Artculo de revisin.

La coloracin de gram y su importancia en el

diagnstico microbiolgico
Gloria Ins Morales Parra. Especialista en Microbiologa Mdica. Docente Universidad de
Santander (UDES), Universidad Popular del Cesar (UPC).Valledupar. Colombia
RESUMEN
Este artculo de revisin pretende dar a conocer la importancia de la coloracin de Gram
como herramienta diagnstica ya que en primera instancia permite caracterizar tamao,
forma y/o agrupacin bacteriana, la reaccin tintorial y el germen predominante en una
infeccin o en muestras contaminadas con biota normal.
En esta coloracin tambin es relevante considerar la presencia de la respuesta leucocitaria
o respuesta inflamatoria y otro tipo de clulas como las epiteliales, con el fin de orientar la
presencia de infeccin aguda o crnica y en algunos casos evaluar la calidad de la muestra
clnica como sucede con las muestras de esputo.
A pesar de que en algunas muestras clnicas esta tincin no tiene valor diagnstico
(farngeas, nasofarngeas y con uso muy limitado en muestras de materia fecal), puede ser
aplicada a diversos especmenes clnicos como liquido cefalorraqudeo, exudados, orinas,
esputo, abscesos y tejidos. La coloracin de Gram es en la actualidad, la prueba de
laboratorio de microbiologa ms simple y con el mejor costo efectividad, lo que representa
un beneficio para el paciente, el clnico y el laboratorio.
Palabras clave: coloracin de Gram, bacterias Grampositivas, bacterias Gram negativas,
diagnostico microbiolgico.
INTRODUCCIN
El advenimiento de las tinciones a mediados del siglo XIX, fue en gran parte, responsable
de los principales avances que tuvieron lugar en la microbiologa y en otros campos del
diagnstico microscpico durante los ltimos 100 aos. Desde los inicios de la
microbiologa la tincin de Gram se ha convertido en una de las tinciones diferenciales ms
usadas en la Microbiologa, como herramienta bsica para el diagnostico preliminar y
presuntivo del agente infeccioso. Esta coloracin diferencial clasifica a las bacterias en dos
grandes grupos: Grampositivas y Gram negativas con base a las diferencias estructurales de
sus paredes celulares.
Las caractersticas fenotpicas que presentan algunas bacterias contribuyen a su diagnostico
presuntivo: la observacin de cocos grampositivos dispuestos en racimos sugieren la
presencia de estafilococos; la disposicin de cocos Grampositivos en cadena indica

estreptococos; diplococos Grampositivos en forma de lanceta o con extremos alargados son

caractersticos de S. pneumoniae cuando se observan en esputos, diplococos Gram
negativos arrionados o reniformes son caractersticos de las especies de Neisseria, bacilos
Grampositivos ordenados en letras chinas o empalizadas son tpicos del Corynebacterim,
bacilos Gram negativos curvos en muestras de heces diarreicas indican especie de Vibrio, o
si tambin se ven en forma de sacacorchos sugieren especies de Campylobacter (1). Adems
de proveer al microbilogo y al clnico las caractersticas fenotpicas de la bacteria en
cuanto a tamao, forma, agrupacin y caractersticas tintoriales, esta tincin es
importantsima ya que en algunos casos permite la instauracin del tratamiento rpido y
oportuno.
A pesar de que esta coloracin es un procedimiento simple, se debe tener un riguroso
control de calidad del frotis, la tincin y el procedimiento, con el fin de minimizar los
errores tcnicos y mejorar la sensibilidad y especificidad de esta tincin como herramienta
para el diagnostico presuntivo del agente infeccioso.
RESEA HISTRICA
Desde los inicios de la bacteriologa, la coloracin de Gram se ha convertido en una
herramienta fundamental para la taxonoma e identificacin bacteriana. Fue ideada por el
dans Hans Christian Joachim Gram (1853-1938), un investigador que trabajaba en el
laboratorio de Carl Friedlander, el descubridor de la Klebsiella pneumoniae(2). Friedlander
haba mencionado la tcnica de su ayudante en una publicacin de 1883, sin darle la
valoracin debida y el 15 de marzo de 1884 Gram hizo su propia publicacin (3). En los
aos siguientes la utilidad de la tcnica se hizo evidente, hasta que en 1889, en la famosa
serie de los Prcis de, que publicaba la editorial Mason et fils en Pars, en el de
Microbiologa se recomienda someter a todos los cultivos a la tincin de Gram, como
primera orientacin diagnstica(4). A pesar de que con este valioso aporte Hans C. J. Gram
entraba en la galera de los inmortales, se cree que no supo valorar la trascendencia de su
mtodo de coloracin y esto se pudo observar cuando escribi He publicado un mtodo,
aunque estoy consciente de que todava es defectuoso e imperfecto; pero deseo que en
manos de otros investigadores pueda resultar de utilidad. Hoy en da la coloracin de
Gram es una de los pilares del diagnstico temprano de las infecciones bacterianas (5).
Posteriormente, el conocimiento de las estructuras de las membranas bacterianas, en cuanto
al aspecto fsico y su composicin molecular demostraron que la coloracin de Gram
distingue dos grupos de bacterias muy diferentes. Las bacterias Grampositivas que
presentan una gruesa capa de peptidoglicano, y las Gram negativas con una delgada capa de
peptidoglicano, a la que se le superpone una capa de lipopolisacrido-lipoprotena,
denominada membrana externa. La presencia de esta membrana, marca la diferencia entre
las bacterias Gram negativas y las Grampositivas carentes de dicha estructura (6).

Las clulas Grampositivas debido a sus gruesa paredes e peptidoglicano y la poca cantidad
de lpidos no son permeables al alcohol acetona (decolorante) puesto que este deshidrata la
pared celular y cierra los poros, alterando y afectando el pequeo espacio entre las
molculas. El complejo cristal violeta-yodo queda atrapado dentro de la pared celular
tiendo a las bacterias Grampositivas de color azul (7). Las bacterias Gramnegativas tienen
espacios en la estructura de su pared celular y el alcohol acetona es un solvente de lpidos
que acta sobre la membrana exterior de la pared celular afectando la membrana
citoplasmtica donde se unen las molculas que componen el peptidoglicano. De igual
manera, la delgada capa de peptidoglicano no es capaz de retener el complejo cristal
violeta-yodo lo cual obliga a las clulas Gram negativas a decolorarse, necesitando
entonces la adicin de la safranina o la fuscina como colorante de contraste para colorearse
de rosado (8).
TINCIN DE GRAM COMO HERRAMIENTA DIAGNOSTICA
La tincin de Gram es de gran utilidad para realizar el examen directo de muestras clnicas,
porque permite determinar la calidad de ellas, la respuesta inflamatoria, la naturaleza y
cantidad de microorganismos presentes y el germen predominante en una infeccin mixta o
con muestras contaminadas con biota normal. Adicionalmente, se puede correlacionar el
resultado del examen directo con el resultado de los cultivos y de esta manera, disponer de
un adecuado control de calidad. Este examen tiene valor diagnostico y es de informe
inmediato en muestras de liquido cefalorraqudeo y lquidos corporales, esputo, sangre,
orina, abscesos, y secreciones (uretral, cervical y vaginal). No tiene valor diagnostico en
muestras farngeas y nasofarngeas ya que la biota observada hace parte de la flora normal
de estos sitios anatmicos. Es de uso limitado en muestras de materia fecal (el diagnostico
presuntivo de infecciones por Campylobacter sp.)(9).
El diagnstico rpido de microorganismos presentes en fluidos corporales estriles, como el
lquido cefalorraqudeo, lquido pleural, peritoneal o articular, es de gran importancia para
el diagnstico de infecciones que, en estas localizaciones, son generalmente graves y
secuelantes. La tincin de Gram constituye una herramienta de gran utilidad en el
diagnstico etiolgico; sin embargo, la sensibilidad de esta tcnica es variable segn el tipo
de muestra y la carga bacteriana presente en ella. La concentracin de la muestra, como un
paso previo a su tincin mejora el rendimiento, por lo que es recomendable su uso de rutina
(10)
.
Chapin y colaboradores han demostrado que la centrifugacin (CT) y la citocentrifugacin
(CC) de los fluidos corporales estriles permite reducir la cantidad de muestra necesaria y
obtener preparaciones uniformemente concentradas en un rea de 6 mm de dimetro,
aumentando el rendimiento de la tcnica y la sensibilidad en la observacin bacteriana y
celular (11). Daz y col. demostraron que la sensibilidad para centrifugacin v

citocentrifugacin fue de 89% y 61%, respectivamente. La especificidad fue de 100% para

ambas tcnicas. En una evaluacin cuantitativa de la celularidad de las muestras, se observ
un aumento de los leucocitos en la centrifugacin con respecto a citocentrifugacin. Estos
resultados muestran que la centrifugacin puede ser de gran ayuda en el diagnstico rpido
de las infecciones de fluidos corporales con baja carga bacteriana. Presenta una mayor
sensibilidad y facilita la visualizacin de bacterias, especialmente en muestras con bajo
recuento celular (10), por lo que debera implementarse en los laboratorios.
Esta tincin, constituye por lo tanto un apoyo indiscutible contra las enfermedades
infecciosas y aumenta su valor en lo relativo a instaurar una terapia rpida permitiendo la
seleccin de los antibiticos apropiados (12). Las siguientes patologas, son algunos ejemplos
en donde la tincin de Gram se convierte en una herramienta importantsima para el
diagnostico presuntivo y definitivo del agente infeccioso:

VAGINOSIS BACTERIANA
La vaginosis bacteriana (VB) es un desorden del ecosistema vaginal caracterizado por un
cambio en la flora vaginal (Lactobacilos) por microorganismos anaerobios que incluyen G.
vaginalis, Mobiluncus sp, Prevotella, Bacteroides sp, Peptostreptococcus sp, entre otros,
siendo la G. vaginalis el morfotipo ms comnmente implicado en este sndrome (13). En la
vaginosis bacteriana, el cultivo tiene una baja sensibilidad y especificidad, ya que esta
patologa no se encuentra en el 50% de las mujeres de las cuales se aisl G. vaginalis (14,1,15).
Adems, algunas bacterias como el Mobiluncus son de lento crecimiento y tardan hasta 10
das de incubacin a 35 C para obtener colonias puntiformes de menos de 1 mm de
dimetro (16).

Varios estudios han demostrado que la tincin de Gram tiene una muy buena correlacin
con el diagnostico de vaginosis bacteriana (17,18, 19). Nugent y col, idearon un mtodo de
cuantificacin para mejorar la correlacin del Gram con la vaginosis bacteriana. Cada
morfotipo bacteriano encontrado en la coloracin (Bacilos grampositivos: Lactobacillus sp.,
cocobacilos Gram variables: G. vaginalis + Bacteroides sp. y bacilos curvos
Gramnegativos: Mobiluncus) es cuantificado de 1+ a 4+. Una vez establecida la cantidad
de bacterias se les asigna un puntaje: Si la suma de los puntajes es 7 o ms, es compatible
con vaginosis bacteriana; 4 a 6 es denominado intermedio y 0 a 3, normal (20). Una notable
ventaja del Gram vaginal, es que ha demostrando muy buena correlacin con el diagnstico
clnico, siendo, adems, rpido y de bajo costo. Adems, permite observar alteraciones de la
flora vaginal sin que existan evidencias clnicas de vaginosis bacteriana, razn por la cual

ha sido considerado por diversos autores como una tcnica objetiva, con un nivel elevado
de reproducibilidad en las distintas poblaciones estudiadas (21, 22).
A pesar de que el sistema de puntuacin de Nugent tiene buena validez, excelente
capacidad diagnstica y altamente reproducible para el diagnstico de vaginosis bacteriana
(23, 24, 25)
algunos autores afirman que a pesar que los parmetros de Nugent tienen muy
buena sensibilidad y especificidad, deben ir mancomunados a los criterios de Amsel y col.
establecidos como estndar para indicar la presencia de la enfermedad (26); esto permite
mejorar el diagnostico clnico de este sndrome (27, 28).
ENFERMEDADES DE TRANSMISIN SEXUAL
En el diagnstico precoz de la gonorrea y su tratamiento, la evaluacin microscpica
representa un elemento importante, ya que es rpido, econmico y sencillo. La sensibilidad
de la tincin de Gram para detectar N. gonorrrhoeae es prxima al 100% en los casos
sintomticos de uretritis, aunque solo del 50% al 70% en pacientes asintomticos. La
sensibilidad en ambos grupos se acerca al 100%, es decir, que los resultados falsos
positivos son excepcionales (29). El diagnstico presuntivo de infeccin por Neisseria
gonorrhoeae en hombres sintomticos, se realiza a partir de frotis de exudados uretrales
coloreados por Gram, al observarse los tpicos diplococos Gram negativos dentro de
leucocitos polimorfonucleares, representando una herramienta clave para el diagnstico de
la uretritis gonoccica en hombres, dada su alta sensibilidad y especificidad (30). Empero, la
interpretacin de frotis coloreados por Gram de muestras endocervicales y rectales se
considera difcil, debido a la presencia de bacterias que interfieren con la observacin del
gonococo o semejan diplococos, como sucede con los cocobacilos Gram negativos
Moraxela osloensis, Moraxela phenylpyruvica, Kingella denitrificans y Acinetobacter spp.
Por lo tanto, no es recomendable, por la baja sensibilidad y especificidad (31).
INFECCIONES DEL TRACTO URINARIO
Las infecciones del tracto urinario (ITU) se hallan entre las enfermedades infecciosas ms
frecuentes. Denotan una amplia variedad de entidades patolgicas, en las cuales el comn
denominador es la presencia de un nmero significativamente grande de microorganismos
en cualquier porcin del aparato urinario. Se han diseado numerosos mtodos para
determinar bacteriuria significativa adems del urocultivo: microscpicos, qumicos,
bioqumicos, enzimticos, etc., pero un nmero mnimo logra ofrecer un costo adecuado y
sencillez en la realizacin del anlisis (32).
La coloracin de Gram se ha empleado como prueba de tamizacin en el diagnstico de la
infeccin del tracto urinario (ITU). La tcnica utilizada en la mayora de los laboratorios y

estudios es la de la orina total sin centrifugar, en la cual se considera como criterio de

positividad el hallazgo de una o ms bacterias por campo de inmersin, lo cual se ha
correlacionado con urocultivos con ms de 10^5 UFC/mL. La sensibilidad y especificidad
de esta prueba varan del 65% al 94%, y del 75% al 98%, respectivamente (33, 34). Por su
lado, Villarroel demostr que la tincin de Gram para el diagnostico de bacteriuria tiene una
sensibilidad y especificidad del 93% y 98% respectivamente (35).
La principal ventaja de realizar el Gram de orina no centrifugada como parte de la rutina
bacteriolgica de cultivos de orina, es el diagnstico presuntivo rpido de infeccin urinaria
y como gua para el tratamiento inicial basado en la forma y propiedades de la tincin del
probable agente etiolgico. En resumen, la gran rapidez y simplicidad de la coloracin de
Gram de orina no centrifugada permiten detectar con alto rango de sensibilidad y
especificidad la presencia de bacteriuria significativa compatible con infeccin del tracto
urinario (36); adems, es un mtodo rpido, econmico, sensible y especfico para detectar
bacteriuria. Se recomienda realizarlo como respaldo frente a discordancias o hallazgos
especiales ms que como screening. Debe aplicarse a la muestra recin agitada sin
centrifugar. La presencia de una bacteria/campo de inmersin tiene buena correlacin con
un recuento mayor de 100.000 ufc/ml en aproximadamente 85% 95% de los casos (37). Sin
embargo, la tincin de Gram de una muestra de orina no se utiliza en la mayora de los
laboratorios clnicos como prueba de cribado porque la revisin metdica de los frotis es
demasiado arduo.
ESPUTO
La tincin de Gram tambin es de gran utilidad para evaluar las muestras de esputo.
Teniendo en cuenta el nmero de clulas epiteliales escamosas y de neutrfilos
segmentados, Barlett en el ao 1974(38), ide un sistema en el cual se le asignan puntos
negativos a un frotis que contenga clulas epiteliales escamosas, parmetro que indica la
contaminacin con secrecin orofarngea (saliva).
Cuando se observan la presencia de neutrfilos se le asigna una puntuacin positiva, que
indica la presencia de inflamacin activa. Posteriormente Murray y Washington
propusieron un sistema similar y consideraron clnicamente relevantes las muestras que
presentaran menos de 10 clulas epiteliales y ms de 25 leucocitos polimorfo nucleares
neutrfilos por campo de bajo poder(39). Aunque este sistema de graduacin de esputos est
clnicamente aceptado para muestras de secreciones respiratorias obtenidas por
expectoracin espontanea, no puede aplicarse si se sospecha infecciones pulmonares
causadas por micobacterias, la mayora de hongos, especies de Legionella y virus. Adems,
el significado de la presencia de neutrfilos se altera en algunas situaciones:
1) cuando el paciente est neutropnico a causa de una enfermedad o tratamiento,

2) cuando el paciente no presenta una respuesta inflamatoria eficaz y

3) cuando un cuerpo extrao causa irritacin de la superficie de la mucosa (1),por lo tanto,
los resultados de la coloracin deberan ser correlacionada con la historia clnica del
paciente.
BACTERIAS ANAEROBIAS
En la identificacin de anaerobios, la tincin de Gram es de una gran utilidad como
diagnstico presuntivo, ya que proporciona informacin acerca de los tipos de bacterias
existentes, cantidad relativa de las mismas, presencia de leucocitos, etc. Por ejemplo,
Bacteroides, por lo general, aparecen como bacilos pleomrficos que se tien dbilmente
con la tincin de Gram; las formas cocobacilares son sugestivas de especies pigmentadas de
Prevotella o Porphyromonas. Fusobacterium nucleatum suele presentarse como un bacilo
Gram negativo fino y fusiforme y a menudo dispuesto en parejas, unidos por un extremo.
La presencia de pequeos cocos gramnegativos son indicativos de Veillonella. Los bacilos
grampositivos anaerobios adoptan mltiples formas y pueden aparecer grampositivos o
gramvariables. Las esporas de Clostridium se ven raramente en las tinciones de los
exudados. Un bacilo grampositivo grueso, de forma rectangular y sin esporas es sugestivo
de Clostridium perfringens. Un bacilo grampositivo ramificado es sugestivo de
Actinomyces o Propionibacterium. Para establecer un diagnstico presuntivo de una
infeccin por anaerobios es importante que el microbilogo correlacione el origen de la
muestra con los morfotipos observados en la tincin de Gram.
Por otra parte, esta tincin es un elemento importante para el control de calidad del
laboratorio. Si no se consigue aislar todos los morfotipos observados esto puede ser debido,
probablemente, a algn fallo en los distintos pasos del diagnstico de los anaerobios
(recoleccin de la muestra, transporte o procesamiento), o bien se trata, aunque es menos
comn, de una inhibicin del microorganismo por un antibitico residual (40).
LQUIDO ARTICULAR
El estudio microbiolgico del lquido articular incluye: la tincin de Gram y la siembra en
medios de cultivo convencionales con incubacin aerobia y anaerobia. La coloracin de
Gram proporciona una informacin til e inmediata en relacin con el diagnstico y la
orientacin del tratamiento. En ocasiones, puede ser el nico dato de infeccin cuando se
debe a organismos exigentes que no son capaces de crecer en el cultivo. A pesar de su
utilidad, la sensibilidad y especificidad de la tincin de Gram no estn bien definidas.
En la artritis bacteriana no gonoccica, se estima que la sensibilidad oscila del 29% al 50%
(mxima sensibilidad en la infeccin por S. aureus). En la artritis gonoccica, la

sensibilidad es mucho ms baja, probablemente menor al 10%. Por el contrario, la

especificidad es siempre muy elevada (41). De lo anteriormente referenciado, se puede
concluir que esta tincin junto con el hemocultivo, deben ser considerados como mtodos
de gran aporte en la confirmacin microbiolgica de las infecciones osteoarticulares (42).
SISTEMA NERVIOSO CENTRAL
En el diagnostico de las infecciones bacterianas del sistema nervioso central, la tincin de
Gram del lquido cefalorraqudeo (LCR) permite una identificacin bacteriana rpida y
precisa en el 60%-90% de los pacientes con una meningitis bacteriana y presenta una
especificidad del 97% (1). La probabilidad de que se visualice algn microorganismo
mediante esta tincin se correlaciona con la concentracin bacteriana en el lquido
cefalorraqudeo (LCR). Una concentracin de 103UFC/ml se asocia a un 25% de
positividad de la tincin de Gram. Una concentracin de 10 3-105 UFC/ml se asocia a un
60% de positividad y una concentracin mayor de 105 UFC/ml se correlaciona con el 97%
de casos con tincin de Grampositiva. La probabilidad de que esta tincin sea positiva
depende tambin del tipo especfico de bacteria que cause la meningitis. S. pneumoniae se
observa en el 90% de casos, H. influenzae en el 86%, Neisseria meningitidis en el 75%,
bacilos Gram negativos en el 50% y aproximadamente en un tercio de los casos de
meningitis causadas por Listeria Monocytogenes se observan bacilos Grampositivos (43). Por
su lado, Baines afirma que la tincin de Gram de lquido cefalorraqudeo (LCR) permite
identificacin del agente etiolgico en aproximadamente 60 a 90% de los casos de
meningitis bacteriana y en el caso de meningococo esta tincin evidencia reaccin
leucocitaria y diplococos Gram negativos intra o extracelulares (44).
Algunos autores consideran que la tincin de Gram puede ser ms sensible que las tcnicas
de deteccin de antgenos (prueba de aglutinacin por ltex) y que, por ello, esta tincin
debe realizarse siempre (45). Aunque la tincin de Gram es un mtodo rpido, barato y
especfico para el diagnstico de las meningitis, en los pacientes que han recibido
tratamiento antibitico previo, la sensibilidad de esta tincin puede disminuir en un
20%(43).Maxson y cols. indican que un tratamiento antibitico oral o parenteral de menos de
24 horas de duracin antes de la realizacin de la puncin lumbar, no da lugar,
necesariamente, a una tincin de Gram del lquido cefalorraqudeo (LCR) negativa(46).
Para finalizar, a la coloracin de Gram se le han hecho algunas modificaciones (Hucker,
Atkin, Kopeloff) que permiten visualizar ciertos microorganismos Gram negativos que se
tien dbilmente con el colorante de contraste, como lo son el Campylobacter sp,
Legionella sp, Brucella sp, y algunos anaerobios. De otro lado, estn los famosos
gramvariables, que son tinciones de difcil interpretacin cuando son realizadas a partir de
cultivos axnicos, ya que las clulas observadas se vern al mismo tiempo como
Grampositivas y Gram negativas. Extendidos muy delgados o muy gruesos, coloraciones

realizadas antes de las 18 horas o despus de las 24 de incubacin, inadecuada

decoloracin, sobrecalentamiento al fijar por calor o lavado excesivo durante la coloracin
son errores que conllevan a obtener coloraciones gramvariables (9). Por lo tanto, se debe
tener un control de calidad riguroso y un buen entrenamiento del personal, parmetros que
conllevaran al diagnostico presuntivo de algunos patgenos con esta importante coloracin.
CONCLUSIONES
A pesar que la tincin de Gram es un procedimiento sencillo, se debe tener cuidado en la
preparacin e interpretacin de los frotis ya que esta tincin puede presentar algunas
*trampas* clsicas que pueden conducir a posibles errores. Por ejemplo, el S. pneumoniae
se presenta como diplococos grampositivos en forma de lanceta, puede ser interpretado
como una mezcla de microorganismos ya que una variante en su presentacin lo hace
aparecer como cocos alargados semejantes a bacilos cortos. Las especies de Acinetobacter
habitualmente son cocobacilos gramnegativos pero puede observarse tambin como
diplococos gramnegativos confundindose con especies de Neisseria. El Clostridium
perfringens tiene su presentacin clsica como bacilos Grampositivos en forma de tndem
pero puede tener la variante de presentacin con forma de bacilos Gram negativos o con
tincin gramvariable pudindose confundir con bacilos Gram negativos; la forma de vagn
es un indicio de que el microorganismo es Grampositivo, otros clostridios y las especies de
Bacillus tambin pueden aparecer en forma similar (1).

En la actualidad, esta tincin es la prueba de laboratorio de microbiologa ms simple y con

el mejor costo efectividad, lo que representa un beneficio tanto para el paciente como para
el clnico y el laboratorio. A pesar de su gran utilidad, este mtodo debe ser valorado con
precaucin, ya que la reaccin puede variar segn la edad de las clulas (cultivos viejos de
bacterias Grampositivas pueden perder capas de peptidoglucanos y teirse como Gram
negativos) y la tcnica empleada (al decolorar por un tiempo muy prolongado se puede
correr el riesgo que bacterias Grampositivas se tian como gramnegativas); por esta
situacin debe realizarse un riguroso control de calidad de la coloracin utilizando bacterias
ATCC Grampositivas y Gram negativas como el S. aureus ATCC 25923 y la Escherichia
coli ATCC 25922 cada vez que esta se realice.
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