Beruflich Dokumente
Kultur Dokumente
BIOTEHNOLOGIILE VEGETALE
CERINE ASUPRA TEMEI:
1. s definii termenii de micropropagare in vitro, aclimatizare, dedifereniei, regenerare,
difereniere, organogenz;
2. s cunoatei condiiile de vitrocultur, implicit a modificrilor morfofiziologice i biochimice
suferite de vitroplantule;
3. s descriei metode de realizare a procesului de micropropagare.
Definiii
SCHAEFFER (1990) definea micropropagarea ca fiind o nmulire clonal in vitro a plantelor,
pornind de la diferite explante, n general, cu o proliferare accelerat de lstari.
Dup ZAID i colaboratorii (1999), micropropagarea reprezint multiplicarea miniaturizat in
vitro a plantelor i regenerarea materialului vegetal ntr-un mediu aseptic, controlat, pe medii de
cultur care conin substane de cretere specifice.
n domeniul vitroculturilor vegetale, termenul de aclimatizare are o semnificaie aparte, i
anume: adaptarea plantulelor generate in vitro (vitroplantulelor) la condiiile mediului
septic de via (CONOVER i POOLE, 1984; CACHI, 1987) sau procesul de cretere a
plantelor cultivate in vitro, n condiiile mediului extern de via (ZAID, 1999).
Evoluia culturilor de celule i esuturi
Ideea de clonare a plantelor a luat natere nc ncepnd cu anul 1838, cnd SCHLEIDEN i, n
anul urmtor, SCHWANN (1839) au formulat ipoteza totipotenialitii celulare, potrivit creia
la baza structurii organismelor fiecare celul posed toate informaiile genetice de care aceasta
are nevoie pentru formarea unui nou organism
-1902 - HABERLANDT - celulele plantelor cultivate in vitro, pe medii artificiale adecvate
asigurrii vieii acestora, pot regenera o plant normal.
- dup descoperirea citochininelor de ctre SKOOG i colab., SKOOG i MILLER, n anul 1957,
au observat c formarea de lstari sau de rdcinie este controlat de balana hormonal
auxin/citochinin;
- embriogeneza somatic in vitro a fost descris, pentru prima dat, de ctre STEWARD i
colab., n anul 1958 i de ctre REINERT, n acelai an;
- un prim pas n micropropagarea industrial a plantelor superioare l-a constituit elaborarea
tehnicilor de micropropagare in vitro la Cymbidium (MOREL, 1960).
- cultura de protoplati, fuziunea i dezvoltarea hibrizilor somatici au fost descrise ntre anii
1960-1970, de ctre COCKING (1960),
formarea de mugurai, fapt care poate conduce la generarea de tulpinie ce, ulterior n poriunea
lor bazal pot s diferenieze rdcini, constituindu-se astfel, n final, la nivelul explantului, o
plantul;
Celulele explantelor inoculate pe medii aseptice, pentru ca s i reorganizeze un mod de via, trebuie s
sufere un proces de conversie, respectiv din celule definitivate structural i funcional, acestea s treac la
starea de celule meristematice, apte de multiplicare, proces numit dedifereniere.
1. Prima faz de dedifereniere:
BIOTEHNOLOGIE
Curs
Embriogeneza somatic
Embriogeneza somatic - Definiii, caracterizare
Embrionul reprezint o entitate distinct, care funcioneaz ca un stadiu intermediar al tranziiei
de la ciclul biologic gametofitic la cel sporofitic.
Embriogeneza somatic la plante este un proces morfogenetic complex prin care o singur celul
somatic se poate divide i transforma n condiii speciale ntr-o structur bipolar care se va
dezvolta genernd n final planta ntreag, printr-un proces asemntor embriogenezei zigotice.
Tipuri de embrioni vegetali
1. -embrioni zigotici generai din zigot (diploizi), format prin fertilizarea ovulului,
2. - embrioni nezigotici formai in vivo (diploizi sau haploizi) sau in vitro, din alte celule
dect zigotul,
- embrioni somatici formai din celulele sporofitului ex. embrionii adventivi (i-au natere din din ali
embrioni, organe sau celule ale sacului embrionar, ale nucelei sau ale integumentelor ovulului)
- embrioni partenogenetici formai din ovule nefertilizate,
- embrioni androgenetici formai din gametofitul masculin,
- embrioni ginogenetici formai din gametofitul feminin
Fazele procesului de embriogenez somatic in vitro
formarea maselor celulare embriogene i a esutului proembrionic
stadiile morfologice caracteristice:
- globular,
- cordiform,
- torpedo,
- cotiledonar.
- embrion matur
Tipuri de embriogenez somatic
Direct - de la celule difereniate, de la plantule i chiar de la embrioni zigotici
Indirect prin iniierea prealabil a calusului
Utilizarea
embrionilor
Semine artificiale.
somatici
producie.
Embrion imatur
Sistemul de regenerare in vitro, rapid i foarte eficient (organogenez i embriogenez somatic) din
lstari apicali
(A) Prima zi de la izolarea lstarilor apicali, cu primordii foliare LP = primordii foliare; SM = meristeme.
(B) Dup prima sptman la nivelul explantelor se pot observa poriuni de meristeme i extinderea
frunyulielor primordiale.
(C) Dup trei sptmani n masa meristematic se disting numero i lstari i frunzuli e ini iale .
(D) Lstari individuai producand 2-8 straturi de tesut translucid.
(E) Fiecare strat de esut a generat mai mul i embrioni somatici .
(F) Diferenierea minibutailor din meristeme.
(G) Germinaia embrionilor somatici putandu-se observa apexul lstarilor (SA), nconjurat de frnzuliele
preliminare (PL).
(H) Diferenierea embrionilor somatici in plantule .
Embriogeneza somatic primar n mediu solid (1) sau n suspensii celulare (2) la Coffea arabica
Incubarea vitroculturilor.
Creterea vitroculturilor.
Pregtirea i prelucrarea vitroculturii pentru viitoarea cultur.
Conservarea vitroculturilor.
Asepsia i asepsizarea
Dispozitive de sterilizare
Mediul de vitrocultura
Caracteristicile generale ale procesului de micropropagare
De ce sunt vitroplantulele verzi i totui nu se hrnesc fotoautotrof?
Prezena n mediul de vitrocultur a zaharozei (cu excepia culturilor fotoautotrofe) molecule
de amidon blocarea cloroplastelor
CAUZELE APARIIEI UNEI EVAPOTRANSPIRAII EXCESIVE LA NIVELUL
EXVITROPLANTULELOR
1. Stomatele au osteolele n permanen deschise (sisteme de nchidere deschidere
nefuncional);
2. Amfistomatia i densitateas ridicat a stomatelor la nivelul limburilor foliare (la
Cymbidium vitroplantulele pot fi amfistomatice, cu toate c, n condiii naturale de via
frunzele prezin hipostomatie).
3. Lipsa cuticulei pe suprafa frunzelor;
Cercul vicios al reglrii condiiilor de mediu ex vitro n perioada de aclimatizare
1. Umiditatea relativ a atmosferei din recipientele de aclimatizare trebuie meninut
ridicat, pentru a reduce mortalitatea exvitroplantulelor
2. O metod de cretere a umiditii n jurul plantulelor, const n meninerea
exvitroplantulelor sub ceaa artificial, care realizeaz o hidratare a atmosferei dar i o
umbrire a acestora,.
3. Fotosinteza este, ns, inhibat n condiii de umbrire prea puternic
4. Inhibarea fotosintezei (fotoautotrofismului) poate descrete organogeneza, respectiv
rizogeneza i caulogeneza
Fig. 1.
A. Arborele de Royal poinciana.
B. B. Detaliu de floare de Royal poinciana.
Tipuri de explante utilizate in experiment: A. Embrion zigotic imatur Bar = 1 mm. B. Smn
imatur. Localizarea embrionului zigotic imatur n smn. Bar = 10 mm. C. Smn imatur
tiat n jumtate Bar = 10
Formarea calusului embriogen (CE). A. Formarea CE n embrionii zigotici imaturi. Bar = 2 mm. B.
Embrioni imaturi localizai n smn, cu calus la capt. Bar = 9 mm. C. Calus produs la
suprafaa semiontelor njumtite Bar = 13 mm.
a ex vitro, b in vitro,
evideniate la microscopul electronic cu baleaj (Taji i Ariel, 1994)