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Mayo / 2011
El examen cubrir los captulos 26, 27, 20 y 28 de ellos se recomienda hacer los siguientes problemas de su libro1:
(recuerde, el guin entre nmeros ejem. 1-10 significa todos los problemas del 1 al 10)
Captulo 26
1-11, 13-14, 16-17, 19-22, 26, 2930
Captulo 27
1, 4-7, 10-13
Captulo 20
NA
Captulo 28
1, 2, 3, 4, 5, 7, 9
Captulo 26
1.
Establezca en que consisten y determine las diferencias entre las siguientes clasificaciones de los mtodos
cromatogrficos en columna:
2.
Establezca en que consisten, determine las diferencias y de ejemplos de sus aplicaciones de los siguientes
procesos de separacin (equilibrios) empleados en las tcnicas anteriores:
3.
Cromatografa de Gases
Cromatografa de Lquidos
Cromatografa de Fluido Supercrtico
Electrofresis capilar
Absorcin
Particin
Exclusin Molecular
Intercambio inico
Afinidad
Electrofresis
4.
Estudie y practique la forma de obtener el nmero de platos tericos (N) y la altura de un plato terico (H)
5.
Estudie y practique la forma de obtener la resolucin de una columna; Establezca los lmites numricos de una
buena resolucin e Identifique los factores de los cuales depende.
Douglas A. Skoog, James Holler y Stanley R. Crouch, Principles of Instrumental Analysis, 6th ed., Editorial: Thomson/Brooks/Cole, 2007
Page -26.
Estudie y practique la forma de obtener el US Pharmacopeia (USP) tailing factor y sus diferencias del factor
de asimetra (As) establezca los lmites numricos de un tailing aceptable. Identifique las causas que dan
origen al tailing, los problemas que puede crear y las formas en las que se puede eliminar.
7.
Estudie los factores que afectan el ensanchamiento de los picos cromatogrficos empleando las curvas de van
Deemter.
8.
Estudie el significado de cada uno de los trminos de la ecuacin de van Deemter y las variables que afectan
cada uno esos trminos.
9.
Estudie las ventajas, desventajas y factores que involucran las formas para mejorar una separacin
Cromatogrfica:
10. Estudie en que consiste el problema general de la elusin y estudie las formas de eliminarlo (en HPLC y GC)
11. Estudio las opciones con que se cuenta para aumentar el factor de separacin () en las separaciones
cromatograficas.
12. Estudie en que consisten los factores de respuesta (absolutos y relativos) y la importancia de su uso apropiado.
13. Recuerde practicar problemas del tipo:
Captulo 27
1.
Identifique las partes esenciales de un instrumento de cromatografa de gases y estudie la funcin e importancia
de cada una de esas partes.
2.
3.
Estudie las razones que justifiquen el uso de un determinado gas de arrastre en GC (ej. H2 vs He vs N2)
4.
Explique el funcionamiento, ventajas, desventajas y diagrama (con flujos) de partes de un inyector en modo:
Split y Splitless
5.
6.
Estudie las diferencias, ventajas y desventajas de una separacin cromatografica Isotermal y una Programada
7.
8.
9.
Estudie las diferencias y las ventajas entre las fases: Adsorbidas, Enlazadas y Crosslinked
10. Estudie la reaccin empleada para enlazar la fase estacionaria a las columnas capilares FSOT
11. Estudie y de ejemplos de la reaccin que da lugar a la obtencin fases enlazadas
12. Identifique las propiedades deseables de una fase estacionaria para ser empleada en cromatografa de gases
13. Identifique cuales sern las caractersticas ideales de un detector ideal en GC
Page -314. Estudie los efectos que tendr sobre una separacin cromatografica los siguientes factores:
Volumen de inyeccin
Temperatura del Horno
Dimetro de la columna
Dimetro del film de fase estacionaria
Polaridad de la fase estacionaria
Split empleado
Captulo 20
1.
Sistema de entrada
Fuente de iones
Analizador de Masa
Detector
Sistema de vaci
2.
3.
4.
5.
Captulo 28
1.
2.
Identifique las partes esenciales de un instrumento de HPLC y estudie la funcin e importancia de cada una de
esas partes.
3.
Identifique los problemas que presenta el bombeo de lquidos e indique las formas de eliminarlas
4.
5.
6.
Estudie como funciona y las diferencias los sistemas de mezclado a baja y alta presin
7.
Estudie en que consiste un diagrama de gradiente empleado en una separacin y su diferencias, ventajas y
desventajas sobre la separacin isotermal.
Page -48.
9.
11. Estudie en que consisten los siguientes tipos de Soporte: Pelicular y poroso
12. Estudie los efectos sobre la separacin cromatogrfica si se modifican los siguientes factores:
Dimetro de la columna
Dimetro de la partcula
Longitud de la columna
Temperatura de la columna
Largo de onda empleado (UVVis)
Efecto de la pureza de la silica empleada en el soporte
Preguntas Adicionales
1.
2.
Cual es la diferencia entre una fuente de ionizacin fuerte y una dbil? Indique las ventajas y desventajas de
ellas.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10. Explique en que consiste el problema general de la elusin. Indique las formas para su eliminacin y/o control
11. En que consiste el fenmeno de difusin de Eddy? Porque afecta el ensanchamiento de las bandas y como se
elimina
12. Indique mediante un diagrama la forma de trabajar de un inyector de gases del tipo Split y splitless
13. Cules son las ventajas de HPLC sobre GC? Y Cules son las ventajas de GC sobre HPLC? Explique sus
respuestas
29. La Neomicina es un antibitico de amplio espectro, cuyo uso est bastante difundido. Su empleo NO est
aprobado en vacas productoras de leche ya que su uso ilegal puede dejar residuos en la leche que pueden ser
peligrosos para el consumidor, principalmente los infantes; la FDA establece que el nivel de tolerancia en la
leche sea de 0.15 ppm. Su determinacin puede llevarse a cabo empleando HPLC de la siguiente manera: A una
muestra de 20.0 ml de leche se agrega 10.0 ml de una solucin de Neomicina (0.3 ppm), la solucin resultante
se pasa a travs de una resina de intercambio que retiene selectivamente la Neomicina (Amberlite CG-50), la
columna se lava con agua destilada y se agregan 0.6 ml del reactivo OPA (Ortho-Phtalaldehyde) que reacciona
con la Neomicina. El producto de reaccin de la Neomicina con el OPA es eluido de la resina con 4 ml de
metanol/buffer alcalino. Esta solucin se almacena por 15 min a -8oC para dejar reaccionar la Neomicina
completamente, finalmente se inyectan 50 L al cromatgrafo y el rea del pico de Neomicina fue de 2345 u2.
Una segunda muestra de 20.0 ml de leche son tratados con 10.0 ml de la solucin de Neomicina (0.6 ppm) y la
solucin resultante se trata de igual forma que la primera. En este caso el rea del pico cromatografico
correspondiente al producto de la Neomicina fue de 3152. Calcul la concentracin de Neomicina (ppm) en la
Leche y determine si est dentro de las restricciones establecidas
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30. El disolvente orgnico (Thinner) empleado para diluir pinturas, resinas y pegamentos puede ser analizado por
cromatografa de gases para determinar su composicin porcentual. Para esto se inyecta primeramente 1 L de
una solucin estndar de cada componente presente en la mezcla, los cuales son: Acetona, etanol, agua, y
xileno(s). Los datos obtenidos de cada una de las soluciones se muestran en la tabla siguiente. Una vez
analizados los estndares se estableci la identidad de cada componente en la mezcla mediante el tiempo de
retencin, al inyectar 1L de la mezcla en el cromatgrafo de gases, empleando las mismas condiciones de los
estndares, se encontr las reas de cada componente las cuales se presentan tambin en la tabla:
Componente
Acetona
Etanol
Agua
Xileno(s)
Area del
Componente
en la mezcla
34235635
22645367
11123456
12123
42134609
10234551
23443309
312673
0.7455
0.3426
0.0765
0.0854
Calcule:
a). El % de cada componente en la mezcla, Suponiendo un factor de respuesta de 1 para cada componente
b). El Factor de respuesta de cada componente (tome como estndar de comparacin a la acetona)
c). El % de cada componente en la mezcla, empleando el mtodo de normalizacin de rea.
31. La determinacin de herbicidas e insecticidas clorados en alimentos, agua potable, suelo, etc. pueden ser
determinados a niveles de trazas empleando la tcnica de cromatografa de gases, empleando un detector de
captura de electrones, mismo que mejora notablemente la sensitividad y el limite de deteccin de estos
compuestos. Adems para mayor precisin se emplea comnmente en cromatografa de gases la tcnica de
estndar interno. El 4,4'-DDT fue determinado en una muestra de 5.0 gr del suelo de una granja donde se
empleo el insecticida, la muestra se coloca dentro de un extractor Soxlet y se reflujarn 50 ml de hexano para
extraer el plaguicida durante 1 hr. A 1.0 ml del extracto se le aade 1.0 ml de una solucin de Adrin
(0.001:g/ml), de esta solucin se inyecta 1.0 :L en el cromatgrafo y las reas resultantes para cada insecticida
fueron de: 4, 4'-DDT= 13454 y Adrin= 2335682. Una mezcla estndar comercial que contiene 100 pg/ml de
Adrin y 400 pg/ml de 4,4'-DDT fue inyectada en el mismo cromatgrafo empleando las mismas condiciones
que para la extraccin, para esta solucin se reporta una rea de 1273 para el Aldrin y 23455 para el 4,4'-DDT.
Calcule la concentracin del DDT en la muestra de suelo (en pg/gr de suelo)