs.
De l'azide de sodium des concentrations
infrieures 0,1 g/dl a t ajout comme
conservateur ; lors de l'limination,
l'vacuer avec de grandes quantits d'eau
pour viter une accumulation d'azides
mtalliques explosifs dans les
canalisations.
Substrat chimiluminescent : viter les
contaminations et l'exposition directe la
lumire solaire (voir la fiche technique).
Eau : utiliser uniquement de l'eau distille
ou dsionise.
Matriel fourni
Les composants de la trousse ne peuvent
tre utiliss que conjointement. Les
tiquettes l'intrieur du coffret sont
ncessaires au dosage.
Cartouche de billes ECP (L2EO12)
Avec code-barres. 200 billes revtues
d'anticorps monoclonal murin anti-ECP.
Stable +2/ +8 C jusqu' la date de
premption.
L2KEO2: 1 cartouche.
Cartouche ractif ECP (L2EOA2)
Avec code-barre. 11,5 ml d'anticorps
polyclonal de lapin anti-ECP conjugu
de la phosphatase alcaline (intestins de
veaux) dans un tampon, avec
conservateur. Stable +2/ +8 C jusqu'
la date de premption.
L2KEO2: 1 cartouche.
Avant l'emploi, retirer la partie suprieure
de l'tiquette au niveau des perforations
en ayant soin de ne pas endommager le
code-barres. Retirer le film protecteur
situ sur la partie suprieure de la
cartouche-ractif ; insrer le couvercle
coulissant entre les glissires sur le
dessus de la cartouche-ractif.
Ajusteurs ECP (LEOL, LEOH)
Deux flacons (bas et haut) contenant de
l'ECP lyophilis dans une matrice de
srum non humain/tampon sans ECP,
avec conservateur. Reconstituer chaque
flacon avec 2,0 ml d'eau distille ou
dsionise. Mlanger en imprimant un
lger mouvement circulaire ou en

retournant dlicatement jusqu' complte
dissolution de la substance lyophilise.
Aliquoter et congeler immdiatement
aprs la reconstitution. Stable
20 C pendant 6 mois aprs
reconstitution.
L2KEO2: 1 jeu.
Avant de procder un ajustement, placer
les tiquettes correspondant l'aliquot
(fournies avec le coffret) sur des tubes en
verre de sorte que les code-barres soient
lisibles par le lecteur.
Contrles ECP (LEOC1, LEOC2)
Deux flacons contenant de l'ECP
lyophilis dans une matrice de srum non
humain/tampon sans ECP, avec
conservateur. Reconstituer chaque flacon
avec 2,0 ml d'eau distille ou dsionise.
Mlanger par retournements. Aliquoter et
congeler immdiatement aprs
reconstitution. Stable 20 C pendant 6
mois aprs reconstitution. Se reporter la
fiche technique du contrle pour les
concentrations.
L2KEO2: 1 jeu.
Composants du coffret fournis

sparment
Diluant chantillon ECP (LEOZ)
Pour la dilution manuelle des chantillons
cliniques. Matrice de srum non
humain/tampon sans ECP, avec
conservateur. Stable +2/ +8 C pendant
30 jours aprs ouverture, ou 6 mois
(aliquot) 20 C.
LEOZ: 25 ml
L2SUBM : Substrat chimiluminescent
L2PWSM : Solution de lavage
L2KPM : Coffret de dcontamination de
l'aiguille de prlvement
LRXT : Godets ractionnels (jetables)
Egalement requis
Eau distille ou dsionise ; tubes essai.
Protocole de dosage
Noter que pour des performances
optimales, il est important de raliser
toutes les procdures de maintenance de
routine selon les instructions du Manuel
d'Utilisation IMMULITE 2000.
Se reporter au manuel d'utilisation de
l'IMMULITE 2000 pour : la prparation, le
17
dmarrage du systme, les ajustements,

le dosage et les procdures de contrle
de qualit.
Intervalle d'ajustement recommand :
2 semaines
Echantillons pour le contrle de
qualit : utiliser le(s) contrle(s) fournis
avec le coffret.
Valeurs de rfrence
Une tude a t ralise avec le test
IMMULITE 2000 ECP sur 43 volontaires
en bonne sant et donn une moyenne
de 10,9 ng/ml, une mdiane de
10,4 ng/ml, et une valeur de rfrence
me
percentile :
basse au 95
ND 24 ng/ml
Utiliser ces valeurs titre indicatif
uniquement. Chaque laboratoire devra
tablir ses propres valeurs de rfrence.
Performances du test
Consulter les tableaux et graphiques pour
obtenir les donnes reprsentatives des
performances de ce test. Les rsultats
sont donns en ng/ml. (En l'absence
d'indication supplmentaire, les rsultats
ci-dessous ont t obtenus avec des
chantillons sriques prlevs sur tube
vacutainer SST (Becton Dickinson).)
Intervalle de linarit : jusqu'
200 ng/ml.
Le dosage peut tre retrac un standard
interne, manufactur laide de matriaux
et procdures de mensuration qualifies.
Sensibilit analytique : 0,2 ng/ml,
Accoutumance aux doses leves :
aucune jusqu' 1 591 ng/ml
Limites
Prcision : les chantillons sont doss en

duplicata sur une priode qui s'tend sur
20 jours, avec deux sries par jours, soit
40 sries et 80 replicata au total. (Voir le
tableau Precision .)
Des variations des paramtres de

prparation du prlvement sanguin
peuvent entraner des variations des
7
mesures d'ECP.
Test de dilution : Des chantillons ont

t doss diffrentes concentrations.
(Voir le tableau Linearity pour des
donnes reprsentatives.)
Ne pas utiliser d'chantillons plasmatiques

ou hmolyss.
Test de rcupration : des chantillons

doss ont t chargs dans une
proportion de 1 19 avec trois solutions
d'ECP (218, 546 et 983 ng/ml). (Voir le
tableau Recovery pour des donnes
reprsentatives.)
Les anticorps htrophiles du srum

humain peuvent ragir avec les
immunoglobulines faisant partie des
composants du coffret et interfrer avec
les immunodosages in vitro. [Voir Boscato
LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a
1988:34:27-33.] Les chantillons
provenant de patients frquemment
exposs aux animaux ou aux produits
sriques d'origine animale peuvent
prsenter ce type d'interfrence pouvant
potentiellement donner un rsultat
anormal. Ces ractifs ont t mis au point
afin de minimiser le risque d'interfrence,
cependant des interactions potentielles
entre des srums rares et les composants
du test peuvent se produire. Dans un but
diagnostique, les rsultats obtenus avec
ce dosage doivent toujours tre utiliss en
association avec un examen clinique,
l'histoire mdicale du patient et d'autres
rsultats.
Bilirubine : La prsence de bilirubine,

conjugue ou non, n'a aucun effet sur le
dosage ni sur sa prcision si la
concentration ne dpasse pas 200 mg/l.
Hmolyse : interfre avec le dosage et
occasionne une levs des mesures de
concentrations suprieures 270 mg/dl.
(Voir le tableau Hemolysis ).
Lipmie : La prsence de triglycrides
jusqu' une concentration de 3 000 mg/dl
n'interfre ni sur la prcision du dosage, ni
sur les rsultats.
Comparaison de mthodes: Le dosage
a t compar au test IMMULITE ECP sur
81 chantillons. (intervalle de
concentrations : environ 2184 ng/ml. Voir
graphique.) Par rgression linaire :
(IML 2000) = 0,98 (IML) + 1,5 ng/ml
r = 0,998
18
Moyennes :
Assistance technique
Contacter votre distributeur national. En
France distribu par DPC France 90 bd
National 92257 La Garenne-Colombes.
Le Systme Qualit de Siemens Medical
Solutions Diagnostics Limited est certifi
ISO 13485:2003.
Italiano
IMMULITE 2000 ECP
Uso: Ad uso diagnostico in vitro con
l'analizzatore IMMULITE 2000 per la
misurazione quantitativa della proteina
cationica degli eosinofili (ECP) nel siero.
Codice: L2KEO2 (200 test)
Codice del Test: ECP Colore: Acqua
Riassunto e spiegazione del

Test
Gli eosinofili, che hanno origine dalle
cellule di base del midollo osseo,
appaiono in grandi quantit nei siti di
infiammazione ed in risposta ad alcune
infezioni parassitarie. Questi leucociti, una
volta maturi, si situano principalmente nei
tessuti, ma circa l'1% della popolazione
eosinofila circola nel sangue. Gli eosinofili
attivati degranulano per rilasciare quattro
proteine di base altamente significative nei
tessuti circostanti. Le proteine granulari,
che uccidono i parassiti ed alcune cellule
di mammiferi, possono danneggiare i
tessuti se associata ad asma ed altre
malattie infiammatorie. L'attivazione degli
eosinofili accompagna un range esteso di
stati infiammatori, inclusa l'asma
bronchiale, la dermatite atopica,
l'infiammazione allergica agli occhi,
l'effusione allergica dell'orecchio medio, le
infezioni parassitarie e batteriche, le
malattie autoimmuni, e la sindrome da
11
affaticamento cronico.
Tra le quattre proteine granulari
fondamentali, si riscontrato che la
proteina cationica degli eosinofili (ECP)
rappresenta un controllo utile per molte
11
malattie infiammatorie attive. Le
concentrazioni di ECP nel plasma ed in
alcuni fluidi corporei aumentano durante

reazioni infiammatorie contraddistinte
dalla presenza di eosinofili attivati.
Prodotta esclusivamente dagli eosinofili,
l'ECP tossica per i neuroni, alcune linee
di cellule epiteliali e di cellule miocardiche
isolate. La proteina con carico positivo si
lega all'eparina ed inibisce la
coagulazione del sangue.
Alcuni studi hanno dimostrato forti
correlazioni individuali e di gruppo tra i
livelli di ECP ed i sintomi clinici dell'asma,
quali un aumento nel picco del ritmo
espiratorio (PEF), il prn ("come
necessario") la 2-agonista inalata, la
risposta delle vie respiratorie e la
1,10
spirometria. Campioni di siero atopico
presentano livelli di ECP superiori a
campioni di siero non atopico di controllo,
anche quando la conta degli eosinofili in
9
circolo rimane entro il range normale. In
pazienti con asma stagionale, le
misurazioni dell'ECP rispecchiano i
cambiamenti nell'attivit della malattia
1,9
durante l'anno. Roquet, et al. ha
dimostrato correlazioni significative tra i
livelli di ECP e l'iperreattivit bronchiale in
6
pazienti con asma pi lieve. Tomassini, et
al. ha dimostrato che le concentrazioni di
ECP nel siero sono superiori ai livelli
normali di controllo in condizioni atopiche
IgE e non IgE mediate. Le misurazioni di
ECP nel siero evitano incongruenze
derivate da valutazioni soggettive
dell'asma.
Le concentrazioni di ECP nel siero
possono essere indice della gravit di
2,3
alcuni disturbi della pelle. La tossicit
neurale dell'ECP potrebbe contribuire al
prurito; pazienti con eruzioni eritematose
papulari e prurigo nodularis hanno
presentato livelli di ECP elevati nel siero,
che poi sono diventati normali dopo la
8,3
guarigione. Diversi gruppi hanno
riscontrato che le concentrazioni di ECP
nel siero rispecchiano l'attivit della
2,3
dermatite atopica (AD). Il metodo clinico
pi comune per la rilavazione della
dermatite atopica tiene conto della
lichenificazione, della perdita del sonno,
dell'eritema, delle papule, del prurito, e
delle escoriazioni. Czech, et al. ha
dimostrato che l'ECP correla con ognuno
di questi sintomi, e la correlazione pi
forte con la valutazione clinica totale.
Bench i parametri immunologici alterati
accompagnino la dermatite atopica, le
19
concentrazioni delle IgE nel siero non

hanno dimostrato correlazioni con alcuni
2
sintomi clinici. La natura oggettiva delle
misurazioni dell'ECP nel siero presenta un
vantaggio rispetto alle misurazioni cliniche
soggettive, che sono pi inclini a
incongruenze basate su di un range pi
esteso di valutazioni individuali effettuate
dai pazienti.
Principio del Dosaggio

IMMULITE 2000 ECP un dosaggio
immunometrico in chemiluminescenza in
fase solida a doppio sito.
Cicli d'incubazione: 1 30 minuti.
Prelievo dei Campioni

Il paziente non deve essere a digiuno.
13
Prelevare il sangue in provette SST
vacutainer della Becton Dickinson,
registrando l'ora del prelievo. Riempire
completamente le provette, capovolgerle
delicatamente, e lasciar coagulare il
sangue per 60120 minuti a temperatura
ambiente (1528C). Centrifugare a
1.0001.300xg per 10 minuti a
temperatura ambiente e separare il siero
dalle cellule. E' da tener presente che i
parametri per l'analisi del sangue, incluso
tempo e temperatura della coagulazione
del sangue, centrifugazione, e
conservazione del campione, potrebbero
avere un impatto sulle concentrazioni di
7
ECP misurate. Variazioni nei parametri
per l'analisi del sangue possono causare
misurazioni di ECP non in linea.
Non utilizzare campioni di plasma o
campioni emolizzati.
Si consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifuga
per schiarire i campioni lipemici.
La centrifugazione dei campioni di siero
prima che la coagulazione sia completa
pu produrre fibrina. Per evitare risultati
errati dovuti alla presenza di fibrina,
assicurarsi che il processo di
coagulazione sia completo prima di
centrifugare i campioni. Alcuni campioni,
in modo particolare quelli di pazienti
sottoposti a terapia con anticoagulanti,
possono richiedere tempi di coagulazione
pi lunghi.
Provette per il prelievo di sangue di
produttori diversi possono dare valori
differenti, a seconda dei materiali e degli
additivi usati, incluso gel o barriere fisiche,
20
attivatori di coaguli e/o anticoagulanti.

L'IMMULITE 2000 ECP non stato
verificato con tutte le possibili variazioni di
tipi di provette.
Volume richiesto: 5 L di siero.
Conservazione: 7 giorni a 28C o 3
12
mesi a 20C.
Conservare i campioni di siero in provette
di polistirene o polipropilene invece di
utilizzare provette di vetro, per evitare una
diminuzione dei valori di ECP. Non
cercare di scongelare i campioni congelati
riscaldandoli in un bagno d'acqua. Evitare
cicli ripetuti di
congelamento/scongelamento.
Diluizione dei Campioni: Campioni con
valori attesi di ECP al di sopra del range di
calibrazione devono essere diluiti
manualmente con il Diluente del
Campione ECP (LEOZ) prima del
dosaggio.
Avvertenze e precauzioni
Ad uso diagnostico in vitro.
Reagenti: Conservare a 28C. Scartare
in conformit alle leggi applicabili.
Seguire le precauzioni universali, e
maneggiare tutti i componenti come se
fossero capaci di trasmettere agenti
infettivi. Sono stati analizzati i materiali di
sorgente dal sangue umano e sono stati
trovati non reattivi per sifilide; per anticorpi
ad HIV 1 e 2; per l'antigeno superficiale
dell'epatite B; e per anticorpi all'epatite C.
E' stata aggiunta Sodio Azide a
concentrazioni inferiori a 0,1 g/dL come
conservante. Al momento
dell'eliminazione, irrorare con molta acqua
per evitare la formazione di azidi
metalliche potenzialmente esplosive nelle
tubature di piombo e di rame.
Sottostrato chemiluminescente: Evitare
la contaminazione e l'esposizione alla luce
del sole diretta. (Vedere l'inserimento).
Acqua: Utilizzare acqua distillata o
deionizzata.
Materiali forniti
I componenti costituiscono un unico set.
Le etichette all'interno della confezione
sono necessarie per eseguire i dosaggi.
Contenitore di Sferette ECP (L2EO12)

Con codice a barre. 200 biglie, coattate
con anticorpi monoclonali murini anti-ECP
Stabile a 28C fino alla data di scadenza.
L2KEO2: 1 confezione.
Porta Reagente ECP (L2EOA2)
Con codice a barre. 11,5 mL di fosfatasi
alcalina (intestino bovino) coniugato con
anticorpi policlonali di coniglio anti-ECP in
un tampone, con conservanti. Stabile a 2
8C fino alla data di scadenza.
L2KEO2: 1 Porta Reagente.
Prima dell'utilizzo rimuovere la parte
superiore dell'etichetta lungo la
perforazione senza danneggiare il codice
a barre. Togliere il foglio protettivo dalla
parte superiore del flacone. Far scattare
nella corretta posizione il coperchio
scorrevole lungo le guide del coperchio
del reagente.
Calibratori ECP (LEOL, LEOH)
Due flaconi (Basso ed Alto) contenenti
ECP liofilo in una matrice/tampone di siero
non umano privo di ECP, con conservanti.
Ricostituire ogni flacone con 2,0 mL di
acqua distillata o deionizzata. Mescolare
agitando delicatamente o capovolendo la
miscela finch il materiale liofilo sia
completamente dissolto. Aliquotare e
congelare immediatamente dopo la
ricostituzione. Stabile a 20C per 6 mesi
dopo la ricostituzione.
L2KEO2: 1 set.
Prima di ricalibrare collocare le etichette
giuste (fornite col kit) sulle provette delle
aliquote cosicch i codici a barre possano
essere registrati dal lettore.
Controlli ECP (LEOC1, LEOC2)
Due flaconi contenenti ECP liofilo in una
matrice/tampone di siero non umano privo
di ECP, con conservanti. Ricostituire ogni
flacone con 2,0 mL di acqua distillata o
deionizzata. Mescolare con rotazione
leggera ed intermittente finch il materiale
liofilo sia completamente dissolto.
Aliquotare e congelare immediatamente
dopo al ricostituzione. Stabile a 20C per
6 mesi dopo la ricostituzione. Fare
riferimento all'inserimento di controllo per i
livelli della concentrazione.
L2KEO2: 1 set.
Componenti del kit forniti

separatamente
Diluente dell'ECP (LEOZ)
Per la diluizione manuale dei campioni dei
pazienti. ECP liofilo in una
matrice/tampone di siero non umano privo
di ECP, con conservanti. Stabile a 28C
per 30 giorni dopo l'apertura, o per 6 mesi
(aliquotato) a 20C.
LEOZ: 25 mL
L2SUBM: Substrato Chemiluminescente
L2PWSM: Tampone di lavaggio dell'Ago
L2KPM: Kit di Pulizia dell'Ago
LRXT: Tubi di Reazione (monouso)
Materiali richiesti
Acqua distillata o deionizzata; Provette.
Procedura del Dosaggio

Attenzione: per prestazioni ottimali,
importante effettuare le procedure di
manutenzione di routine cosiccome
definite nel Manuale dell'Operatore
IMMULITE 2000.
Vedi Manuale dell'Operatore IMMULITE
2000 per: preparazione, messa a punto,
calibrazione, dosaggio e procedure per il
controllo di qualit.
Intervallo di Calibrazione Consigliato:
2 settimane
Campioni per il controllo di qualit:
Utilizza i controlli forniti con il kit.
Valori Attesi
Uno studio effettuato con IMMULITE 2000
ECP su 43 volontari di laboratorio
apparentemente sani ha prodotto una
media di 10,9 ng/mL, una mediana di
10,4 ng/mL e un range di riferimento
basso al 95% di:
ND 24 ng/mL
Considerare questi limiti soltanto come
linee guida. Ogni laboratorio dovrebbe
stabilire i propri range di riferimento.
Limiti
Variazioni nei parametri di analisi del
sangue possono causare misurazioni di
7
ECP non in linea.
Non utilizzare campioni di plasma o
campioni emolizzati.
21
Gli anticorpi eterofili presenti nel siero

umano possono reagire con le
immunoglobuline presenti nelle
componenti del dosaggio provocando
un'interferenza con i dosaggi in vitro. [Vedi
Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic
antibodies: a problem for all
immunoassays. Clin Chem 1988:34:2733.] Campioni di pazienti routinariamente
esposti agli animali o a prodotti derivati da
siero di animali possono presentare
questo tipo di interferenza causa
potenziale di risultati anomali. Questi
reagenti sono stati formulati per
minimizzare il rischio di interferenze,
tuttavia, possono verificarsi interazioni
potenziali tra sieri rari e componenti del
test. A scopo diagnostico, i risultati ottenuti
con questo dosaggio devono sempre
essere utilizzati unitamente all'esame
clinico, all'anamnesi del paziente e ad
altre indagini di laboratorio.
Prestazioni del Dosaggio

Vedi tabelle e grafici per dati
rappresentativi delle prestazioni del
dosaggio. I risultati sono espressi in
ng/mL. (Se non diversamente specificato,
tutti i risultati sono stati generati in
campioni di siero prelevati in provette SST
vacutainer della Becton Dickinson.)
nessun effetto entro il range di precisione

del dosaggio.
Emolisi: Interferisce con la prova,
causando unelevazione di valori a livelli al
superiore di 270 mg/dL (Vedi tabella
Hemolysis).
Lipemia: La presenza di trigliceridi in
concentrazioni fino a 3 000 mg/dL non ha
nessun effetto sui risultati entro il range di
precisione del dosaggio.
Comparazione di Metodi: Il dosaggio
stato comparato al dosaggio IMMULITE
ECP su 81 campioni. (Range di
concentrazione: da circa 2184 ng/mL.
Vedi grafico.) Mediante regressione
lineare:
(IML 2000) = 0,98 (IML) + 1,5 ng/mL
r = 0,998
Valore Medio:
30,5 ng/mL (IMMULITE 2000)
32,6 ng/mL (IMMULITE)
Assistenza Tecnica
All'Estero: Contattare il proprio distributore
nazionale.
Il Sistema Qualit della Siemens Medical
Solutions Diagnostics Limited certificato
ISO 13485:2003.
Range di calibrazione: Fino a

200 ng/mL.
Portugus
Il dosaggio standardizzato verso uno

standard interno preparato usato con
materiali e secondo procedure di qualit.
ECP
Sensibilit analitica: 0,2 ng/mL,

Effetto Gancio a Dosi Elevate: Nessun
effetto fino a 1 591 ng/mL
Utilizao: Para o diagnstico in vitro

com o Analisador IMMULITE 2000 para
o doseamento quantitativo da protena
catinica de eosinfilos (ECP) em soro.
Precisione: I campioni sono stati elaborati

in doppio in 20 giorni, due sedute al
giorno, per un totale di 40 sedute ed 80
replicati. (Vedi tabella Precision).
Nmeros de catlogo:
L2KEO2 (200 testes)
Linearit: I campioni sono stati dosati a

varie diluizioni (Vedi tabella Linearity per
dati rappresentativi).
Sumrio e explicao do teste
Recupero: Sono stati dosati campioni

1:19 ai quali sono state aggiunte tre
soluzioni di ECP (218, 546 e 983 ng/mL).
(Vedi Tabella "Recovery" per dati
rappresentativi.)
Bilirubina: La presenza di bilirubina
coniugata e non coniugata in
concentrazioni fino a 200 mg/L non ha
22
Cdigo do teste: ECP Cor: Verde gua
Os eosinfilos, originrios de clulas

pedunculadas da medula ssea,
aparecem em grande nmero em locais
de inflamao e em resposta a
determinadas infeces parasitrias.
Esses leuccitos, quando maduros,
residem na maioria dos tecidos, mas
cerca de 1% da populao eosinfla
circula no sangue. Os eosinfilos
activados desgranulam-se para libertar
quatro protenas altamente bsicas para o

tecido circundante. As protenas
granulares, que podem matar parasitas e
algumas clulas mamferas, podem
causar os danos de tecido associados
com a asma e outras doenas
inflamatrias. A activao do eosinfilo
est relacionado com uma vasta gama de
condies inflamatrias, incluindo asma
brnquica, dermatite atpica, rinite,
inflamao ocular alrgica, efuso
alrgica do ouvido mdio, infeces
bacterianas e parasitrias, doenas auto11
imunes, e sndrome do cansao crnico.
Entre as quatro protenas granulares
bsicas, a protena catinica eosinfla
(ECP), tem comprovado ser um monitor
til para muitas doenas inflamatrias
11
activas. As concentraes de doenas
em plasma e outros fludos corporais
aumentam durante as reaces
inflamatrias acentuadas por eosinfilos
activados. Produzida exclusivamente por
eosinfilos, a ECP txica aos neurnios,
algumas linhas de clulas epiteliais e
clulas miocrdicas isoladas. A protena
carregada positivamente liga-se
heparina e inibe a coagulao sangunea.
Vrios estudos referem correlaes de
grupo e individuais elevadas entre nveis
de ECP e sintomas clnicos de asma,
como o aumento no pico de fluxo
expiratrio (PEF), beta 2-agonista inalado
prn, reactividade das vias areas e
1,10
Amostras atpicas de
espirometria.
soro possuem nveis mais elevados de
ECP do que amostras de controlo no
atpico, mesmo quando a contagem dos
eosinfilos circulantes permanece dentro
9
da faixa normal. Em pacientes asmticos
sazonais, as medidas de ECP reflectem
alteraes na actividade da doena
1,9
durante o ano. Roquet, (e outros),
reportou correlaes significativas entre
nveis de ECP e hiper-reactividade
brnquica e hiper-reactividade em
6
doentes moderadamente asmticos.
Tomossini, (e outros), mostrou que
concentraes de ECP no soro excedem
nveis de controlos normais em ambas as
condies atpicasse, se ou no
mediadas por IgE. As medies de ECP
no soro evitam inconsistncias inerentes
s avaliaes de asma subjectivas.
As concentraes de ECP no soro podem
indicar a gravidade de certas doenas da
2,3
pele. A toxicidade neural de ECP pode
contribuir para certas doenas da pele,

como erupes eritematosas papulares e
prurido nodular, exibiram nveis maiores
de ECP no soro, que normalizam quando
8,3
as doenas sararam. Vrios grupos
descobriram que as concentraes de
ECP no soro reflectem actividades de
2,3
dermatite atpica (AD). O sistema de
registo clnico mais regularmente usado
para dermatite atpica regista
liquenificao, perda de sono, eritema,
ppulas, prurido, e escoriaes. Czech (e
outros), mostrou que o ECP se
correlaciona com cada um destes
sintomas, e a maioria se correlaciona
bastante com o registo clnico total.
Embora os parmetros imunolgicos
alterados acompanhem a dermatite
atpica,as concentraes de IGE no soro
no se correlacionaram com alguns
2
sintomas clnicos. A natureza objectiva
dos doseamentos de ECP no soro
apresentam uma desvantagem sobre as
medies clnicas subjectivas, que tm a
predisposio para inconsistncias
resultantes de uma vasta gama de
avaliaes individuais do doente e
investigador.
Princpio do Procedimento
A ECP IMMULITE 2000 um ensaio
imunomtrico em fase slida
quimioluminescente de duas voltas.
Ciclos de incubao: 1 30 minutos.
Colheita
O doente no precisa de estar em jejum.
13
Colher o sangue por venopuno em
tubos de conteno a vcuo Becton
Dickinson SST, anotando a hora da
colheita. Encha os tubos de colheita
completamente, invertendo-os
ligeiramente, e deixe o sangue coagular
por 1620 minutos temperatura
ambiente (1528C). Centrifugue a 1 000
1 300xg por 10 minutos temperatura
ambiente, e separe o soro das clulas.
Note que os parmetros de
processamento da amostra de sangue,
incluindo o tempo e a temperatura de
coagulao do sangue, centrifugao e
armazenamento da amostra, podem ter
influncia na concentrao de ECP
7
obtida. As variaes nos parmetros de
processamento sanguneo entre a
amostragem podem causar medies de
ECP inconsistentes.
23
Amostras hemolisadas e plasma no

devem ser usados.
Recomenda-se o uso de uma ultra
centrfuga para clarear amostras
lipmicas.
A centrifugao de amostras de soro
antes da formao completa do cogulo
pode resultar na presena de fibrina. Para
prevenir resultados errados devido
presena de fibrina, certifique-se que a
formao do cogulo foi completa antes
da centrifugao das amostras. Algumas
amostras, em especial as de doentes que
recebem terapia anticoagulante podem
requerer um maior tempo de formao do
cogulo.
Os tubos para colheita sangunea de
diferentes fabricantes, podem originar
diferentes valores, dependendo dos
materiais e aditivos, inclundo gel ou
barreiras fisicas, activadores do cogulo
e/ou anti coagulantes. IMMULITE 2000
ECP no foram ainda testados com todas
as possiveis variaes originadas pelos
tipos de tubos.
Volume de Amostra: 5 L de soro.
Estabilidade: 7 dias a 28C, ou 3 meses
12
a 20C.
Armazene as amostras de soro em
poliestireno ou polipropileno em vez de
tubos de vidro, para evitar a reduo nos
valores de ECP. No tente descongelar os
espcimes aquecendo-os em banhomaria. Evite ciclos repetidos de
congelamento/descongelamento.
Diluio de amostras elevadas: As
amostras em que se esperem obter
valores de ECP acima dos valores de
calibrao da curva devem ser
manualmente diluidas com o diluente de
amostras de ECP (LEOZ) antes de
ensaiar.
Precaues
Para uso de diagnstico in vitro.
Reagentes: Manter a 28C. Elimine de
acordo com as leis aplicveis.
Manipule com as devidas precaues
todos os materiais capazes de transmitir
doenas infecciosas. As matrias primas,
obtidas de soro humano, foram testadas,
revelando resultados negativos para a
sfilis, para os anticorpos do vrus da
imunodeficincia humana (HIV) 1 e 2;
24
para o antignio de superfcie da hepatite

B (HBsAg) e para os anticorpos do vrus
da hepatite C.
Azida de sdio foi adicionada como
conservante; para evitar acumulaes de
azidas metlicas explosivas em
canalizaes de cobre e alumnio, os
reagentes devem ser rejeitados no esgoto
apenas se estiverem diludos e forem
lavados com grandes volumes de gua.
Substrato quimioluminescente: Evite
contaminao e exposio luz directa
(ver bula do substrato).
gua: Utilize gua destilada ou
desionizada.
Materiais Fornecidos
Os componentes formam um conjunto uno
e indivisvel. Os cdigos de barras no
interior das caixas so necessrias para o
ensaio.
Embalagem de prolas de ECP.
(L2EO12)
Com cdigo de barras. 200 prolas
revestidas com anticorpo monoclonal
murino anti-ECP. Estvel at a data de
validade a 28C.
L2KEO2: 1 embalagem.
Embalagem de reagente de ECP.
(L2EOA2)
Com cdigo de barras. 11,5 mL de
fosfatase alcalina (de intestino de vitela)
conjugado com anticorpo policlonal de
coelho anti-ECP em tampo com
conservante. Estvel at a data de
validade a 28C.
L2KEO2: 1 embalagem.
Antes de utilizar, retire a etiqueta de
proteco da tampa deslizante; levante a
tampa,remova o remanescente da
etiqueta com o cuidado de no danificar o
cdigo de barras. Remova o selo de
alumnio do topo da embalagem, encaixe
a tampa deslizante nas ranhuras e
verifique se a tampa desliza.
Ajustes ECP (LEOL, LEOH)
Dois frascos (baixo e alto) contendo ECP
liofilizado num tampo srico livre de
ECP, com conservante. Reconstitua cada
frasco com 2,0 mL de gua destilada ou
desionizada. Misture por inverso ou
movimentos lentos at o material
liofilizado dissolver completamente.
Alquote e congele imediatamente aps a

reconstituio. Estvel por 6 meses aps
a reconstituio a 20C.
L2KEO2: 1 conjunto.
Amostras de controlo de qualidade:

Utilize os controlos fornecidos com o kit.
Antes de realizar qualquer ajuste, coloque

as etiquetas da alquota apropriadas
(fornecidas com o "kit") nos tubos de
amostra de forma a que os cdigos de
barras possam ser lidos pelo dispositivo
de leitura do aparelho.
Num estudo efectuado com o kit de ECP

no IMMULITE 2000 em 43 voluntrios
aparentemente saudveis obteve-se uma
media de 10,9 ng/mL, com um valor
mediano de 10,4 ng/mL, e valores de
referncia para a zona baixa de 95% de:
Controlos de ECP (LEOC1, LEOC2)

Dois frascos contendo ECP liofilizado
numa matriz srica livre de ECP, com
conservante. Reconstitua cada frasco com
2,0 mL de gua destilada ou desionizada.
Misture com movimentos gentis e
intermitentes. Alquote e congele
imediatamente aps a reconstituio
Estvel por 6 meses aps a reconstituio
a 20C. Refira-se literatura inserida
para os nveis de concentrao.
L2KEO2: 1 conjunto.
Componentes do kit fornecidos

separadamente
Diluente de amostra para ECP (LEOZ)
Para a diluio manual de amostras de
doentes,numa matriz srica livre de ECP
com conservante. Estvel, aps a
abertura, durante 30 dias a 28C, ou por
6 meses (aliquotado) a 20C.
LEOZ: 25 mL
L2SUBM: Substrato quimioluminescente
L2PWSM: Soluo de lavagem
L2KPM: Kit de limpeza do pipetador
LRXT: Tubos de reaco (descartveis)
Tambm necessrio :
gua destilada ou desionizada; tubos de
amostra.
Procedimento de doseamento
Tr em ateno que para obter um
desempenho ptimo, importante
efectuar todos os procedimentos de
manuteno de rotina conforme definido
no Manual de Operador do
IMMULITE 2000.
Consulte o Manual de Operador do
IMMULITE 2000 para para instrues
sobre preparao, ajuste, doseamento e
procedimentos de controlo de qualidade.
Intervalo entre ajustes aconselhvel:
2 semanas
Valores de Referncia
ND 24 ng/mL
Considere estes limites apenas como
directrizes. Cada laboratrio deve
estabelecer os seus prprios valores de
referncia.
Limitaes
As variaes nos mtodos de
processamento do sangue podem causar
7
medies inconsistentes de ECP.
Amostras hemolisadas e plasma no
devem ser usados.
Os anticorpos heterfilicos no soro
humano podem reagir com as
imunoglobulinas presentes no ensaio,
causando interferncia com os
imunoensaios in vitro. [Ver Boscato LM,
Stuart MC. Heterophilic antibodies: a
1988:34:27-33.] Amostras de doentes
expostas em rotina a produtos ou soros
de animais podem demonstrar este tipo
de interferncia, potencial causador de
resultados anmalos. Estes reagentes
foram formulados para minimizar o risco
de interferncia, contudo podem ocorrer
potenciais interaces entre soros (raros)
e componentes do teste. Para fins de
diagnstico, os resultados obtidos neste
ensaio devem ser sempre analisados em
combinao com o exame clnico, histria
de medicao do doente e outros
achados que se possam correlacionar.
Caractersticas do Ensaio
Consulte Tabelas e Grficos para dados
representativos do desempenho do
doseamento. Os resultados so
apresentados em ng/mL. (Salvo quando
especificado de outra forma, todos os
resultados foram obtidos em amostras de
soro colhidas em tubo de conteno a
vcuo Becton Dickinson SST.)
Calibrao: At 200 ng/mL.
25
O ensaio monotorizado com padro

interno feito com materiais qualificados e
procedimentos de medio.
Sensibilidade Analtica: 0,2 ng/mL
Efeito Hook de Alta Dose: nenhum at
1 591 ng/mL
Preciso: Amostras foram processadas
em duplicado num perodo de 20 dias,
dois ensaios por dia, perfazendo um total
de 40 ensaios e 80 rplicas. (Consulte a
tabela Precision".)
Linearidade: Amostras foram doseadas
sob vrias diluies. (Consulte a tabela
"Linearity" para dados representativos.)
Recuperao: As amostras foram
adicionadas na relao de 1 para 19 com
trs solues de ECP (de 218, 546 e
983 ng/mL) antes do doseamento. (Vr
tabela de "Recovery" para dados
representativos.)
Siemens Medical Solutions

Diagnostics Limited
Glyn Rhonwy
Llanberis, Gwynedd LL55 4EL
United Kingdom
Siemens Medical Solutions

Diagnostics
5210 Pacific Concourse Drive
Los Angeles, CA 90045-6900
USA
2007-11-20
PIL2KEO 12
Bilirrubina: A presena de bilirubina

conjugada e no conjugada em
concentraes at 200 mg/L no tem
efeito no procedimento dentro da preciso
do ensaio.
Hemlise: Interfere com o doseamento,
causando a avaliao dos valores a nveis
superiores a 270 mg/dL. (Consulte a
tabela Hemolysis".)
Changes in this Edition:

cc#17216: Added Calibration Traceability
statement to Performance Data under
Reportable/Calibration Range.
Lipemia: A presena de trigliceridos em

concentraes at 3 000 mg/dL no tem
efeito nos resultados, dentro da preciso
do ensaio.
Comparao de Mtodos: O ensaio foi
comparado ao kit de ECP no IMMULITE
em 81 amostras. (Zona de trabalho:
aproximadamente: 2184 ng/mL.
Consulte o grfico.) Regresso linear:
(IML 2000) = 0,98 (IML) + 1,5 ng/mL
r = 0,998
Mdias:
30,5 ng/mL (IMMULITE 2000)
32,6 ng/mL (IMMULITE)
Assistncia Tcnica
Por favor contacte o seu Distribuidor
Nacional.
O Sistema da Qualidade da Siemens Medical
Solutions Diagnostics Limited est registado sob
a norma ISO 13485:2003.
26

Ecp

Hochgeladen von

Dokumentinformationen

Copyright

Verfügbare Formate

Dieses Dokument teilen

Dokument teilen oder einbetten

Freigabeoptionen

Stufen Sie dieses Dokument als nützlich ein?

Sind diese Inhalte unangemessen?

Copyright:

Verfügbare Formate

Ecp

Hochgeladen von

Copyright:

Verfügbare Formate

ECP

Siemens Medical Solutions Diagnostics

IMMULITE 2000 ECP

Summary and Explanation

prn ("as needed") inhaled 2-agonist,

Principle of the Procedure

Warnings and Precautions

The patient need not be fasting. Collect

For in vitro diagnostic use.

Plasma or hemolyzed samples should

IMMULITE 2000 ECP (PIL2KEO-12, 2007-11-20)

Reagents: Store at 28C. Dispose of in

immediately after reconstitution. Stable at

volunteers yielded a mean of 10.9 ng/mL,

Before making an adjustment, place the

ECP Controls (LEOC1, LEOC2)

Consider these limits as guidelines only.

Linearity: Samples were assayed under

7) Rubira N, Rodrigo MJ, et al. Blood sample

(IML 2000) = 0.98 (IML) + 1.5 ng/mL

The Quality System of Siemens Medical

Tables and Graphs

Solution1 Observed2 Expected3

IMMULITE 2000 ECP

IMMULITE ECP, ng/mL

(IML 2000) = 0.98 (IML) + 1.5 ng/mL

IMMULITE 2000 ECP (PIL2KEO-12, 2007-11-20)

Unspiked 135 mg/dL 270 mg/dL 540 mg/dL

Portugus. Precision: 1Entre-ensaios, 2Total,

IMMULITE 2000 ECP (PIL2KEO-12, 2007-11-20)

Eosinophile Zellen sind Abkmmlinge der

Im Rahmen umfangreicher Studien wurde

Bestimmung von ECP groe Vorteile. Die

Gerinnungsaktivatoren und /oder

IMMULITE 2000 ECP (PIL2KEO-12, 2007-11-20)

Monate bei 20C haltbar. Die

Separat erhltliche TestsystemKomponenten

Grenzen der Methode

High-Dose-Hook-Effect: keiner bis

Przision: Proben wurden innerhalb von

Diese Grenzwerte sind lediglich als

Linearitt: Proben wurden in

IMMULITE 2000 ECP (PIL2KEO-12, 2007-11-20)

Wiederfindung: Die getesteten Proben

IMMULITE 2000 ECP (PIL2KEO-12, 2007-11-20)

Resumen y Explicacin del

todo el ao. Roquet, et al. Sealaron

Principio del anlisis

tubos Vacutainer Becton Dickinson

IMMULITE 2000 ECP (PIL2KEO-12, 2007-11-20)

Dilucin de muestras altas: Las

Antes de usar, cortar la parte superior de

Ajustadores de ECP (LEOL, LEOH)

Para uso diagnstico in vitro.

IMMULITE 2000 ECP (PIL2KEO-12, 2007-11-20)

Antes de hacer un ajuste, colocar las

Componentes del kit que se

obstante, pueden darse interacciones

Muestras de Control de calidad: Use los

Para ver resultados representativos de las

Intervalo de calibracin: Hasta

Intervalo de ajuste recomendado:

Un estudio realizado con ECP en el

El ensayo es trazable a un estndar