UNIVERSIDAD

NACIONAL MAYOR DE
SAN MARCOS
FACULTAD
DE INGENIERA
INDUSTRIAL
E.A.P. INGENIERA
INDUSTRIAL
INFORME DE
LABORATORIO N4

CROMATOGRAFA DE COMPUESTOS
ORGNICOS

Profesor: Gustavo
Ruiz
Integrantes:

Chacpi Afaro Sara Geraldine

15170060
Rojas Falcon Jhow
14170051
Barturen Castilla Mia
15170005
Fecha de realizacin del experimento: 15
de octubre del 2016
Lima, Ciudad Universitaria, 21 de octubre del 2016.
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TABLA DE CONTENIDOS

Marco Terico

Mtodo Operativo

Discusin de Resultados

10

Conclusiones

11

Cuestionario

12

Referencias Bibliogrficas

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MARCO TERICO
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DEFINICION
Es un procedimiento fsico-qumico que consiste en separar los componentes o
sustancias integrantes de una mezcla en movimiento por medio de reparto o
absorcin sobre una superficie estacionaria o inmvil. Es un conjunto de
tcnicas basadas en el principio de retencin selectiva, cuyo objetivo es
separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y
determinar las cantidades de dichos componentes.
La cromatografa cumple con las siguientes funciones:
Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos ms puros y
que puedan ser usados posteriormente (etapa final de muchas sntesis).
Medir la proporcin de los componentes de la mezcla (finalidad
analtica). En este caso, las cantidades de material empleadas son
pequeas.
CLASIFICACION DE LA CROMATOGRAFIA
Tipos
Cromatografa en papel
Cromatografa en capa fina
Cromatografa de gases
Cromatografa lquida

Fase mvil
Lquido
Lquido
Gas
Lquido (polar)

Fase estacionaria
Lquido
Slido
Slido o lquido
Slido o lquido

en fase inversa
Cromatografa lquida

Lquido

(menos polar)
Slido o lquido

en fase normal
Cromatografa lquida

(menos polar)
Lquido (polar)

(polar)
Slido

de intercambio inico
Cromatografa lquida

Lquido

Slido

de exclusin
Cromatografa lquida

Lquido

Slido

de absorcin
Cromatografa de

Lquido

Slido

fluidos supercrticos
Las distintas tcnicas cromatogrficas se pueden dividir segn cmo est
dispuesta la fase estacionaria:
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Cromatografa plana. La fase estacionaria se sita sobre una placa

plana o sobre un papel. Las principales tcnicas son:

Cromatografa en papel
Cromatografa en capa fina

Cromatografa en columna. La fase estacionaria se sita dentro de una

columna. Segn el fluido empleado como fase mvil se distinguen:

Cromatografa de lquidos
Cromatografa de gases
Cromatografa de fluidos supercrticos

La cromatografa de gases es til para gases o para compuestos relativamente

voltiles, lo que incluye a numerosos compuestos orgnicos. En el caso de
compuestos

no

voltiles

se

recurre

procesos

denominados

de

"derivatizacin", a fin de convertirlos en otros compuestos que se volatilizen en

las condiciones de anlisis.
Dentro de la cromatografa lquida destaca la cromatografa lquida de alta
resolucin (HPLC, del ingls High Performance Liquid Chromatography), que
es la tcnica cromatogrfica ms empleada en la actualidad, normalmente en
su modalidad de fase reversa, en la que la fase estacionaria tiene carcter no
polar, y la fase mvil posee carcter polar (generalmente agua o mezclas con
elevada proporcin de la misma, o de otros disolventes polares, como por
ejemplo metanol). El nombre de "reversa" viene dado porque tradicionalmente
la fase estacionaria estaba compuesta de slice o almina, de carcter polar, y
por tanto la fase mvil era un disolvente orgnico poco polar.
La razn por la que es posible conseguir separaciones difciles de lograr por
otros mtodos se debe en que, pequeas diferencias en el coeficiente de
reparto o en la adsorcin-desorcin de cada uno de los componentes se va
multiplicando a lo largo del sistema.
Se pueden establecer dos mecanismos:

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Reparto: Es la distribucin de una sustancia o mezcla de sustancias

entre la fase mvil y la fase estacionaria soportada sobre un slido
adecuado.

Adsorcin: Es un proceso donde un slido se utiliza para eliminar una

sustancia soluble del agua

PARTES DE UN SISTEMA CROMATOGRAFICO

Fase mvil: Lo constituyen los solventes, que son sustancias fluidas de

diferente polaridad, metanol, cloroformo, etanol, etc. La polaridad de la
fase mvil est relacionada con su capacidad de elucin o desorcin.

Los solventes deben tener grado de pureza.

Fase estacionaria o soporte: Lo constituyen

las

sustancias

adsorbentes que generalmente se depositan sobre la placa de vidrio, en

el caso de la C. en papel, el papel de Whatman. Debe ser insoluble en el
disolvente que se va utilizar para la separacin y no debe reaccionar con

las sustancias que se van a separar.

Cmara de saturacin: Que es un recipiente con una tapa que cierra

hermticamente donde se realiza el cromatograma.

Reveladores: Si todos los componentes son coloreados, bastar la
inspeccin ocular para distinguir las manchas, pero en la mayora de
casos, los compuestos son incoloros y por ello invisibles en el
cromatograma, siendo necesario utilizar mtodos fsicos (Luz UV) o
qumicos, como los vapores de Iodo, u otros reactivos especiales que

permitan hacer visible.

Aplicadores: Son micropipetas utilizadas en la aplicacin o sembrado

de las sustancias o cromatografiar.

Muestras: Son las sustancias a cromatografiar y pueden ser: la
sustancia patrn o estndar y la sustancia problema o muestra
problema.

RELACION DE FLUJO (Rf)

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Es una constante fsica, caracterstica de cada compuesto siempre que se

efectu la determinacin en las mismas condiciones. Es la constante que
relaciona la distancia recorrida por la muestra problema (frente soluto) y la
distancia recorrida por el solvente (frente solvente)

Frente del solvente

Distancia recorrida
por el solvente

Distancia
recorrida por
la sustancia
x
Origen o siembra

Rf =

Distancia recorrida por el Soluto

Distancia recorrida por el Solvente

Para averiguar si nos encontramos ante un mismo compuesto, se colocan

ambos sobre la misma placa y se desarrolla con varios eluyentes. Una vez
desarrollados se calculan los RF y si estos son distintos, puede deducirse con
toda seguridad que no se trata del mismo compuesto. Por el contrario, si los RF
son iguales los compuestos pueden ser iguales o no serlo.

MTODO OPERATORIO
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I.

Materiales y Reactivos:
Metanol
Cmara cromatogrfica
Muestra patrn de acetanilida
Muestra purificada de acetanilida
2 capilares
Frasco
Lamina Silicagel
Lpiz
Cmara de rayos luz UV
Cmara con Vapores de sodio.

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II.

Procedimiento
Experimental
1. Dilucin de los cristales de acetanilida

En esta primera parte, diluimos los cristales de acetanilida obtenidos en el

laboratorio anterior en 0.5ml de etanol, hasta logar disolver toda la muestra.

2. Marcado simtrico de la lmina Silicagel

Aqu realizamos el marcado (con lpiz) de 2 puntos equidistantes a un
centmetro de la base, en la lmina Silicagel.

3. Aplicacin de la muestra patrn y muestra purificada de acetanilida

Aqu aplicamos, con la ayuda de 2 capilares, en cada uno de los puntos
marcados: 5 veces de la muestra de acetanilida patrn y de 8-10 veces la
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muestra purificada de acetanilida, cuidando que los halos formados no se

junten y esperando en cada aplicacin que estas soluciones se sequen.

4. Placa en

la Cmara

Cromatografica
Aqu llevamos la lmina Silicagel con las soluciones aplicadas a la cmara
cromatografica y esperamos que el sistema de solventes suba por toda la
lmina.

5. Reveladores

Revelacin en Fsico: Aqu llevamos nuestra lamina Silicagel l a

un ambiente oscuro y lo irradiamos con luz UV de 254 mm de

longitud de onda y observamos el recorrido de las muestras.

Revelacin en Qumico: Aqu llevamos la lmina Silicagel a la
cmara de vapores de Yodo y observamos el recorrido de las
muestras.

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6. Finalmente realizamos los clculos de Rf de ambas muestras y las

comparamos, para su posterior anlisis.

Frente del Solvente

57
27
24
Origen o siembra
E

Calculando:

Rf Estandar =

Distancia recorrida por el Soluto

24
= =0.42
Distancia recorrida por el Solvente 57

Rf Problema =

Distancia recorrida por el Soluto

27
= =0.47
Distancia recorrida por el Solvente 57

DISCUSIN DE RESULTADOS

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De los resultados obtenidos en el experimento, se observa que la razn de flujo

de la muestra de acetanilida es menor a la de acetanilina purificada.

Ante esto surge la pregunta: Porque las razones de flujo son relativamente
diferentes?
Segn la literatura existente, se debe a que la acetanilida purificada posee un
componente relativamente ms polar en relacin al componente encontrado en
la acetanilida patrn.

Tambin se observa una mancha perteneciente a la acetanilida patrn, la cual

est al mismo nivel que la acetanilida pura. Esto nos indica la existencia de un
componente de igual polaridad en ambas muestras y hasta se puede decir que
se trata del mismo componente. Sin embargo, es necesaria una confirmacin,
repitiendo el experimento con diferentes fases mviles y estacionarias, y
tambin con distintos reactivos de revelado.

CONCLUSIONES

Despus de realizar un anlisis riguroso de los resultados llegamos a las

siguientes conclusiones:
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 La acetanilida purificada en prcticas anteriores fue cercana al estndar

exigido, ya que el Rf con respecto a la muestra patrn era
numricamente cercana.
Por medio de la cromatografa es posible identificar y separar los
componentes de una mezcla, as como tambin determinar la pureza de
un compuesto
A pesar de que es una tcnica muy sencilla de realizar, existen
inconvenientes que alteran los resultados de la misma, ya sea la sobre
distribucin de las muestras sobre el papel (afectando a otras tintas en
sus corrimientos) o los factores ambientales (p. ej. calor y la falta de una
cmara cromatografa) que afectan a la fase mvil, disminuyendo su
cantidad al vaporizarse o el deterioro de la fase estacionaria.

CUESTIONARIO
1. Qu es una serie eluotrpica?
La serie eluotrpica es la ordenacin de los disolventes de acuerdo con su
capacidad relativa para desplazar solutos de un determinado adsorbente. La
fuerza eluyente es una medida de la energa de adsorcin del disolvente,
supuesto el valor cero para el sistema pentano/slice pura. Cuanto ms polar es
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el disolvente, mayor es su fuerza eluyente respecto a la slice en cromatografa

de adsorcin. Cuanto mayor es la fuerza eluyente del disolvente, tanto ms
rpidamente se eluirn los solutos de la columna
2. Mencione las aplicaciones de la cromatografa por HPLC y la
cromatografia de gases.
HPLC preparativa
Es la tcnica escogida para aislamiento y purificacin de productos de valor en
las industrias qumicas y farmacuticas, as como en la biotecnologa y la
bioqumica. La cromatografa preparativa comprende un amplio rango de
aplicaciones, desde el aislamiento de 1g de muestra para identificacin
espectroscpica hasta el aislamiento de un compuesto puro de una mezcla de
100g.
Campos de Aplicacin de HPLC
Frmacos: Antibiticos, sedantes esteroides, analgsicos
Bioqumica: Aminocidos, protenas, carbohidratos, lpidos
Productos de alimentacin: Edulcorantes artificiales, antioxidantes,
aflatoxinas, aditivos
Productos

de

la

industria

qumica:

Aromticos

condensados,

tensoactivos, propulsores, colorantes

Contaminantes: fenoles, Pesticidas, herbicidas, PCB
Qumica forense: Drogas, venenos, alcohol en sangre, narcticos
Medicina clnica: cidos biliares, metabolitos de drogas, extractos de
orina, estrgenos.
Algunas aplicaciones importantes de la HPLC preparativa
Separacin y purificacin de metabolitos
Separacin y purificacin de los metabolitos de las drogas procedentes
de muestras de orina
Purificacin y separacin de enantimeros
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 Purificacin de compuestos naturales

Purificacin y caracterizacin de enzimas y protenas
Aplicaciones de la cromatografa de gases
Medioambientales: Anlisis de pesticidas y herbicidas, anlisis
hidrocarburos, semivoltiles y voltiles, anlisis del aire...

de

Alimentos y aromas: fragancias y aromas, aceites, bebidas, cidos

orgnicos, azcares, FAMES, steres metlicos, triglicridos, alcoholes...
Qumica Industrial: alcoholes, cidos orgnicos, aminas, aldehdos y
cetonas, steres y glicoles, hidrocarburos, disolventes, anilinas, gases
inorgnicos...
Biociencia: drogas, frmacos, alcoholes y contaminantes en sangre,
disolventes residuales...
Derivadas del petrleo: gas natural, gases permanentes, gas derefinera,
gasolinas, gasleos, parafinas...

3. Diga que es la electroforesis y cul es su fundamento

La mayora de las biomolculas poseen una carga elctrica, cuya magnitud
depende del pH del medio en el que se encuentran. Como consecuencia, se
desplazan cuando se ven sometidas a un campo elctrico.
Se denomina electroforesis a la tcnica mediante la cual se separan las
biomolculas en disolucin cuando se ven sometidas a un campo elctrico. Se
trata de una tcnica fundamentalmente analtica, aunque tambin se puede
realizar con fines preparativos.

Cada molcula se desplaza por efecto del campo, alcanzando rpidamente una
velocidad constante al equilibrarse la fuerza impulsora (fuerza del campo
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elctrico) con la resistencia al avance (fuerza de friccin o rozamiento)

impuesta por el medio en el que se desplaza.

Fuerza del campo elctrico=Fuerza de friccin

Q . E=F . V

Donde:
Q=Carga (C)

E=I ntensidad del campo(V /m=N / C)

F=C oeficiente de friccin(CVs/m 2=kg /s)

V =V elocidad de la molcula(m/ s)

El coeficiente de friccin mide la resistencia intrnseca debida a las

caractersticas de cada molcula, siendo stas esencialmente su forma y su
tamao. As, por ejemplo, las molculas grandes y de forma irregular poseen
un mayor coeficiente de friccin que las pequeas y compactas.

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BIBLIOGRAFA

Gary D. Christian. Qumica Analtica. Sexta Edicin. Mxico. Mc GrawHill.2009

Skoog, Holler, Nieman. Principios de Anlisis Instrumental. Quinta edicin.
Mc Graw-Hill. Espaa. 2001
Serie
Eluotrpica.
[Monografa

en

Internet]

Disponible

en:

http://es.unionpedia.org/Serie_eluotr%C3%B3pica
Marta Ozores. Cromatografa de Lquidos. [Monografa en Internet]
Disponible

en:

http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/analisis-

qumicos/cromatografa-de-lquidos-hplc
Marta Ozores. Cromatografa de Gases. [Monografa en Internet].
Disponible

en:

http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/analisis-

qumicos/cromatografa-de-gases

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