Es posible apreciar la actividad enzimtica de la enzima succinato

deshidrogenasa mediante una reaccin colorimtrica?

Teora
Los enzimas son protenas que catalizan reacciones qumicas en los seres vivos.
Los enzimas son catalizadores, es decir, sustancias que, sin consumirse en una
reaccin, aumentan notablemente su velocidad. No hacen factibles las reacciones
imposibles, sino que solamente aceleran las que espontneamente podran
producirse. En ocasiones la actividad de la enzima depender slo de su
estructura como protena, pero en otras ocasiones necesitar de cofactor que es
una sustancia de naturaleza no proteica que es requerida para que ejerza su
actividad biolgica, este podr ser un ion metlico o una coenzima que es un tipo
de cofactor; es un cofactor orgnico no proteico que se requiere junto con la
protena enzimtica para que tenga lugar la reaccin enzimtica.

Estas se clasifican en:

1. Oxidorreductasas: Catalizan reacciones de xido-reduccin
2. Tranferasas: Catalizan reacciones de transferencia de grupos
3. Hidrolasas: Catalizan ruptura de enlaces qumicos con adicin de agua
4. Liasas: Catalizan la ruptura de enlaces qumicos sin participacin de agua
(adicin a dobles enlaces)
5. Isomerasas: Catalizan reacciones de Isomeracin
6. Ligasas: Catalizan reacciones que consisten en unir dos molculas.
La succinato deshidrogenasa es una enzima clasificada dentro del grupo de las
oxidorreductasas, cataliza una reaccin muy importante en el metabolismo
oxidativo de la clula: la conversin del succinato en fumarato.
Algunas enzimas actan con la ayuda de estructuras no proteicas que se
denominan:
o Coenzima: Molculas orgnicas
o Cofactor: Se trata de iones o molculas inorgnicas.
Las variables que influyen en la velocidad de una reaccin:
1. Concentracin de enzimas
2. Temperatura
3. pH

4. Concentracin de sustrato
5. Efectores (activadores e inhibidores)
Fundamento:
Una oxidorreductasa es una enzima que cataliza la transferencia de electrones
desde una molcula donante (el agente reductor) a otra aceptora (el agente
oxidante), es decir, transfieren hidrgeno (H) o electrones (e-) de un sustrato a
otro.
La succinato deshidrogenasa es una enzima clasificada dentro del grupo de las
oxidorreductasas, esta se encarga de catalizar la conversin del succinato en
fumarato. El H2 cedido por el succinato puede ser transferido del FADH 2 a un
colorante susceptible como el azul de metileno que al cambiar su estado redox
pasa de coloreado a incoloro o viceversa.

Indicador

Color (reducido)

Color (oxidado)

Azul de metileno

Incoloro

Azul

La succinato deshidrogenada remueve 2H+ y 2 electrones del succinato para

formar fumarato y la coenzima reducida (FADH2).
La enzima est sujeta a una poderosa inhibicin competitiva por el fenol. Para
estudiar el transporte de cargas en la reaccin se emple un aceptor artificial de
electrones (azul de metileno), cuya decoloracin permite diferenciar la actividad
enzimtica en los ensayos a realizar en la presente prctica.

Objetivos:
Que el alumno aprecie la actividad de le enzima Succinato Deshidrogenasa
mediante una reaccin colorimtrica.

Material

2 tubos de ensaye
2 pipetas de 5ml
Bao Mara a 50C
Pinzas para tubo de ensaye
Reactivos

NaOH al 10%
cido succnico al 3% neutralizado con NaOH al 10%hasta pH=7.4
Fenol al 90%
Azul de metileno al 0.1%
Aceite mineral
Hgado de rata
Procedimiento

Pesar 1g de hgado de rata recientemente

sacrifcada.
En el mortero molerlo con 4 ml de cido succnico
hasta obtener una masa (agregar el cido succnico
poco a poco).
Transferir en partes iguales a 2 tubos y proseguir
segn la tabla.
Incubar ambos tubos por 10 minutos en bao Mara
a 40 - 50C.
Observar los cambios.

1)
2)
3)

Nmero de tubo
Reactivo

-------------Fenol 90%

1.0 ml

Azul de metileno

3 gotas

3 gotas

Mezclar cada tubo!

Aceite mineral

10 gotas

10 gotas

Fichas de seguridad

Cuestionario

1.

Cules son los colores del azul de metileno en sus estados oxidado y
reducido?

En estado reducido el color es azul (Enzima-FAD + azul de metileno) y en su

estado oxidado es incoloro (Enzima-FADH2 + azul de metileno).

2.

Cul es la funcin del fenol en la reaccin?

El fenol inhibe la actividad de las enzimas ya que desnaturaliza las protenas,
en este caso a la enzima deshidrogenasa, provocando la prdida de su
actividad.

3.

En qu va metablica est involucrada la enzima succinato

deshidrogenasa?

La
enzima
succinato
involucrada en la reaccin 7
de succinato se transforma
con ayuda del cofactor FAD,
en
FADH2,
para
en fumarato.

deshidrogenasa
est
del ciclo de Krebs, ya que
a fumarato. El succinato
le cede 2 H+ y se convierte
posteriormente convertirse

Conclusin
Si es posible visualizar la
actividad enzimtica de la
enzima
succinato
deshidrogenasa mediante
una reaccin colorimtrica en este caso mediante el azul de metileno, ya que
cuando este se reduce se produce una coloracin azul y por lo contrario al utilizar
un inhibidor (fenol) la coloracin no cambia.