Impacto Ambiental Rs

REPBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELA
UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL DE GUAYANA

COORDINACIN GENERAL DE INVESTIGACIN Y POSTGRADO
COORDINACION DE ESTUDIOS DE POSTGRADO EN CIENCIAS
AMBIENTALES
ENSAYO DE DEGRADACIN BIOLGICA DE LIXIVIADOS GENERADOS EN

UN SITIO DE DISPOSICIN DE DESECHOS SLIDOS.
CASO: RELLENO SANITARIO CAMBALACHE. MUNICIPIO CARON ESTADO BOLVAR.
TRABAJO DE INVESTIGACIN PARA OPTAR AL GRADO DE MAGSTER EN

CIENCIAS AMBIENTALES.
AUTOR: RAFAEL ALFONZO ZERPA D.

TUTOR: HCTOR BASTARDO
CIUDAD GUAYANA, MARZO 2008

1
ENSAYO DE DEGRADACIN BIOLGICA DE LIXIVIADOS GENERADOS EN

UN SITIO DE DISPOSICIN DE DESECHOS SLIDOS.
CASO: RELLENO SANITARIO CAMBALACHE. MUNICIPIO CARON,
ESTADO BOLVAR.
AUTOR: Rafael A. Zerpa D.
TUTOR: Hctor Bastardo.
RESUMEN
En la gestin integral de los desechos slidos una alternativa para la disposicin final es el
relleno sanitario, la cual se suele convertir en un problema ambiental debido a que el
lixiviado generado representa un riesgo de contaminacin de agua y de suelo con todas las
implicaciones que de all se derivaran. A partir de muestras del lixiviado generado en el
Relleno Sanitario de Ciudad Guayana Cambalache se logro el aislamiento y
caracterizacin de 23 grupos funcionales de microorganismos con los que se formo un
pool (consorcio bacterial) a ser inoculado en lixiviado estril del cual se prepararon las
diluciones para el tratamiento de biodegradacin de acuerdo al tiempo determinado de 0, 3,
5 y 7 das de permanencia, para luego realizar el conteo de las colonias y la caracterizacin
post-degradacin, esta caracterizacin pre y post degradacin del lixiviado incluyo la
determinacin de parmetros fsicos y fsico-qumicos (pH, SST, Conductividad, DBO,
DQO, fenoles as como macro y micro elementos) a fin de analizar la efectividad del
tratamiento para dicho compuesto. Los resultados obtenidos en el estudio no fueron
correspondientes con lo esperado, es decir la disminucin de la concentracin de los
compuestos txicos o de los parmetros indicativos de calidad para un efluente de este tipo
no disminuyeron hasta los niveles exigidos por la Norma Tcnica regulatoria, sin embargo
se demostr que la degradacin biolgica es una alternativa a tomar en cuenta a la hora de
disear una estrategia integral para el tratamiento y adecuacin de los compuestos
lixiviados que se generan diariamente en cualquier sitio de disposicin de desechos y los
cuales afectan gravemente a la calidad de los cuerpos de agua superficiales y subterrneos
en el rea de influencia de dichas instalaciones.
Descriptores: Lixiviados, Degradacin Biolgica, Biorremediacin, Ciudad Guayana,

Relleno Sanitario Cambalache, Desechos Slidos.
Lnea de Investigacin: Remediacin Biolgica.
2
CONTENIDO
Introduccin5
Capitulo I
Planteamiento del Problema6
Objetivos.8
Justificacin.9
Capitulo II
Marco Terico11
1.- Rellenos Sanitarios11
2.-Lixiviados...15
3.-Biorremediacin.27
Capitulo III
Metodologa
I.
Pruebas Microbiolgicas.38
II.
Pruebas Bioqumicas...40
III.
Determinacin de Grupos Funcionales42
Capitulo IV
Anlisis y Discusin de Resultados43
Descripcin Macromorfologica de las colonias..43
Anlisis de Sensibilidad del Lixiviado46
Cintica de Crecimiento Bacterial...47
Biodegradacin del Lixiviado.................51
Dosis Letal 50..53
Caracterizacin del Lixiviado..54
ndice de Biodegradabilidad60
Capitulo V
Conclusiones y Recomendaciones..63
Referencias Bibliogrficas..65
Memoria Fotogrfica67
NDICE DE FIGURAS
1.- Ubicacin relativa del Relleno Sanitario Cambalache..13
2.- Diseo Experimental de Biodegradacin del Lixiviado52
NDICE DE IMGENES
1.
2.
3.
4.
Aspecto General Del Relleno Sanitario Cambalache..15

Presencia de escarbadores en el sitio...15
Vista Parcial Relleno Sanitario Cambalache (Lindero Este)...16
Vista Parcial Relleno Sanitario Cambalache (Lindero Sur)16
NDICE DE TABLAS
1.- Composicin tpica del Lixiviado..19

2.- Compuestos Orgnicos Voltiles en Lixiviados y sus efectos en la Salud22
3.- Metales presentes en Lixiviados y sus efectos en la Salud23
4.- Clasificacin de los Lixiviados segn el Coeficiente de Biodegradabilidad.24
5.- Tipos de tratamientos a aplicar a los Lixiviados segn su clasificacin25
6.- Resultado Pruebas Bioqumicas.44
7.- Determinacin de Grupos Funcionales..45
8.- Diseo experimental del Ensayo de Sensibilidad del Lixiviado46
9.- Tiempos de siembra/Diluciones.47
10.- Ensayos por cada Grupo Funcional..47
11.- Diseo Experimental (Reformulado) de Cintica de Crecimiento Bacterial...48
12.- Tiempos y Diluciones para Ensayo de Cintica de Crecimiento Bacterial..49
13.- Diseo de Ensayo (Repeticin) de Cintica de Crecimiento Bacterial50
14.- Tiempos y Diluciones de Ensayo (Replica) de Crecimiento Bacterial.....50
15.- Numero de UFC resultantes post ensayo de degradacin....53
16.- Determinacin de pH, Conductividad, Color, Turbidez, SD, SS.56
17.- Determinacin de DQO en las muestras de lixiviado..57
18.- Determinacin de Concentracin de Fenoles en las muestras de lixiviado.....57
19.- Determinacin del Contenido de Ca, Fe, Hg, K, Mg, Mn, Na y F..58
18.- Determinacin de DBO, DQO y Fenoles en el lixiviado crudo......60
INTRODUCCIN
La Biorremediacin esta definida como el manejo o utilizacin de comunidades biolgicas

para la desintoxicacin, degradacin o mineralizacin de contaminantes orgnicos.
Especficamente, este proceso implica la conversin de la totalidad de los compuestos
contaminantes a formas minerales, sin riesgos de afectacin para la salud de las personas o
los recursos naturales.
El objetivo de la Biorremediacin es el manejo de las propiedades fsicas, qumicas y

biolgicas para superar las limitaciones de la actividad bacteriana y optimizar la capacidad
de la comunidad biolgica de descontaminar.
Generalmente, las comunidades biolgicas manejadas por Biorremediacin son autctonas

del medio. La capacidad metablica de dicha comunidad esta directamente relacionada con
las condiciones propias del sustrato, pero podran ser mejoradas con ingreso al sistema de
mayor cantidad de nutrientes, as como de oxigeno.
La utilizacin de estas comunidades microbianas nativas hara posible la mineralizacin de

contaminantes orgnicos recalcitrantes que componen parcialmente los lixiviados tpicos
generados en sitios de disposicin final de residuos y desechos slidos domsticos en las
localidades de nuestro pas. En el caso de estudio, que es el Relleno Sanitario de Ciudad
Guayana, estos lixiviados son generados en cantidades importantes y son descargados
superficialmente sin tratamiento alguno, ocasionando de esta manera una afectacin de
considerable magnitud a los recursos naturales del rea y a la poblacin residente en la
comunidad de Cambalache y zonas circunvecinas. Por tal motivo, se plantea la hiptesis de
esta investigacin con el fin de explorar la posibilidad de usar la remediacin biolgica o
Biorremediacin para tratar estos lixiviados y sean vertidos adecuadamente en
correspondencia a lo establecido en la norma tcnica vigente.
5
CAPTULO I
Planteamiento Del Problema
Toda actividad humana, ya sea domstica o industrial genera vertidos lquidos, emisiones y
desechos slidos. Estos ltimos deben recibir un manejo adecuado desde su etapa inicial de
generacin hasta el tratamiento y disposicin final de los mismos.
La disposicin final de residuos y desechos slidos de origen domestico ha de realizarse en

un sitio que cumpla con caractersticas ambientalmente apropiadas a tal fin. En dicho sitio
se dispondrn finalmente los desechos slidos a fin de que reciban el tratamiento adecuado,
el cual consiste en la colocacin y posterior compactacin de los desechos en una fosa o
celda, y luego sean recubiertos con material impermeable en capas de espesor variable
hasta la capa final de cobertura y aislamiento de las celdas.
A partir de ese momento, los desechos inician una fase de degradacin biolgica inicial de
forma aerbica con una duracin entre 500 a 600 horas aproximadamente, dependiendo de
la cantidad de oxgeno presente durante el proceso. Posteriormente se inicia la fase de
degradacin anaerbica; proceso descomposicin en ausencia de oxgeno. Como resultado
de estos procesos se generan dos productos fundamentales, una mezcla gaseosa conocida
como Biogs y un compuesto lquido denominado Lixiviado. Este ltimo se genera por la
descomposicin de la materia orgnica componente de los desechos y por la infiltracin de
aguas pluviales.
Este lixiviado tiene una composicin tpica, la cual concentra altas cantidades de
compuestos potencialmente contaminantes como materia orgnica, metales pesados,
material lignocelulosico, hidrocarburos aromticos y productos qumicos diversos.
6
En el caso especifico de Ciudad Guayana, conurbacin formada por las poblaciones de

Puerto Ordaz y San Flix, y con aproximadamente 800.000 habitantes, la disposicin de
todos los residuos y desechos slidos de origen domestico no peligrosos se realiza en un
rea de 32 hectreas, ubicada en la Zona Industrial Cambalache (UD-500) de la Parroquia
Unare del Municipio Autnomo Caron, enclavado a la margen derecha del Ro Orinoco
aproximadamente a 10 km aguas arriba de la confluencia del Rio Caron con el Rio
Orinoco. Esta instalacin sanitaria inicia sus operaciones en el ao 1985 como un sitio
provisional para la disposicin de desechos, dado el agotamiento de la vida til y colapso
del sitio que se estaba utilizando en ese momento localizado en San Flix, especficamente
en el Sector Sendero de Luz, de la Parroquia Vista al Sol.
El rea donde se ha emplazado el Relleno Sanitario Cambalache presenta una topografa de

pendiente y un conjunto de canalizaciones que ha formado una red de drenaje superficial
para los lixiviados generados, conducindolos hacia un rea lindero del terreno al Noroeste
del Relleno Sanitario, del cual por las condiciones del terreno son drenados de manera
natural hacia una quebrada de rgimen temporal que a su vez descarga sus aguas a la
Laguna El Cardonal, la cual forma parte del sistema de rebalse del Ro Orinoco en su
margen derecha.
Mediante la Biorremediacin, se estima que resulte positiva la aplicacin directa en el

sistema de coleccin y retencin de los lixiviados de sustancias que activen el metabolismo
y el crecimiento de los microorganismos presentes, y sea posible la disminucin de los
valores de toxicidad de los lixiviados y se logre la adecuacin de estos a las Normas para
la clasificacin y el control de la calidad de los cuerpos de agua y vertidos o efluentes
lquidos expresadas en el Decreto N 883, publicado en la Gaceta Oficial N 5.021
Extraordinario, de fecha 11 de Octubre de 1995; minimizando de esta manera los impactos
ocasionados por estas descargas, las cuales han estado ocasionando afectaciones
importantes al ecosistema ribereo y a las poblaciones localizadas en el rea de influencia
del Relleno Sanitario.
7
OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIN
Objetivo General:
Realizar ensayos de degradacin biolgica a muestras de lixiviados generados en el Relleno
Sanitario Cambalache.
Objetivos Especficos:
Describir las caractersticas fsico qumicas de los lixiviados generados en la
zona de estudio, antes y despus de la degradacin biolgica.
Aislar y Caracterizar los microorganismos asociados a las muestras de lixiviados
generados en el rea de estudio.
Estudiar la cintica de crecimiento de los grupos funcionales aislados y su
capacidad para transformar a los compuestos lixiviados en estudio.
Realizar ensayos a escala piloto con el objeto de evaluar la actividad bacteriana
sobre los lixiviados.
JUSTIFICACIN
La gestin de los residuos y desechos slidos es una accin inherente a todo desarrollo
humano por pequeo que este sea y no termina su ciclo con el almacenamiento o
disposicin final en los vertederos controlados, no controlados o en rellenos sanitarios. La
transformacin de la materia orgnica junto con las infiltraciones del agua de lluvia,
(Precipitacin media anual Ciudad Guyana estacin Macagua serie 1949-2006: 1.109 mm.
CVG EDELCA, 2008) que disuelven y arrastran a su paso elementos contaminantes,
generan compuestos lixiviados con alto grado de toxicidad.
El Relleno Sanitario Municipal Cambalache, desde su implantacin en el ao 1985 como

sitio autorizado provisionalmente para la disposicin final de los desechos slidos
generados en las poblaciones de Puerto Ordaz y San Flix, ha venido ocasionado una
impacto y afectacin importante al medio ambiente circundante, especficamente por la
generacin y vertido de los lixiviados, ocasionando impactos a los recursos suelo, agua,
vegetacin y fauna, as como al paisaje y a la comunidad de Cambalache.
En base a lo descrito anteriormente, se sabe que en los sitios de disposicin final de

desechos se producen reacciones qumicas y biolgicas entre los constituyentes de la
materia orgnica e inorgnica. Estas transformaciones, junto con las infiltraciones del agua
de lluvia, que disuelven y arrastran a su paso elementos contaminantes, generan lixiviados
con alto grado de contaminacin (Cotoras, 1995). Estos lixiviados, generalmente con cargas
orgnicas muy altas, son sometidos en el mejor de los casos a tratamientos que conllevan
adicin de considerables cantidades de compuestos qumicos, por lo cual resultan ambiental
y econmicamente poco viables y sostenibles (Muoz y Martnez, 2001).
La aplicacin de tratamientos de remediacin biolgica o Biorremediacin para la

detoxificacin o descontaminacin de estos lixiviados se presenta como una alternativa
muy atractiva desde el punto de vista ambiental ya que ofrece la posibilidad de degradar los
compuestos orgnicos presentes sin mayores requerimientos de reactivos qumicos, con
bajos costos (Eweis et al 1999) y con nula o muy baja generacin posterior de productos
indeseables.
De la misma forma, de resultar exitoso el uso de la Biorremediacin, se podra aplicar

directamente a estos lquidos previamente colectados, para que estos sean adecuados y
posteriormente descargados al medio ambiente e inclusive pudieran ser reutilizados sin que
estos representen un potencial dao al ambiente.
10
CAPITULO II.
Marco Terico
1.- Rellenos Sanitarios
Entre los profesionales dedicados al rea de tratamiento de residuos existe el consenso de
que los rellenos sanitarios son uno de los medios ms adecuados desde el punto de vista
para el tratamiento de los desechos y residuos slidos urbanos. En la actualidad se
considera a los Rellenos Sanitarios como la ms factible solucin desde la evaluacin
tcnica, econmica y sanitaria para disponer los residuos slidos. A esta solucin se llega
despus de muchos aos durante los cuales se utilizaron otras metodologas de tratamiento
o disposicin, las que presentaban como comn denominador una gran contaminacin del
medio ambiente. Chile, es junto con Brasil, pionero a este respecto en Latinoamrica,
habindose ms que duplicado el nmero de rellenos en los ltimos 15 aos (Bagchi, 1990).
Un Relleno sanitariamente controlado es aquel en que se colocan los desechos,

compactndolos para que ocupen el menor volumen posible y se les cubre al final de la
jornada diaria con una capa de espesor variable de material impermeable, para que no
afecten el sistema ecolgico o se constituyan en focos infecciosos (Bautista y Timoshina,
2003).
En el fondo, un Relleno Sanitario es un gran digestor anaerobio en el cual se degrada la

materia orgnica y en la que se generan 2 productos; metano y dixido de carbono. Por
tanto, junto con ser una buena solucin para la disposicin final de los residuos slidos,
permite aprovechar el biogs generado, ya sea para industrias cercanas o bien para el gas
domestico usado en la ciudad.
La composicin de los lixiviados vara mucho de acuerdo con la composicin y el tipo de

residuos, la temperatura y precipitaciones en el rea, las velocidades de descomposicin
11
qumica u otras condiciones del lugar. Sin embargo, hay tres grupos de sustancias que se
encuentran generalmente en las cercanas de los rellenos (Muoz y Martnez, 2001):
a) los compuestos orgnicos voltiles: formados bsicamente por tomos de carbono e
hidrgeno que se evaporan fcilmente;
b) los metales contenidos en los residuos depositados en los rellenos que son disueltos y
transportados debido al carcter cido de los lquidos lixiviados;
c) otros compuestos qumicos como orgnicos sintticos y alcoholes.
1. a.- RELLENO SANITARIO DE CAMBALACHE

El sitio actual de disposicin final de residuos y desechos slidos de Ciudad Guayana en el
Municipio Caron del Estado Bolvar, denominado Cambalache, el cual se encuentra
situado en la zona del mismo nombre, ubicada esta a la margen derecha del Ri Orinoco, en
la Parroquia Unare de este Municipio, tal como se muestra en la figura 1. Este sitio de
disposicin final fue autorizado por la Corporacin Venezolana de Guayana en el ao 1985,
como un sitio de carcter provisional para recibir los desechos slidos generados por las
poblaciones de San Flix y Puerto Ordaz las cuales forman el conglomerado urbano de
Ciudad Guayana.
Previamente a la puesta en funcionamiento de este Relleno Sanitario, y de acuerdo a

informacin recabada por parte de tcnicos de la Corporacin Venezolana de Guayana, no
se realizaron ningn tipo de estudios tcnicos previos a la seleccin, as como tampoco la
evaluacin ambiental correspondiente, dado el uso que se le estaba asignando a dicho
espacio. Aunado a esa situacin, el rea seleccionada no posee las condiciones mnimas
requeridas para el uso propuesto, entre otras cosas por tener un nivel fretico de poca
profundidad desde la superficie, aproximadamente a 5 metros de profundidad, no poseer
una roca base o material impermeable, suelo principalmente de tipo arenoso y ausencia en
sitio de material adecuado para la cobertura de los desechos.
12
El Relleno Sanitario de Cambalache, se encuentra ubicado en una ciudad que, al igual que
la mayora de las grandes urbes del pas, ha confrontado problemas para la efectiva gestin
integral de los residuos y desechos slidos, as como del manejo efectivo de las variables
ambientales que en este se generan.
Figura 1.- Ubicacin Relativa del Relleno Sanitario Cambalache

La situacin del Relleno Sanitario de Cambalache es crtica desde hace ms de cinco aos,
ya que sobrepas su capacidad de recepcin o de disposicin de desechos, ocasionado por
el tiempo de uso de los espacios as como la falta de una planificacin y ordenamiento del
rea correspondiente para el tratamiento de los residuos y desechos slidos municipales.
El proceso reglamentario para que este o cualquier relleno sanitario funcione a cabalidad
dicta que, al ser recibida y pesada, los desechos deben ser compactados a una tasa
13
determinada y posteriormente tapados con material adecuado para la cobertura de los

mismos. Sin embargo, en el Relleno de Cambalache, no se cumplen estos pasos, segn
informacin aportada por el Ing. Ramn Ron, Coordinador de Gestin Empresarial de la
Corporacin de Servicios de la Alcalda del Municipio Caron, ente encargado de la
Gestin de los Residuos y Desechos Slidos.
Las irregularidades en el Relleno abarcan desde contaminacin por emisiones libres de

biogs en las diferentes celdas; infiltracin y escorrentas de lixiviados, quema de desechos
a cielo abierto, presencia de escarbadores en el sitio, tal como se muestra en las imagen 1,
2, 3 y 4; as como siniestros mayores ocurridos durante los aos 2004, 2005 y 2006, al
registrarse seis (6) incendios en las fosas destinadas a la disposicin de los cauchos, gomas
y neumticos. Por otro lado, de los doce (12) ventiladores de gases instalados en el sitio en
el ao 1999, actualmente no existe ninguno debido a hechos de vandalismo, de igual
manera sucedi con la cerca perimetral que cubra todo el acceso a la instalacin.
Imagen 1.- Aspecto General del Relleno Sanitario Cambalache
14
Imagen 2.- Presencia de escarbadores en el sitio.
Imagen 3. Vista parcial Relleno Sanitario Cambalache. (Lindero Este)
15
Imagen 4.- Vista parcial Relleno Sanitario Cambalache. (Lindero Sur).
2.- LIXIVIADOS
Se denomina Lixiviado al fluido resultante de la interaccin entre la precipitacin que cae
sobre el rea afectada por el Relleno Sanitario, filtrndose, y los desechos mezclados dentro
del mismo, y es uno de los problemas ms comunes presentados ante la operacin de un
relleno sanitario. Es un liquido residual generado por la descomposicin biolgica de la
parte orgnica o biodegradable de los desechos, bajo condiciones aerbicas o anaerbicas,
o como resultado de la percolacin de agua a travs de los residuos en proceso de
degradacin (Muoz y Martnez, 2001). Su aspecto es de color negro, de olor fuerte y
penetrante, fluido y en zonas de acumulacin y/o estancamiento presenta una capa
superficial de varios centmetros de espuma.
Por lo general, cuando el agua entra en contacto con los residuos slidos depositados o
dispuestos en un relleno sanitario o en un vertedero, se produce una solucin que se
16
denomina lixiviado, rica en elementos contaminantes que al desplazarse verticalmente

llegan al subsuelo. Se pueden formar de cinco formas distintas:
Diversos elementos lquidos generados por la descomposicin de los desechos slidos,

especialmente materia orgnica y/o materiales gelificados.
A partir de agua de lluvia que cae directamente sobre los residuos slidos.
Agua que se mueve horizontal al suelo y que llega directamente al relleno sanitario.
Contacto directo de las aguas subterrneas con los residuos por la elevacin del nivel
fretico.
Aporte o derrame de lquidos en el relleno sanitario.
La composicin de un lixiviado producido en un vertedero de basura puede ser muy

compleja, aunque existen caractersticas qumicas ms o menos comunes en este tipo de
instalaciones (Muoz y Martnez, 2001):
Gran cantidad de hidrocarburos solubles.
Gran cantidad de nitrgeno orgnico y amoniacal.
Presencia de metales pesados como: cadmio (Cd), nquel (Ni), zinc (Zn), plomo (Pb).
Alta Demanda Qumica de Oxgeno (DQO)
Salinidad muy elevada.
Los lixiviados son una fuente de contaminacin sobre la cual no se tiene un control
adecuado debido a que cada uno de los lixiviados que se producen en los diversos lugares
de confinamiento o disposicin de residuos tiene distintos tipos de contaminantes. En el
17
caso que nos ocupa, a los lixiviados generados en el Relleno Sanitario de Cambalache no se
le aplica tratamiento alguno, incluso no se llegan a colectar en su totalidad todos los
lixiviados que se generan en dicho sitio. Por lo que, actualmente se estudian alternativas
viables para el mejor tratamiento de los lixiviados, de modo que se asegure la eficiencia del
mismo en trminos de calidad de los vertidos a los cuerpos de agua circundantes.
2.a.- Formacin de Lixiviados

Como ya hemos descrito, los lixiviados son sustancias complejas generados o producidos
en sitios de disposicin de desechos conocidos comnmente como Rellenos Sanitarios.
Estas sustancias tienen las siguientes caractersticas:
Se forman por el fenmeno de lixiviacin durante la infiltracin del agua pluvial
La mezcla compleja resultante contiene materiales orgnicos e inorgnicos en forma
soluble, suspendida o miscible, adems de microorganismos patgenos.
En magnitud, pueden llegar a representar 100 veces mas la contaminacin orgnica
presente en un agua municipal tpica.
En la tabla N 1 se presenta la composicin tpica de lixiviados generados en sitios de

disposicin final de desechos, haciendo la salvedad de que no necesariamente todos los
lixiviados tendrn esta composicin dadas las diferentes condiciones climticas, la
composicin de los desechos y los mtodos de tratamiento usados en esos sitios.
Tabla N 1 . - Composicin tpica del lixiviado.

Parmetro
Intervalo de valores (mg/l, excepto donde se indica)
Slidos Disueltos Totales
584 - 55,000
Slidos Suspendidos Totales
2 - 140,900
Conductancia Especfica
480 - 72,500 microhmios/cm.
DBO5
6.6 - 99,000
18
DQO
10.0 - 195,000
Carbono Orgnico Total
ND - 40,000
pH
3.7- 8.9
Alcalinidad Total
ND - 15,050
Dureza
0.1 - 225,000
Cloruros
2.0 - 11,375
Calcio
3.0 - 2,500
Sodio
12.0 - 6,010
Nitrgeno Total
2.0 - 3,320
Hierro
ND - 4,000
Potasio
ND - 3,200
Magnesio
4.0 - 780
Nitrgeno Amoniacal
ND - 1,200
Sulfatos
ND - 1,850
Aluminio
ND - 85.0
Zinc
ND - 731.0
Manganeso
ND - 400.0
Fsforo Total
ND - 234.0
Boro
0.87 - 13.0
Bario
ND - 12.50
Nquel
ND - 7.50
Nitrgeno de Nitratos
ND - 250.0
Plomo
ND- 14.20
Cromo
ND - 5.60
Antimonio
ND - 3.19
Cobre
ND - 9.0
Talio
ND - 0.78
Cianuro
ND - 6.0
Arsnico
ND - 70.20
19
Molibdeno
0.01 - 1.43
Estao
ND - 0.16
Nitrgeno de Nitritos
ND - 1.46
Selenio
ND - 1.85
Cadmio
ND - 0.40
Plata
ND - 1.96
Berilio
ND - 0.36
Mercurio
ND - 3.00
Turbiedad
40 - 500 UTJ
Fuente: Bagchi, 1990
2. b.- Composicin de los lixiviados

La composicin de los lixiviados vara mucho de acuerdo al tipo de residuos dispuestos, las
precipitaciones en el rea, las velocidades de descomposicin qumica y de las condiciones
climticas del lugar. Sin embargo, hay dos (2) grupos de sustancias que se encuentran
generalmente en las cercanas de los rellenos.
2.b.1.- Compuestos Orgnicos Voltiles
Los Compuestos Orgnicos Voltiles son compuestos formados bsicamente por tomos de
carbono e hidrgeno que se evaporan fcilmente. La tabla N 2 detalla los compuestos
orgnicos voltiles ms comunes de encontrar en los lquidos lixiviados, y sus efectos en la
salud humana.
Tabla N 2. Compuestos Orgnicos Voltiles en Lixiviados y sus efectos en la Salud
Compuesto Orgnico Voltil
Efectos en la Salud
Benceno
Cancergeno, mutagnico, posible teratognico; efectos sobre el

sistema nervioso central y perifrico; efectos sobre el sistema
inmunolgico y gastrointestinal; desrdenes en las clulas de la
sangre; alergias; irritaciones en los ojos y la piel.
20
Cloroformo
Probable cancergeno y teratognico; efectos sobre el sistema

nervioso central y efectos gastrointestinales; daos en el hgado
y el rin; embriotxico; irritaciones en los ojos y la piel.
1,1-dicloroetano
Embriotxico; efectos sobre el sistema nervioso central, hgado

y riones.
Etilbenceno
Efectos sobre el sistema nervioso central; daos en los riones y

el hgado; irritaciones en el sistema respiratorio, en los ojos y la
piel.
Cloruro de metileno
Posible cancergeno; efectos sobre el sistema nervioso central,

pulmones / sistema respiratorio y sistema cardiovascular;
desrdenes en la sangre; irritaciones en la piel y los ojos.
Tetracloroetileno
Tricloroetileno
Probable cancergeno; efectos sobre el sistema nervioso central,

pulmones / sistema respiratorio; embriotxico; daos en los
riones e hgado; irritaciones al sistema respiratorio y los ojos
Posible cancergeno y teratognico; efectos en el sistema
nervioso central, riones e hgado, sistema cardiovascular,
pulmones / sistema respiratorio; desrdenes en las clulas de la
sangre; irritaciones en el sistema respiratorio, piel y ojos.
1,1,1-tricloro
etileno
Cloruro de vinilo
Cancergeno; mutagnico; efectos en el sistema nervioso central,

pulmones / sistema respiratorio; daos en el hgado y el rin;
irritacin en ojos y piel
Cancergeno; mutagnico; posible teratognico; efectos en el
sistema nervioso central; daos en el hgado y el rin; irritacin
en ojos y piel; desrdenes en las clulas de la sangre
Xileno
Efectos en el sistema nervioso central, sistema cardiovascular;

daos en el hgado y el rin; irritacin en ojos y sistema
respiratorio
Fuente: Bautista y Timoshina, 2003.
2. b.2.- Metales
Los metales que se encuentran contenidos en los residuos depositados en los rellenos,
debido al carcter cido de los lixiviados son disueltos y transportados. La tabla N 3
muestra los metales que pueden estar presentes y sus efectos en la salud humana.
21
Tabla N 3. Metales presentes en Lixiviados y sus efectos en la Salud Humana.
Metal
Efectos sobre la salud humana
Arsnico
Cancergeno; potencialmente teratognico; efectos sobre los sistemas cardiovascular, nervioso

perifrico, reproductivo y pulmones / respiratorio; daos en el hgado y el rin
Cadmio
Probable cancergeno y teratognico; embriotxico; efectos en el sistema nervioso central, sistema

reproductivo y sistema respiratorio / pulmones; daos en el rin
Cromo
Cancergeno; probable mutagnico; efectos sobre el sistema pulmonar / respiratorio; alergias,

irritacin en los ojos
Plomo
Probable teratognico; daos en el rin y el cerebro; efectos sobre el sistema nervioso central y
reproductivo; desrdenes en las clulas de la sangre
Mercurio
Teratognico; efectos sobre el sistema nervioso central, cardiovascular y pulmonar / respiratorio;

daos en rin y la vista
22
2.c.- Clasificacin de los lixiviados

Segn la relacin o coeficiente de biodegradabilidad (relacin: DBO/DQO) los
lixiviados se pueden clasificar como:
Lixiviados Biodegradables: (DBO/DQO>0.3)
Lixiviados Maduros: (DBO/DQO = 0.1-0.3)
Lixiviados Estabilizados: (DBO/DQO < 0.1)
En la tabla N 4 se muestra una clasificacin de lixiviados segn el coeficiente de

biodegradabilidad y sus parmetros fsico-qumicos.
Tabla N 4. Clasificacin de los Lixiviados segn el Coeficiente de
Biodegradabilidad
DBO/DQO
>0.3
= 0.1-0.3
< 0.1
Tipo de Lixiviado
Biodegradables
Maduros
Estabilizados
pH (adim)
< 6.5
6.5-7.5
> 7.5
DQO (mg/L)
> 10000
<10000
< 5000
DQO/COT (adim)
< 2.7
2.0-2.7
> 2.0
AGV (mg/L)
70-90
20-30
La materia orgnica de lixiviados estabilizados est constituida principalmente por

sustancias recalcitrantes de origen natural, como los cidos hmicos, as como por
compuestos de tipo sinttico (Bautista y Timoshina, 2003). En la tabla N 5 se
23
muestran los diferentes tipos de tratamiento que se pueden aplicar a los lixiviados de
acuerdo a su coeficiente de biodegradabilidad.
Tabla N 5. Tipos de tratamientos a aplicar a los lixiviados segn su clasificacin
DBO/DQO
>0.3
0.1-0.3
< 0.1
Tipo de Lixiviado
Biodegradable
Maduros
Estabilizados
Tratamiento
Eficiencia
Biolgicos
Buena
Favorable
Pobre
Precipitacin Qumica
Favorable-
Favorable
Pobre
Favorable
Buena
Buena-Favorable
Buena
Buena-Favorable
Buena
Buena
Buena
Pobre
Oxidacin Qumica
FavorablePobre
Carbn Activado
FavorablePobre
Coagulacin
FavorablePobre
smosis Inversa
Favorable
3.- Biorremediacin
La Biorremediacin es una estrategia o proceso que usan los microorganismos,
plantas, microbios o enzimas de plantas para detoxificar contaminantes en
determinados sustratos o en otros ambientes (Montrs y Vicent, 2002).
Este concepto incluye Biodegradacin, el cual se refiere a la parcial y en algunos

casos, la total transformacin o detoxificacin de compuestos contaminantes, ya sea
por microorganismos o plantas. La Mineralizacin es un trmino ms restrictivo para
la completa conversin de contaminantes orgnicos a sus constituyentes inorgnicos
24
por especies solitarias o por un consorcio
(pool) de microorganismos. El
Cometabolismo es otro trmino ms restrictivo referido a la transformacin de un

contaminante sin proveerle fuente de carbono o energa para los microorganismos
degradadores. Todas estas definiciones estn siendo usadas en el contexto de la
conversin de contaminantes a compuestos intermedios menos txicos o
mineralizacin de estos a sus formas inorgnicas (Levin y Gealt, 1997).
La transformacin biolgica de contaminantes contenidos en terrenos y aguas

subterrneas supone un tema que atrae cada vez ms la atencin de la comunidad de
ingenieros y cientficos que trabajan en relacin con el ambiente.
Estas transformaciones pueden ocurrir de forma natural, si bien suelen producirse

muy lentamente y limitadas por la disponibilidad de nutrientes, oxgeno o por los
microorganismos adecuados. Las alteraciones que puedan sufrir los factores que
influyen en la reaccin para incrementar la tasa de transformacin biolgica, se
traducen en la biorrecuperacin (tratamiento de suelos y de aguas subterrneas
mediante procesos biolgicos). Para alterar aquellos factores que afectan a la reaccin
de una manera que sea rentable y conseguir un grado de tratamiento determinado, es
necesaria para la aplicacin de mtodos y principios de ingeniera.
3.a.- Criterios para la Biorremediacin.

Para considerar seriamente la Biorremediacin como una prctica de tratamiento,
ciertos criterios deben ser conocidos:
25
Los organismos deben tener la actividad catablica necesaria para degradar

los contaminantes en una tasa que lleve la concentracin de los contaminantes
a un nivel que sean acordar a la norma regulatoria.
El contaminantes debe ser biodisponible.
El sitio contaminado debe tener condiciones de suelo que propendan al
crecimiento de plantas o microbios o actividad enzimtico.
El costo de la Biorremediacin debe ser menor, en el peor de los casos, que
tecnologas alternativas que tambin puedan remover el contaminante.
La falla en el conocimiento de estos criterios puede causar rechazo en el alcance de

la Biorremediacin. Por ejemplo, aun una abundante fuente de carbono y energa para
el crecimiento microbiano no se sobreponen a una condicin abitica de suelo pobre
como inadecuada humedad.
El Principio de Infalibilidad Microbial asume que para cada compuesto orgnico
natural, hay un microbio o sistema de enzimas capaz de su degradacin (Gale, 1952,
citado por Levin y Gealt, 1997). En el pasado una asuncin comn era que debido a
su gran flexibilidad metablica, los microbios pueden degradar todos los compuestos
sintticos as como igualmente, compuestos orgnicos naturales. Esto no es verdad;
puesto que la vasta mayora de los compuestos sintticos pueden ser degradados, solo
unos pocos desafan estos principios y no pueden ser degradados a una tasa razonable.
Estos son frecuentemente referidos como compuestos recalcitrantes. Algunos
compuestos naturales son recalcitrantes. Aun algunos compuestos orgnicos
naturales, podran ser pobres candidatos para la Biorremediacin. Por ejemplo, de ser
necesario intentar la Biorremediacin de una sustancia qumicamente heterognea
como el humus, est no sera degradada a una tasa razonable (Levin y Gealt, 1997).
26
3.b.- Estrategias para la Biorremediacin.

Varias estrategias de Biorremediacin pueden restaurar suelos y calidad ambiental.
Para un contaminante dado, una o ms de las siguientes estrategias pueden ser
necesitadas o aplicadas para asegurar una Biorremediacin exitosa.
Pasiva o Biorremediacin intrnseca. Es la Biorremediacin natural

de un sitio contaminado mediante microorganismos nativos o propios
del sitio.
Bioestimulacin: Es la adicin de nutrientes, tales como nitrgeno y

fsforo, para estimular microorganismos nativos en el suelo.
Bioventilacin: es una forma de bioestimulacin donde estimulantes

gaseosos, tales como oxgeno y metano, son pasivamente adicionados
o forzados dentro del sustrato para estimular la actividad microbial.
Bioaumentacin: es la inoculacin de un sitio contaminado con

microorganismos para facilitar la biodegradacin. El inoculante puede
contener microorganismos silvestres o microorganismos logrados
mediante Ingeniera Gentica, como especies solitarias o como un
consorcio (pool) de bacterias de varias especies. En cualquier caso, los
organismos son seleccionados por su alto potencial de degradar el
contaminante en cuestin.
27
Land Farming: consiste en la disposicin de sustancias con

cantidades importantes de compuestos contaminantes en lechos de
secado o aireacin al aire libre.
Compostaje: es el uso microorganismos aerbicos y termoflicos en

pilas de suelos para degradar contaminantes. Estas pilas son
fsicamente mezcladas y humedecidas peridicamente para fomentar la
actividad microbial.
Fitorremediacin: es el uso de plantas para remover, contener o

transformar contaminantes. Esto puede ser acometido directamente, ya
sea por plantas que acumulen o hiperacumulen metales pesados, o
indirectamente por plantas estimulando microorganismos en la
rizsfera.
3.3.- Ventajas y Desventajas de la Biorremediacin.

La Biorremediacin es frecuentemente menos peligrosa para la limpieza y menos
costosa porque los contaminantes pueden ser tratados en el sitio. La Biorremediacin
es un proceso natural y por consiguiente tiene menor impacto ambiental porque no se
generan desechos.
Un factor significativo en el desarrollo de la Biorremediacin o biorrecuperacin ha

sido la promulgacin de legislaciones y regulaciones relativas al medio ambiente que
fomenten el tratamiento de residuos antes que el vertido de los mismos
28
Por otro lado, la Biorremediacin tiene un nmero de desventajas que pueden ser
derivados de la lista previa de criterios para su aplicacin. Por ejemplo, la baja
biodisponibilidad de un contaminante podra limitar la aplicacin de la
Biorremediacin. El peor escenario es para aquellos sitios contaminados con no un
compuesto o aun una clase de compuestos, pero con una mezcla de compuestos
orgnicos e inorgnicos. En tales sitios, un compuesto puede ser biodegradable por
microorganismos
mientras otro puede ser txico a los microorganismos; un
compuesto puede requerir condiciones aerbicas para su degradacin, mientras que

otro requiere condiciones anaerbicas; un compuesto puede requerir condiciones
alcalinas a neutras, mientras que otro requiere de condiciones cidas. Nuestro
conocimiento del modelaje y manipulacin biolgica, qumica e interacciones fsicas
en donde los sitios tienen mezclas complejas de qumicos es an extremadamente
limitado.
El empleo de la biorrecuperacin en el tratamiento de residuos slidos peligrosos o

no, es un concepto relativamente nuevo, aunque se ha convertido en una tendencia de
rpido crecimiento dentro de la gestin medioambiental. (Eweiss et al. 1999).
Desde 1970, en la mayora de los pases industrializados, el tratamiento de residuos

ha venido cobrando cada vez ms importancia (Cortinas & Mossler, 2002), y
generalmente se ha comprobado que los tratamientos biolgicos son ms econmicos
que los procedimientos qumicos o fsicos.
Los contaminantes orgnicos que se encuentran en los terrenos pueden ser

clasificados como de origen natural o antropognico. Los compuestos orgnicos de
origen natural, que resultan de la descomposicin de tejidos de plantas y animales, y
se denominan materias hmicas, constituyen los componentes habituales de los suelos
29
y aguas subterrneas. Estos compuestos poseen una estructura compleja y son

resistentes a las transformaciones biolgicas adicionales. Los suelos generalmente
contienen menos del 3 por ciento de materias hmicas totales. Los compuestos
orgnicos de origen antrpico varan ampliamente segn sus caractersticas. De
especial importancia son su capacidad para ser biodegradados, polaridad, solubilidad,
volatilidad y toxicidad.
En algunos casos, la degradacin puede producir dixido de carbono (CO ) y agua

(H2O). Las ventajas son claras: los microbios son baratos, sus reacciones son
predecibles, y muchas veces las reacciones pueden llevarse a cabo in situ. Esto da
lugar a un ahorro en los costes de transporte, y mediante la degradacin in situ se
consigue un ahorro incluso en los costes de separacin respecto al terreno o las aguas
subterrneas. Si esto se realiza de una forma optima, los costes pueden ser la cuarta o
la tercera parte de los originados mediante vertido o incineracin. (Levin, M. et
al.1998.)
Una ventaja potencial importante al profundizar en una mejor comprensin de los

procesos naturales de degradacin es la posibilidad de elegir un microbio para
degradar una sustancia txica ms eficazmente que los organismos de la poblacin
autctona.
Sin embargo, existen algunos problemas con la biodegradacin: quizs no existan

microbios autctonos apropiados para degradar un compuesto txico determinado. El
nivel del compuesto txico puede ser tan alto que imposibilite la degradacin in situ
debido a una gran mortalidad. La degradacin podr ser inducida mediante otro
compuesto txico. Es posible que no existan suficientes nutrientes, cofactores u
oxgeno presentes para la degradacin in situ.
30
Las dos aproximaciones principales a la biorrecuperacin de los contaminantes

ambientales son: la inoculacin microbiana (seeding) y la bioestimulacin de las
actividades microbianas naturales. En la mayora de los casos, la bioestimulacin
consiste en una modificacin ambiental capaz de suprimir algn factor limitante que
esta restringiendo la velocidad del crecimiento microbiano y el metabolismo de la
sustancia contaminante. Para que esta aproximacin funcione, el contaminante no
debe ser recalcitrante, es decir, los microorganismos deben tener la capacidad
gentica y fisiolgica suficiente como para degradar la sustancia. Los factores que
generalmente se controlan para estimular las actividades degradadoras mediante
bioestimulacin son: las concentraciones de nutrientes, la concentracin de oxigeno
molecular, el potencial de xido-reduccin y los niveles de humedad. Adems,
pueden aportarse sustancias como los sustratos para apoyar el crecimiento. (Atlas, R.,
1998).
La premisa bsica para una Biorremediacin in situ es que los microorganismos estn
presentes en la zona subsuperficial, que se adapten a los contaminantes, y que estn
presentes todos los nutrientes necesarios o se puedan aadir para lograr una
biodegradacin ptima de los contaminantes.
Esto parece algo obvio y fundamental, pero en fechas recientes como los aos 70, se
podan encontrar datos en la literatura especializada con relacin a las bajas cifras de
microorganismos que existan en las aguas subterrneas. Se llego a la hiptesis de que
el agua se filtraba a travs del suelo perda todos los microorganismos y, a
consecuencia de ello, las aguas subterrneas se mostraban esencialmente estriles. En
1973, McNabb y Dunlap revisaron la literatura existente y afirmaron, al contrario de
las creencias prevalentes, que los microorganismos estaban muy extendidos en la
subsuperficie. Por lo tanto, postularon que exista la posibilidad de una degradacin
microbiana de los materiales orgnicos en las aguas subterrneas.
31
Durante muchos aos, el entierro en vertederos de los residuos slidos ha sido un

proceso razonablemente rentable. Sin embargo, han surgido problemas con algunos
vertederos, ya que se han producido filtraciones a las aguas subterrneas. En los
vertederos modernos, este problema ha sido aliviado, al menos temporalmente,
mediante el uso de un sistema complejo de recubrimientos geosintticos, as como de
sistemas de drenaje y contencin.
Esto nos lleva al uso de los procesos naturales de degradacin, generalmente

conocidos como biodegradacin. En este mtodo, los microorganismos, normalmente
bacterias, pero tambin hongos y algas, son los responsables de romper los
compuestos txicos en productos secundarios no txicos.
El tratamiento de lixiviados de vertederos es una aplicacin cada vez ms comn en

biotratamiento. Con el uso incrementado y obligatorio de vertederos con
revestimientos, la recoleccin y tratamiento de los lixiviados presenta mltiples
problemas. El tratamiento semicontinuo posibilita el mantener el tratamiento durante
periodos de tiempo prolongados. El biotratamiento semicontinuo de un lixiviado de
vertedero que contena un producto qumico herbicida fenoxi permiti el tratamiento
de una carga diaria media de 1,6 Kg de herbicida y de 0,5 Kg de fenoles con una
descomposicin superior al 98 por ciento para ambos. (Bhamidimarri, S.M, et al.
1990).
El desarrollo de tecnologas amigables con el ambiente es un aspecto hacia el cual los

investigadores vienen encauzando sus esfuerzos en forma creciente, tanto a nivel
internacional, desde hace muchos aos, como en el mbito nacional, ms
recientemente.
32
Segn Eweis y col., los conceptos de biorrecuperacin se han desarrollado a partir de

la gestin y tratamiento de aguas residuales y residuos slidos, sin embargo ya desde
finales del siglo XIX, se eliminaban las aguas residuales mediante su vertido en
suelos agrcolas, lo cual supone el empleo de las bacterias del terreno en procesos de
descontaminacin. Posteriormente se han desarrollado mtodos ms sofisticados para
la eliminacin de contaminantes, algunos ampliamente conocidos, como lechos
bacterianos, lodos activados o fermentacin anaerobia. Otro campo en el que la
Biorremediacin ha
ganado gran aceptacin, es en la biodegradacin de
hidrocarburos.
Como lo indica Rey, 2002, la aplicabilidad de esta tcnica en la descontaminacin de

ambientes impactados por hidrocarburos, la cual se ha venido utilizando con xito en
los ltimos 30 aos, qued firmemente evidenciada con la limpieza de la costa de
Prince William Sound, en Alaska, resultado del vertido de crudo del Exxon Valdez en
1989. En este caso la EPA llev a cabo pruebas de eficacia del biotratamiento que
demostraron una mejora dramtica de los niveles de contaminacin y sirvi de base
para el tratamiento de 70 millas de lnea de costa.
Principalmente por su condicin de pas productor de petrleo, Venezuela no escapa

al inters por el desarrollo de tcnicas de Biorremediacin, y la industria petrolera
venezolana ha dedicado importantes recursos para la investigacin de suelos
afectados por derrames de crudos o por la inadecuada disposicin de desechos. Estos
estudios han rendido importantes resultados, aunque poco conocidos, entre los que se
encuentran el desarrollo de productos bioestimulantes y la produccin de
biosurfactantes a partir del aislamiento y caracterizacin de grupos funcionales
bacterianos degradadores de hidrocarburos.
33
Aunque la Biorremediacin ha tenido su mayor campo de aplicacin en la

degradacin de hidrocarburos, se ha encontrado que la accin de los tratamientos de
Biorremediacin se extiende ms all de la biodegradacin de compuestos orgnicos,
al ser identificados microorganismos como la bacteria Geobacter sulfurreducens,
capaces de provocar la precipitacin de un gran nmero de radioncleos y metales
solubles, tales como el uranio, el tecnecio o el cromo, lo cual los convierte en agentes
muy tiles en procesos de Biorremediacin de acuferos subterrneos contaminados
por estos metales, uno de los principales problemas ambientales en la actualidad.
Los Investigadores A. Montrs y T. Vicent sealan que "el gran nmero de patentes
existente evidencia el gran inters en la aplicacin comercial de microorganismos
extremfilos en tratamientos de depuracin de suelos y aguas residuales, pero
tambin seala que todava queda por descubrir gran parte de su potencial.
34
CAPITULO III
Metodologa
En este capitulo se describe toda la metodologa aplicada para llevar a cabo las
diferentes pruebas o ensayos correspondientes a la evaluacin de la degradacin
biolgica de los lixiviados recolectados, a tal fin se desarrollo el diseo experimental
en 3 etapas a saber, la realizacin de las pruebas microbiolgicas, luego las
bioqumicas y finalmente la determinacin de los grupos funcionales.
I.- Pruebas Microbiolgicas.

I.1.- Incubacin para Crecimiento de los Microorganismos.
A los fines de lograr la incubacin de los microorganismos existentes en las muestras
de lixiviado se prepararon 2 frascos de 225 ml de caldo nutritivo en 10% de lixiviado.
Se dejaron incubando ambos frascos durante 24 horas en la estufa a una temperatura
de 37 +- 2 C. Luego se observa la coloracin que indique crecimiento de los
microorganismos.
I.2.- Preparacin de medios de cultivo para aislamiento de los microorganismos.
Para la preparacin de medios de cultivo se utiliza un caldo nutritivo como medio, el

cual se logra con Agar nutritivo, Cloruro de Sodio, Agar- Agar en la siguiente
relacin:
Para preparar un litro de Caldo nutritivo, se aaden 23 gr. de agar nutritivo, 5 gr. de
Cloruro de Sodio y 3 gr. de Agar- Agar.
35
Se colocan los compuestos previamente dosificados segn sus diferentes

proporciones en una fiola. Se agita ligeramente hasta llegar a una mezcla homognea.
Se le coloca un tapn de gasa a la fiola, luego se cubre este tapn con papel aluminio
y se sella con cinta adhesiva. Se lleva a la autoclave durante 15 min. a una presin
entre 15 y 20 lb. /pulg. (psi) para su esterilizacin.
Posteriormente este medio de cultivo estril, se sirve en placas de Pietri formando una
pelcula y se llevan a una nevera para su enfriamiento y gelificacin. Luego de
enfriarse el medio en las placas, se hace la siembra por el mtodo de agotamiento a
travs de un asa de platino y en una campana de siembra de siembra a condiciones
controladas para evitar la contaminacin. Luego de la siembra, las placas son cerradas
y llevadas a la estufa durante 24 horas a una temperatura de 37 C.
I.3.- Aislamiento de microorganismos.

Para el aislamiento de los microorganismos sembrados en las placas, se debe trabajar
en las campanas de siembra, en condiciones controladas de aire y presin para evitar
contaminacin. A travs del asa de platino se toman los microorganismos que se han
aislado en las placas y se siembran en los viales contentivos de caldo nutritivo.
Cada uno de estos viales se siembra con una colonia y se sellan para llevarlos a la
estufa durante 24 horas a una temperatura de 37 C. Pasadas las 24 horas de
incubacin de las colonias en los viales, estos se llevan a la nevera para su
conservacin y retardo del crecimiento para luego realizar las pruebas bioqumicas.
36
II. Pruebas Bioqumicas.
II.1.- Preparacin de medios de cultivo.
II.1.1.- Medio Agar-Sangre.

El medio de cultivo Agar-Sangre se obtiene mezclando 40 gr. de base agar-sangre en
un litro de agua destilada. Esta mezcla se homogeneza mediante agitacin en fro y
se lleva a la autoclave en una fiola sellada durante 15 min. a una presin de 15 lb.
/pulg. Se retira del autoclave, se deja enfriar y se le agrega la sangre a una relacin
del 5% v/v agitndose para luego servir el medio en placas de Pietri. Estas placas son
llevadas a la nevera, para luego sembrar las colonias aisladas y observar la actividad
metablica de los hematocritos.
II.1.2.- Medio Triple Azcar Hierro (por sus siglas en ingles TSI, Triple Sugar Iron).
Este medio se obtiene mezclando 65 gr. de base TSI en 1 litro de agua destilada. Se
colocan los gramos necesarios de base TSI para la cantidad de tubos a preparar y se
lleva a una mezcla homognea mediante agitacin y temperatura en plancha caliente.
Posteriormente se sirve el medio en tubos y se lleva a la autoclave durante 15
minutos a una presin de 15 lb. /pulg para su esterilizacin. Se saca de la autoclave y
se colocan los tubos de manera que se formen cuas de medio dentro de los tubos.
II.1.3.- Medio Agar Citrato Simmons.

Para preparar 1 litro de este medio de cultivo se agregan 24,2 grs. de base Agar
Citrato Simmons en un litro de agua destilada. Se lleva a ebullicin para lograr una
completa disolucin del medio. Luego se coloca en autoclave durante 15 minutos a
37
una presin de 15 lb. /pulg. Posteriormente se sirve en tubos y se coloca de manera

que se forme una cua del medio dentro del tubo.
II.1.4.- Medio Agar Acetato de Sodio.

Para preparar este medio de cultivo se necesitan 6 grs. de Acetato de Sodio mas 17
grs. de Agar Nutritivo en un litro de agua destilada. Se lleva luego el medio a una
plancha caliente hasta ebullicin y luego a la autoclave para esterilizacin durante 15
minutos a una presin de 15 lb. /pulg. El medio ya estril ha de servirse en placas de
Pietri.
II.1.5.- Medio Kliger (Iron Agar).

Este medio de cultivo se prepara utilizando 55 grs. de Base Iron Agar en 1 litro de
agua destilada. Se unen mediante agitacin hasta lograr una mezcla homognea y se
lleva a la autoclave para su esterilizacin durante 15 minutos a una presin de 15 lb. /
pulg. Luego del autoclave, se retira la fiola se sirve el medio en tubos colocados de
manera que se formen cuas dentro del tubo.
III. Determinacin de Grupos Funcionales.

Luego de la preparacin de los diferentes medios de cultivo necesarios para la
determinacin de las pruebas bioqumicas, cada uno de los tubos y placas, segn sea
el caso, son sembrados por puncin y puestos en la estufa durante 24 horas a 32C,
para ser posteriormente analizados segn la prueba bioqumica especifica.
Cada una de las colonias expresan sus caractersticas metablicas segn el medio en
el que sean inoculados.
38
La determinacin de los grupos funcionales se har
a travs del anlisis del
comportamiento de la colonia ante el medio en la que fue inoculada. Cada medio

genera comportamientos especficos para las colonias de acuerdo a la actividad
metablica que desarrollan estas colonias. A continuacin se presentan los diferentes
comportamientos de las colonias de acuerdo a la prueba que se este analizando.
III.1.a.- Medio Agar-Sangre.: En la lectura de la prueba con el medio agar-sangre, se

verifican dos actividades metablicas por parte de las colonias. Hay metabolismo del
medio para la produccin de Carbono. Pueden producirse 2 comportamientos del
inoculo ante el medio:
Alfa-Hemlisis: es positivo cuando hay consumo o metabolismo del medio

por parte de la colonia y se forma un halo opaco alrededor de la misma. Es
negativo si no se forma el halo opaco alrededor de la colonia.
Beta-Hemlisis: es positivo cuando hay metabolismo del medio por parte de

la colonia y se forma un halo transparente alrededor de la colonia. Es negativo
si no se forma el halo transparente alrededor de la colonia.
III.1.b.- Medio Triple Azcar Hierro (Triple Sugar Iron).

Este medio es sumamente importante puesto que genera diversas interpretaciones en
una sola prueba.
Formacin de Gas: Positivo si hay ruptura del agar y se forma una cmara de
gas; negativo si no se forma cmara de gas.
Catalasa: Positivo si al aadir Perxido de Hidrogeno se produce

efervescencia; negativo si no se produce efervescencia.
39
Formacin Sulfuro de Hidrogeno: Positivo si se forma una coloracin negra

en el agar; negativo si no se produce coloracin alguna.
Glucosa: Positivo si hay un viraje de la coloracin amarilla a rojo de la parte

vertical del medio en el tubo; negativo si no hay cambio alguno.
Lactosa: Positivo si viraje del color rojo a amarillo de la parte inclinada del
medio en el tubo; negativo si no hay viraje de la coloracin.
III.1.c.- Medio Agar Citrato Simmons.

Este medio genera una interpretacin nica, se toma como positivo el metabolismo en
la colonia ante el medio si hay un cambio del medio en el color, de verde a azul y es
negativo si no se produce reaccin alguna de la colonia al medio.
III.1.d.- Agar Acetato de Sodio.

Se toma como positivo si hay un crecimiento de la colonia en el medio y negativo
cuando hay ausencia de crecimiento.
III.1.e.- Medio Kliger (Iron Agar).

El medio Kliger es aun mas completo que el Medio TSI, en cuanto a la cantidad de
pruebas que se logran determinar del mismo. Se puede determinar la actividad
metablica de las colonias en cuanto a Glucosa, Sacarosa y Catalasa y la formacin
de Gas, Sulfuro de Hidrogeno as como la motilidad de dicha colonia.
La Sacarosa se expresa de igual manera, positivo si hay un viraje del color amarillo a
rojo en la parte baja del Agar.
40
La Motilidad esta determinada por el crecimiento de la colonia en el medio y se

expresa en nmeros, del 0 al 3, siendo 0 sin crecimiento y 3 el mximo crecimiento.
Posteriormente los datos obtenidos del anlisis del comportamiento de las colonias en
cada uno de los diferentes medios se introducen en una hoja de calculo, en la que se
conviene que el signo positivo (+) es igual a 1 y el signo negativo (-) es igual a 0. Este
procedimiento permite el agrupamiento de las colonias que tienen comportamientos
similares en cuanto a las actividades metablicas, lo que se conoce como Grupos
Funcionales.
41
Capitulo IV.
Anlisis y discusin de resultados
IV.1.- Presentacin de Resultados.
En este capitulo se presentan los resultados obtenidos de los diferentes ensayos
realizados y sus interrelaciones as como su correspondiente anlisis con respecto a la
hiptesis de la Investigacin.
Los resultados obtenidos en cada una de las pruebas tanto microbiolgicas como
bioqumicas realizadas a los diferentes grupos funcionales se muestran en las tablas
N 6 y 7, mostrados en valores adimensionales 0 como negativo o no reactivo y 1
como positivo o no reactivo.
42
Tablas N 6 y 7.- Resultados de las pruebas bioqumicas.

N
muestra Glucosa Lactosa Sacarosa H2S
1
0
0
0
1
2
1
1
1
1
3
0
0
0
0
4
0
1
0
0
5
0
1
1
1
6
0
0
1
1
7
0
1
0
0
8
0
0
1
0
9
0
0
0
0
10
0
0
0
0
11
1
1
1
0
12
0
0
0
0
13
0
1
1
1
14
0
0
0
0
15
0
0
0
0
16
0
1
1
1
17
0
0
1
1
18
1
0
0
1
19
0
1
1
1
20
0
1
1
0
21
1
1
1
0
22
1
0
0
0
23
0
1
1
1
24
1
1
1
0
25
1
0
0
1
26
0
1
1
1
27
0
1
1
1
28
1
1
1
1
29
1
1
1
0
30
1
1
1
1
31
1
1
1
0
32
1
1
1
0
33
0
1
1
1
34
1
1
1
0
35
1
1
1
1
36
1
1
1
0
37
1
1
1
1
38
1
0
0
1
39
1
1
1
0
40
1
1
1
1
41
0
1
1
1
42
1
1
1
1
43
0
1
1
1
44
1
1
1
0
45
1
1
1
0
46
1
0
0
1
47
1
1
1
1
48
0
1
1
1
49
1
1
1
0
Gas Catalasa
0
1
1
1
0
1
0
1
1
1
1
1
0
1
1
1
0
0
0
1
1
1
0
1
1
1
0
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
43
Citrat
o
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
1
0
0
0
0
0
0
0
0
1
1
1
0
B
Hemlisis
0
1
0
1
0
0
0
0
0
1
0
0
0
1
0
0
0
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
1
1
A
Hemlisis
1
0
1
0
1
1
1
1
1
0
1
1
1
0
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
0
0
Acetato
0
0
1
0
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
N muestra
Glucosa
Lactosa
Sacarosa
H2S
Gas
Catalasa
Citrato
B Hemlisis
A Hemlisis
Acetato
Gf
10
IV.2.Descripcin
Macromorfolgica
de
las colonias.
14
0
0
0
0
0
1
0
1
3
12
15
20
17
10
16
11
13
19
23
26
27
33
41
43
48
13
22
14
29
44
49
11
21
24
31
32
34
36
39
45
18
25
38
18
46
19
20
28
21
30
40
42
35
37
47
44
12
15
16
17
22
23
La descripcin macromorfolgica de las colonias que fueron aisladas se realizo

tomando como referencia las descripciones tpicas elaboradas por el laboratorio de
Ecologa de Microorganismos (LEM) del Instituto de Zoologa Tropical de la
Facultad de Ciencias de la Universidad Central de Venezuela.
Estas descripciones se realizan mediante observaciones bajo lupa de las colonias
aisladas en las placas de Petri, en cuanto a Superficie, Borde y Elevacin de cada
colonia. Es necesario hacer esta descripcin como apoyo a la determinacin de los
grupos funcionales.
IV.3.- Anlisis de Sensibilidad del Lixiviado.

Esta prueba se utiliza para determinar el poder biocida del lixiviado sobre el las
colonias de microorganismos. Se lleva a cabo a travs de la aplicacin de diluciones
del lixiviado sobre las colonias que fueron aisladas y se hicieron crecer en placas de
Petri con agar nutritivo. Para esta prueba se utilizaron crculos de papel filtro
impregnados en las diluciones preparadas del lixiviado y se colocaron sobre cada
colonia. Todo este procedimiento se hace en condiciones controladas dentro de la
cmara de siembra a fin de evitar contaminacin en las placas. Las diluciones se
prepararon con una relacin de lixiviado en agua destilada, en las siguientes
concentraciones que se muestran en la Tabla N 8.
Tabla N 8. Diseo experimental del ensayo de sensibilidad del lixiviado
Nmero de Ensayo
1 (Control)
6 (control)
Lixiviado (ml)
Agua Destilada (ml)
Fuente: Elaboracin propia.
Esta prueba dio un resultado que se esperaba como lgico dada las condiciones de los
microorganismos pero que era necesario descartar para efectos de la investigacin. En
ninguna de las pruebas se logro inhibir el crecimiento en las colonias, dado que el
45
lixiviado no actua sobre las mismas como un compuesto Biocida y se debe

fundamentalmente a que estas bacterias fueron aisladas directamente del compuesto
lixiviado en su estado puro y por lo tanto son tolerantes al mismo y aun se tornan mas
resistentes al ser colocadas en concentraciones poco fuertes o dbiles.
IV.4.- Cintica de Crecimiento Bacterial.

Esta prueba denominada Cintica de Crecimiento Bacterial se realizo a fin de
observar el crecimiento de cada uno de los grupos funcionales aislados del compuesto
lixiviado puro y se hizo en base a un diseo experimental especfico, el cual se
muestra a continuacin en las tablas N 9 y 10.
Tabla N 9.- Tiempos de siembra / Diluciones
N
Tiempo
Dilucin
0 horas
Sin dilucin; -1; -2.
3 horas
Sin dilucin; -1; -2; -3.
5 horas
-2; -3; -4.
24 horas
-2; -3; -4; -5.
48 horas
-3; -4; -5; -6.
120 horas
-4; -5; -6.
Tabla N 10.- Ensayos por cada Grupo Funcional.

Concentracin (%)
Lixiviado (ml.)
Medio Mnimo (ml.)
100
90
10
75
75
15
10
50
50
40
10
90
10
46
Inoculo (ml.)
Luego de realizar esta prueba, se colocaron los frascos correspondientes en bao de

mara a temperatura controlada de 37C con agitacin constante y las placas de
Petri se colocaron en la estufa para su incubacin a una temperatura de 32C durante
24 horas continuas.
En este ensayo se hizo la observacin o conteo en las placas usando un equipo

contador de bacterias a fin de cuantificar las unidades. Los resultados de este ensayo
posteriormente indicaran que el crecimiento de las unidades formadoras de colonias
tenda a nmeros infinitos de colonias o lo que algunos autores refieren como tntc
por sus siglas en Ingles, too numerous to count o muy numeroso para contar.
Se procedi a reformular el diseo experimental, esta vez esterilizando el compuesto

lixiviado puro contra el compuesto lixiviado crudo, el esquema para este diseo
reformulado se muestra en la tabla N 11.
Tabla N 11.-Diseo Experimental Cintica de Crecimiento Bacterial.

(Reformulado)
Numero
Medio Mnimo + Agua
Grupo Funcional
Lixiviado
Denominacin
(ml).
(ml)
9 + 81
10
Control
4 + 36
10
50
Estril
4 + 36
10
50
Crudo
1+9
10
80
Estril
1+9
10
80
Crudo
47
Para este ensayo de crecimiento bacterial, se utilizo el medio mnimo para lixiviado
(MML), preparado a una concentracin de 10x. Esto se hace con el fin de retardar el
crecimiento del Grupo Funcional empleado en la determinacin de la curva de
crecimiento. Igualmente se utilizo Solucin Salina Peptonizada (SSP). Se aplico el
tratamiento de acuerdo a la reformulacin y se muestra en la Tabla N 12.
Tabla N 12.- Tiempos y Diluciones Ensayo Cintica de Crecimiento Bacterial.
Tiempo
Diluciones
0 horas
Sin dilucin; -1; -2.
3 horas
Sin dilucin; -1; -2; -3.
24 horas
-2; -3; -4.
48 horas
-3; -4; -5.
72 horas
-3; -4; -5; -6.
IV.4.1.- Replica del Ensayo de Cintica de Crecimiento Bacterial.
48
Se replic el ensayo realizado para preparar las curvas de crecimiento con otro Grupo
Funcional, de la misma manera que se realizo en el 1er. Ensayo, segn diseo
experimental descrito a continuacin en las tablas N 13 y 14.
Tabla N 13.- Diseo Experimental de Ensayo (Repeticin) de Cintica de

Crecimiento Bacterial.
Codificacin
MML (ml.)
G.F. (ml.)
Lixiviado (ml.)
Observacin
Frasco 1
90
10
Control
Frasco 2
40
10
50
Lix. Estril
Frasco 3
40
10
50
Lix. Crudo
Frasco 4
10
10
80
Lix. Estril
Frasco 5
10
10
80
Lix. Crudo
Fueron preparados todos los ensayos correspondientes a t : 0 h, incubando las placas

en la estufa a 32C durante 24 h y los frascos contentivos del Grupo Funcional se
llevaron al Agitador/Bao de Maria a una temperatura de 37C. Luego fueron
preparados cada uno de los ensayos segn el diseo y tanto las placas de Petri como
los frascos a las mismas condiciones.
49
Tabla N 14.- Tiempos y Diluciones de Ensayo (Replica) de Cintica de

Crecimiento Bacterial.
Tiempo
Diluciones
0 horas
-1; -2; -3.
3 horas
-2; -3; -4.
24 horas
-4; -5; -6.
48 horas
-7; -8; -9.
72 horas
-10; -11; -12.
IV.5.- Ensayo de Biodegradacin del Lixiviado.

Este ensayo fue diseado para la determinacin del poder de degradacin del
lixiviado por parte del consorcio (pool) bacterial.
Se hicieron siembras a diferentes tiempos como 0, 3, 5 y 7 das de incubacin, por
profundidad en tubos con agar nutritivo para luego verter en Placas de Petri e incubar
50
a 32c durante 24 horas en la estufa para luego hacer el recuento. Este ensayo se
realizo bajo el esquema presentado en la figura N 2 que se muestra a continuacin:
A los resultados obtenidos en este ensayo se le determinaron el nmero de unidades
formadoras de colonias (ufc), que se muestran en la tabla N 15 que se muestra a
continuacin, mientras que los valores resultantes de otros parmetros como pH,
Conductividad, Slidos Totales Suspendidos arrojados por este ensayo se muestran en
la tabla N 16.
Fig. N 2.- Diseo Experimental de Biodegradacin del Lixiviado.
50 ml G.F
50 ml G.F
50 ml G.F
50 ml G.F
450 ml.
Lixiviado
estril
450 ml.
Lixiviado
estril
450 ml.
Lixiviado
estril
450 ml.
Lixiviado
estril
5 ml
5 ml
5 ml
5 ml
Frasco estril vaco
20 ml
1 ml
1 ml
1 ml
1 ml
1 ml
Tubos con 9 ml de
SSP
para preparar
diluciones
-1
-2
-3
-4
-5
15 ml Agar
nutritivo diluido
A 45 C
Incubar a 32 C por 24
hrs. para recuento
Placas de Petri
51
Tabla N 15. Numero de Unidades Formadoras de Colonias resultantes post

ensayo de biodegradacin.
Diluciones
Tiempo 0
Tiempo 3
Tiempo 5
Tiempo 7
-3
Incontable
-----
-----
-----
-4
Incontable
-----
-----
-----
-5
345
Incontable
Incontable
-----
-6
152
388
408
230
-7
57
27
29
-8
10
-9
IV.6.- Ensayo de Dosis Letal 50 (Letal Dosis 50).

La realizacin de un ensayo de dosis letal 50 se considero como un valor adicional
sumamente importante para este trabajo, ya que se podra determinar el poder biocida
del lixiviado sobre la ictiofauna, comunidad biolgica que podra estar siendo
afectada por la infiltracin o escorrenta del lixiviado hacia los cuerpos de agua
superficiales que se encuentran alrededor del Relleno Sanitario Cambalache.
52
Para esta prueba se utilizaron peces ornamentales conocidos como Guppi, con un
tamao no mayor a los 10 cm. Los ensayos se realizaron con un numero de 40
individuos en un acuario de 500 cm3 con suministro constante de oxigeno por 40
minutos, cuantificando los decesos de los individuos hasta completar la mitad de la
poblacin del ensayo, en iguales condiciones para cada uno, variando las
concentraciones del lixiviado desde su estado puro (100%) y luego en
concentraciones de 75%, 50%, 25%, 20%, 15%, 10%, y 5%.
En las concentraciones menores a 20%, no se observo decesos de individuos en el
tiempo de duracin (40 minutos) de cada ensayo. A partir de la concentracin de 20%
hacia soluciones ms concentradas, se observo el deceso de la mitad o ms de los
individuos y proporcionalmente a la concentracin disminuyo el tiempo de tolerancia
de los peces al compuesto lixiviado.
IV.7.- Caracterizacin fsica y fsico-qumica del Lixiviado.

La caracterizacin posterior del lixiviado es de suma importancia puesto que
determina la variacin de los parmetros fsicos y fsico-qumicos de los lixiviados
posterior al tratamiento de biodegradacin y porque permite a su vez la evaluacin de
la actividad bacterial sobre los componentes txicos de los lixiviados, la cual es la
finalidad de esta investigacin, por lo que determinara la efectividad del tratamiento.
La aplicacin del tratamiento de Biorremediacin requiri de definir las proporciones
lixiviado/inculo a evaluar. Para el caso en estudio se emple la proporcin lixiviado/
inculo indicada: 1800 ml. de lixiviado y 200 ml. de pool del grupo funcional en
caldo nutritivo.
Los das 0, 3, 5 y 7 del tratamiento, se utilizaron para efectuar los anlisis indicados
para los elementos presentes y las propiedades fisicoqumicas del lixiviado (excepto
la Demanda Biolgica de Oxigeno) con el fin de identificar la variacin de los
53
parmetros en estudio y determinar la efectividad del tratamiento en la

descontaminacin del lixiviado.
A tal efecto se requiri de la determinacin de los siguientes parmetros:
Presencia y concentracin de los siguientes elementos: Calcio (Ca), Magnesio

(Mg), Sodio (Na), Potasio (K), Fosforo (P), Nitrgeno (N), Azufre (S),
Manganeso (Mn), Hierro (Fe), Nquel (Ni), Cromo (Cr), Plomo (Pb) y Mercurio
(Hg), lo cual requiere, en el caso de los metales, su determinacin mediante
anlisis de Espectrofotometra por Absorcin Atmica, y para Nitrgeno
(N),Fosforo (P) y Azufre (S) la realizacin de anlisis especficos.
Parmetros fsico-qumicos: Acidez, Alcalinidad (pH), Demanda Qumica y

Demanda Biolgica de Oxigeno (DQO y DBO), color, conductividad y
temperatura.
Fenoles .
Puede decirse que las variaciones ocurridas a los parmetros fsico-qumicos en los
lixiviados no son significativas luego de haber inoculado el lixiviado con el pool de
microorganismos (bacterias). Los parmetros que presentaron variacin fueron:
turbiedad, pH, color y conductividad, los cuales deben dicha variacin a la adicin del
caldo nutritivo, pero luego sus valores permanecen constantes durante el proceso de
biodegradacin. Por otro lado se puede notar que la conductividad (18 mili-1) resulta
muy baja para un lixiviado si se compara con la composicin tpica (tabla N 1), cuyo
valor est por el orden de 480 mili-1, es decir, 27 veces por debajo del valor tpico.
De todos los metales analizados para la muestra cruda slo se detectaron trazas de Cu
y Zn. Las concentraciones de ambos elementos, como era de esperarse, disminuyen al
realizar las mezclas lixiviado-pool del grupo funcional en caldo nutritivo (1.800 ml:
54
200 ml). En el caso del Cu, su presencia se hace indetectable una vez realizada la
mezcla, debido al efecto de dilucin, mientras que la concentracin de Zn vara con el
transcurso del tiempo. Estas variaciones podran atribuirse a la sensibilidad del equipo
con que se realiz la determinacin de las concentraciones.
Al realizar la mezcla muestra cruda lixiviado-pool bacterial se detecta la presencia

del elemento Bario (Ba), el cual no fue detectado en la muestra cruda, esto se podra
explicar en base a que este elemento forma parte de los nutrientes incorporados al
medio mnimo de crecimiento. La concentracin de este metal permanece
prcticamente invariable en el tiempo.
IV.7.1.- Resultados: Los resultados de la caracterizacin post-degradacin de las

muestras de lixiviados se muestran a continuacin en las siguientes tablas, N 16, 17,
18, 19 y 20, con su posterior anlisis.
Tabla N 16.- Determinacin de pH, Conductividad, Color, Turbidez, Slidos

Disueltos Y Slidos Suspendidos en las muestras de lixiviado.
Muestra
pH
Conductividad
Color(m-1)
Turbidez (FNU)
Slidos totales (mg/ml)
Cruda
7,99
12,5 mili -1
17,4**
152
-----
Tiempo 0
8,33
19,0 mili -1
48,7*
114,8
12,6
Tiempo 3
9,03
19,0 mili -
48,7**
104
12,8
Tiempo 5
9,21
19,0 mili -
48,9*
83,0
12,8
Tiempo 7
9,20
19,0 mili -
48,7*
81,0
13,0
Conductividad del agua destilada 12.0 micro -1. Escala de medicin: FNU = (0, 100); m-1 = (0.5,
50.0) Mtodo de anlisis: Colorimetra. Gravimetra. Medidores especficos.
55
Tabla N 17.- Determinacin Del Contenido De Plata, Bario, Cadmio, Cromo,

Cobre, Mercurio, Nquel, Plomo, Antimonio, Titanio Y Zinc en las muestras de
lixiviado.
MUESTRA
Ag
Ba
Cd
Cr
Cu
Hg
Ni
Pb
Sb
Ti
Zn
Cruda
ND
ND
ND
ND
0.2
ND
ND
ND
ND
ND
0.15
Tiempo 0
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
0.07
Tiempo 3
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
Tiempo 5
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
Tiempo 7
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
0.10
Sensibilidad
0.08
----
0.03
0.5
----
7.5
0.3
0.5
----
Nota: ND => No Detectable (Los valores estn reportados en ppm)

Mtodo de Anlisis: Espectrofotometra de Absorcin Atmica.
Tabla N 18.- Determinacin de DQO en las muestras de Lixiviado.

Parmetro
Valor (mg/)l)
Reduccin acumulada (%)
Reduccin relativa (%)
DBO (Crudo)
56
-----
-----
DQO (Crudo)
5940
-----
-----
DQO (T0)
4158
30,00
30,00
DQO (T3)
3663
38,33
12,00
DQO (T5)
2773
53,32
24,30
DQO (T7)
1580
73,40
43,02
38,25
-----
-----
Tabla N 19.- Determinacin de la Concentracin de Fenoles en las muestras de

lixiviado.
56
Muestra
Concentracin de Fenoles (mg/l)
Lixiviado Crudo
38,25
T0
60,05
T3
85,68
T5
42,68
T7
95,53
Mtodos: Los establecidos en el Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater
(20th edition). El mtodo empleado para determinar fenoles en muestras acuosas, fue el establecido por
las normas WPA, a travs del uso del sistema Hydrocheck. Mtodo: p-nitroanilina, filtro 445nm.
Tabla N 20.-
Determinacin del Contenido de Calcio, Hierro, Potasio,
Magnesio, Manganeso, Sodio y Fsforo en las muestras de lixiviado.

Muestra
Ca
Fe
Mg
Mn
Na
Cruda
100.0
4.7
1350
88
0.5
1200
19.0
Tiempo 0
35.5
1.2
990
140
ND
2650
16.0
Tiempo 3
30.6
0.8
1020
137
ND
2740
4.7
Tiempo 5
34.0
0.4
950
130
ND
2700
7.7
Tiempo 7
24.0
0.4
1050
145
ND
2980
7.2
Sensibilidad
----
----
----
----
0.03
---
----
IV.7.2.- Anlisis de resultados: Puede decirse que las variaciones ocurridas a los
parmetros fsico-qumicos en los lixiviados no son significativas luego de haber
inoculado el lixiviado con el pool de microorganismos (bacterias). Los parmetros que
presentaron variacin fueron: turbiedad, pH, color y conductividad, los cuales deben
dicha variacin a la adicin del caldo nutritivo, pero luego sus valores permanecen
constantes durante el proceso de biodegradacin. Por otro lado se puede notar que la
57
conductividad (18 mili-1) resulta muy baja para un lixiviado si se compara con la
composicin tpica (tabla N 1), cuyo valor est por el orden de 480 mili-1, es decir,
27 veces por debajo del valor tpico.
De todos los metales analizados para la muestra cruda slo se detectaron trazas de Cu y
Zn. Las concentraciones de ambos elementos, como era de esperarse, disminuyen al
realizar las mezclas lixiviado-pool del grupo funcional en caldo nutritivo (1.800 ml:
200 ml). En el caso del Cu, su presencia se hace indetectable una vez realizada la
mezcla, debido al efecto de dilucin, mientras que la concentracin de Zn vara con el
transcurso del tiempo. Estas variaciones podran atribuirse a la sensibilidad del equipo
con que se realiz la determinacin de las concentraciones.
Al realizar la mezcla muestra cruda lixiviado-pool bacterial se detecta la presencia del

elemento Bario (Ba), el cual no fue detectado en la muestra cruda, esto se podra
explicar en base a que este elemento forma parte de los nutrientes incorporados al medio
mnimo de crecimiento. La concentracin de este metal permanece prcticamente
invariable en el tiempo.
Con respecto a la concentracin de fenoles en lixiviados se toma como base a lo

establecido en el anexo D de las Normas para la clasificacin y control de la calidad de
cuerpos de agua y vertidos o efluentes lquidos (Decreto N 883), la cual fija la
concentracin mxima permitida de fenoles en lixiviados de 0,5 mg/l, en el caso de la
muestra cruda esta concentracin es de 38,25 mg/L, la cual excede claramente los
lmites permitidos.
IV. 8.- ndice de Biodegradabilidad.
58
El ndice de Biodegradabilidad se determina a travs del cociente entre la Demanda

Biolgica y la Demanda Qumica de Oxigeno y los resultados de este anlisis y de
otros parmetros realizados a las muestras de lixiviado crudo se muestran a
continuacin en la tabla N 21.
Tabla N 21.- Determinacin de DBO, DQO y Fenoles en el Lixiviado Crudo.
Parmetro
Valor
Concentracin de Fenoles
38,25 mg/L
Oxgeno Disuelto (OD)
5, 24 mg/L (Temp. Ref 24C)
pH
8,05
Conductividad
10 mg/L
DBO 5,20
56 mg/L
DQO
5940 mg/L
ndice de biodegradabilidad (DBO/DQO)
0,009
Mtodos: Los establecidos en el Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater
(20th edition). El mtodo empleado para determinar fenoles en muestras acuosas, fue el establecido por
las normas WPA, a travs del uso del sistema Hydrocheck. Mtodo: p-nitroanilina, filtro 445 nm.
El ndice determinado para el lixiviado crudo fue de 0,009, que lo clasifica como un
lixiviado estabilizado de acuerdo a lo expresado en la tabla N 4, que a su vez indica
que la materia orgnica est constituida principalmente por sustancias recalcitrantes
de origen natural, posiblemente cidos hmicos, as como por compuestos de tipo
sinttico, ya que la cantidad de materia orgnica susceptible de degradacin
microbiana (DBO= 56 mg/L) es pequea en comparacin a la cantidad de materia no
biodegradable que se encuentra incluida en el valor de la DQO.
59
En relacin a la disminucin de los parmetros referenciales de naturaleza orgnica

(DQO), se observa que al aplicar el tratamiento de Biorremediacin con el pool del
grupo funcional ms caldo nutritivo, este experimenta una disminucin promedio de
48 % y de 53,3% con respecto a la DQO inicial, para un periodo de tratamiento de
siete (7) das.
Es de hacer notar que estos resultados no lucen contradictorios cuando se compara el

valor del ndice de biodegradabilidad de las muestras con lo indicado en la tabla N 5,
acerca de los tipos de tratamiento a aplicar a lixiviados estabilizados o con valores del
coeficiente menor a 0,1, en los que se recomienda aplicar tratamientos de naturaleza
fsico-qumica ya que los biolgicos presentan pobre eficiencia, lo cual quedo en
evidencia en los resultados obtenidos posterior a la aplicacin de la Biorremediacin
y esto se debe bsicamente a la materia orgnica recalcitrante que se encuentra en
mayor cuanta en el lixiviado. De hecho, la composicin del lixiviado proveniente del
Relleno Sanitario de Ciudad Guayana resulta atpica si se compara con los valores
estndar para estos compuestos (Tabla N 1), y ms bien se asemeja a la composicin
de un agua residual domstica.
En la tabla N 20, se aprecia la variacin del contenido de nutrientes (micros y macro)

del lixiviado crudo y de ste durante el proceso de biorremediacin con el pool de
grupo funcional de bacterias. En el caso del Ca, Fe y P estos experimentaron una
disminucin con el tiempo, esto posiblemente a la utilizacin de estos nutrientes por
parte de las bacterias para realizar sus actividades metablicas (sntesis, produccin
de energa, etc.). El K, Na y Mg presentaron incremento a medida que transcurre el
tiempo de tratamiento.
60
Como se observa en la tabla N 21, tomando en cuenta los valores de lixiviado crudo,
T0, T3 y T5; se puede inferir que durante el proceso de degradacin de la materia
orgnica, se expone en la primera etapa de sta, las molculas fenlicas; este grupo
funcional, generalmente se encuentra solapado en estructuras qumicas complejas, lo
que explica el valor de 38,25 mg/l en la muestra cruda. Cuando la biomasa se activa
metablicamente, es decir, una vez inoculado el pool de grupo funcional de bacterias
en caldo nutritivo, se inicia su actividad catablica por grupos funcionales, que
permitan obtener la fuente de carbono por va rpida. Este es el caso de los
compuestos orgnicos saturados, cetonas, aminas y alcoholes, entre otros. En este
caso una vez que se agotan las fuentes de carbono metablicamente sencillas de
degradar, la biomasa puede mediante una induccin enzimtica, comenzar a degradar
compuestos qumicos ms complejos, como es el caso de los fenoles.
CAPITULO V
Conclusiones y Recomendaciones
1.- La Biorremediacin es una alternativa viable para el tratamiento de lixiviados

generados en sitios de disposicin de Residuos y Desechos Slidos. Sin embargo este
tipo de tratamiento presenta una eficiencia muy baja en comparacin con otros
tratamientos. La desventaja con respecto a otros radica en el hecho de que es un
61
proceso muy lento y deber de incorporrsele mayores cantidades de nutrientes y de

oxigeno al consorcio de bacterias para lograr la disminucin de los valores de los
compuestos contaminantes lo que incrementara los costos de tratamiento y mas aun
los tiempos de retencin del lixiviado en el sistema. Aun despus de eso es posible
que los lixiviados no cumplan con los valores exigidos por las Normas para la
Clasificacin y el Control de la Calidad de los Cuerpo de Agua y Vertidos o Efluentes
Lquidos (Decreto N 883, Gaceta Oficial N 5.021 (E) del 18 de Diciembre de 1995).
2.- Los parmetros fsico-qumicos mostrados en la caracterizacin del compuesto

lixiviado crudo tuvieron variaciones por efecto del tratamiento de Biorremediacin,
sin embargo estos no fueron significativos en cuanto a la disminucin de la toxicidad
del compuesto con referencia a los valores permitidos por la Norma Tcnica
regulatoria de la materia.
3.- Analizando la composicin de la muestra en estado crudo, esta ha resultado ser

No Tpica para los promedios de la composiciones de un compuesto lixiviado
generados en las instalaciones de disposicin de desechos slidos, mostrados
bsicamente en cuanto a los valores obtenidos en las pruebas para la Demanda
Biolgica de Oxigeno, Contenido de Metales, Concentraciones de Fenoles y
Conductividad.
4.- No obstante, quedo claramente determinado que habitan en el lixiviado estudiado,

microorganismos autctonos capaces de metabolizar los elementos que lo
constituyen, pero con una baja capacidad de degradacin para considerar este mtodo
como nico para el tratamiento de estos compuestos.
62
5.- Se recomienda el uso de este mtodo en combinacin con otros de tipo fsico o
qumico e inclusive en combinacin de ambos a fin de proporcionar una alternativa
verdaderamente eficaz en el tratamiento de estos compuestos, que en la mayora de
los sitios de disposicin de desechos existentes en el pas son descargados
directamente al medio ambiente sin la aplicacin de ningn tipo de tratamiento.
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65
66
Memoria Fotogrfica
67
Imagen 6.- Proceso de esterilizacin por autoclave.
Imagen 7.- Secado material para ensayos.
68
Imagen 8.- Pesaje para preparacin de los medios de cultivo.
Imagen 9.- Dosificacin de los medios de cultivo.
69
Imagen 10.- Siembra por agotamiento.
Imagen 11.- Conteo de colonias de microorganismos
70
Imagen 12.- Sede de Centro Biotecnolgico de Guayana.

Universidad Nacional Experimental de Guayana.
71

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REPBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELA

UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL DE GUAYANA

ENSAYO DE DEGRADACIN BIOLGICA DE LIXIVIADOS GENERADOS EN

TRABAJO DE INVESTIGACIN PARA OPTAR AL GRADO DE MAGSTER EN

AUTOR: RAFAEL ALFONZO ZERPA D.

CIUDAD GUAYANA, MARZO 2008

ENSAYO DE DEGRADACIN BIOLGICA DE LIXIVIADOS GENERADOS EN

Descriptores: Lixiviados, Degradacin Biolgica, Biorremediacin, Ciudad Guayana,

Aspecto General Del Relleno Sanitario Cambalache..15

1.- Composicin tpica del Lixiviado..19

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El objetivo de la Biorremediacin es el manejo de las propiedades fsicas, qumicas y

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1. a.- RELLENO SANITARIO DE CAMBALACHE

Previamente a la puesta en funcionamiento de este Relleno Sanitario, y de acuerdo a

Figura 1.- Ubicacin Relativa del Relleno Sanitario Cambalache

determinada y posteriormente tapados con material adecuado para la cobertura de los

Las irregularidades en el Relleno abarcan desde contaminacin por emisiones libres de

Imagen 1.- Aspecto General del Relleno Sanitario Cambalache

Imagen 2.- Presencia de escarbadores en el sitio.

Imagen 3. Vista parcial Relleno Sanitario Cambalache. (Lindero Este)

Imagen 4.- Vista parcial Relleno Sanitario Cambalache. (Lindero Sur).

denomina lixiviado, rica en elementos contaminantes que al desplazarse verticalmente

Diversos elementos lquidos generados por la descomposicin de los desechos slidos,

Aporte o derrame de lquidos en el relleno sanitario.

La composicin de un lixiviado producido en un vertedero de basura puede ser muy

Gran cantidad de hidrocarburos solubles.

Gran cantidad de nitrgeno orgnico y amoniacal.

Alta Demanda Qumica de Oxgeno (DQO)

Salinidad muy elevada.

2.a.- Formacin de Lixiviados

En la tabla N 1 se presenta la composicin tpica de lixiviados generados en sitios de

Tabla N 1 . - Composicin tpica del lixiviado.

Intervalo de valores (mg/l, excepto donde se indica)

Slidos Disueltos Totales

Slidos Suspendidos Totales

480 - 72,500 microhmios/cm.

Carbono Orgnico Total

Fuente: Bagchi, 1990

2. b.- Composicin de los lixiviados

Cancergeno, mutagnico, posible teratognico; efectos sobre el

Probable cancergeno y teratognico; efectos sobre el sistema

Embriotxico; efectos sobre el sistema nervioso central, hgado

Efectos sobre el sistema nervioso central; daos en los riones y

Posible cancergeno; efectos sobre el sistema nervioso central,

Probable cancergeno; efectos sobre el sistema nervioso central,

Cancergeno; mutagnico; efectos en el sistema nervioso central,

Efectos en el sistema nervioso central, sistema cardiovascular;

Fuente: Bautista y Timoshina, 2003.

Tabla N 3. Metales presentes en Lixiviados y sus efectos en la Salud Humana.

Efectos sobre la salud humana

Cancergeno; potencialmente teratognico; efectos sobre los sistemas cardiovascular, nervioso