UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

CARRERA DE QUMICA
INFORME DE LABORATORIO DE ANLISIS QUMICO INSTRUMENTAL I
PRCTICA N: 6
TEMA: ESPECTROFOTOMETRIA VISIBLE.

Fecha de entrega: 16/06/2016

1.1 OBJETIVOS:
Examinar y operar un espectrofotmetro.
Determinar hierro en una muestra por el mtodo de la ortofenantrolina.
Familiarizarse con los diferentes mtodos que existen para el clculo de la
concentracin por espectrofotometra. Ley de Beer.
INTEGRANTES:
- Bolaos Andrea
- Franco Jessica
- Ramrez Johanna
- Rodrguez Maritza
- Villashaay Jairo

GRUPO N: 1
DIA: Jueves
HORA: 14:00 16:00

1.2 TEORIA:
La espectrofotometra UV-visible es una tcnica analtica que permite determinar la
concentracin de un compuesto en solucin. Se basa en que las molculas absorben las
radiaciones electromagnticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma
lineal de la concentracin. Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotmetro, en
el que se puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solucin y medir la
cantidad de luz absorbida por la misma. Los espectrofotmetros son aquellos instrumentos en
los que se mide fundamentalmente la distribucin espectral de energa radiante en las regiones
espectrales: UV, VIS e IR (cercano hasta el medio). Estos instrumentos utilizan un complejo
sistema ptico de seleccin de longitud de onda (monocromador) (Diaz, Barcena, Reyes, &
Galvan, 2010).
1.2.1 FUNDAMENTO:
El fundamento de la espectroscopia se debe a la capacidad de las molculas para absorber
radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UV-visible. Las longitudes de onda
de las radiaciones que una molcula puede absorber y la eficiencia con la que se absorben
dependen de la estructura atmica y de las condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza
inica, constante dielctrica), por lo que dicha tcnica constituye un valioso instrumento para la
determinacin y caracterizacin de biomolculas (Diaz, Barcena, Reyes, & Galvan, 2010).
La regin UV se define como el rango de longitudes de onda de 195 a 400 nm. Es una regin
de energa muy alta. Provoca dao al ojo humano as como quemadura comn.

Ley de Lambert-Beer, esta ley expresa la relacin entre absorbancia de luz monocromtica (de
longitud de onda fija) y concentracin de un cromforo en solucin:
A = log I/Io = cl
Donde: Absortividades molar
c concentracin de la solucin
l longitud de la celda
(Diaz, Barcena, Reyes, & Galvan, 2010)
1.2.2 CONSULTA:
1. Diseo y funcionamiento de un espectrofotmetro de un solo haz y de doble haz

1.3 PROCEDIMIENTO:

Para la preparacin de los estndares se parti de una solucin patrn de

hierro de concentracin de 10ppm. Se prepararon 6 soluciones de 15ml las
cuales contenan solucin de hierro, solucin buffer, ortofenantrolina, sulfito
de sodio y agua destilada, las mismas que se prepararon en tubos Nessler;
para esto se procedi de la siguiente manera: a cada uno de tubos nessler
se les agrego 1ml de buffer, 1ml de ortofenantrolina y 0.5 de sulfito de sodio;
posteriormente se agreg 0,0:0,6:1,3;2,5;5; 10 ml de solucin patrn y
12,5;11,9;11,2;10,0;7,5;2,5 ml de agua destilada ajustando los 15 ml
respectivamente. Posteriormente se llev al espectrofotmetro se coloc en
las celdas y se determino los valores de % de Transmitancia y absorbancia a 510nm de cada
estndar.

Finalmente para la preparacin de la muestra problema se realiz los

clculos respectivos, de donde se tom 2,8 ml de la muestra problema y 9,7
ml de agua, se mantuvo constantes las cantidades de las soluciones buffer,
ortofenantrolina y sulfito de sodio; ajustando de esta manera los 15 ml. Se
llev al espectrofotmetro se coloc en las celdas y se determino los valores de % de
Transmitancia y absorbancia a 510nm de la muestra.

1.4 REPORTE DE DATOS:

1.4.1 Datos experimentales:
Tabla 1: preparacin de los estndares de hierro.
St.
0
1
2

ml Soln.
Patrn
0,0
0,6
1,3

ml Ac.
Ascrbico
0,5
0,5
0,5

ml Buffer
1,0
1,0
1,0

ml
Ortofenantrolina
1,0
1,0
1,0

ml H2O

Vol. Final

12,5
11,9
11,2

15,0
15,0
15,0

3
2,5
0,5
4
5,0
0,5
5
10,0
0,5
Elaborado por: Franco. J. y otros.

1,0
1,0
1,0

1,0
1,0
1,0

Tabla 2: Valores de comparativos de absorbancia y transmitancia.

St.

g Fe / ml

0
0,00
1
0,40
2
0,87
3
1,67
4
3,33
5
6,67
M
0,36
Elaborado por: Franco. J. y otros.

Espectrofotmetro
Absorbancia
Transmitancia
0,025
0,944
0,063
0,865
0,112
0,773
0,305
0,495
0,530
0,295
0,967
0,108
0,074
0,843

1.5 CLCULOS Y RESULTADOS:

1.5.1 Concentracin de hierro.
Calculo de la concentracin de hierro en los estndares.
Para 0,6ml de Fe ug/ml

C1 V 1=C 2 V 2

C2 =

C 1V 1
V2

C2 =

10 ug/ml0,6 ml
15 ml

C2 =0,4 ug/ml

1.5.2 Curva de calibracin.

Ajuste de los datos a una recta de tipo y = a + bx
St.
0
1
2
3

g Fe / ml Absorbancia
0,00
0,40
0,87
1,67

0,025
0,063
0,112
0,305

10,0
7,5
2,5

15,0
15,0
15,0

4
3,33
0,530
5
6,67
0,967
Elaborado por: Franco. J. y otros.

Abs=f(C)
1.2
1

f(x) = 0.14x + 0.02

R = 0.99

0.8
Absorbancia

0.6
0.4
0.2
0
0

Concentracin (ug/ml)

y=0,1443 x +0,0224

A=0,1443C +0,0224
A=0,1443(0,40)+0,0224

A=0,08012
Tabla 3: Correccin de los valores de absorbancia.
Absorbancia
(Shimadzu)
Estndar
Experimental
Corregido
0
0,025
0,0224
1
0,063
0,0801
2
0,112
0,1479
3
0,305
0,2634
4
0,530
0,5029
5
0,967
0,9849
Elaborado por: Franco. J. y otros.
1.5.3

Coeficiente de absortividad molar y absortividad especifica.

Calculo del coeficiente de cada estndar, sacar la media de estos valores adems de y

su media.
Molaridad

M=

0,40 ug 1000 ml 106 g 1 mol

x
x
x
1ml
1L
1 ug 55,85 g

M =7,162 x 106 mol/ L

C=[ mol/ L ]

Absortividad molar

A=bC

A
bC

0,063
1 cm7,162 x 106 mol /L

=8796,43 L/molcm
Absortividad especifica

C=[ g / L ]

A=bC

=
=

A
bC
0,063
cm0,40 ug 1000ml 106 g
1
x
x
1 ml
1L
1ug

=157,5 L/gcm
Tabla 4: Clculo de los valores de absortividad especfica.
Espectrofotmetro
(l / mol cm)

Molaridad
Fe (mol/L)

St

g Fe/ml

0,40

7,162 x 106

0,87

(l / g cm)

157,5

8796,43

1,557 x 10

128,74

7193,32

1,67

2,990 x 105

182,63

10200,67

3,33

5,962 x 105

159,16

8889,63

6,67

1,194 x 104

144,98

8098,83

------

--------

154,60

8635,78

Elaborado por: Franco. J. y otros.

1.5.4

Muestra

Calculo de la cantidad de hierro en la muestra por los siguientes mtodos.

Interpolacin grafica

Abs=f(C)
f(x) = 0.14x + 0.02
R = 0.99
Absorbancia

0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 5.5 6 6.5 7 7.5 8

Concentracin (ug/ml)

A=0,074
C=0,49 ug/ml

Interpolacin analtica (recta ajustada A=A0+KsC)

A=0,1443C +0,0224

C=

A0,0224
0,1443

C=

0,0740,0224
0,1443

C=0,36

Calculo de las concentraciones utilizando y comparando con el estndar ms cercano.

A=bC

A=bC

C=

A
b

C=

A
b

C=

0,074
1 cm8796,43 L/ cmmol

C=

0,074
1 cm157,5 L/cmg

C=8,4125 x 10

C=0,47 ug/ml

mol
1L
55,85 g 1 ug
x
x
x
L 1000 ml 1 mol 106 g

C=4,6984 x 10
C=0,47 ug/ml

g
1L
1 ug
x
x 6
L 1000 ml 10 g

1.5.5

Calculo estadstico.

Clculo de la sensibilidad y lmite de deteccin

A=0,1443C +0,0224
Ks= 0,1443 Sensibilidad

LD=

3 bl
ks

LD=

32 x 104
0,1443

LD=0,00416
.
1.6 DISCUSIONES:

Para determinar la concentracin de hierro en los estndares y la muestra se coloc a las

soluciones patrn 1ml de ortofenantrolina, debido a que va a complejar al Fe con tres
molculas de este compuesto, formando un complejo de color anaranjado, esto es de vital
importancia ya que la coloracin le permitir absorber al complejo en una longitud de onda
visible, por otro lado al agregar 0,5ml Na 2SO4 se asegura que los iones de hierro que se
encuentran como Fe3+ pasen a formar parte de Fe2+ y por ultimo al colocar 1ml de solucin
buffer se asegur que el pH del complejo sea cido y que solo Fe 2+ forme un complejo con la
ortofenenatrolina.
La absortividad molar y especfica son propios de cada sustancia qumica, esta propiedad
depende directamente de la absorbancia e indirectamente del ancho de la cubeta y de la
concentracin, por tanto es una propiedad intensiva porque depende de la cantidad de
materia, por tanto podemos inferir que a medida que aumenta la concentracin la
absortividad molar disminuye, debido a que la absortividad es funcin indirecta de la
concentracin.
Al realizar el barrido espectral se determin que la longitud de onda mxima en donde
absorbe este complejo es en 510 nm, este complejo formado obedece a la Ley de Lambert Beer y por tanto se puede determinar sus concentraciones a travs de sus absorbancias o
bien de sus transmitancias. Como podemos ver en la TABLA N2 los datos obtenidos
experimentalmente, donde se aprecia una tendencia directamente proporcional tanto para
absorbancia como para transmitancia, se observa que a medida que aumenta la
concentracin de Fe la absorbancia tambin aumenta y la transmitancia disminuye, esto es
debido a que conforme la concentracin de las soluciones patrn va aumentando hay mayor
nmero de molculas del compuesto que absorben la radiacin electromagntica.
Al calcular la concentracin de la muestra mediante la ecuacin ajustada de la regresin
lineal obtenemos 0,36ug/ml para una muestra con absorbancia de 0,074 y mediante el lmite
de deteccin obtenido 0,00416 ug/ml, se puede decir que los datos obtenidos son confiables
y el mtodo es adecuado para concentraciones muy diluidas.

1.7 CONCLUSIONES:

Realizada la prctica reconocimos algunas de las funciones del

instrumento usado en la espectrofotometra ultravioleta visible;
instrumento que se denomina espectrofotmetro UV VIS, y permite
comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que
contiene una cantidad desconocida de soluto con una que contiene una
cantidad conocida de la misma sustancia. Se mide la transmitancia de la
muestra que se expresa habitualmente como porcentaje o bien la
absorbancia.
Manipulado el espectrofotmetro UV VIS se determin que las muestras
se colocan en una celda transparente (cubeta), que suelen ser
rectangulares con un ancho interior de 1cm. Las mejores cubetas estn
hechas con cuarzo de alta calidad, aunque son ms comunes las de vidrio
o plstico. El cristal, el vidrio y la mayora de los plsticos absorben en el
UV, lo que limita su utilidad a las longitudes de onda en el visible.
Durante la experimentacin se pudo determinar que aquellas soluciones
que contenan mayor concentracin de hierro eran aquellas soluciones
que se observaban ms coloreadas; es decir, absorben la luz visible
debido a que los electrones en los tomos de metal se pueden excitar
desde un estado electrnico a otro, registran as mayor absorbancia en el
espectrofotmetro UV-VIS.
Se determin la concentracin de una muestra de hierro, su
concentracin fue de 0,36 ug/ml mediante la Ley de Beer, la cual es una
relacin emprica que relaciona la absorcin de luz con las propiedades
del material o sustancia atravesado.
Se encontr la concentracin de la muestra por diferentes mtodos, el
primero fue por medio de una interpolacin grfica y se obtuvo 0,49
ug/ml, a travs de una regresin lineal se obtuvo 0,36 ug/ml, y el ultimo
mtodo utilizado fue la comparacin de y con el estndar ms cercano,
dando una concentracin de 0,47 ug/ml .

1.8 BIBLIOGRAFIA:

Diaz, N., Barcena, A., Reyes, E., & Galvan, A. (2010). Espectrofometra:
Espectros de absorcin. CORDOBA: DEPARTAMENTO DE QUIMICA Y
BIOLOGIA MOLECULAR.
Sogorb, M. A. (25 de 03 de 2009). Innovacion. Recuperado el 14 de 06
de
2016,
de
Innovacion:
http://repositorio.innovacionumh.es/Proyectos/P_22CursoMateriales/Mig

uel_Angel_Sogorb/Wimba/Espectroscopia_04.htm