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1. Ttulo:
H460 y MCF-7.
2. Personal Investigador
- Autores
Azaa Velez, Omar
Morales Flores, Ana Stephany
Moreno Henostroza, Diego Javier
Mota Asencios, Sharon Katherine
Napn Angulo, Carlos Miguel Alexander
Neyra Muoz, Nathaly Andrea
Ortega Espinoza, Elizabeth Alexandra
Torres Mario, Josu
Vsquez Ochoa, Pedro Pablo
- Profesora Tutora.
- Alumno(s) Asesor(es).
- Colaboradores.
Cayetano Heredia
5. Duracin del proyecto: 3 meses
6. Fechas de inicio y trmino del proyecto
presupuesto)
7.1 Personal:
- Dra. Mery Maximiliana Romero Rojas
- Dra. Doris Huerta Canales (Departamento de Ciencias Dinmicas de San Fernando)
- PhD. Abraham Jaime Vaisberg Wolach (Director de la Facultad de Biologa y Virologa
de Cayetano)
- Dr. Jorge Luis Arroyo Acevedo (Coordinador del Laboratorio de Farmacologa)
7.2 Material y equipo:
Celulas VERO
Incubador celular
Maquina de destilacion
Estufa
8. Presupuesto
8.1 Bienes:
Bienes Costo
Lneas celulares de plumn y de mama 600 soles
Raz de la Arracacha (3 Kg) 20 soles
Macetas para la arracacha 40 soles
Productos de aseo 30 soles
Total 690 soles
8.2 Servicios
Servicios Costo
Alquiler del Laboratorio 100 soles
Pago de trabajo de horas extras al cuidador de los bioterios 80 soles
Costo de envo de la Arracacha 40 soles
Total 220 soles
INTRODUCCIN
Nuestras plantas nativas se consideran como una fuente de una invaluable riqueza curativa. La
Arracacia Xanthorrhiza, tambin conocida en nuestro medio como arracacha es una pequea
siendo Amrica del Sur el lugar ms probable de su aparicin. En la actualidad son cuatro los
pases que dotan de una amplia produccin como Brasil, principalmente, Ecuador, Colombia y
La arracacha es considerada como una de las nicas umbelferas que ha podido ser muy bien
relacionada con su contenido en almidn elevado. La arracacha puede, sin embargo, ser
recomendada por la presencia de otros nutrientes como b-caroteno, cido ascrbico y calcio, pero
en cantidades pequeas.
No se cuenta con una informacin detallada de esta planta nativa, pero las pocas investigaciones
nos revela que genticamente cuenta con 44 cromosomas; Parece haber poca variacin morfolgica
parte ms variable de la planta; estas son las tres formas generalmente reconocidos:
. Amarilla: Esta arracacha produce races amarillas de muy buen sabor y el follaje es verde.
Por muchos aos, las acciones citotxicas de las drogas quimioteraputicas fueron atribuidas
evidencias que estos agentes ejercen sus efectos citotxicos principalmente induciendo apoptosis
clula y la carcinognesis.
Actualmente se dispone de una gama de drogas quimioteraputicas que inducen la apoptosis en las
tratamiento del cncer, se ha buscado a travs de los datos etnomdicos, plantas medicinales que
puedan tener alguna actividad antitumoral, para identificar posteriormente sus sustancias activas.
carotenos para un posible efecto antiproliferativo, ya que estos carotenoides podran influir en el
cese de los efectos negativos de los radicales libres, principales productores de la proliferacin
Por lo tanto, el objetivo de la presente investigacin es determinar la actividad anti proliferativa del
Tambin resaltar el uso de lneas celulares humanas como un medio de investigacin viable, ya que
se puede preservar las propiedades fisiolgicas, bioqumicas y genticas de las clulas humanas.
OBJETIVO
Objetivo general
Objetivo secundario
Identificar los factores del extracto de la Arracacia xanthorrhiza que intervienen con un
efecto antiploriferativo .
Estandarizar la tcnica de cultivos celulares.
Determinar el principio activo de la raz en lneas celulares
HIPTESIS
1. Problema
1.1. Enunciado del problema cientfico
Es posible la contencin de las clulas cancergenas mediante los componentes de una
planta, esa es la interrogante que presentamos en este proyecto. Algunos estudios reafirman
que las propiedades presentes en los componentes de nuestra raz posibilitan la detencin
todo, no obstante no se presenta dato alguno de la capacidad de ejercer este efecto por parte
componentes en su composicin) tal y como se plante con otras plantas presentes en este
peruviana. Cabe resaltar, que los mecanismos que actan en la accin de las plantas antes
vitamina a lneas celulares, es as como Lotan (1995) demostr que estos compuestos, en
ovario. En lo que se refiere a cncer de mama, Roman et al. (1992) demostr que el cido
cncer de mama en humanos. Sin embargo, para obtener resultados positivos, se tuvo que
desconocido.
Como podemos apreciar, se han realizado estudios que demuestran los efectos que producen la
administracin de vitamina A en lneas celulares y roedores, sin embargo las vas por el cual
estos compuestos logran dichos efectos anticancergenos son an poco conocidos. Se cree que
los mecanismos por los que la vitamina A, los retinoides y b-carotenos pueden inhibir el
crecimiento canceroso estn relacionadas con mayores niveles de sealizacin, como por
Zandjwijk (2000).
Con respecto al cncer de pulmn, Comstock et al. (2001) compararon los niveles de vitamina
que no lo hicieron, solo se hall un efecto significativo del retinol en la reduccin del cncer de
pulmn. Sin embargo, estudios del Ensayo de la Eficiencia del Beta caroteno y el Retinol
sugiere que se debera evitar la suplementacin con vitamina A en personas con alto riesgo de
pulmn. Esto probablemente al entorno oxidativo presente en los pulmones, creando productos
parece poco probable que una ingesta superior de vitamina A reduzca el riesgo de cncer de
pulmn, aunque los efectos del retinol pueden ser distintos en los fumadores y no fumadores.
Determinados estos antecedentes en lneas celulares, podemos ingresar en el conocimiento con
aproximadamente 30 especies distribuidas desde Mxico hasta Bolivia, entre los 600 y 3600
msnm. En nuestro pas se identificaron 6 especies, siendo la especie relevante en este proyecto
por influencia de la cultura Nazca, expandindose a lo largo y ancho del Per. Actualmente, el
Cajamarca. Sin embargo, esta planta no es muy difundida a pesar de su gran valor nutritivo y
posible agente anti proliferativo es su gran cantidad de vitamina A. Sin embargo, este no es el
nico componente que resalta en su composicin qumica, ya que podemos observar una
por ejemplo la vitamina B3, el cido ascrbico y el calcio, aunque estos ltimos en menores
cantidades.
2. Tabla1. Composicin qumica de la raz de Arracacia xanthorrhiza
claro del todo, sin embargo podemos aplicar este conocimiento a la realidad que
las mujeres con un total de 11 340 casos registrados en el periodo 2006-2011, solo
detrs del cncer de cuello uterino con 16 374 casos en el mismo periodo. Adems el
total de 5044 casos registrados en el periodo 2006 2011. La distribucin del cncer
cncer de cuello uterino. En la sierra, hay cierta heterogeneidad, asociado quiz a los
pulmn.
2006 -2011
necesario saber si los qumicos que contiene esta especie influyen sobre clulas
normales, ya que no es de mucha relevancia contar con un frmaco que pueda daar
cancergena.
Cabe resaltar que al ser este proyecto en lneas celulares, se niegan efectos
fisiolgicos que suceden normalmente en un animal o ser humano, es por esto que se
da la posibilidad de extender este conocimiento para otorgar una base cientfica sobre
principalmente dos lneas celulares sobre las cuales probaremos los posibles efectos
Manual de Lineamientos para el Servicio de Salud Pblica de Estados Unidos. Esta clula,
NCI-H460, fue aislada por A. F. Gazdar del fluido pleural de un paciente con cncer de
pulmn en 1982.
Las clulas expresan la protena supresora de tumores p53 en niveles comparados con una
Las clulas se tien positivamente para queratina y vimentina, mas no para la protena de
neurofilamento.
MCF 7.
Es una lnea celular de carcinoma de mama aislada en 1970 de una mujer caucsica de 69
aos de edad llamada Frances Mallon (fallecida en 1970). MCF es el resultado de las
lneas celulares de mama que fueran capaces de vivir ms que unos pocos meses.
El MCF-7 es un tumor primario, es un carcinoma invasivo de la zona ductal mamaria.
Poseen receptores para estrgeno y progesterona. Muestra respuesta proliferativa ante las
es positivo pero solo con suplemento estrognico. Encontramos estas clulas en epitelio
insulina.
Clulas VERO.
Las Clulas VERO son lneas celulares usadas como grupo control en cultivos celulares.
Las clulas VERO fueron aisladas de clulas epiteliales de rin extradas del mono verde
africano (Cholorecebus sp.), estas son continuas y aneuploides. El anlisis del genoma
indica que las Lneas celulares VERO derivan de una hembra Chlorocebus sabaeus. El
delecin homocigota causando la prdida del grupo de genes tipo interfern I y de los
MTODOS
prospectivo y transversal.
(UNMSM).
7), la muestra es toda la poblacin de las lneas celulares de los cultivos que se prepararan, la
lnea celular H 460 (Adenocarcinoma pulmonar de humano) y al cultivo de la lnea celular MCF-7
(adenocarcinoma de mama).
1-Actividad anti proliferativa del extracto de Arracacia Xanthorrhiza, de tipo cuantitativa, medida
tipo cualitativa.
3-Dosis con actividad anti proliferativa ms efectiva del extracto de Arracacia Xanthorrhiza, tipo
cuantitativa.
Procedimiento
1- Conseguir los 3 tipos de lneas celulares: Clulas VERO, Clulas de Adenocarcinoma pulmonar
Umbelifera, gnero Arracacia, para el tratamiento de las 3 distintas lneas celulares, de la siguiente
manera:
medio de cultivo a eleccin debe ser ptimo para la proliferacin celular, ser suplementado con
suero fetal bovino y gentamicina. Las tres lneas sern mantenidas a una temperatura de 37 C, en
5- Ensayo de la actividad anti proliferativa: Se utilizaran dos multiplacas, una control con pozos
para las tres lneas celulares y otra experimental, con una cantidad de pozos iguales para cada lnea
celular, en cada pozo de ambas placas se coloc la misma cantidad de medio de cultivo. Se llevara
a incubar a 37 C en una atmsfera hmeda con 5% de CO2 y 95% de aire por 24 h. Los pozos de
la multiplaca experimental sern tratados en partes iguales con 5 fluoruracilo, con el extracto de
races de Arracacia Xanthorrhiza a distintas diluciones y la ltima parte se utilizara para control,
6- Medir la actividad anti proliferativa que genera el extracto de Arracacia Xanthorrhiza en las
lneas celulares y la que genera el 5 fluoracilo mediante marcador CI50, con un hemocitometro
FLUJOGRAMA
PROYECTO DE
No
Reevaluacin
Asesora y orientacin
Discusin de resultados
Desempeo del
proyecto
Publicacin
Publicacin
BIBLIOGRAFA
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